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Introduction: Regulation and introduction of new advanced cellular technologies in clinics requires better knowledge on the used cells. One of the major challenges is the difficulty to accurately determine the mechanisms of cell activities when submitted to advanced therapies. Objective: Understand, using the cell tracking methods, the tissue distribution and the molecular response of cells exposed to advanced therapies. Methods: This work was done as an integrated review of data collected in international data-bases and of legislations concerning the clinical use of nanoparticles. Results: Nanotechnology is a very useful tool for cell tracking in vivo, and several nanoparticles have been already approved for clinical use; they can be incorporated into cells and visualized by magnetic resonance imaging. Conclusions: The perspectives on the use of nanomedicines for cellular tracking in medical clinic are promising, requiring elaboration and approval of laws, guides and norms to orient the industrial sectors, regarding the nanomaterials characterization and potential risks to human and animal health, as well as to the environment. Introdução: Para uma regulamentação específica e implementação das novas tecnologias avançadas na clínica médica, é preciso refinar o conhecimento sobre as células utilizadas. Um dos maiores desafios está na dificuldade em determinar os mecanismos de funcionamento das células após a terapia. Objetivo: Compreender, usando os métodos de rastreamento celular em pacientes, a distribuição e a função de células usadas em terapias avançadas. Método: Este trabalho foi elaborado pelo levantamento de artigos científicos nas bases de dados internacionais e da legislação vigente sobre a utilização clínica das nanopartículas. Resultados: Constatamos que a nanotecnologia já é uma ferramenta de grande utilidade, pois diversas nanopartículas magnéticas já são aprovadas para uso clínico; elas podem ser incorporadas por células e visualizadas por imagens de ressonância magnética. O presente texto discute as perspectivas sobre uso de nanomedicamentos para rastreamento celular na clínica médica. Conclusões: A utilização das nanopartículas necessita a elaboração e aprovação de leis, guias e normas que orientem a indústria, como outros setores, sobre a caracterização dos nanomateriais e potenciais riscos à saúde humana, animal e ao meio ambiente.

Introduction: Platelet Rich Fibrin is a platelet concentrate, extemporaneously prepared and autologous, whose purpose is to improve and accelerate the cicatrizing and repair of surgical lesions, originally used for oral surgeries. Objective: To analyze the preparation, quality control and clinical use of PRF, to understand and discuss the practical and regulatory aspects of its use. Method: This work was elaborated as an integrative review, by the survey of scientific articles and current legislation on the clinical use of PRF. Results: PRF consists of a matrix of fibrin with a large quantity of platelets, which release numerous pro-regenerative mediators. Its preparation is done in a surgical center or dental office, and the dental surgeon is responsible for the procedures and the final product. The used equipment and materials must be compatible with the standards approved for the PRF preparation methods. Conclusion: The use of the PRF by dental surgeons is regulated by the Resolution of the Federal Council of Dentistry (CFO) 158/2015, June 08, 2015. There is no regulation for the use of PRF by the Federal Council of Medicine (CFM). PRF preparation and use are not considered to be a part of Advanced Therapies. Introdução: A Fibrina Rica em Plaquetas é um concentrado plaquetário, de preparo extemporâneo e uso autólogo, cuja proposta é promover uma melhor e mais rápida cicatrização e reparo das lesões cirúrgicas, tendo sido desenvolvida, inicialmente, para as cirurgias bucais. Objetivo: Analisar o preparo, controle de qualidade e uso clínico do PRF para compreender e discutir os aspectos práticos e regulatórios acerca da sua utilização. Método: Este trabalho foi elaborado como uma revisão integrativa, pelo levantamento de artigos científicos e legislação vigente sobre a utilização clínica do PRF. Resultados: O PRF constitui-se de uma matriz de fibrina, com grande quantidade de plaquetas, que liberam numerosos mediadores pró-regenerativos. A sua obtenção, preparo e uso ocorrem em centro cirúrgico ou consultório odontológico, cabendo ao cirurgião-dentista o compromisso com a garantia da qualidade, quanto aos procedimentos realizados. Além disso, os equipamentos e insumos utilizados devem ser compatíveis com as técnicas de preparo e uso do PRF. Conclusões: A utilização do PRF, pelos cirurgiões-dentistas, segue as determinações da Resolução do Conselho Federal de Odontologia – CFO nº 158/2015, de 08 de junho de 2015. Não há regulamentação para o uso de PRF pelo Conselho Federal de Medicina (CFM). A preparação e o uso do PRF não são considerados Terapia Avançada.

Introduction: Platelets have a central role in the tissue response to injury, in hemostasis and clot formation. They also release rapidly and in orchestrated order bioactive molecules, important for angiogenesis and for tissue regeneration. Non-transfusional clinical use of platelet-derived products, such as Platelet Rich Plasma (PRP), is based on their ability to maximize cellular regeneration in lesions that have repair difficulties. Objectives: This review addresses the characteristics and the potential clinical use of platelets and their derivatives and discusses the legislative framework of their use in the Brazilian context. Method: The databases of PubMed, Brazilian Virtual Health Library, electronic pages of Anvisa and the Brazilian Ministry of Health were consulted between September 2017 and January 2018. Results: PRP is a platelet-derived product that cannot be chemically defined, and its proposed clinical uses are not orthologous applications. Conclusions: We can thus consider that the applications of PRP are Advanced Cell Therapies. Therefore, it is mandatory to standardize protocols and establish quality control criteria - such as traceability, efficacy and pharmacovigilance - so that their use can be properly controlled by the competent regulatory organs, guaranteeing safety in their use. Introdução: As plaquetas têm um papel central no processo da resposta tecidual à injúria, atuando na hemostasia primária e na coagulação, e liberando de maneira coordenada as moléculas bioativas importantes para a angiogênese e para a regeneração tecidual. O uso clínico não transfusional de produtos derivados de plaquetas, como o Plasma Rico em Plaquetas (PRP), baseia-se na sua habilidade de maximizar o processo de regeneração celular, em lesões com dificuldades de reparo natural. Objetivo: Esta revisão aborda as características e potencialidades do uso clínico de plaquetas e seus derivados e discute seu arcabouço legislativo no contexto brasileiro. Método: Foram consultadas as bases de dados PubMed, Biblioteca Virtual em Saúde, páginas eletrônicas da Anvisa e do ministério da Saúde, entre setembro 2017 e janeiro de 2018. Resultado: O PRP é produto derivado de plaquetas que não pode ser quimicamente definido, e o seu uso clínico aqui discutido não é ortólogo. Conclusão: Dessa maneira, podemos considerar a aplicação do PRP como uma Terapia Celular Avançada, sendo fundamental padronizar protocolos, estabelecer critérios de controle de qualidade (rastreabilidade, eficácia e fármaco-vigilância), tornando seu uso devidamente controlado pelos órgãos competentes, com maior segurança na sua utilização.

Introduction: Preparations of products for advanced therapies include an extensive manipulation stage of the cell primary culture, which can lead to changes in the final cellular population. Standardization of the technique for obtaining the cellular cultures, in complying with Good Manufacturing Practices (GMP), and carrying out quality controls of process and final product, are essential to ensure patient safety and comparability of clinical outcomes. Objective: The purpose of this study was to identify the most prevalent trials cited in the scientific literature or in health standards applied to the evaluation of the quality of human primary cells, which could be inserted in the routine of the Cell Processing Centers. Method: A survey was carried out of scientific articles and health standards related to cell therapy and associated quality assays. Results: This study showed that the advanced cellular therapy products regulation do not specify the tests that should be used for quality control or, when specified, do not define acceptance or rejection ranges for the products, which makes urgent the discussion of such matter. Conclusions: In this article, we highlight the need to prepare the product in the form of a single batch that should be quality-controlled from samples representative of the whole. In addition, we mention some of the trials that define the quality of the advanced cellular therapy product, detailing the points at which they are to be performed in the flowchart. Introdução: O preparo de produtos para terapias avançadas inclui, frequentemente, a manipulação extensa de células primárias in vitro, o que pode acarretar em alterações da população celular final. A padronização dos métodos de obtenção das culturas, seguindo as regras das Boas Práticas de Fabricação, com a realização dos controles de qualidade do processo e do produto final, é essencial para garantir a segurança do paciente e a comparabilidade dos resultados clínicos obtidos. Objetivo: Este estudo buscou identificar os ensaios, prevalentemente citados na literatura científica ou em normas sanitárias, aplicados na avaliação da qualidade de células primárias humanas, passíveis de serem inseridos na rotina dos Centros de Processamento Celular. Método: Foi realizado o levantamento de artigos científicos e de normas sanitárias que tratassem de terapia celular e dos ensaios de qualidade associados. Resultados: Foi evidenciado que as normas regulamentares direcionadas a produtos com base em células cultivadas in vitro não detalham os ensaios de qualidade, o que torna urgente a discussão dessa matéria. Conclusões: Evidenciamos a necessidade de preparo do produto na forma de um lote de células, que deve ser controlado para a qualidade, a partir de amostras representativas do todo e propomos a realização de uma bateria de ensaios, que definem a qualidade do produto de terapia avançada, a base de células cultivadas in vitro, com detalhamento dos pontos em que estes devem ser realizados, organizados como fluxogramas de processamento.

Introduction: The advancement of clinical trials and cell therapy require the replacement of fetal bovine serum by a product of human origin, capable of sustaining an expansion of human cells for research and cell therapy. Objective: This integrative review had as main objective to evaluate different alternatives of cell culture supplementation free of animal products, called xeno-free cell cultures. Method: Fifty selected articles from PubMed published up to January 2018 in English or Portuguese were evaluated. Results: Platelet rich plasma (PRP) is considered to be a good alternative for supplementation of the cell culture media. PRP is obtained from blood, and has a rich content released by activated platelets, capable of stimulating proliferation and differentiation of several cell types, both fully differentiated and the progenitor ones. Use of PRP in “xeno-free” cell culture systems has apparently no risk of genetic alterations of the cells, nor their contamination with pathogens. Advantages of its use include: 1) the possibility of using autologous serum; 2) reducing the risk of contamination; 3) easy preparation and 4)low cost of production. Conclusions: The use of discarded platelet concentrate in hemotherapy centers is a good alternative for the production of PRP, which will be used systematically in the culture of human cells. The challenge is to standardize this production process, in order to grant the quality of the product to be used in advanced therapies. Introdução: O avanço dos ensaios clínicos e da terapia celular implicam na necessidade de substituição do soro fetal bovino por um produto de origem humana, capaz de sustentar a expansão de células humanas destinadas às pesquisas e terapias celulares. Objetivo: Esta revisão integrativa teve como objetivo principal avaliar diferentes alternativas de suplementação de cultura celulares livres de produtos animais, chamadas de culturas celulares xeno-free. Método: Foi realizada a análise de 50 artigos recuperados do PubMed publicados até janeiro de 2018 em língua inglesa ou em português. Resultados: O plasma rico em plaquetas (PRP) é considerado como uma boa alternativa para suplementação do meio de cultura celular. O PRP é obtido a partir do sangue, e possui um rico conteúdo liberado pelas plaquetas ativadas, capaz de estimular a proliferação e a diferenciação de diversos tipos de células, tanto diferenciadas quanto progenitoras. A utilização do PRP em sistemas de cultura celular xeno-free não oferece risco de alterações genéticas da população celular, tampouco sua contaminação com patógenos. As vantagens de sua utilização incluem: 1) a possibilidade de uso de soro autólogo; 2) redução de riscos de contaminação; 3) facilidade de preparo e 4) baixo custo de produção. Conclusões: O uso de concentrado de plaquetas descartados nos centros de hemoterapia é uma boa alternativa para a produção do PRP, que será utilizado sistematicamente na cultura de células humanas. O desafio é padronizar esse processo de produção, de forma a garantir a qualidade do produto destinado às terapias avançadas.

Biotechnology applied to health requires human cells for quality controls of products and for toxicological assessment of molecules that enter in contact with human body. Validated alternative methods allowed reduction and/or replacement of animal use in toxicology, but the Brazilian legislation on the use of biological materials of human ori-gin does not provide human cells with controlled and certified quality.The critical analysis conducted in the Brazilian’ legislation on legal ways of access to human biological materials for obtaining, characterization and availability of hu-man cells, from the period of the Federal Constitution in 1988 until May 2014, showed that Brazilian society lacks rules for collection and use of human biological materials, including supply of cells, either for therapeutic use or for in vitro assays including the alternative methods for toxicology.We propose a model for providing human biological materials such as cells, tissues, organs or body parts for research, toxicological or therapeutic use similar to the model of the surplus production of blood and its derivatives. A biotecnologia aplicada à saúde necessita de células humanas para controle de qualidade de produtos e para análise toxicológica das moléculas que entram em contato com o corpo humano. Métodos alternativos validados promovem redução e substituição do uso de animais nos ensaios toxicológicos, mas a legislação brasileira referente ao uso de material biológico humano não prevê disponibilização de células com qualidade controlada e certificada.A análise crítica da legislação brasileira sobre vias de acesso legal a materiais biológicos humanos para obtenção, caracterização e disponibilização de células humanas, abrangendo o período da Constituição Federal de 1988 até o mês de maio de 2014, evidencia que a sociedade Brasileira carece de regulamentação para coleta e uso de material biológico humano incluindo o fornecimento de células para fins terapêuticos ou para utilização na aplicação dos métodos alternativos.Propomos como modelo para disponibilização de materiais biológicos humanos como células, tecidos, órgãos ou partes do corpo humano para fins de pesquisa, ensaios toxicológicos e uso terapêutico o mesmo modelo de oferta do excedente de sangue e seus derivados.

FUNDAMENTO: Diversos estudos foram publicados sobre a ação de células tronco da medula óssea no ventrículo esquerdo, ao atuarem no remodelamento pós-infarto agudo do miocárdio. Os resultados, no entanto, têm se mostrado controversos. OBJETIVO: Avaliar através do ecocardiograma a função sistólica de pacientes com infarto agudo do miocárdio após o Transplante Autólogo de Células Mononucleares da Medula Óssea (TACMMO) através de duas vias injeção: intracoronariana e intravenosa. MÉTODOS: Estudo aberto, prospectivo, randomizado. Foram incluídos pacientes admitidos por infarto agudo do miocárdio (IAM) com supradesnivelamento do segmento ST e submetidos à reperfusão mecânica ou química, dentro de 24 horas após o início dos sintomas, que apresentavam ao ecocardiograma redução da contratilidade segmentar e defeito fixo da perfusão relacionada à artéria culpada pelo IAM. A medula óssea autóloga foi aspirada da crista ilíaca posterior sob sedação e analgesia, nos pacientes randomizados para o grupo tratado. Após manipulação laboratorial, 100 milhões de células mononucleares foram injetadas por via intracoronariana ou intravenosa. Utilizamos o ecocardiograma (Vivid 7) para avaliar a função ventricular antes e após três e seis meses da infusão de células. RESULTADOS: Foram incluídos trinta pacientes, 14 no grupo arterial (GA), dez no grupo venoso (GV) e seis no grupo controle (GC). Não houve diferença estatística dos parâmetros ecocardiográficos estudados entre os grupos. CONCLUSÃO: O transplante autólogo de células mononucleares da medula óssea não demonstrou melhora dos parâmetros ecocardiográficos da função sistólica. BACKGROUND: Several studies have been published on the effect of bone-marrow stem cells on the left ventricle when acting on post- acute myocardial infarction remodeling. However, the results have been controversial. OBJECTIVE: To carry out an echocardiographic analysis of the systolic function of patients with acute myocardial infarction after autologous mononuclear bone marrow cell transplantation (AMBMCT) as performed via the intracoronary and intravenous routes. METHODS: This is an open-label, prospective, randomized study. Inclusion criteria: patients admitted for ST-elevation acute myocardial infarction (MI) who had undergone mechanical or chemical reperfusion within 24 hours of the onset of symptoms and whose echocardiogram showed decreased segmental wall motion and fixed perfusion defect related to the culprit artery. Autologous bone marrow was aspirated from the posterior iliac crest under sedation and analgesia of the patients randomly assigned for the treatment group. After laboratory manipulation, intracoronary or intravenous injection of 100 x 106 mononuclear cells was performed. Echocardiography (Vivid 7) was used to assess ventricular function before and three and six months after cell infusion. RESULTS: A total of 30 patients were included, 14 in the arterial group (AG), 10 in the venous group (VG), and six in the control group (CG). No statistical difference was found between the groups for the echocardiographic parameters studied. CONCLUSION: Autologous mononuclear bone marrow cell transplantation did not improve the echocardiographic parameters of systolic function. FUNDAMENTO: Diversos estudios fueron publicados sobre la acción de células tronco de la médula ósea en el ventrículo izquierdo, al actuar en la remodelación postinfarto agudo del miocardio. Los resultados, sin embargo, tienen se mostrado controvertidos. OBJETIVO: Evaluar a través del ecocardiograma la función sistólica de pacientes con infarto agudo de miocardio tras el Transplante Autólogo de Células Mononucleares da Médula Ósea (TACMMO) a través de dos vías inyección: intracoronaria e intravenosa. MÉTODOS: Estudio abierto, prospectivo, randomizado. Se incluyeron a pacientes admitidos por infarto agudo de miocardio (IAM) con supradesnivelamiento del segmento ST y sometidos a la reperfusión mecánica o química, dentro de 24 horas tras el inicio de los síntomas, que presentaban al ecocardiograma una reducción de la contractilidad segmentar y defecto fijo de la perfusión relacionada a la arteria responsable del IAM. Se llevó a cabo la aspiración de la médula ósea antóloga de la cresta ilíaca posterior bajo sedación y analgesia, en los pacientes randomizados para el grupo tratado. Tras la manipulación laboratorial, se inyectaron 100 millones de células mononucleares por vía intracoronaria o intravenosa. Utilizamos el ecocardiograma (Vivid 7) para evaluar la función ventricular antes y tras tres y seis meses de la infusión de células. RESULTADOS: Se incluyeron a 30 pacientes, 14 en el grupo arterial (GA), 10 en el grupo venoso (GV) y 6 en el grupo control (GC). No hubo diferencia estadística de los parámetros ecocardiográficos estudiados entre los grupos. CONCLUSIÓN: El transplante antólogo de células mononucleares de la médula ósea no demostró mejora de los parámetros ecocardiográficos de la función sistólica.

INTRODUÇÃO: A medicina regenerativa tem ganho grande importância nos últimos anos em decorrência da possibilidade de certas células se diferenciarem em linhagens celulares distintas e, assim, reconstruírem o tecido lesado. As células-tronco têm despontado como forma alternativa de tratamento para doenças pela sua capacidade de diferenciação nos mais de 100 tipos de tecido. A medula óssea contém células-tronco adultas, hematopoéticas e mesenquimais, que auxiliam na limitação do remodelamento cardíaco. MÉTODO: Foram utilizados 9 cães com peso entre 25 kg e 30 kg, divididos em três grupos: intracoronária, intramiocárdica-transendocárdica e retrógrada venosa. Células mononucleares da medula óssea foram coletadas por densidade Ficoll, marcadas com fluorocromo Hoechst e infundidas nas diferentes vias citadas anteriormente. RESULTADOS: Observou-se que, na via intracoronária, a distribuição das células foi homogênea do epicárdio ao endocárdio, em átrios e ventrículos direito e esquerdo; na via intramiocárdica-transendocárdica, as células ficaram mais restritas ao local da infusão, com consequente maior número em ventrículo esquerdo; e na via retrógrada venosa, as células encontravam-se com padrão de distribuição semelhante ao da via intramiocárdica, contudo sem que as mesmas chegassem à região endocárdica. Com relação à quantidade de células distribuídas pelo tecido, foi observado que havia diferença significativa (P < 0,01), quando analisada a interação via de infusão vs. região. CONCLUSÃO: Podemos concluir que existe a possibilidade de empregar técnicas distintas de entrega de células para diferentes doenças cardíacas. BACKGROUND: Regenerative medicine has become increasingly important in recent years due to the possibility of certain cells to differentiate into different cell lines and thus recover the damaged tissue. The stem cell has emerged as an alternative treatment for diseases as a result of their ability to differentiate in more than 100 types of tissue. Bone marrow contains adult stem cells, hematopoietic and mesenchymal cells, which limit heart remodeling. METHODS: Nine dogs weighing between 25 and 30 kg were divided into three groups: intracoronary group, intramyocardial-transendocardial group and retrograde venous group. Mononuclear cells were collected from bone marrow by Ficoll density, stained with Hoechst fluorocrom and infused through the different routes mentioned above. RESULTS: It was observed that distribution of the cells was homogeneous from the epicardium to the endocardium in the right and left atrium and ventricle when the intracoronary route was used. With the transendocardial route the cells were more restricted to the infusion site, with a consequent larger number in the left ventricle. A similar distribution pattern was observed with retrograde venous infusion, however, cells did not reach the endocardial region. As to the number of cells distributed over the tissue, a significant difference (P < 0.01) was observed for the interaction between the infusion route versus region. CONCLUSION: We concluded that different cell delivery techniques may be used according to the different heart diseases.

INTRODUÇÃO: A medicina regenerativa tem ganho grande importância nos últimos anos em decorrência da possibilidade de certas células se diferenciarem em linhagens celulares distintas e, assim, reconstruírem o tecido lesado. As células-tronco têm despontado como forma alternativa de tratamento para doenças pela sua capacidade de diferenciação nos mais de 100 tipos de tecido. A medula óssea contém células-tronco adultas, hematopoéticas e mesenquimais, que auxiliam na limitação do remodelamento cardíaco. MÉTODO: Foram utilizados 9 cães com peso entre 25 kg e 30 kg, divididos em três grupos: intracoronária, intramiocárdica-transendocárdica e retrógrada venosa. Células mononucleares da medula óssea foram coletadas por densidade Ficoll, marcadas com fluorocromo Hoechst e infundidas nas diferentes vias citadas anteriormente. RESULTADOS: Observou-se que, na via intracoronária, a distribuição das células foi homogênea do epicárdio ao endocárdio, em átrios e ventrículos direito e esquerdo; na via intramiocárdica-transendocárdica, as células ficaram mais restritas ao local da infusão, com consequente maior número em ventrículo esquerdo; e na via retrógrada venosa, as células encontravam-se com padrão de distribuição semelhante ao da via intramiocárdica, contudo sem que as mesmas chegassem à região endocárdica. Com relação à quantidade de células distribuídas pelo tecido, foi observado que havia diferença significativa (P < 0,01), quando analisada a interação via de infusão vs. região. CONCLUSÃO: Podemos concluir que existe a possibilidade de empregar técnicas distintas de entrega de células para diferentes doenças cardíacas.

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FUNDAMENTOS: As neoplasias malignas da pele de grandes dimensões apresentam dificuldades de reconstrução após a excisão. OBJETIVO: O objetivo deste estudo foi avaliar a exeqüibilidade de uma nova proposta de cobertura para feridas cirúrgicas criadas após a ressecção de grandes tumores cutâneos, a combinação da derme acelular humana com epitélio autólogo cultivado. MÉTODOS: A aplicação dos substitutos de pele foi feita em quatro pacientes com área de implante variando de 33 a 120 cm2. Além da observação dos resultados clínicos, realizou-se estudo morfológico para avaliação da integração dos implantes. RESULTADOS: Ceratinócitos autólogos cultivados foram enxertados em dois pacientes e não demonstraram integração. A derme acelular foi aplicada em quatro pacientes, sendo que em um deles foram feitas duas aplicações. Dos cinco implantes de derme acelular realizados, dois não apresentaram integração, em dois a integração foi de 70%, e de 50% no último. CONCLUSÃO: A cobertura imediata e definitiva de defeitos cirúrgicos através da aplicação de derme acelular humana combinada com epitélio autólogo cultivado é exeqüível. Em oncologia cutânea apenas em situações especiais o uso de substitutos de pele pode ser conveniente no sentido de evitar reconstruções mais complexas.

FUNDAMENTOS: As neoplasias malignas da pele de grandes dimensões apresentam dificuldades de reconstrução após a excisão. OBJETIVO: O objetivo deste estudo foi avaliar a exeqüibilidade de uma nova proposta de cobertura para feridas cirúrgicas criadas após a ressecção de grandes tumores cutâneos, a combinação da derme acelular humana com epitélio autólogo cultivado. MÉTODOS: A aplicação dos substitutos de pele foi feita em quatro pacientes com área de implante variando de 33 a 120 cm2. Além da observação dos resultados clínicos, realizou-se estudo morfológico para avaliação da integração dos implantes. RESULTADOS: Ceratinócitos autólogos cultivados foram enxertados em dois pacientes e não demonstraram integração. A derme acelular foi aplicada em quatro pacientes, sendo que em um deles foram feitas duas aplicações. Dos cinco implantes de derme acelular realizados, dois não apresentaram integração, em dois a integração foi de 70%, e de 50% no último. CONCLUSÃO: A cobertura imediata e definitiva de defeitos cirúrgicos através da aplicação de derme acelular humana combinada com epitélio autólogo cultivado é exeqüível. Em oncologia cutânea apenas em situações especiais o uso de substitutos de pele pode ser conveniente no sentido de evitar reconstruções mais complexas. BACKGROUND: Reconstruction difficulties may arise after excision of large malignant skin neoplasms.a OBJECTIVE: The objective of this study was to assess the feasibility of a new coverage for surgical wounds following resection of large skin tumors: a combination of human acellular dermis with cultured autologous epithelium. METHODS: The skin substitute was implanted in four patients, one of them received two implants and the area ranged from 33 to 120 cm2. Clinical results and morphologic studies were assessed as to implant integration. RESULTS: Cultured autologous epithelium was grafted in two patients and no integration was observed. The acellular dermis was applied to four patients. Out of five acellular dermis implants, two did not present integration, two presented 70% integration and the remaining, 50% integration. CONCLUSION: The immediate and definite coverage of surgical defects by means of application of human acellular dermis combined with cultured autologous epithelium is feasible. In skin oncology, the use of skin substitutes might be convenient only in special situations to avoid more complex reconstructions.

OBJETIVO: Avaliação da segurança e eficácia do uso de células progenitoras autólogas da medula óssea (CMMO) no tratamento da Osteonecrose da Cabeça Femoral (OCF) de pacientes portadores de anemia falciforme. MÉTODOS: Foram estudados 8 pacientes portadores de anemia falciforme, com OCF nos estágios I e II (classificação de Ficat e Arlet). As CMMO retiradas da crista ilíaca posterior foram concentradas e reinfundidas na área central da osteonecrose. Os principais parâmetros avaliados foram segurança, sintomas clínicos e progressão da doença, através da avaliação clínica (Harris Hip Score) e radiológica. RESULTADOS: A maior parte dos pacientes (7 em 8) referiu melhora dos sintomas após o tratamento. Não houve complicações durante o procedimento anestésico e cirúrgico. A medida do escore (Harris Hip Score) no pré-operatório foi 78,5 +/- 6,2 pontos, com aumento significativo destes valores no pós-operatório (98,3 +/- 2,5 pontos) (p< 0,001). As avaliações radiográficas e os parâmetros celulares foram favoráveis. CONCLUSÃO: O implante autólogo de CMMO parece ser seguro e eficaz no tratamento dos estágios iniciais da OCF em pacientes falciformes. Embora os resultados iniciais sejam promissores, sua interpretação é limitada pelo número de pacientes avaliados e o período curto de duração do seguimento pós-operatório. Necessita-se estender o grupo em estudo e os parâmetros celulares avaliados. PURPOSE: To assess the efficacy and safety of autologous bone-marrow mononuclear cells (BMMC) implantation in necrotic lesions of the femoral head in patients with sickle cell disease. METHODS: We studied eight patients with stage-I or -II femoral head osteonecrosis according to the system by Ficat and Arlet. BMMCs were harvested and re-infused into the necrotic zone. The primary endpoints studied were safety, clinical symptoms and disease progression, these being assessed according to the Harris hip score (HHS) and to X-ray studies. RESULTS: After eight months, seven of the eight patients reported improvement from symptoms. There were no complications during anesthetic and surgery procedures. There was a significant postoperative increase in the HHS (98.3 +/- 2.5 points) compared to preoperative HHS (78.5 +/- 6.2 points) (p< 0.001). X-ray evaluation and cell parameters were found to be favorable. CONCLUSION: The autologous bone-marrow mononuclear cells implantation seems to be a safe and effective treatment for early stages of femoral head osteonecrosis in patients with sickle cell disease. Although promising, the interpretation of these early results is limited due to the small sample and to the short duration of follow-up. Further studies and advanced cellular assays are required to confirm the results.

OBJETIVO: Avaliação da segurança e eficácia do uso de células progenitoras autólogas da medula óssea (CMMO) no tratamento da Osteonecrose da Cabeça Femoral (OCF) de pacientes portadores de anemia falciforme. MÉTODOS: Foram estudados 8 pacientes portadores de anemia falciforme, com OCF nos estágios I e II (classificação de Ficat e Arlet). As CMMO retiradas da crista ilíaca posterior foram concentradas e reinfundidas na área central da osteonecrose. Os principais parâmetros avaliados foram segurança, sintomas clínicos e progressão da doença, através da avaliação clínica (Harris Hip Score) e radiológica. RESULTADOS: A maior parte dos pacientes (7 em 8) referiu melhora dos sintomas após o tratamento. Não houve complicações durante o procedimento anestésico e cirúrgico. A medida do escore (Harris Hip Score) no pré-operatório foi 78,5 +/- 6,2 pontos, com aumento significativo destes valores no pós-operatório (98,3 +/- 2,5 pontos) (p< 0,001). As avaliações radiográficas e os parâmetros celulares foram favoráveis. CONCLUSÃO: O implante autólogo de CMMO parece ser seguro e eficaz no tratamento dos estágios iniciais da OCF em pacientes falciformes. Embora os resultados iniciais sejam promissores, sua interpretação é limitada pelo número de pacientes avaliados e o período curto de duração do seguimento pós-operatório. Necessita-se estender o grupo em estudo e os parâmetros celulares avaliados.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-06T20:52:40Z No. of bitstreams: 3 TESE - FABIO TUCHE pre-textuais.pdf: 207432 bytes, checksum: 9bb428c99d61ec4bb95a14ed2fb852b7 (MD5) REFERENCIAS.pdf: 34605 bytes, checksum: 6201517682146a1d5a0d8ad84e7db12c (MD5) TESE - FABIO TUCHE.pdf: 1640142 bytes, checksum: 13fb4e296286aa2c583baf2982479aef (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-06T20:52:40Z (GMT). No. of bitstreams: 3 TESE - FABIO TUCHE pre-textuais.pdf: 207432 bytes, checksum: 9bb428c99d61ec4bb95a14ed2fb852b7 (MD5) REFERENCIAS.pdf: 34605 bytes, checksum: 6201517682146a1d5a0d8ad84e7db12c (MD5) TESE - FABIO TUCHE.pdf: 1640142 bytes, checksum: 13fb4e296286aa2c583baf2982479aef (MD5) Previous issue date: 2010-03-31 Cell therapy for cardiovascular disease represents a promising new therapeutic option, especially for ischemic heart disease. The intracoronary (ICo) injection of bone marrow mononuclear cells (BMMC) is the most commonly studied rote in clinical trials. Although it has been documented beneficial effects with this therapy, data pertaining the mechanisms of interaction between transplanted cells and cardiac microvascular environment are lacking. Assessment of BMMC in myocardial microcirculation has the potential to clarify its mechanisms of action, opening new therapeutic possibilities. The objective of the study was to describe and to evaluate an innovative technique of direct ICo injection and in vivo visualization of BMMC in myocardial small rodents, after a period of global cardiac ischemia (GMI) and reperfusion, in the presence and absence of atherosclerosis. Materials and Methods: The syngeneic murine cervical heterotopic heart transplantation (CHHT) technique was modified by inserting and fixing a catheter connected to a syringe into the donor animal brachiocephalic trunk. GMI was induced occluding the nutritive artery of the graft for 1 hour. Bone marrow mononuclear cells were isolated and labeled prior to ICo injection. Intravital fluorescence microscopy (IFM) was used for analysis of the coronary microcirculation of the right ventricle (RV), including arterioles, capillaries and venules. Parameters of microvascular perfusion, microvascular permeability and the interactions between the BMMC and endothelial cells were studied. The impact of atherosclerosis on the recovery, phenotype and cellular function was also evaluated. Results: The IFM has allowed detailed analysis of both the coronary microcirculation, as the kinetics of BMMC. The GMI affected microcirculation, reducing the functional capillary density (FCD). This reduction was higher in the presence of atherosclerosis. The main area of cell retention was the capillary network, not the arterioles or venules. The number of BMMC retained was not increased in the presence of ischemia, neither of atherosclerosis and didn t correlate with microvascular perfusion or inflammation before injection. Cell retention was strongly correlated with BMMC expression of CXCR4. BMMC injection didn t affect negatively the FCD and microcirculation. Atherosclerosis didn t change the number of BMMC recovered after Ficoll gradient isolation. BMMC expression of CD54 was reduced in ApoE-/- mice. BMMC of atherosclerotic donors have generated a greater number of colony forming units of granulocytes and macrophages. The RV function analyses of the cardiac graft could be performed by echocardiography. Conclusions: The direct ICo injection and detailed visualization of BMMC kinetics in the coronary microcirculation in vivo was possible. The IRCG caused reduction of functional capillary density. Retention BMMC after ICo injection occurred in the capillaries and probably depends on the expression of CXCR4. A terapia celular para doenças cardiovasculares representa uma nova e promissora opção terapêutica, principalmente para a cardiopatia isquêmica. A injeção de células mononucleares de medula óssea (CMMO) pela via intracoronariana (ICO) é a mais estudada em ensaios clínicos. Embora já se tenha documentado efeitos benéficos com essa terapia, dados relativos aos mecanismos de interação entre as células transplantadas e o ambiente microvascular cardíaco são escassos. A avaliação das CMMO na microcirculação miocárdica tem o potencial de esclarecer seus mecanismos de ação, abrindo novas possibilidades terapêuticas. O objetivo do estudo foi descrever e avaliar uma inovadora técnica de injeção ICO direta e visualização in vivo das CMMO na microcirculação miocárdica de pequenos roedores, após um período de isquemia miocárdica global (IMG) seguida de reperfusão, na presença e na ausência da aterosclerose. Materiais e Métodos: A técnica de transplante cardíaco heterotópico cervical (TCHC) em murinos foi modificada com a inserção e fixação de um microcateter conectado a uma seringa, no tronco braquiocefálico do animal doador. IMG foi induzida ocluindo-se a artéria nutridora do enxerto com um microclamp vascular, por 1 hora. As CMMO foram isoladas e marcadas antes da injeção ICO. Microscopia intravital de fluorescência (MIF) foi usada para análise da microcirculação coronariana do ventrículo direito (VD), incluindo arteríolas, capilares e vênulas pós-capilares. Parâmetros de perfusão e permeabilidade microvasculares e as interações entre as CMMO e células endoteliais foram estudados. O impacto da aterosclerose na recuperação, fenótipo e função celular também foi avaliado. Resultado: A MIF permitiu análise detalhada da microcirculação coronariana e da cinética das CMMO injetadas pela via ICO. A IMG afetou a microcirculação, reduzindo a densidade capilar funcional (DCF). Tal redução foi maior na presença de aterosclerose. A principal área de retenção celular foi a rede capilar e não as arteríolas ou vênulas. Nem a presença de isquemia, nem de aterosclerose alterou o número de células retidas. O número de CMMO retidas não aumentou na presença de isquemia, nem de aterosclerose e não se correlacionou com a perfusão microvascular ou inflamação prévios à injeção. Houve forte correlação entre o número de CMMO retidas e a expressão de CXCR4. A injeção de CMMO não afetou negativamente a DCF e a microcirculação. Aterosclerose não alterou o número de CMMO obtidas após isolamento por gradiente de Ficoll. A expressão de CD54 estava reduzida em camundongos ApoE-/-. CMMO de doadores ateroscleróticos geraram um número aumentado de unidades formadoras de colônias de granulócitos e macrófagos. A análise ecocardiográfica da função do VD do enxerto cardíaco cervical foi exeqüível. Conclusões: A injeção ICO direta e a visualização detalhada da cinética das CMMO na microcirculação coronária in vivo por MIF foi possível. A IMG provocou redução da densidade capilar funcional. A retenção das CMMO após injeção ICO se deu nos capilares e provavelmente depende da expressão de CXCR4.

A mielopoiese depende do estroma mielossuportivo tanto no que diz respeito a produção de fatores de crescimento como de proteoglicanos de heparan-sulfato. O ambiente intercelular formado entre células do estroma e células progenitoras mielóides possui características ácidas, conferidas por moléculas carregadas negativamente e sensíveis a sialidase. Gangliosídios, glicoesfingolipídios contendo pelo menos uma molécula de ácido siálico, têm sido relacionados à modulação de fatores de crescimento e à diferenciação de células hematopoiéticas. Neste trabalho, estudamos a produção, a distribuição e o papel dos gangliosídios em um modelo experimental in vitro de mielopoiese dependente do estroma derivado de fígado fetal murino AFT-024. Utilizamos como sistema de resposta para o monitoramento da disponibilidade e atividade local de GM-CSF a linhagem celular precursora mielóide FDC-P1, a qual é dependente de GM-CSF para sua sobrevivência e proliferação. O GM3 foi o principal gangliosídio produzido pelo estroma, mas não pelas células mielóides, sendo requerido para que a função mielossuoprtiva do estroma seja ótima. Este gangliosídio foi liberado para o sobrenadante de cultura das células AFT-024 e seletivamente incorporado pelas células progenitoras mielóides, onde foi segregado em rafts e colocalizou-se com a cadeia α do receptor de GM-CSF. Além disso, o gangliosídio GM3 foi encontrado na fração insolúvel de células AFT-024 tratadas com Triton X-100 a 4°C, estando presente também nas frações menos densas do fracionamento em gradiente de sacarose, indicando sua presença em rafts. O GM3 captado pelas células FDC-P1 foi metabolizado, gerando gangliosídios das séries a e b, da mesma forma que o GM3 endógeno. Nestas células, o GM1 é o principal gangliosídio, também sendo encontrado na interface entre estroma e células mielóides, mas com colocalização apenas parcial com a cadeia α do receptor de GM-CSF. As imagens de imunocitoquímica ainda revelaram que o GM1 não apresenta colocalização significante com a cadeia β do receptor de GM-CSF, com o gangliosídio GM3, ou com CD44. Em um outro grupo de experimentos, analisamos o perfil de síntese e shedding de gangliosídios em um estroma derivado de medula óssea, a linhagem celular S17; na linhagem celular GRX, derivada de células estreladas hepáticas isoladas de reação fibro-granulomatosa inflamatória; e em cultivos primários de fibroblasto de pele murinos. Além disso, comparamos a habilidade destes estromas para sustentar a sobrevivência e a proliferação das células precursoras mielóides. A concentração de ácido siálico reflete a capacidade mielossuportiva dos estromas. Embora os diferentes estromas sintetizem os mesmos gangliosídios, existem diferenças no conteúdo relativo de cada gangliosídio. Aparentemente, o GM3 é o principal gangliosídio envolvido na modulação da atividade dos fatores de crescimento. O shedding foi similar ao perfil de síntese de gangliosídios, mas a atividade mielossuportiva dos sobrenadantes foi diferente entre os tipos celulares e em relação a sustentação por contato. No entanto, a proliferação das células FDC-P1 diminuiu em todos os sobrenadantes obtidos de células estromais em que a síntese de gangliosídios foi inibida e onde o gangliosídio GM3 foi neutralizado pelo anticorpo monoclonal anti-GM3. As diferenças encontradas na capacidade de sustentação da proliferação de células progenitoras mielóides por fator de crescimento solúvel ou apresentado podem estar relacionadas a diferenças na concentração de gangliosídios inseridos na membrana plasmática ou liberados para o meio de cultura. Sendo assim propomos que as células do estroma mielossuportivo produzem e secretam os fatores de crescimento necessários e seus cofatores, tais como proteoglicanos de heparan-sulfato. O estroma também fornece gangliosídios, os quais são transferidos do estroma para as célulasalvo, onde geram domínios de membrana específicos contendo complexos macromoleculares que incluem os receptores para fatores de crescimento.

Orientador: Radovan Borojevic Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Terapias celulares para o tratamento de doença isquêmica cardíaca estão atualmente sob investigação. Foram anteriormente publicados pelo nosso grupo os resultados de ensaio clínico na fase I, onde células autólogas mononucleares da medula óssea foram injetadas por via transendocárdica em pacientes com doença cardíaca isquêmica terminal. O estudo atual reporta os achados anatomopatológicos do estudo post-mortem de um dos pacientes tratados, que morreu 11 meses após a terapia celular objetivando verificar a presença de neovascularização nas zonas tratadas assim como descrever a possibilidade de ter havido transdiferenciação de populações celulares. Trata-se de estudo necroscópico de paciente de 55 anos com cardiomiopatia isquêmica, com defeito parcial reversível na parede anterolateral e defeito fixo (cicatriz) na parede posterior, pertencente à classe funcional III (NYHA ¿ New York Heart Association) e angina classe III (CCS ¿ Canadian Cardiovascular Society). O paciente recebeu um total de 30 milhões de células mononucleares da medula óssea colhidas 2 horas antes da injeção, obtidas através de punção óssea. As células foram injetadas por via transendocárdica na parede anterolateral do ventrículo esquerdo com o auxílio de mapeamento eletromecânico. Fragmentos das paredes ventriculares, anterolateral (a que recebeu a terapia celular), septal (septo interventricular, a qual tinha perfusão normal e que não recebeu terapia celular) e a inferoposterior (a qual tinha cicatriz extensa e sem terapia celular) foram retiradas durante a necropsia e processados em parafina e congeladas. Anticorpos foram utilizados contra fator VIII para células endoteliais, actina a de músculo liso para pericitos, troponina T, actina a sarcomérica e actinina a sarcomérica e desmina para identificação de cardiomiócitos. Estudo histomorfométrico da densidade capilar nas diferentes paredes ventriculares e da densidade de capilares contendo pericitos foi realizado, assim como foi quantificado o número de capilares/mm2 das paredes anterolateral e posterior, dados estes submetidos a testes estatísticos. Nossos resultados demonstraram não haver crescimento excessivo de nenhuma população celular, havendo aumento significativo da densidade de capilares com e sem pericitos na parede anterolateral. Nas zonas de cicatrizes comparando-se a parede anterolateral com a posterior foi verificado também haver aumento significativo do número de capilares. Nesta mesma parede houve uma hiperplasia dos pericitos, algumas destas células adquiriram elementos do citoesqueleto e proteínas contráteis (desmina e troponina). Em conclusão, nosso estudo demonstrou que o procedimento utilizado é seguro e que leva ao aumento da densidade capilar, hiperplasia pericitária com provável transdiferenciação de pericitos em cardiomiócitos Abstract: Cell-based therapies for treating ischemic heart disease are currently under investigation. We previously reported the results of a human phase I trial of transendocardial injection of autologous mononuclear bone marrow cells in patients with end-stage ischemic heart disease. The current report focuses on post mortem cardiac findings from one of the treated patients, who died 11 months after cell therapy in order to verify modifications on cardiac structure produced by the procedure. The heart of study was obtained on necropsy of a 55 years old patient suffering of an ischemic cardiomiopathy with a reversible partial defect on anterolateral ventricular wall (scar), a fixed one in the posterior wall. At enrollment, he was in New York Heart Association (NYHA) functional class III and Canadian Cardiovascular Society (CCS) angina class III. Patient was treated with 30 millions bone marrow mononuclear cells collected 2 hours and injected transendocardially with the guidance of electromechanical mapping, into the anterolateral wall of the left ventricle. Fragments of ventricular wall, anterolateral, septal (interventricular) and posterior walls were collected for histology and frozen. Immunohistological detection of endothelial and pericytic population allowed the quantification of capillaries and pericytic containing capillaries in anterolateral, septal and posterior walls (surface density). The amount of capillaries present in fibrotic zones of anterolateral and posterior walls were also quantified. No signs of adverse events were found in the cell-injected areas. Capillary density was significantly higher (P

Orientador : Radovan Borojevic Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O microambiente da medula óssea desempenha importância fundamental na proliferação e diferenciação das células progenitoras hematopoéticas bem como no controle do egresso dessas células para o sangue periférico. Embora moléculas da matriz extracelular, juntamente com citocinas, sejam cruciais na compartimentalização dos microambientes da medula óssea, ainda não se conhecem os pré-requesitos para que um determinado estroma possa sustentar a hematopoese. Usando uma linhagem celular (FDC-Pl) dependente de fator de crescimento, comparamos modelos experimentais de estromas periféricos e de medula óssea, que sustentam ou não a proliferação mielóide "in vitro". Observamos que todos os estromas produzem um grupo similar de hemopoetinas, incluindo o fator estimulador de colônias de macrófagos e granulócitos (GM-CSF), o qual pode ser liberado das monocamadas estromais, através de altas concentrações de sais, numa forma biologicamente ativa. Por outro lado, glicosaminoglicanos (GAGs) obtidos a partir desses estromas, exibiram uma capacidade de modulação da atividade biológica do GM-CSF variável, dependendo da concentração utilizada. Fibroblastos de pele, que não são capazes de sustentar a mielopoese "in vitro", sintetizam GAGs que podem inibir a atividade mielopoética de GM-CSF. Concluímos que, a qualidade dos glicoconjugados pericelulares dos estromas, presentes no microambiente local, é determinante para que um dado estroma seja capaz de sustentar a mielopoese, mesmo quando hemopoetinas biologicamente ativas são localmente produzidas. Os aspectos espaciais desse microambiente e as interações moleculares entre as células do estroma e progenitores mielóides foram investigados. Demonstramos que esse contato fisico pode disparar um "capping" de moléculas de superfície celular incluindo glicoconjugados de ácido siálico e proteoglicanos. Juntas, essas moléculas, potencialmente interativas com o GMCSF, geram um ambiente intercelular esfecífico, promovendo condições fisico-químicas requeri das para essa interação. A identificação da expressão dos HSPGs associados as superfícies celulares foi monitorada através de RT -PCR. Os estromas analisados mostraram expressão de mRNA para glipicam, betaglicam e sindecam-4. O tratamento das monocamadas estromais com PI-PLC (fosfolipase C) e tripsina branda, confinnou a presença de HSPGs de superfície celular (glipicam) e sindecam, respectivamente. Aproximadamente, 20% dos HSPGs obtidos, estão associados à membrana através de âncoras de GPI enquanto o restante, 80%, permanece integrado à membrana plasmática. Demonstramos que as moléculas marcadas com sulfato radioativo, deslocadas da superfície celular das células estromais após tratamento com tripsina branda, são capazes de aumentar a atividade biológica do GM-CSF, quando comparadas com aquelas deslocadas por PIPLC as quais não apresentaram diferenças significativas se comparadas com o controle. Esses resultados sugerem a existência de HSPGs transmembranares e associados via âncora de GPI nas superfícies das células estromais, e que, a atividade biológica de GM-CSF na proliferação de FDC-Pl "in vitro", é aumentada através de uma possível interação física entre o fator de crescimento e um HSPG transmembranar Abstract: The bone marrow microenvironrnent plays an important role in promoting hematopoietic progenitor cell proliferation and differentiation, as well as their controlled release into the circulation. It has been shown that the extracellular matrix elements in combination with cytokines are crucial for compartmentalization of the bone marrow environrnent, but it is not clear which are the molecular and structural requirements for a given stroma to sustain hematopoiesis. Using the growth factor-dependent cell line FDC-Pl, we have compared in vitro experimental models of bone marrow and peripheral stromas, two of which sustain myeloid proliferation and one which does not. We have found that all the stromas produced a similar set of hemopoietins, including the GM-CSF, which could be released from the stromal cell layer in an active form by high-salt buffers. On the other hand, glycosaminoglycans (GAGs) obtained from stromas had variable concentration-dependent capacity to modulate the GM-CSF activity. The skin fibroblasts, which can not sustain myelopoieis in vitro, synthesized GAGs that could inhibit the myelopoiesis-promoting activity of GM-CSF produced by the same cells. We conclude that the quality of the stroma pericellular glycoconjugates, present in microenvironrnent, is determinant for the ability of a given stroma to sustain myelopoiesis, even when biologically active hemopoietins are locally produced. The spatial organization of this microenvironrnent and molecular interactions among stroma cells and myeloid progenitors was investigated, and we have shown that the physical intercellular contact triggers the capping of cell surface molecules, including sialylated glycoconjugates and proteoglycans. Together, they generated the specific intercellular environrnent, rich in molecules potentially interactive with GM-CSF, and providing the physicochemical conditions required for this interaction. We have partially assessed the identification of the core proteins of cell-associated HSPGs of the stromal cell lines monitoring their expression by RT-PCR. The assayed stromas expressed mRNA for glypican, syndecan-4 and betaglycan. The stromal layers treatment with PI-PLC and mild trypsin confirmed the presence of hydrophobic cell surface HSPG glypican and syndecan, respectively. About 20% of the HSPG are linked to membrane by glycosilphosphatidylinositol (GPI) anchor while the remainder, 80%, are integrated in the plasma membrane. We have shown that the 35 -s labeled molecules dislodged from stroma cell membranes by mild treatment with trypsin increased the biological activity of the GM-CSF, whilst those dislodged by phospholipase-C did noto These results suggested the existence of both transmembrane HSPG and GPI-HSPG and that the biological activity of GM-CSF in FDC-Pl proliferation, in vitro, is increased by a physical interaction between growth factor and transmembranar HSPG Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural