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Orientador: Eliana Pereira de Araújo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: Tem sido estudado que o ácido piperonílico, molécula presente na pimenta negra (Piper nigrum L) e na pimenta longa (Piper longum L), é capaz de ativar o Receptor do Fator de Crescimento Epidermal (EGFR) e assim desencadear sinalização intracelular levando a transcrição de genes responsáveis pela proliferação e sobrevivência celular, principalmente em queratinócitos, células cruciais na manutenção da homeostase cutânea e na barreira epidérmica principalmente quando a pele é lesionada. Portanto, nossa hipótese é que o ácido piperonílico é capaz de melhorar o processo de cicatrização de feridas cutâneas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do tratamento tópico com ácido piperonílico na cicatrização de feridas em modelo animal. Trata-se de um estudo experimental em camundongos C57BL6/J machos submetidos a feridas cutâneas dorsais provocadas por um punch de 6mm e tratadas topicamente com ácido piperonílico ou veículo. As feridas foram avaliadas macro e microscopicamente e foram coletadas amostras de tecido para imunofluorescência e PCR em tempo real, nos dias 6, 9 e 19 pós lesão. Os resultados deste estudo mostram que o tratamento tópico de feridas com o ácido piperonílico levou ao aumento da velocidade de cicatrização a partir do dia 6 pós lesão, até o fechamento. Esse estudo sugere que esse fenômeno ocorreu por meio da ativação do EGFR e modulação da expressão de queratinócitos. Ademais, o ácido piperonílico foi capaz de modular a expressão gênica de proteínas como IL-6, IL-1?, TNF-?, IL-10 e MCP-1, importantes para o processo de cicatrização. E no dia 19 pós lesão, o novo tecido formado apresentou maior deposição de colágeno do tipo I e morfologia mais próxima da pele intacta, com maior presença de papilas dérmicas e folículos pilosos. Portanto, os resultados sugerem que o ácido piperonílico é ser uma opção viável para o tratamento de feridas cutâneas Abstract: The Epidermal Growth Factor (EGF) stimulates growth, cell proliferation and survival in various tissues. Recently, It has been described that piperonylic acid, a molecule present in black pepper (Piper nigrum L) and long pepper (Piper longum L), is able to activate the Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) and thus trigger a cascade of intracellular signaling leading to gene transcription responsible for cell proliferation and survival, especially in keratinocytes. Keratinocytes are fundamental cells in maintaining cutaneous homeostasis and they are the first to be injured in case of wounds. Therefore, our hypothesis is that piperonylic acid can improve the healing process of skin wounds. The aim of this work was to evaluate the effect of topical treatment with piperonylic acid on wound healing in an animal model. This is an experimental study in male C57BL6 / J mice submitted to dorsal skin wounds caused by a 6mm punch and treated topically with piperonylic acid or vehicle. The wounds were evaluated macro and microscopically and tissue samples were collected for immunofluorescence and real time PCR, on days 6, 9 and 19 after the injury. Student's t test was used for statistical analysis of independent samples and ANOVA for more than two variables. The level of significance for rejection of the null hypothesis was 5% (p

Colorectal cancer is noted for being one of the most frequent of tumors, with expressive morbidity and mortality rates. In new drug discovery, plants stand out as a source capable of yielding safe and high-efficiency products. Well known in Brazilian popular medicine, Libidibia ferrea (Mart. Ex Tul.) L.P. Queiroz var. ferrea (better known as “ironwood” or “juca”), has been used to treat a wide spectrum of conditions and to prevent cancer. Using methodologies that involved flow cytometry, spectrophotometry and RT-qPCR assays, crude extracts of the fruits of L. ferrea (20T, 40T, 60T and 80T) were evaluated at 24 h and/or 48 h for: their ability to inhibit cell proliferation; induce apoptosis through Bcl-2, caspase-3 and Apaf-1; their antioxidant activity and effects on important targets related to cell proliferation (EGFR and AKT) in the HT-29 human colorectal cancer lineage. The results revealed high antiproliferative potential as compared to the controls, induction of apoptosis through the intrinsic pathway, and probable tumor inhibition activity under the mediation of important targets in tumorigenesis. In addition, L. ferrea revealed antioxidant, lipid peroxidation and chemoprotective effects in healthy cells. Thus, L. ferrea derivatives have important anticancer effects, and may be considered promising candidate for colorectal cancer therapy.

O câncer cervical é uma neoplasia muito prevalente na população feminina e está associado à infecção pelo papilomavírus humano (HPV). As oncoproteínas E6 e E7 de HPV de alto risco são as principais responsáveis pelas alterações celulares que levam ao desenvolvimento deste tipo tumoral. A dipeptidil peptidase IV (DPPIV/CD26) é uma enzima que exerce importantes funções relacionadas à progressão tumoral. Diversos estudos demonstram alterações na expressão e atividade desta proteína em diferentes tipos de câncer. Tendo em vista a relação entre a DPPIV/CD26 e o câncer, e que ainda não existem estudos relacionando esta proteína ao câncer cervical, neste estudo inicialmente investigamos a expressão e atividade da DPPIV/CD26 em linhagens celulares de carcinoma cervical humano (SiHa, HeLa e C33A) e em queratinócitos imortalizados (HaCaT). Nossos resultados demonstram uma baixa expressão da DPPIV/CD26 nas linhagens celulares estudadas, sendo praticamente indetectável na linhagem HeLa. Foi verificada a atividade enzimática dipeptidilpeptidásica tanto ligada à membrana quanto solúvel em todas as linhagens. Na presença do inibidor de DPPIV/CD26 (fosfato de sitagliptina) observamos que a linhagem SiHa apresentou um aumento na migração celular, e assim sugerimos que ao menos em parte a migração nesta linhagem é regulada pela atividade enzimática da DPPIV/CD26. A fim de investigar a relação da expressão da DPPIV/CD26 com as oncoproteínas E6 e E7 do HPV, avaliamos sua expressão em queratinócitos normais e transduzidos com estas oncoproteínas. Verificamos que queratinócitos expressando E6 de HPV de alto risco apresentam uma redução na expressão da DPPIV/CD26, e esta regulação parece ser dependente da degradação da p53. Considerando que as linhagens celulares estudadas apresentam baixa expressão e atividade da DPPIV/CD26, para melhor compreender a importância da expressão desta proteína, nós induzimos a superexpressão da DPPIV/CD26 em linhagem de câncer cervical (HeLa) para posterior avaliação dos efeitos em diferentes mecanismos tumorais. Os resultados demonstram uma redução no crescimento de células expressando DPPIV/CD26, sendo este efeito independente da atividade enzimática. Além disso, foi demonstrado que a indução da expressão de DPPIV/CD26 não afeta os mecanismos de migração e adesão celular na linhagem HeLa. Sendo assim, acreditamos que o esclarecimento do papel da DPPIV/CD26 no contexto do câncer cervical possibilita que novas abordagens diagnósticas e terapêuticas sejam implementadas no futuro. Cervical cancer is a very prevalent neoplasm in female population and is associated with human papillomavirus (HPV) infection. The high risk HPV E6 and E7 oncoproteins are responsible for cellular alterations that lead to the development of this tumor type. The dipeptidyl peptidase IV (DPPIV/CD26) is an enzyme that exerts important functions related to tumor progression. Several studies have shown changes in the expression and activity of this protein in different types of cancer. Considering the relationship between DPPIV/CD26 and cancer, and that there are still no studies relating this protein to cervical cancer, in the present study we first investigated the DPPIV/CD26 expression and activity in human cervical carcinoma cell lines (SiHa, HeLa and C33A) and in immortalized keratinocytes (HaCaT). Our results demonstrate a low DPPIV/CD26 expression in the studied cell lines, being almost undetectable in HeLa cell line. The dipeptidylpeptidasic enzymatic activity was verified both membrane bound and in the soluble form in all cell lines. In the presence of the DPPIV/CD26 inhibitor (sitagliptin phosphate) we observed that SiHa cell line showed an increase in cell migration, thus we suggest that at least in part cell migration in this cell line is regulated by DPPIV/CD26 enzymatic activity. In order to investigate the relationship between DPPIV/CD26 expression and HPV E6 and E7 oncoproteins, we evaluated the expression of this protein in normal keratinocytes or transduced with these oncoproteins. We have found that keratinocytes expressing high-risk HPV E6 present a reduction in DPPIV/CD26 expression, and this regulation appears to be dependent on p53 degradation. Considering that the cell lines studied have low DPPIV/CD26 expression and activity, in order to better understand the importance of the expression of this protein, we induced the DPPIV/CD26 overexpression in a cervical cancer cell line (HeLa) for further evaluation of the effects on different tumor mechanisms. The results demonstrate a reduction in cell growth of DPPIV/CD26 expressing cells, being this effect independent of the enzymatic activity. In addition, it has been demonstrated that the induction of DPPIV/CD26 expression does not affect the cell migration and adhesion mechanisms in the HeLa cell line. Thus, we believe that the elucidation of the DPPIV/CD26 role in the context of cervical cancer enables new diagnostic and therapeutic approaches to be implemented in the future.

O estudo das interações entre células e seu substrato na engenharia de tecidos é de grande importância para determinação das propriedades biológicas dos implantes. A adesão das células ao substrato influencia na morfologia, na proliferação e na viabilidade celular. Neste trabalho, foram avaliadas adesão, proliferação e viabilidade de fibroblastos de camundongo, linhagem L929, em suporte biopolimérico. Utilizaram-se membranas de celulose bacteriana como substrato para a avaliação in vitro. As células foram cultivadas sobre essas membranas em meio Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM), suplementado com 10% de Soro Bovino Fetal (SBF), a 37°C, contendo 5% CO2. Para monitorar e avaliar o comportamento dessas células em distintos tempos de cultivos nas membranas, escolheram-se diferentes parâmetros celulares. Com base nessa experiência, observaram-se diferenças morfológicas significativas nas células. Os resultados evidenciaram boa adesão, crescimento, proliferação e viabilidade das células nas membranas utilizadas.

Made available in DSpace on 2015-08-26T19:19:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-04-01. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-31T13:04:56Z : No. of bitstreams: 1 S0102-09352015000200447.pdf: 277633 bytes, checksum: 42db768df4d959577321849475852db5 (MD5) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) A coloração pela prata das regiões organizadoras de nucléolos (NORs) é caracterizada por marcar proteínas ligadas ao ácido ribonucleico ribossômico, avaliando a proliferação em células normais ou neoplásicas. Objetivou-se estudar, em testículos de ovinos obtidos em matadouro, a validade do uso da técnica de coloração pela prata (AgNOR) na identificação das regiões organizadoras de nucléolo (NORs) em células saudáveis da linhagem espermatogênica. Utilizaram-se 43 pares de testículos de ovinos mestiços entre seis e 10 meses de idade. Testes de Wilcoxon e Spearman foram empregados, com nível de 5%. As médias das NORs nas células das gônadas direita e esquerda foram, respectivamente: espermatogônia (8,77±1,14 e 9,04±0,96), espermatócitos (4,99±2,00 e 6,20±2,07; P

INTRODUCTION: The activation of the phosphoinositide 3-kinase (PI3K)/AKT signalling pathway is one the most frequent genetic events in breast cancer, consequently the development of PI3K inhibitors has attracted much attention. Here we evaluate the effect of PI3K inhibition on global gene expression in breast cancer cells. METHODS: We used a range of methodologies that include in silico compound analysis, in vitro kinase assays, cell invasion assays, proliferation assays, genome-wide transcription studies (Agilent Technologies full genome arrays), gene set enrichment analysis, quantitative real-time PCR, immunoblotting in addition to chromatin immunoprecipitation. RESULTS: We defined the physico-chemical and the biological properties of ETP-45658, a novel potent PI3K inhibitor. We demonstrated that ETP-45658 potently inhibited cell proliferation within a broad range of human cancer cells, most potently suppressing the growth of breast cancer cells via inhibiting cell cycle. We show that this response is Forkhead box O (FOXO) protein dependent and p53 independent. Our genome-wide microarray analysis revealed that the cell cycle was the most affected biological process after exposure to ETP-45658 (or our control PI3K inhibitor PI-103), that despite the multiple transcription factors that are regulated by the PI3K/AKT signalling cascade, only the binding sites for FOXO transcription factors were significantly enriched and only a subset of all FOXO-dependent genes were induced. This disparity in gene transcription was not due to differential FOXO promoter recruitment. CONCLUSIONS: The constitutive activation of PI3Ks and thus the exclusion of FOXO transcription factors from the nucleus is a key feature of breast cancer. Our results presented here highlight that PI3K inhibition activates specific FOXO-dependent genes that mediate cell cycle arrest in breast cancer cells. R Hill is the recipient of a Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT) 2012 research grant n° SFRH/BPD/84634/2012. R Kalathur is the recipient of a Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT) research grant n° SFRH/BPD/70718/2010. We thank B. Vogelstein (Johns Hopkins University, Baltimore, USA) for our [p53−/−] HCT116 cell line. Sí

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-06T20:53:35Z No. of bitstreams: 1 TESE_FINAL_PUBLICADA_Raimunida_Ribeiro_da_Silva.pdf: 1476855 bytes, checksum: e50b2899f0ee71c2ce723a9d40d953fb (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-06T20:53:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE_FINAL_PUBLICADA_Raimunida_Ribeiro_da_Silva.pdf: 1476855 bytes, checksum: e50b2899f0ee71c2ce723a9d40d953fb (MD5) Previous issue date: 2013-03-21 Menopause, physiological phenomenon that occurs in all women, average age 51, is accompanied by about 80% of cases symptoms such as hot flashes, vaginal dryness, irritability and insomnia, which affect the quality of life and socioeconomic productivity women's, and predispose them to chronic degenerative diseases such as atherosclerosis, obesity and cardiovascular disorders. The hormone replacement therapy based on estrogen, which aims to reduce the discomforts of menopause is associated with an increased risk of endometrial and breast cancer, as has been shown in scientific studies. Whereas that women, consuming soy, had lower rates of chronic degenerative diseases and cancer at rates lower than those of Western countries, soy isoflavones have been tested in clinical and experimental studies, but with contradictory results. The present study investigated the effect of chronic administration of soy isoflavones on the uterus, breast, bone and adipose tissues from ovariectomized rats. Forty female Wistar rats were divided into four groups: a) ovariectomized: ISO group receiving soy isoflavones (100mg/kg/dia/vo); b) ovariectomized: EB group receiving estradiol benzoate (10μg/kg/dia/sc); c) ovariectomized: OVX group receiving saline (0.1 ml/100g/dia/vo); d) controls: FO group, receiving saline (0.1 ml/100g/dia/vo). Before and during the 90 days of treatment vaginal smears were analyzed to monitor the estrous cycle, given the body weight and food intake monitored weekly. After this period, the animals were anesthetized and blood was collected for analysis of serum estradiol and progesterone serum by radioimmunoassay, and lipid and glucose by spectrophotometry. Subsequently, the animals were euthanized and necropsied, collecting the uterus, breasts, intra-abdominal fat and femur for macroscopic exam and weighing. The tissues selected for the study were stained with HE and analyzed by light microscopy and histomorphometry, in order to investigated possible changes in cell growth (NIH Image software VS-J;-optronics CCD digital images). In the group treated with isoflavones a decrease in body weight decreased compared OVX in which there was an increase in weight compared to the false-operated animals. Macroscopically, the uterus weight was lower in ISO group, similar to the OVX group. Furthermore, no change was showed in the histopathology of endometrial glands between ISO and OVX groups. The EB group showed glandular proliferation, pseudo-stratified epithelium, frequent mitoses typical squamous metaplasia, and eosinophilic infiltrate and hidrometry. The estradiol concentration in the ISO group was similar to OVX. However, EB group showed increase in estradiol and uterine weight in relation to OVX. No differences in mammary histomorphometry were observed among the four groups. Fat abdominal tissue weight was lower in ISO group compared with OVX group but, no morphological changes were seen on microscopy, only a cellular hipertrophy confirmed by histomorphometry. Although there were no differences in the glucose concentration, total cholesterol and triglycerides among groups, the cholesterol-HDL was increased in the group ISO. There was no difference in femur density among the groups. These results indicate that chronic treatment with soy isoflavones, at the tested dose did not induce significant changes in the uterus, breast, bone and adipose tissues, suggesting safety in handling without risk for development of cancer. A menopausa, fenômeno fisiológico que ocorre em todas as mulheres, em média, aos 51 anos, é acompanhada em cerca de 80% dos casos de sintomas como fogachos, secura vaginal, irritabilidade e insônia, que interferem na qualidade de vida e na produtividade socioeconômica das mulheres, além de predispô-las a doenças crônico-degenerativas, como arteriosclerose, obesidade e distúrbios cardiovasculares. A terapia de reposição hormonal à base de estrógenos, que visa reduzir os incômodos da menopausa, está associada ao aumento do risco de câncer de mama e do endométrio, como foi demonstrado em estudos científicos. Considerando que as mulheres orientais, consumidoras de soja, apresentam doenças crônico-degenerativas e câncer em taxas inferiores às dos países ocidentais, as isoflavonas da soja têm sido testadas em estudos clínicos e experimentais, porém com obtenção de dados até contraditórios. O presente estudo investigou o efeito da administração crônica de isoflavonas de soja no útero, mamas e tecidos adiposo e ósseo de ratas ovariectomizadas. Quarenta ratas Wistar adultas foram distribuídas em quatro grupos experimentais: a) ovariectomizadas: grupo ISO, recebendo isoflavonas de soja (100mg/kg/dia/v.o.); b) ovariectomizadas: grupo BE, recebendo benzoato de estradiol (10µg/kg/dia/s.c.); c) ovariectomizadas: grupo OVX, recebendo salina (0,1ml/100g/dia/v.o.); d) controles: grupo FO, recebendo salina (0,1ml/100g/dia/v.o.). Antes e durante os 90 dias de tratamento, foram analisados os esfregaços vaginais, para acompanhamento do ciclo estral, determinação do peso corporal e do consumo de ração semanal. Após esse período, os animais foram anestesiados e o sangue coletado para análise de estradiol e progesterona séricos, por radioimunoensaio; e lipidograma e glicose, por espectrofotometria. Posteriormente, os animais foram sacrificados e necropsiados, coletando-se o útero, mamas, gordura intra-abdominal e fêmur para macroscopia e pesagem. Os tecidos selecionados para o estudo foram corados em HE, analisados por microscopia óptica e histomorfometria, visando investigar alterações do crescimento celular (software V.S NIH Image-J; imagens digitais-optronicos CCD). No grupo tratado com isoflavonas, o peso corporal diminuiu em relação OVX, no qual ocorreu aumento de peso em comparação aos animais falso-operados. O exame macroscópico revelou que o útero diminuiu de peso nas ratas do grupo ISO, semelhante às do OVX. Além disso, a histopatologia das glândulas endometriais não mostrou alterações entre os grupos ISO e OVX. Contudo, o grupo BE apresentou proliferação glandular, pseudoestratificação epitelial, frequentes mitoses típicas, metaplasia escamosa, infiltrado eosinofílico e hidrométrio. A concentração de estradiol no grupo ISO foi semelhante à do OVX. Porém, no grupo BE, o estradiol e o peso uterino apresentaram-se aumentados em relação ao OVX. Não foram observadas diferenças na histomorfometria mamária entre os grupos. Houve redução no peso do tecido adiposo abdominal no grupo ISO, comparado com o OVX, sem identificação de alterações morfológicas significativas, apenas hipotrofia celular, confirmada pela histomorfometria. Apesar de não ter havido diferenças na concentração de glicose, colesterol total e triglicerídeos, entre os grupos, o colesterol-HDL apresentou aumento no grupo ISO. Não houve diferença na densitometria do fêmur entre os grupos avaliados. Esses resultados indicam que o tratamento crônico com isoflavonas de soja, na dose testada, não induz mudanças significativas no útero, mamas e tecidos adiposo e ósseo, sugerindo segurança no tratamento, sem risco para o desenvolvimento de câncer.

Universidade Federal de Sao Carlos The use of mesenchymal stromal cells (MSCs) for clinical therapy has been limited by the low amount of cells that can be obtained directly from tissue, making it necessary to develop techniques for in vitro cell number expansion. The current methods of expansion are laborintensive, exhibit unfavorable environments for cell growth, show still modest levels of expansion and low yield in the recovery of these cells. In the search for better alternatives, several types of bioreactors have been assessed, however, with results still discreet. A littlestudied system, which has showed itself very effective in the use with other types of animal cells, is the hollow fiber bioreactor. This bioreactor has relatively homogeneous culture environment, low level of hydrodynamic stress on cells and the process control is made through manipulation external to the culture. Thus, it is proposed in this work the study of the in vitro expansion of MSCs in 15 mL hollow fiber prototype bioreactor designed and built with a configuration specifically conceived for expansion of MSCs for use in therapeutic applications. The inoculum was prepared with MSCs precultured adhered to microcarrier Cultispher-S at concentration of 4 g/L in spinner flask containing 50 mL of α-MEM culture medium with 15% v/v fetal bovine serum. The preculture was performed in CO2 incubator at pH close to 7.3 and temperature of 37°C. For bioreactor expansion cultures, it was used the same culture medium, with addition of 12 g/L of alginate and 4.25-4.50 mM of CaCl2 as gelling agents to immobilize and keep in suspension the microcarriers, in the conditions of pH and temperature used in the preculture. The oxygenation of the culture medium continuously recirculated through the intracapilar space was carried out by air bubbling in an external flask. The oxygenation levels were of 70 to 90% of saturation with air. The experimental results obtained show that the used configuration of hollow fiber bioreactor promoted good conditions for expansion of MSCs without cell aggregation, reaching 15.3-fold expansion and cell recovery levels of 82%. These results also demonstrate the possibility of improving the efficiency of MSCs expansion through the renewal of medium to maintain suitable levels of arginine, nutrient present in limiting amounts, and ammonium, growth inhibitor metabolite. A utilização de células estromais mesenquimais (MSCs em inglês) para a terapia clínica tem sido limitada pela baixa quantidade de células que podem ser obtidas diretamente do tecido, tornando necessário o desenvolvimento de técnicas de expansão do número de células in vitro. Os métodos atuais de expansão apresentam necessidade de intensa mão de obra, ambientes desfavoráveis para o crescimento celular, níveis de expansão ainda modestos e baixo rendimento na recuperação destas células. Na procura de melhores alternativas, diversos tipos de biorreatores vêm sendo avaliados, porém, com resultados ainda discretos. Um sistema pouco estudado que tem se mostrado muito eficiente no uso com outros tipos de células animais é o biorreator de fibra oca. Este biorreator apresenta ambiente de cultura relativamente homogêneo, baixo nível de forças hidrodinâmicas sobre as células e o controle do processo é feito através de manipulação externa à cultura. Assim, é proposto neste trabalho o estudo da expansão in vitro de MSCs num protótipo de biorreator de fibra oca de 15 mL projetado e construído com uma configuração especialmente concebida para expansão de MSCs a serem utilizadas em aplicações terapêuticas. O inóculo foi preparado com MSCs précultivadas aderidas ao microcarregador Cultispher-S na concentração de 4 g/L em frasco spinner contendo 50 mL de meio de cultura α-MEM com 15% v/v de soro fetal bovino. O précultivo foi realizado em incubadora de CO2 a pH próximo a 7,3 e temperatura de 37°C. Para os cultivos de expansão no biorreator foi utilizado o mesmo meio de cultura, com adição de 12 g/L de alginato e 4,25-4,50 mM de CaCl2 como agentes geleificantes para imobilizar e manter suspensos os microcarregadores, nas condições de pH e temperatura utilizadas no précultivo. A oxigenação do meio de cultura continuamente recirculado pelo espaço intracapilar foi realizada mediante borbulhamento de ar em um frasco externo. Os níveis de oxigenação foram de 70 a 90% da saturação com ar. Os resultados experimentais obtidos mostram que a configuração utilizada propiciou boas condições para a expansão sem agregação celular das MSCs, chegando-se a fatores de expansão estimados de 15,3 vezes e níveis de recuperação de células de 82%. Esses resultados também evidenciam a possibilidade de melhora da eficiência da expansão das MSCs através da renovação do meio de cultivo para a manutenção de níveis adequados de arginina, nutriente presente em quantidades limitantes, e amônia, metabólito inibidor de crescimento.

OBJETIVO: Avaliar os efeitos in vitro da cafeína na proliferação, apoptose e expressão de transcriptos gênicos de diferenciação condrogênica na cartilagem de crescimento. MÉTODO: As epífises cartilaginosas de fêmures de ratos neonatos foram divididas em dois subgrupos: os tratados com cafeína e o grupo controle, ambos observados nos tempos de 0, 7, 14 e 21 dias. As epífises cartilaginosas de fêmures de cada subgrupo e de cada tempo foram submetidas à histomorfometria, análise imunoistoquímica, técnica de túnel e RT-PCR em tempo real. RESULTADO: A diminuição da atividade proliferativa e o aumento de condroblastos em apoptose aos 21 dias foram encontrados em ambos os subgrupos. Entretanto a diminuição da proliferação celular causada pela cafeína foi menor quando comparada ao grupo controle e aumentou significativamente a expressão de transcriptos gênicos para diferenciação condrogênica, representada pelo SOX-9 e pelo RUNX-2. Entretanto o cultivo in vitro com cafeína demostrou efeitos antagônicos: apesar dos efeitos positivos na proliferação e diferenciação de condroblatos, cafeína aumentou a apoptose, caracterizada pelo aumento da expressão de caspase-3 e do numero de células em apoptose (p< 0.05). CONCLUSÃO: A cafeína apresenta efeitos antagônicos in vitro na cartilagem em crescimento, aumentando a proliferação, diferenciação e apoptose celular. Estudo experimental. OBJECTIVE: To evaluate the in vitro effects of caffeine on proliferation, apoptosis and gene transcripts expression of chondrogenic differentiation in growth cartilage. METHODS: The cartilaginous epiphyses of femurs of newborn rats, were divided into two subgroups: treated with caffeine and control group, both observed over the time periods of 0, 7, 14 and 21 days. The cartilaginous epiphyses of femurs of each subgroup and each time span were subjected to histomorphometrics, immunohistochemical analysis, tunel technique and RT-PCR in real time. RESULTS: The decrease in proliferative activity and the increase of apoptotic chondroblasts at 21 days were found regardless of the subgroup. However, the decrease in cell proliferation caused by caffeine was lower than in the control group and significantly increased the expression of gene transcripts for chondrogenic differentiation, represented by SOx-9 and RUNx-2. However, the in vitro culture with caffeine revealed antagonistic effects: despite the positive effect on chondroblasts proliferation and differentiation, caffeine increased apoptosis, characterized by increased expression of caspase-3 and of the number of cells undergoing apoptosis (p

INTRODUÇÃO: A técnica de criopreservação tem como característica cessar reversivelmente todas as funções biológicas dos tecidos vivos em baixas temperaturas e tem sido aplicada a diversas células humanas, visando à sua utilização posterior. OBJETIVO: Avaliar a proliferação de células mesenquimais do ligamento periodontal humano após a criopreservação por dois diferentes protocolos. MÉTODO: As células do ligamento periodontal foram obtidas a partir de dois dentes (terceiros molares) hígidos, com indicação de remoção cirúrgica. Após o processamento, as células foram cultivadas em placas de Petri e mantidas a 37 °C em 5% de CO2, até atingirem 70-90% de confluência, com troca de meio a cada três dias. Na primeira passagem, as células foram divididas em dois grupos e criopreservadas: Grupo -80 °C - criopreservação em ultrafreezer por 45 dias; Grupo -196 °C - criopreservação em nitrogênio líquido por 45 dias. Decorrido esse tempo, as células dos dois grupos foram descongeladas e plaqueadas para o experimento. A curva de crescimento dos grupos estudados foi traçada a partir de contagem em Câmara de Neubauer e pelo método de ensaio do MTT, nos intervalos de 24, 48 e 72 horas. Os resultados foram analisados por meio do teste de Mann‑Whitney, com nível de significância de 5%. RESULTADO: Verificou-se um crescimento ascendente nos dois protocolos utilizados, porém uma maior taxa proliferativa foi verificada no grupo criopreservado em nitrogênio líquido (p < 0,05). CONCLUSÃO: Ambos os protocolos de criopreservação estudados foram eficazes, porém a criopreservação em nitrogênio líquido (-196 °C) manteve uma maior taxa de proliferação celular em todos os intervalos de tempo. INTRODUCTION: Cryopreservation aims to stop reversibly the biological functions of living tissues at low temperatures, and is an important resource for the storage of human cells for later use. AIM: To assess the proliferation of mesenchymal cells from human periodontal ligament cryopreserved by two different protocols. METHOD: Periodontal ligament cells were obtained from third molars with an indication for surgical removal. After processing, cells were grown and maintained at 37 °C in 5% CO2 until they reached 70-90% confluency, with medium changing every three days. In the first passage cells were divided into two groups, according to the protocol used: Group -80 °C - cryopreserved in ultrafreezer for 45 days, Group -196 °C - cryopreserved in liquid nitrogen for 45 days. After this time, cells from both groups were thawed and plated for the experiment. The growth curve of the groups was drawn from counting cells in a Neubauer chamber and by the MTT assay method, in the intervals of 24, 48 and 72 hours. The data were analyzed using the Mann-Whitney test with a significance level of 5%. RESULT: There was an upward cell growth in both protocols used, but a higher proliferative rate was observed in group cryopreserved in liquid nitrogen (p < 0.05). CONCLUSION: Cryopreservation has proven to be an effective technique for the storage and of mesenchymal cells from the periodontal ligament, especially when stored at a temperature of -196 °C.

O artigo descreve o Sistema do Hormônio de Crescimento (GH), enfatizando suas possíveis ações nas células da epiderme, nas estruturas da derme e na cicatrização de feridas cutâneas. Para tanto, fez-se uma revisão dos conhecimentos sobre o hormônio do crescimento, seu receptor, a proteína carreadora deste hormônio e demais proteínas envolvidas no mecanismo que o GH utiliza para a sua manifestação nos tecidos cutâneos

Universidade Federal de Minas Gerais The thioredoxin peroxidase (Tpx) is a group of antioxidant proteins that has been widely studied due to its role in the decomposition of different peroxides such as H2O2, peroxynitrite and organic peroxides. The ability of peroxide decomposition by Tpx is related to the presence of a conserved cysteine called peroxidatic cysteine (CysP). Most Tpx has a second cysteine (resolving cysteine - CysR) which forms a disulfide with CysP after peroxide decomposition. In addition to the peroxidase activity, some Tpx have molecular chaperone activity and are also involved in signaling of cell growth induced by hydroperoxides. It has been demonstrated that the Tpx cytosolic isoform of Schizosaccharomyces pombe is able to interact directly with MAPK (Sty1) via mixed disulfide, which is stabilized when the CysR is replaced by a serine residue. Saccharomyces cerevisiae have a nuclear isoform of Tpx (nTPx) and review of the literature shows the importance of this protein in maintaining the telomere silencing and decomposition of organic peroxides in the nucleus. Scale proteomic studies using mass spectrometry and two-hybrid indicate the nTPx association with MAP kinases. However, despite its location and participation in biological processes of relevance, works related to nTPx are scarce. Scale proteomics studies reported the physical interaction between nTPx and Mec3, Gts1, Pc1 and Dog2. These proteins are related to cell signaling or maintenance of telomeric silencing. However, no specific studies were performed to confirm these interactions and if they are established by mixed disulfides. This study aimed to evaluate the interactions previously described in the literature between nTPx and Mec3, Pcl1, Dog2 and Gts1 through the expression and purification of these proteins and in vitro evaluation of interactions as well as in vivo tests using two-hybrid. Several efforts were made with different approaches, nevertheless it was impossible overexpression of Mec3, Pcl1, Dog2, indicating a toxic effect of these proteins on the strains used. Furthermore, we found great success in overexpression of nTPx and nTpxC112S (8 mg and 10 mg per liter of cell culture) in Eschericchia coli strain BL21 (DE3) C43. This is the first time that these proteins were expressed in native form. It was also possible to overexpress the Gts1 protein in the same strain. These results could lead for new approaches in future studies in order to determine these threedimensional structures, by methods such as X-ray crystallography or nuclear magnetic resonance (NMR). Finally, the results obtainedusing the technique of two-hybrid yeast confirmed the interaction in vivo among nTPx and Mec3, Gts1, Dog2. However, opposing the results described in the literature, no interaction was detected between nTPx and PCL1, emphasizing the necessity of specific experiments in addition to the large-scale ones. As tiorredoxinas peroxidases (TPx), constituem um grupo de proteínas antioxidantes que vêm sendo bastante estudadas pela sua atuação na decomposição de diversos tipos peróxidos, como o H2O2, peroxinitritos e peróxidos orgânicos. A capacidade de decomposição de peróxidos pelas TPx está relacionada a presença de uma cisteína conservada denominada de cisteína peroxidásica (CysP). A maioria das TPx possuem uma segunda cisteína (cisteína de resolução - CysR) a qual forma um dissulfeto com CysP após a decomposição de um peróxido. Adicionalmente, à atividade peroxidásica, algumas TPx possuem atividade de chaperona molecular e também estão envolvidas em processos de sinalização de crescimento celular induzidos por hidroperóxidos. Já foi demonstrado que a isoforma citosólica de TPx de Schizosaccharomyces pombe é capaz de interagir diretamente com uma MAPK (Sty1) através da formação de um dissulfeto misto entre as proteínas, que é estabilizado quando a CysR é substituída por um resíduo de serina. Entretanto, nenhuma interação deste tipo foi descrita para outros organismos. Em Saccharomyces cerevisiae ocorre uma isoforma de TPx no núcleo (nTPx) e a revisão da literatura demonstra a relevância desta proteína na manutenção do silenciamento dos telômeros e decomposição de peróxidos orgânicos no núcleo. Estudos em escala proteômica utilizando espectrometria de massa e duplo híbrido indicam a associação de nTPx com MAP quinases, entretanto, apesar de sua localização e participação em processos biológicos de relevância, trabalhos relacionados com nTPx são escassos. Estudos em escala proteômica relataram a interação física entre nTPx e as proteínas Mec3, Gts1, Pcl1 e Dog2 relacionadas a sinalização celular ou manutenção do silenciamento telomérico. No entanto, não foram efetuados estudos pontuais visando confirmar estas interações como também averiguar a possibilidade das interações entre nTPx e as proteínas supracitadas serem estabelecidas através de dissulfetos mistos. Este trabalho teve por objetivo a avaliação de interações previamente descritas na literatura entre nTPx e Mec3, Pcl1 e Dog2 por meio da expressão e purificação destas proteínas e avaliação in vitro de interações como também in vivo através de ensaios de duplo híbrido. Diversos esforços com diferentes abordagens foram efetuados, entretanto não foi possível a superexpressão de Mec3, Pcl1, Dog2, indicando um efeito tóxico destas proteínas sobre as linhagens utilizadas. Por outro lado, obtivemos grande sucesso na superexpressão de nTPx e nTpxC112S (8 mg e 10 mg por litro de cultura de células) em linhagens de Eschericchia coli BL21 (DE3) C43, o que representa a primeira vez que estas proteínas foram expressas sem trucamentos. Também foi possível expressar na mesma linhagem a proteína Gts1. Estes resultados abrem a possibilidade de estudos posteriores visando a determinação de suas estruturas tridimensionais, por metodologias como cristalografia de raios-X ou ressonância magnética nuclear (RMN). Por fim, os resultados de interação in vivo utilizando a técnica de duplo híbrido em levedura, confirmaram a interação entre nTPx e Mec3, Gts1 e Dog2. Entretanto ao contrario dos resultados descritos na literatura, não foi detectada interação entre nTPx e Pcl1, reforçando que experimentos pontuais são necessários em adição aos experimentos de larga escala.

Cancer is a multi-factorial disease linked with different initiating causes, cofactors and promoters, and several types of cellular damage. Advancing knowledge on the cellular and molecular biology of the processes that regulate cell proliferation, cell differentiation and cellular responses to external signals, has provided a wealth of information about the cancer cell and how it differs from a normal one. These findings make available a number of potential targets for new therapeutic approaches. The Medicinal Chemistry artwork performed so far in the development of selective and potent adenosine receptor A3 ligands, a current cancer target, will be highlighted in this work.

Minist?rio da Sa?de. Secretaria de Vigil?ncia em Sa?de. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil. Universidade Federal do Par?. Bel?m, PA, Brasil / Centro Universit?rio do Par?. Bel?m, PA, Brasil. Funda??o Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gon?alo Muniz. Salvador, BA, Brasil. Minist?rio da Sa?de. Secretaria de Vigil?ncia em Sa?de. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil. Infus?es das folhas, cascas e sementes de Campsiandra laurifolia Benth. (Fabaceae) s?o utilizadas por comunidade de negros descendentes de escravos (quilombolas) para o tratamento, principalmente, de leishmaniose cut?nea (LC), feridas, ?lceras e impigens. Extratos hidroalc?olicos e aquosos de C. laurifolia foram investigados para a atividade anti-Leishmania sobre promastigotas e amastigota de Leishmania ( L.) amazonensis e resposta imunomoduladora: prolifera??o celular de esplen?citos e produ??o ON por macr?fagos peritoniais de camundongos BALB/c. Os extratos hidroalc?olicos da casca e aquosos da folha e semente apresentaram reduzida atividade contra as formas amastigotas e promastigotas (

Este estudo teve como objetivo avaliar o valor prognóstico de marcadores de proliferação celular em casos de mastocitomas cutâneos caninos. Vinte e três casos foram analisados quanto à expressão imuno-histoquímica de Ki67 e do Antígeno Nuclear de Proliferação Celular (PCNA), sendo subsequentemente acompanhados clinicamente. Observou-se que a expressão de Ki67 mantém relação negativa com a tradicional graduação histopatológica (p= 0,0418; p

A glutamina é o aminoácido livre mais abundante no plasma e no tecido muscular. Nutricionalmente é classificada como um aminoácido não essencial, uma vez que pode ser sintetizada pelo organismo a partir de outros aminoácidos. A glutamina está envolvida em diferentes funções, tais como a proliferação e desenvolvimento de células, o balanço acidobásico, o transporte da amônia entre os tecidos, a doação de esqueletos de carbono para a gliconeogênese, a participação no sistema antioxidante e outras. Por meio de técnicas de biologia molecular, estudos demonstram que a glutamina pode também influenciar diversas vias de sinalização celular, em especial a expressão de proteínas de choque térmico (HSPs). As HSPs contribuem para a manutenção da homeostasia da célula na presença de agentes estressores, tais como as espécies reativas de oxigênio (ERO). Em situações de elevado catabolismo muscular, como após exercícios físicos intensos e prolongados, a concentração de glutamina pode tornar-se reduzida. A menor disponibilidade desse aminoácido pode diminuir a resistência da célula a lesões, levando a processos de apoptose celular. Por essas razões, a suplementação com L-glutamina, tanto na forma livre, quanto como dipeptídeo, tem sido investigada. Alguns aspectos bioquímicos, metabólicos e mecanismos moleculares da glutamina, bem como os efeitos de sua suplementação, são abordados no presente trabalho. Glutamine is the most frequent free amino acid in the serum and muscular tissue. Nutritionally, it is classified as a non-essential amino acid, once it can be synthesized by the body from other amino acids. Glutamine is involved in different functions, such as cell proliferation and development, basic acid balance, ammonia transportation between tissues, carbon skeleton donation to the gluconeogenesis, participation in the antioxidant system, among others. Molecular biology techniques show that it may also influence several cell signaling ways, especially the expression of heat shock proteins (HSP). The HSPs contribute to the maintenance of the cellular homeostasis in the presence of stress agents such as oxygen reactive species (ORE). In situations of high cellular catabolism, as after intense and prolonged physical exercises, the glutamine concentration may become reduced. Lower availability of this amino acid may decrease the cell resistance to injuries, leading to cellular apoptosis processes. Therefore, L-glutamine supplementation either in free form or as dipeptide has been investigated. Some biochemical and metabolic aspects, molecular mechanism of glutamine, as well as the effects of its supplementation are approached in the present article.

OBJETIVO: Avaliar a importância da presença de células 3T3 para estabelecer cultura de suspensão de células epiteliais do limbo obtido de rimas córneo-esclerais. MÉTODOS: Rimas de diferentes doadores tiveram seus estroma posterior e endotélio removidos (n=6). Cada rima foi dividida em três segmentos iguais, que foram colocados em cultura em três diferentes condições: um segmento foi colocado na placa de cultura com o lado epitelial para cima (Grupo A). Os dois segmentos restantes foram tripsinizados e a suspensão de células obtida foi cultivada com (Grupo B) ou sem (Grupo C) células 3T3 irradiadas. As células foram mantidas em meio de cultura "supplemental hormonal epithelial médium" (SHEM), a migração epitelial e a formação de clones nos grupos A, B e C foram avaliadas pela microscopia de contraste de fase e por coloração pela rodamina B. Os resultados foram comparados estatisticamente. RESULTADOS: O crescimento de células epiteliais foi observado em 4/6 rimas (Grupo A). Todas as suspensões de células epiteliais que foram cultivadas com células 3T3 (Grupo B) formaram clones. Nenhuma adesão ou formação de clones verdadeiros (holo ou meroclones) foi observada na cultura de células que foi cultivada sem 3T3 (Grupo C) (p=0,009). CONCLUSÕES: Suspensão de células epiteliais límbicas obtidas de rimas córneo-esclerais no modelo utilizado precisa ser cultivada com células 3T3 para formar clones e estabelecer colônias epiteliais com perspectivas para uso terapêutico na reconstrução da superfície ocular. PURPOSE: To evaluate the importance of the presence of 3T3 fibroblasts for establishing limbal epithelial cultures from cell suspension obtained from corneo-scleral rims (CSR). METHODS: Corneo-scleral rims from different donors (n=6) had their posterior stroma and endothelium stripped away. Each corneo-scleral rim was divided into three equal segments that were set up in tissue culture in three different conditions: one of the segments was placed with the epithelial side up on the bottom of a 6-well culture plate (Group A). The other two fragments were trypsinized and the obtained cell suspension was cultured with (Group B) or without (Group C) irradiaded 3T3 cells. The cells were cultured in supplemental hormonal epithelial medium (SHEM), the epithelial migration and clone formation in groups A, B and C were evaluated with phase contrast microscopy and rodamine B staining. RESULTS: Epithelial cell growth was observed in 4/6 rims (Group A). All epithelial cell suspensions that were cultured with 3T3 cells (Group B) formed clones. No adhesion or true clone formation (holo- or meroclones) was observed in the cell suspensions that were cultivated without 3T3 (Group C) (p=0.009). CONCLUSIONS: Epithelial cell suspension obtained from corneo-scleral rims in this model needs to be cultivated with 3T3 cells in order to form clones and establish limbal epithelial cell colonies with the potential to be used for ocular surface reconstruction.

Primary cultures of Mannheimia granulomatis were established in chicken embryos to assess their capacity to stimulate fibroblast proliferation. The capacity of the bacterium-activated macrophages to stimulate cytokine and enzyme proliferation was assessed in a mouse peritoneum macrophage culture. To evaluate the bacteria infection on fibroblasts and their growth within 48h in relation to the active macrophages, cultures were washed and trypsinized and the cells counted. Results showed no significant differences when the bacteria-infected fibroblasts were mixed with bacterial extract (P=0.9682). The treatment using just products of macrophages resulted similar to the negative control. Significant differences on cell proliferation were established (P=0,0039) when the products of M. granulomatis -activated macrophages were used, meaning that bacterial components were unable to promote fibroblast increase. Further research is needed to elucidate the effect of M. granulomatis on the macrophages., Facultad de Ciencias Veterinarias

OBJETIVO: Avaliar a importância da interação entre a integrina Mac-1 dos leucócitos (a Mb 2) e a glicoproteína (GP) Iba das plaquetas para o recrutamento de leucócitos após a lesão vascular e o efeito da neutralização da interação Mac-1-GPIba sobre a proliferação celular e a hiperplasia neointimal desencadeadas por lesão vascular. MÉTODOS: Um peptídeo denominado M2 ou anticorpo anti-M2 foi desenvolvido para bloquear a interação Mac-1-GPIba . Esse peptídeo foi injetado e comparado com anticorpo-controle em camundongos C57B1/6J submetidos a lesão vascular da artéria femoral com corda-guia. Um, cinco ou 28 dias após a lesão vascular, as artérias femorais foram retiradas para a realização de morfometria e imuno-histoquímica. RESULTADOS: O bloqueio da interação Mac-1-GPIba promoveu uma redução estatisticamente significativa do número de leucócitos na camada média no primeiro dia após a lesão vascular (controle: 7,9±5,0% do total de células versus anti-M2: 2,0±1,6%, p=0,021), bem como determinou uma diminuição estatisticamente significativa do acúmulo de leucócitos na neoíntima em cinco e 28 dias (controle: 42,3±12,9% versus anti-M2: 24,6±10,8%, p=0,047 e controle: 7,9±3,0% versus anti-M2: 3,3±1,3%, p=0,012; respectivamente). A proliferação celular na camada média do vaso em cinco dias pós-lesão foi reduzida com o bloqueio da interação Mac-1-GPIba (controle: 5,0±2,9% do total de células versus anti-M2: 1,8±0,5%; p=0,043), assim como houve diminuição significativa da proliferação celular na camada íntima do vaso em 28 dias (controle: 3,8±1,7% versus anti-M2: 2,0±1,2%; p=0,047). O bloqueio da interação Mac-1-GPIba também determinou uma redução estatisticamente significativa do espessamento intimal em 28 dias pós-lesão (controle: 10.395±3.549 µm² versus anti-M2: 4.561±4.915 µm²; p=0,012). CONCLUSÃO: O recrutamento de leucócitos após a lesão vascular é dependente da interação Mac-1-GPIba e a neutralização dessa interação inibe a proliferação celular e a formação neointimal. OBJECTIVE: To assess the importance of the interaction between leukocyte integrin Mac-1 (a Mb 2) and platelet glycoprotein (GP) Ib-a for leukocyte recruitment after vascular injury and the effect of the neutralization of the Mac-1-GPIba interaction on cell proliferation and the neointimal hyperplasia triggered by the vascular injury. METHODS: A peptide called M2 or anti-M2 antibody was developed to block the Mac-1-GPIba interaction. This peptide was injected and compared to a control-peptide in C57B1/6J mice submitted to vascular injury of the femoral artery with a guide wire. One, five or 28 days after the vascular injury, the femoral arteries were removed for morphometric and immunohistochemical analyses. RESULTS: The blocking of the Mac-1-GPIba interaction promoted a statistically significant reduction in the number of leukocytes in the neointimal layer on the first day after the vascular injury (control: 7.9±5.0% of the cell total versus anti-M2: 2.0±1.6%, p=0.021), as well as determined a statistically significant decrease in leukocyte accumulation in the neointimal layer on days 5 and 28 (control: 42.3±12.9% versus anti-M2: 24.6±10.8%, p=0.047 and control: 7.9±3.0% versus anti-M2: 3.3±1.3%, p=0.012; respectively). Cell proliferation in the neointimal layer of the vessel five days post-injury was reduced with the blocking of the Mac-1-GPIba interaction (control: 5.0±2.9% of the cell total versus anti-M2: 1.8±0.5%; p=0.043), along with a significant decrease in cell proliferation in the vessel neointimal layer 28 days post-injury (control: 3.8±1.7% versus anti-M2: 2.0±1.2%; p=0.047). The blocking of the Mac-1-GPIba interaction also determined a statistically significant decrease of the intimal thickening 28 days post-injury (control: 10,395±3,549 µm² versus anti-M2: 4,561±4,915 µm²; p=0.012). CONCLUSION: Leukocyte recruitment after a vascular injury depends on the Mac-1-GPIba interaction and the neutralization of this interaction inhibits cell proliferation and neointimal formation.

OBJETIVO: Investigar os efeitos de baixas concentrações de LDL oxidada (LDL-ox) sobre a proliferação e a motilidade espontânea de células endoteliais de artérias coronárias humanas (CEACH) em cultura. MÉTODOS: Culturas de CEACH foram tratadas com baixas concentrações de LDL nativa (LDLn), isolada de plasma humano, e com LDL minimamente oxidada por diferentes métodos químicos, e os efeitos, comparados entre si. RESULTADOS: LDLn não apresentou efeitos deletérios sobre o endotélio em proliferação e na motilidade in vitro de CEACH, porém na mais alta concentração e por tempo mais prolongado inibiu a proliferação celular. As LDL-ox, quimicamente, pela espermina nonoato (ENO) e 3-morfolinosidnonimina (SIN-1) expressaram efeitos inibitórios significativos sobre a proliferação e a motilidade in vitro de CEACH proporcionais às maiores concentrações e graus de oxidação das LDL. CONCLUSÃO: LDL-ox apresenta efeito citotóxico, inibindo a proliferação e a motilidade espontânea de células endoteliais de artérias coronárias humanas em cultura, proporcionalmente à concentração e ao grau de oxidação da LDL, enquanto, LDL nativa é relativamente inócua.

Art. original(p.185-191) Submitted by ROBERTO PAULO CORREIA DE ARAÚJO (ppgorgsistem@ufba.br) on 2016-09-13T13:52:10Z No. of bitstreams: 1 R. Ci. méd. biol., v.2, n. 2-2003.pdf: 131643 bytes, checksum: 7d7045e42c32854634911a0c6e540fcc (MD5) Made available in DSpace on 2016-09-13T13:52:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 R. Ci. méd. biol., v.2, n. 2-2003.pdf: 131643 bytes, checksum: 7d7045e42c32854634911a0c6e540fcc (MD5) Previous issue date: 2003-07 O envelhecimento é influenciado por fatores genéticos, nutricionais, exposição a radicais livres, radiação e substâncias genotóxicas. A sensibilidade da célula às substâncias mutagênicas aumenta com a idade e pode contribuir para a aceleração do processo de envelhecimento. Esta investigação analisa o efeito do Metotrexato (MTX), agente indutor de quebras cromossômicas na inibição da reprodução celular em grandes longevos e em um grupo controle. A amostra foi constituída por dez idosos com idades entre 92 e 114 anos e doze controles de 20 a 25 anos. As células para análise foram obtidas por cultura temporária de linfócitos, com adição de MTX. A análise estatística foi realizada com as provas de Kruskal-Wallis e Friedman. O Metotrexato mostrou-se eficaz na redução da divisão celular com resultados estatisticamente significativos. O índice mitótico apresentou valores baixos nos idosos, mesmo sem o uso do MTX, mostrando que o processo de envelhecimento está relacionado com o decréscimo na capacidade de reprodução da célula. Salvador

A finalidade deste estudo foi avaliar a atividade secretora, proliferação celular e inibição do ciclo celular das neoplasias hipofisárias. Os tecidos foram obtidos de 13 pacientes incluindo acromegalia (n=5), adenomas não-secretores (n=4), hiperprolactinemia (n=3) e doença de Cushing (n=1). Os espécimes foram examinados por técnica imuno-histoquímica com anticorpos anti-ACTH, anti-TSH, anti-LH, anti-FSH, anti-PRL, anti-hGH, anti-MIB-1 (análise da proliferação celular) e anti-p27 (análise da inibição do ciclo celular). A expressão imuno-histoquímica quanto à atividade secretora nos tumores hipofisários demonstrou que todos produziam mais que um hormônio. As células positivas para o marcador de proliferação celular MIB-1 mostraram-se presentes em aproximadamente 46% dos casos. A maior taxa proliferativa foi encontrada nos tumores com quadro clínico de acromegalia (80% dos casos). A taxa de positividade para a proteína p27 foi de aproximadamente 38%, sendo, em média, maior no tumor responsável pela doença de Cushing. Esses resultados demonstram que os adenomas multisecretores são relativamente comuns. Os índices de proliferação celular baixos e os níveis de p27 próximos àqueles observados em tecidos normais expressam o baixo nível de proliferação celular destes tumores. The aim of this study was to evaluate the secretory activity, cell proliferation and inhibition of the cell cycle of pituitary neoplasm. Tissues were obtained from 13 patients presenting with acromegaly (n=5), non-secreting adenomas (n=4), hyperprolactinemia (n=3) and Cushing's disease (n=1). Specimens were examined by an immunohistochemical technique using anti-ACTH, anti-TSH, anti-LH, anti-FSH, anti-PRL, anti-hGH, anti-MIB-1 (analysis of cell proliferation) and anti-p27 (analysis of cell cycle inhibition) antibodies. Regarding secretory activity all tumors produced more than one hormone. Cells positive for MIB-1 were present in approximately 46% of the cases. The highest incidence of proliferation was found in those presenting acromegaly (80% of the cases). Expression of the p27 protein was positive in approximately 38%, being on an average, highest in Cushing's disease. These results demonstrate the presence of multisecretory pituitary adenomas, a relative common finding. The rela-tively low cell proliferation indexes and the near normal tissue levels of p27 confirm that these tumors grow at a rather slow rate.