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Dissertação de mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduaçãoem Biociências, do Instituto Latino-Americano de Ciências da Vida e da Natureza, da Universidade Federal da Integração Latino-Americana, como requisito parcial à obtenção do título de Mestre em Ciências, área de concentração Biociências.Orientador: Prof. Dr. Kelvinson Fernandes Viana Submitted by Açucena Veleh Rivas (acucenarivas@gmail.com) on 2020-04-02T20:29:54Z No. of bitstreams: 1 AÇUCENA VELEH RIVAS_dissertacao_banca_divulgacao_embargo.pdf: 275212 bytes, checksum: 08e15613026af30eb5e02ccc06b2c1c0 (MD5) Made available in DSpace on 2020-04-02T20:29:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AÇUCENA VELEH RIVAS_dissertacao_banca_divulgacao_embargo.pdf: 275212 bytes, checksum: 08e15613026af30eb5e02ccc06b2c1c0 (MD5) Previous issue date: 2020-04-02 Brazil is one of the largest tilapias(Oreochromis niloticus, Linnaeus 1758) producers in the world, however, one of the main factors that limit this production is the occurrence of infections caused by Aeromonas spp. and Streptococcusspp. This work aimed to evaluate a bivalent vaccine against AeromonassobriaandStreptococcusagalactiaeby intraperitoneal (i.p.) administration in Nile tilapia from production tanks, under experimental conditions. 92 fish (50g) were selected from commercial tanks for the experiment,andthe bacteria were isolated and identified from fish with clinical signs of bacteriosis. Both cultures of bacteria were inactivated and adjusted to 1 × 107cells / dose. The control (46) and vaccinated (46) groups received via i.p. 50μL of sterile saline solution (NaCl 0.9%) and 50μL of the vaccine, respectively. The agglutination test was performed 30 days after immunization. The experimental infection was performed with 1x 108cells / dose via i.p. of both bacteria after 30 days of vaccination. In the statistical analysis, the chi-square test (corrected by Yates), the calculation of Relative Risk (RR), the Relative Percentage of Survival (RPS), the Mann-Whitney test, the Log-rank test (Survival Curves) and Student's t testwere performed. Skin, liver and spleen fragments were collected from fish fromeach experimental group, stored in paraformaldehyde and subjected to typical processing for histological cuts and analyzed for structural and cellular changes. The agglutination tests showed agglutinating activity with vaccinated fish sera for the antigens of both bacteria in the three dilutions tested. The efficacy results were p = 0.0042, RR = 0.13 (95% CI: 0.02-0.75) and RPS= 91%. Mortality in the vaccinated group was 01 (2.94%) and in the control group it was 11 (32.35%). The vaccine prevented clinical signs of disease in the vaccinated group. The control group showed classic clinical signs of the diseases. The histologicalchanges in the organs analyzed in the vaccinated and control groups did not show significant differences. The tested bivalent vaccine protected tilapia against infections under experimental conditions. O Brasil é um dos maiores produtores de tilápia (Oreochromis niloticus, Linnaeus 1758) do mundo, entretanto, um dos principais fatores que limitam essa produção é a ocorrência de infecções causadas por Aeromonas spp. e Streptococcus spp. Este trabalho teve como objetivo avaliar uma vacina bivalente contra Aeromonas sobria e Streptococcus agalactiae por administração intraperitoneal (i.p.) em tilápias-do-Nilo provenientes de tanques de produção, sob condições experimentais. Foram selecionados 92 peixes (50g) de tanques comerciais para o experimento, as bactérias foram isoladas e identificadas a partir de peixes com sinais clínicos de bacterioses. Ambas culturas de bactérias foram inativadas e ajustadas para 1 × 107 células / dose. Os grupos controle (46) e vacinado (46) receberam via i.p. 50μL de solução salina estéril (NaCl 0,9%) e 50μL da vacina, respectivamente. O teste de aglutinação foi realizado após 30 dias da imunização. A infecção experimental foi realizada com 1 x 108 células / dose via i.p. de ambas as bactérias após 30 dias de vacinação. Na análise estatística foram realizados o teste de qui-quadrado (corrigido de Yates), o cálculo de Risco Relativo (RR), a Porcentagem Relativa de Sobrevivência (RPS), o teste de Mann-Whitney, o teste de Log-rank (Curvas de Sobrevivência) e o teste T de Student. Fragmentos de pele, fígado e baço foram coletados de peixes de cada grupo experimental, acondicionados em paraformaldeído e submetidos ao processamento típico para cortes histológicos e analisados quanto às alterações estruturais e celulares. Os testes de aglutinação mostraram atividade aglutinante com soros de peixes vacinados para os antígenos de ambas as bactérias nas três diluições testadas. Os resultados de eficácia foram p = 0,0042, RR = 0,13 (IC 95%: 0,02-0,75) e RPS = 91%. A mortalidade no grupo vacinado foi de 01 (2,94%) e no grupo controle foi de 11 (32,35%). A vacina impediu sinais clínicos das doenças no grupo vacinado. O grupo controle mostrou sinais clínicos clássicos das doenças. As alterações histológicas dos órgãos analisados dos grupos vacinado e controle não apresentaram diferenças significativas. A vacina bivalente testada protegeu a tilápia contra infecções em condições experimentais.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2019. Extratos de própolis e do cogumelo shiitake (Lentinula edodes) são permitidos na agricultura orgânica, porém, faltam pesquisas com esses materiais relacionadas ao controle de doenças de plantas. Esses compostos e o indutor de resistência comercial Acibenzolar-S-metil (ASM) foram avaliados contra a mancha angular do morangueiro causada por Xanthomonas fragariae, uma bacteriose que provoca perdas de aproximadamente 30% na produção de morangos. In vitro, avaliou-se o efeito dos compostos sobre a formação de colônias e de biofilme bacteriano. Em casa de vegetação, plantas de morango com três folhas verdadeiras foram pulverizadas com o polissacarídeo do shiitake (PSHII) (3 mg/mL), extrato de própolis verde de Wenceslau-Braz ? PR (PVERD1) (5 mg/mL) e ASM (25 ppm) e aos 7,14 e 21 dias foi avaliada a severidade da doença. Amostras foliares foram coletadas para se determinar o conteúdo de compostos fenólicos e flavonoides, assim como a atividade das enzimas fenilalanina amônia-liase (FAL), superóxido dismutase (SOD) e catalase. PSHII e o ASM reduziram a severidade da doença em aproximadamente 30% em plantas de morango da cultivar San Andreas. Além disso, observou-se um aumento na atividade de superóxido dismutase 3 dias após a aplicação desses compostos. Na cv. Albion, ASM promoveu um maior nível de redução na severidade em torno de 60 e 80% quando aplicado 3 e 6 dias antes da inoculação respectivamente. Entretanto, no caso do extrato de própolis (PVERD1), uma proteção significativa das plantas foi observada apenas para a cultivar Albion. Na cultivar San Andreas, PVERD1 atrasou o desenvolvimento da doença e promoveu o aumento na atividade da FAL 3 dias após a aplicação. In vitro, PVERD1 a 1 mg/mL inibiu totalmente a formação de colônias e parcialmente o biofilme bacteriano. Dessa forma, o polissacarídeo extraído de biomassa fúngica de L. edodes, o extrato de própolis e o indutor comercial ASM demonstraram algum potencial para o controle da mancha angular do morangueiro. Porém mais estudos devem ser realizados para se avaliar o efeito dos produtos sobre os mecanismos de defesa das plantas. Abstract: Extracts of propolis and shiitake mushroom (Lentinula edodes) are permitted in organic agriculture, however, research is lacking with these materials related to the control of plant diseases. These compounds and the commercial resistance inducer Acibenzolar-S-methyl (ASM) were evaluated against the disease caused by Xanthomonas fragariae, a bacteriosis that promotes losses of approximately 30% in the production of strawberries. In vitro, the effect of the compounds on the formation of colonies and bacterial biofilms was evaluated. In a greenhouse, strawberry plants with three true leaves were sprayed with shiitake polysaccharide (3 mg / mL), green propolis extract from Wenceslau-Braz -PR (PVERD1) (5 mg / mL) and ASM (25 ppm) and 7,14 and 21 days the severity of the disease was evaluated. Foliar samples were collected to determine the content of phenolic compounds and flavonoids, as well as the activity of the enzymes phenylalanine ammonia, superoxide dismutase and catalase. The L. edodes polysaccharide and the ASM reduced the severity of the disease by around 30% in strawberry plants of the cultivar San Andreas. In addition, it was observed an increase in the superoxide dismutase activity 3 days after the application of these compounds. In cv. Albion, ASM provided a higher level of reduction in severity, around 60 and 80%, when applied 3 and 6 days before inoculation, respectively. However, a significant protection of plants over time, conferred by propolis (PVERD1), was observed only for the Albion cultivar. In the cultivar San Andreas, PVERD1 delayed the development of the disease and promoted the increase in FAL activity 3 days after application. In vitro, PVERD1 at 1 mg/mL completely inhibited the formation of colonies and partially the bacterial biofilm. Thus, the polysaccharide extracted from fungal biomass of L. edodes, the propolis extract and the commercial inductor (ASM) demonstrated some potential for the control of angular spot in strawberry plants. However, further studies should be conducted to evaluate the effect of the products on plant defense mechanisms.

Made available in DSpace on 2019-10-04T12:32:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2018-09-01. Added 1 bitstream(s) on 2021-07-15T14:34:54Z : No. of bitstreams: 1 S0100-736X2018000901713.pdf: 1192037 bytes, checksum: 50dfebcd32ff1503ec380c6a6d47be76 (MD5) Mastitis in dairy cattle is the disease that impacts dairy production the most; Staphylococcus aureus is the main causative agent of this condition. The genus Staphylococcus has the ability to produce biofilms, an important mechanism of antibiotic resistance. Bearing in mind that plants have therapeutic action, this study investigated the in vitro antibiofilm activity of the plant extract and compounds isolated from the species Croton urucurana, native to the Brazilian Cerrado, against Staphylococcus aureus isolated from the milk of cows with mastitis, as well as the antibiotic gentamycin and vancomicyn. The antibiofilm activity was evaluated by means of violet crystal and the counting of Colony Forming Units. The images were obtained by scanning electron microscopy. The C. urucurana crude extract and fraction displayed better antibiofilm effect than gentamycin; their antibiofilm action was similar to the action of vancomycin. Compared with all the assessed treatments, the isolated compound alpha-Costol was significantly more active it reduced six logarithmic cycles of the bacterial population composing the biofilm. The phytocomplexs and the alpha-Costol substance isolated from Croton urucurana are promising in the fight against one of the main etiological agents of bovine mastitis. Univ Estadual Paulista Julio de Mesquita Filho Un, Dept Med Vet Prevent, Via Acesso Prof Donato Castellane S-N, BR-14884900 Jaboticabal, SP, Brazil Univ Ribeirao Preto Unaerp, Dept Biotecnol Plantas Med, Av Costabile Romano 2201, BR-14096385 Ribeirao Preto, SP, Brazil Univ Estadual Paulista Julio de Mesquita Filho Un, Dept Med Vet Prevent, Via Acesso Prof Donato Castellane S-N, BR-14884900 Jaboticabal, SP, Brazil

RESUMO: Muitas espécies de animais silvestres de vida livre servem como reservatório de bactérias patogênicas que ameaçam a saúde humana e dos animais domésticos. Algumas bactérias, como Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Yersinia enterocolitica e Salmonella enterica, causam enfermidades em humanos e podem contaminar os animais domésticos e silvestres. O Núcleo de Reabilitação da Fauna Silvestre da Universidade Federal de Pelotas (NURFS-UFPel) soluciona uma demanda regional específica de atenção à fauna silvestre brasileira. O objetivo desse trabalho foi identificar a presença de Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Salmonella spp. e Yersinia enterocolitica em animais silvestres que se encontravam em processo de reabilitação. Foram coletadas amostras de fezes, com uso de zaragatoas estéreis, de 34 aves, 16 mamíferos e 23 répteis. Dos 73 animais amostrados, quatro (5,48%) albergavam Y. enterocolitica, sendo duas aves, um mamífero e um réptil. Salmonella e Campylobacter não foram isolados. Os perfis de bandas dos isolados de Y. enterocolitica analisados pela rep-PCR foram diferentes entre si. Esses resultados indicam que as cepas isoladas não estão relacionadas entre si, não possuindo uma origem comum recente. Vanellus chilensis, Turdus rufiventris, Didelphis albiventris e Pantherophis guttatus podem albergar Y. enterocolitica e eliminá-la nas fezes, oferecendo risco de disseminação desse micro-organismo no ambiente, além de constituírem possíveis fontes de contaminação para humanos e outros animais.

RESUMO: Descrevem-se dois casos de infecção por Mycobacterium sp. em gatos domésticos no sertão da Paraíba, Nordeste do Brasil. Os animais apresentavam emagrecimento progressivo, dispneia, tosse e linfadenomegalia generalizada em um dos casos, com evolução clínica de um e sete meses, respectivamente. Macroscopicamente as lesões estavam restritas aos linfonodos superficiais e/ou profundos e parênquima pulmonar, caracterizadas por nódulos multifocais ou multifocais a coalescentes, amarelados, irregulares que ao corte apresentavam áreas multifocais a coalescentes amareladas, friáveis e caseosa, além de áreas multifocais brancacentas e firmes. Histologicamente, verificou-se linfadenite e pneumonia granulomatosa caracterizada por áreas centrais de necrose e mineralização central circundadas por macrófagos, células epiteliais e tecido conjuntivo fibroso. No primeiro caso havia ainda hepatite granulomatosa discreta e aleatória. Em ambos os casos, foram visualizados bacilos álcool-ácido resistentes livres e no citoplasma de macrófagos na coloração de Ziehl-Neelsen. Houve imunomarcação para Mycobacterium sp. no citoplasma de macrófagos em ambos os casos. Na PCR, identificou-se apenas o gênero Mycobacterium no Caso 1 e Mycobacterium bovis no Caso 2. O diagnóstico de infecção por Mycobacterium sp. nos felinos foi realizado com base nos achados anatomopatológicos e imuno-histoquímica. Pela PCR foi realizado o diagnóstico etiológico de micobacteriose no Caso 1 e tuberculose por M. bovis no Caso 2. O diagnóstico das doenças causadas por micobactérias em felinos, principalmente aquelas em que M. bovis esteja envolvido, é de extrema importância para a saúde pública, destacando o potencial zoonótico desta espécie, pois muitos animais infectados podem ser assintomáticos ou apresentarem sinais clínicos inespecíficos. ABSTRACT: This report describes two cases of domestic cats infected with Mycobacterium sp. in the backland of Paraiba, Northeast Brazil. The animals manifested nonspecific clinical signs, characterized by progressive weight loss, dyspnea, cough and generalized lymphadenomegaly in one cases, and clinical evolution of one and seven months respectively. Macroscopically the lesions were restricted to superficial and/or deep lymph nodes and pulmonary parenchyma, characterized by multifocal or multifocal to coalescent, yellowish and irregular nodules that presented multifocal areas with yellowish, friable and caseous as well as multifocal to coalescent, white and firm areas. Histologically, it was observed lymphadenitis and granulomatous pneumonia in both cases, varying in intensity of inflammatory response and degree of mineralization. The granulomas were constituted by macrophages and epithelioid cells, some with marked necrosis and central mineralization, surrounded by a large amount of connective tissue. In the first case there were also discrete and random granulomatous hepatitis. In both cases alcohol-acid-resistant bacilli were visualized inside the cytoplasm of macrophages in Ziehl-Neelsen staining; there was immunostaining for Mycobacterium sp. in the cytoplasm of macrophages. Through PCR was identified only the genus Mycobacterium in Case 1, and Mycobacterium bovis in Case 2. The diagnosis of Mycobacterium sp. In the cats was performed based on anatomopathological findings and immunohistochemistry. The PCR was performed the etiological diagnosis of mycobacteriosis in Case 1 and tuberculosis by M. bovis in Case 2. The diagnosis of diseases caused by mycobacteria in cats, especially those in which M. bovis was involved, is extremely important for public health highlighting the zoonotic potential of this species, since many infected animals may be asymptomatic or show nonspecific clinical signs.

RESUMO: Objetivou-se com este trabalho determinar a frequência de animais soropositivos para Leptospira spp., Toxoplasma gondii e Neospora caninum em cães do Estado da Paraíba, Nordeste do Brasil, bem como identificar fatores de risco. Foram amostrados 1.043 soros de cães procedentes de cinco centros urbanos considerados polos regionais: João Pessoa, Campina Grande, Patos, Sousa e Cajazeiras. Para o diagnóstico sorológico da infecção por Leptospira spp. foi utilizada a soroaglutinação microscópica (SAM) enquanto que para detecção de anticorpos anti-T. gondii e N. caninum empregou-se a reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Noventa e sete cães apresentaram aglutininas anti-Leptospiraspp., resultando em frequência de 9,3% (IC 95% = 7,5-11,1%). Os sorovares de maior frequência foram Icterohaemorragiae (47,4%), Copenhageni (16,5%), Bratislava (11,3%), Canicola (10,3%) e Pomona (6,2%). Observou-se soropositividade de 22,1% (231/1.043; IC 95% = 19,6-24,7%) e 7,7% (80/1.043; IC 95% = 6,1-9,3%) para T. gondii e N. caninum, respectivamente. Idade >48 meses (OR=2,92), raça não definida (OR=1,94) e criação com acesso à rua (OR=1,57) foram apontados como fatores de risco para infecção por Leptospira spp. Para toxoplasmose, as categorias idade >48 meses (OR=1,74), alimentação com comida caseira (OR=2,24), alimentação com ração e comida caseira (OR=2,34) e contato com gatos (OR=1,57) foram consideradas fatores de risco, enquanto que a criação com acesso à rua (OR=2,62) foi fator de risco para N. caninum. Conclui-se que cães de cinco centros urbanos do Estado da Paraíba estão expostos às infecções por Leptospiraspp., T. gondii e N. caninum, evidenciadas pela detecção de anticorpos, bem como sugere-se melhor manejo alimentar, controle no acesso a ambientes externos e destino adequado das fezes de gatos. ABSTRACT: The aim of this study was to determine the frequency of seropositive animals for Leptospiraspp., Toxoplasma gondii and Neospora caninum in dogs from Paraiba state, northeastern Brazil, and to identify risk factors. A total of 1,043 sera were sampled from dogs from five urban centers considered as regional poles: João Pessoa, Campina Grande, Patos, Sousa and Cajazeiras. For the serological diagnosis of Leptospira spp. infection the microscopic agglutination test (MAT) was used, and for detecting anti-T. gondii and N. caninum antibodies the indirect fluorescent antiboy test (IFAT) was carried out. Ninety-seven dogs showed anti-Leptospira spp. agglutinins, resulting in a frequency of 9.3% (95% CI=7.5; 11.1%). The most frequente serovars were Icterohaemorragiae (47.4%), Copenhageni (16.5%), Bratislava (11.3%), Canicola (10.3%) and Pomona (6.2%). The seropositivities for T. gondii and N. caninum were 22.1% (231/1043; 95% CI=19.6; 24.7%) and 7.7% (80/1043; 95% CI=6.1; 9.3%) respectively. Age >48 months (OR=2.92), mixed breed (OR=1.94) and access to street (OR=1.57) were identified as risk factors for Leptospira spp. infection. For toxoplasmosis, the categories age >48 months (OR=1.74), homemade food (OR=2.24), comercial and homemade food (OR=2.34) and contact with cats (OR=1.57) were considered risk factors, while access to street (OR=2.62) was risk fator for N. caninum. We conclude that dogs from five urban centers in Paraiba state are exposed to Leptospira spp., T. gondii and N. caninum infections, evidenced by antibody detection, as well as it is suggested a better feed management, control of outside home environment access and proper disposal of cat feces.

RESUMO: Mycoplasma é um patógeno altamente contagioso, podendo causar mastite, pneumonia, artrite, entre outras enfermidades. Seu isolamento requer meios e condições específicas devido ao seu crescimento fastidioso. Devido à complexidade do seu diagnóstico, acredita-se que a real prevalência de casos de mastite por micoplasma seja subestimada. O objetivo do presente estudo foi identificar a prevalência de Mycoplasma bovis em diferentes rebanhos de bovinos leiteiros no estado de São Paulo. O estudo foi dividido em fase de triagem, na qual colheram-se amostras de 67 tanques de expansão e a coleta individual, na qual propriedades positivas para M. bovis foram visitadas e colhidas amostras de leite de todos os animais com mastite clínica e subclínica. O diagnóstico laboratorial foi feito por meio da PCR e cultivo microbiológico específico. A prevalência de M. bovis encontrada na fase de triagem foi de 1,4%. Na fase individual, todas as amostras de leite, procedentes de propriedade positiva para M. bovis no tanque de expansão, foram negativas, o que permite concluir pela baixa prevalência do agente nas condições do presente estudo. ABSTRACT: Mycoplasma is a highly contagious pathogen, which can cause mastitis, pneumonia, arthritis, among other diseases. Its isolation requires specific means and conditions due to its fastidious growth. Due to the complexity of its diagnosis, it is believed that the real prevalence of mastitis cases by Mycoplasma is underestimated. The objective of the present study was to identify the prevalence of Mycoplasma bovis in different dairy herds in the state of São Paulo. The study was divided into a screening phase in which samples were collected from 67 expansion tanks and individual collection, in which positive properties for M. bovis were visited and collected milk samples from all animals with clinical and subclinical mastitis. The laboratory diagnosis was made through PCR and specific microbiological culture. The prevalence of M. bovis found in the screening phase was 1.4%. In the individual phase, all milk samples from M. bovis positive property in the expansion tank were negative, which allows to conclude the low prevalence of the agent under the conditions of the present study.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2018. O maracujazeiro azedo (Passiflora edulis) é a principal espécie do gênero cultivada no Brasil e apresenta grande importância econômica, social e nutricional. Muitas doenças afetam esta cultura, como a antracnose (Colletotrichum gloeosporioides), bacteriose (Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae - Xap), septoriose (Septoria passiflorae), verrugose (Cladosporium spp.) e virose do endurecimento dos frutos (VEF) (Cowpea aphid-borne mosaic virus - CABMV). A identificação de fontes de resistência e o desenvolvimento de ferramentas adequadas para a quantificação da severidade das doenças são essenciais para o desenvolvimento de materiais resistentes. Portanto, os objetivos deste estudo foram: avaliar a reação de genótipos de maracujazeiro azedo a isolados de Xap (UnB-1392 e UnB-1393) e CABMV (UnB-FAL e UnB-Pipiripau), inoculados mecanicamente nas mesmas plantas, em épocas distintas, sob cultivo protegido; e elaborar e validar escalas diagramáticas para a avaliação da severidade da antracnose, bacteriose, septoriose e verrugose em frutos e folhas do maracujazeiro azedo. Todos os genótipos foram moderadamente suscetíveis à VEF, independentemente da ordem de inoculação dos isolados. Todos os genótipos mostraram-se suscetíveis à bacteriose quando os isolados foram inoculados na estação chuvosa. Quando inoculados na estação seca, MAR20#10, MAR20#41 e Rosa Intenso foram moderadamente resistentes à bacteriose (UnB-1393), enquanto os genótipos remanescentes mostraram-se moderadamente suscetíveis. As escalas diagramáticas propostas permitiram quantificar as severidades das doenças de forma acurada e precisa, aumentando a concordância entre os valores estimados e os valores reais. O aumento da acurácia foi detectado pela redução nos erros constantes e sistemáticos. Por sua vez, o aumento da precisão foi verificado pelo incremento dos coeficientes de determinação, pela redução dos erros absolutos e pelo aumento da reprodutibilidade das estimativas entre pares de avaliadores. A análise de correlação de concordância de Lin confirmou os incrementos da acurácia e precisão detectados pela análise de regressão linear. O uso das escalas diagramáticas desenvolvidas e validadas neste estudo proporcionará melhores avaliações da severidade das doenças, auxiliando os melhoristas e fitopatologistas nas avaliações e seleções de genótipos de maracujazeiro azedo resistentes às doenças em frutos e folhas. Yellow passion fruit (Passiflora edulis) is the main species from Passiflora cultivated in Brazil and presents economic, social, and nutritional importance. Many diseases affect this crop, such as anthracnose (Colletotrichum gloeosporioides), bacterial spot (Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae - Xap), septoriosis (Septoria passiflorae), scab (Cladosporium spp.), and passion fruit woodiness disease (PWD) (Cowpea aphid-borne mosaic virus - CABMV). Identification of disease resistance sources and development of adequate tools to quantify disease severity are essential for developing resistant plant materials. Therefore, the objectives of this study were to evaluate the reaction of passion fruit genotypes to Xap (UnB-1392 and UnB-1393) and CABMV (UnB-FAL and UnB-Pipiripau) isolates, which were mechanically inoculated on the same plants, in distinct dates, under protected cultivation; and to elaborate and validate diagrammatic scales for severity assessments of anthracnose, bacterial spot, septoriosis, and scab in fruits and leaves of yellow passion fruit. All genotypes were moderately susceptible to PWD, regardless the inoculation sequence of the isolates. All genotypes were susceptible to the bacterial spot when the isolates were inoculated in the wet season. When inoculated in the dry season, MAR20#10, MAR20#41, and Rosa Intenso were moderately resistant to the bacterial spot (UnB-1393), whereas the remaining genotypes were moderately susceptible. The proposed diagrammatic scales allowed accurate and precise quantification of disease severity, increasing the concordance between estimated and actual values. The increased accuracy was detected by the reduction of the constant and systematic errors. Moreover, the increased precision was verified by the increase of the coefficient of determination, by the reduction of the absolute errors, and by the increase of the reproducibility between pairs of evaluators. Lin's concordance correlation coefficient confirmed the increases in accuracy and precision detected by the linear regression analysis. The utilization of the diagrammatic scales developed and validated in this study will provide better quality evaluations of the severity of the diseases, assisting plant breeders and pathologists during evaluations and selection of yellow passion fruit genotypes resistant to diseases in fruits and leaves.

RESUMO: O gene floR descrito é descrito pela literatura como o responsável pela resistência ao florfenicol, que é um antimicrobiano amplamente utilizado na aquicultura. Esse gene já foi relatado em muitas espécies de bactérias, inclusive no gênero Aeromonas. Essas bactérias causam alta mortalidade na piscicultura trazendo prejuízos econômicos. É importante que haja estudos sobre esse gene e possíveis mutações que possam levar a alterações na estrutura e função da proteína. Os objetivos desse estudo foram caracterizar o gene floR em isolados de Aeromonas spp. obtidas do Vale do São Francisco e verificar se a presença desse gene está associada com a resistência ao florfenicol. Foram realizadas reações em cadeia da polimerase (PCR) para a presença do gene floR em 27 isolados de Aeromonas spp.. Amostras positivas para a presença do gene foram sequenciadas e analisadas quanto à presença de polimorfismos por meio de alinhamentos. Os diferentes haplótipos detectados foram utilizados para análises com os programas SIFT e PolyPhen para predição de alteração de função proteica. A modelagem estrutural da proteina codificada pelo gene floR foi realizada com o programa Modeller e, os modelos foram avaliados pelo Procheck, Verify3D e Whatif. A similaridade da estrutura tridimensional da proteína referência com as estruturas tridimensionais das proteínas codificadas pelos diferentes haplótipos foi comparada através do TM-align. A resistência das bactérias ao florfenicol foi avaliada através do teste de microdiluição em caldo, o qual também foi realizado na presença do carbonil cianeto m-clorofenil hidrazona para verificar o efeito da inibição da bomba de efluxo sobre tal resistência. Dos vinte e sete isolados avaliados quanto a presença do gene floR, 14 isolados foram positivos e 10 foram sequenciados, o que permitiu a identificação de três polimorfismos no gene floR, que levaram a construção de três haplótipos diferentes (TAA, TTA e CTG). As análises realizadas com os programas SIFT e PolyPhen apontaram que os haplótipos TTA e TAA provavelmente poderiam alterar a estrutura e função da proteína. As proteínas modeladas para os três haplótipos demonstraram possuir praticamente a mesma conformação estrutural entre si. Todos os isolados que apresentaram o gene foram resistentes ao florfenicol e aqueles que não apresentavam foram sensíveis. O teste na presença do Carbonil Cianeto m-Clorofenil Hidrazona foi realizado para três isolados, cada isolado representando um haplótipo, sendo possível observar a inibição do crescimento bacteriano em todas as concentrações independente do haplótipo. Os resultados obtidos nesse estudo mostram que a resistência ao flofenicol em Aeromonas spp. pode ser explicada pela presença do gene floR, e que esse gene está relacionado com uma bomba de efluxo. As mutações verificadas no gene floR, parecem não estar envolvidas com alteração de estrutura e função da proteína codificada por esse gene. ABSTRACT: The floR gene is described in related literature as responsible for resistance to florfenicol, which is a widely used antimicrobial agent in aquaculture. This gene has been reported in many species of bacteria, including the genus Aeromonas. These bacteria cause high mortality in fish farming bringing economic losses. It is important that studies of this gene and possible mutations that can lead to changes in the structure and function of the protein. The aim of this study was to characterize the floR gene in isolates of Aeromonas spp. and check if the presence of this gene is associated with resistance to florfenicol in Aeromonas spp. obtained from the San Francisco Valley. PCR (Polymerase Chain Reaction) were also performed to verify the presence of the floR gene in 27 isolates of Aeromonas spp. Positive samples for the presence of the gene were sequenced and analyzed for the presence of polymorphisms using alignments. Different haplotypes detected were used for analysis with the SIFT and PolyPhen programs for prediction of changes in protein function. The structural modeling of protein encoded by the floR gene was performed using the Modeller software, and the models were evaluated by Procheck, Verify3D and Whatif. The similarity of the dimensional structure of reference protein with the dimensional structures of the proteins encoded by the different haplotypes was compared by TM-align. Bacterial resistance to florfenicol was assessed by the microdilution test, which was also performed in the presence of carbonyl cyanide m-chlorophenyl hydrazone to verify the effect of inhibiting the efflux pump. 14 isolates were positive for the presence of floR gene and 10 were sequenced and allowed the identification of three polymorphisms in the floR gene, which led to construction of three different haplotypes (TAA TTA and CTG). The analyzes carried out with the SIFT and PolyPhen programs showed that the TTA and TAA haplotypes could probably change the protein structure-function. Proteins modeled for the three haplotypes were found to have substantially the same structural conformation with each other. All isolates presenting the gene were resistant to florfenicol and those who did not have were sensitive. The test in the presence of carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone was conducted for three isolates, representing each single haplotype and was observed inhibition of bacterial growth at all concentrations independent of the haplotype. The results of this study show that resistance to flofenicol in Aeromonas spp. may be explained by the presence of floR gene and that this gene is associated with an efflux pump. Mutations observed in floR gene do not appear to be involved with chenges in structure and function of the protein encoded by gene.

Made available in DSpace on 2018-12-11T17:21:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2018-01-01. Added 1 bitstream(s) on 2021-07-15T14:33:57Z : No. of bitstreams: 1 S0100-736X2018000400665.pdf: 844110 bytes, checksum: 1bfcf388eb0157e2ab8691eeefc7bec1 (MD5) Mycoplasma is a highly contagious pathogen, which can cause mastitis, pneumonia, arthritis, among other diseases. Its isolation requires specific means and conditions due to its fastidious growth. Due to the complexity of its diagnosis, it is believed that the real prevalence of mastitis cases by Mycoplasma is underestimated. The objective of the present study was to identify the prevalence of Mycoplasma bovis in different dairy herds in the state of São Paulo. The study was divided into a screening phase in which samples were collected from 67 expansion tanks and individual collection, in which positive properties for M. bovis were visited and collected milk samples from all animals with clinical and subclinical mastitis. The laboratory diagnosis was made through PCR and specific microbiological culture. The prevalence of M. bovis found in the screening phase was 1.4%. In the individual phase, all milk samples from M. bovis positive property in the expansion tank were negative, which allows to conclude the low prevalence of the agent under the conditions of the present study. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Universidade Estadual Paulista 'Julio de Mesquita Filho' (Unesp) Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Universidade Estadual Paulista 'Julio de Mesquita Filho' (Unesp)

Results of tests for the diagnosis of bovine brucellosis and tuberculosis were evaluated aiming to analyze the distribution of positivity and characteristics of performance of the control program. The analysis used as secondary data the results of all diagnostic tests of bovines executed in 2008 in the state of Rio Grande do Sul (RS) by veterinarians authorized to operate under the National Program for Control and Eradication of Animal Brucellosis and Tuberculosis. The data were statistically adjusted to minimize the effect of outliers and missing data. The tests achieved 66.80% of the 497 municipalities in the RS and included the participation of 165 authorized veterinarians. 40.21% of tests were carried out in the months of April, September and October, and in 73.90% of establishments had tests performed for both diseases. In the case of brucellosis it appeared that 35,289 animals were tested, with positivity of 0.25%, while the frequency of positive holdings among the 3,406 tested was 0.94%. Females had higher positivity rate (0.29% of 26,724 tested) than males (0.13% of 5,235 tested). Animals between 48-60 months of age presented higher chance of positivity compared to other age groups (Odds Ratio (OR) = 2.63; CI 95% = 1.63 - 4.26). Dairy cattle represented 62.66% of tested animals, which were more likely to appear as positive than beef animals (OR = 2.32; CI 95% = 1.38 - 3.90). In addition, 73.74% of the tested holdings were dairy ones. In the case of tuberculosis, 62,149 animals were tested, distributed in 5,151 holdings, with positivity of 0.87% and 3.13%, respectively. The chance of positivity increased with age, being that animals older than 48 months presented higher values compared to those found in younger animals (OR = 2.07; CI 95% = 1.73 - 2.48). Dairy cattle represented 59.74% of tested animals, which were more likely to be positive than beef ones (OR = 5.03; CI 95% = 4.09 - 6.94). Dairy holdings were 78.50% of all the tests for tuberculosis. The comparative analysis of this study with previous studies on brucellosis prevalence suggested that current control measures have been effective in reducing the prevalence of this disease in RS. On the other hand, information obtained on tuberculosis can be indicators of the condition of this disease, especially in the lack of prevalence stuvigilândies carried out in the last 30 years. Finally, it is concluded that the use of secondary data, if properly adjusted, can be an effective tool in the management of animal health programs and monitoring and surveillance systems.

Made available in DSpace on 2018-12-11T17:21:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2018-01-01. Added 1 bitstream(s) on 2021-07-15T14:33:57Z : No. of bitstreams: 1 S0100-736X2018000400613.pdf: 810527 bytes, checksum: 0df6d82d27d44fbef3b177af3face17c (MD5) This study was conducted in pigs of Mossoró, Rio Grande do Norte, with the objective of epidemiological characterization of swine leptospirosis in herds reared under poor technical and sanitary conditions in the Brazilian semiarid. Serological diagnosis of infection was carried out by means of microscopic agglutination test (MAT), and the samples were submitted to a collection of 24 Leptospira serovars. Information about, variables referring to the farm owner, general property characteristics, productive, reproductive and health management were obtained, by means of visits to the farms and interviews, in order to perform an analysis of risk factors. A prevalence of 78.6% (324/412) of seropositive pigs was observed. The samples were positive to 15 serovars, with predominance of serovar Icterohaemorrhagiae, followed by Pomona, Shermani and Tarassovi. The animals were positive for up to eight serovars. The titles ranged from 100 to 12,800, and the highest titers were observed to serovar Pomona. In all the 20 examined herds there were reactor animals, and the prevalence in each herd ranged from 25% to 100%. The risk factors that were associated with leptospirosis were the confinement system of animals and bad sanitation of breeding facilities. The use of treated water for watering the animals showed a protective factor. The results showed that Leptospira spp. was found to be quite widespread in swine farms of Mossoró, with wide variation of circulating serovars, representing a problem in animal production and risks to public health. Departamento de Ciências Animais Universidade Federal Rural do Semi-árido, Av. Francisco Mota 572 Instituto Superior de Teologia Aplicada, Rua Antônio Rodrigues Magalhães Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Reprodução Animal Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (FCAV) Universidade Estadual Paulista (Unesp), Via de Acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Zona Rural Departamento de Apoio Produção e Saúde Animal Faculdade de Medicina Veterinária (FMV) Unesp, Rua Clóvis Pestana 763 Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Reprodução Animal Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (FCAV) Universidade Estadual Paulista (Unesp), Via de Acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Zona Rural Departamento de Apoio Produção e Saúde Animal Faculdade de Medicina Veterinária (FMV) Unesp, Rua Clóvis Pestana 763

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2017. Infecções por Escherichia coli (E. coli) ainda são um problema de saúde pública graças ao seu alto potencial zoonótico e ao fato de que em muitos países ainda existem altos índices de mortalidade. Sistemas de secreção são descritos como importantes aparatos celulares para que bactérias sejam capazes de translocarem proteínas efetoras para células hospedeiras. Dentre as proteínas efetoras que compõe o sistema de secreção do tipo VI (SST6), destacam-se ClpV e IcmF, por sua importância em manter o SST6 funcional. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi analisar o papel do SST6 bacteriano, via ClpV e IcmF, na ativação dos inflamassomas durante a resposta imune inata. Através dos resultados observamos que o SST6 é crucial para a replicação intracelular de E. coli em macrófagos, modulando a secreção de citocinas, o metabolismo redox da célula e a ativação dos inflamassomas através da clivagem de caspase 1. As proteínas NLRP3 e as caspases 1 e 11 são necessárias para o aumento da secreção de IL-1β induzida por E. coli. Demonstramos que a presença das caspases 1 e 11, bem como do receptor NLRP3 podem atuar em outros processos e mecanismos celulares ativados durante a infecção por E. coli, como a apresentação de antígenos lipídicos, geração de espécies reativas de oxigênios, produção de óxidos nítrico e outras citocinas pró-inflamatórias. A ausência de componentes do inflamassoma favoreceu a replicação intracelular bacteriana assim como a colonização de órgãos vitais em camundongos como o fígado e o baço. Investigamos também o papel do metabolismo lipídico durante a infecção através da análise da biogênese de corpúsculos lipídicos e ainda constatamos que a replicação intracelular bacteriana está relacionada com a presença da enzima ácido graxo-sintase. Portanto o presente trabalho caracterizou os diferentes mecanismos celulares envolvidos durante a ativação da resposta imune inata frente à infecção com uma linhagem patogênica de E. coli focando no papel do sistema de secreção do tipo VI, através do uso de cepas onde suas proteínas efetoras são ausentes, e ainda a relevância de componentes do inflamassoma nesse processo. Escherichia coli (E. coli) infections remains a public health problem since its higher zoonotic power and the fact that in a lot of countries there are still cases with mortality risk. Secretion systems are described as important cellular apparatus to make bacteria capable of translocate effectors proteins to the host cell. Among all proteins constituent of type six secretion system (T6SS) effectors proteins, ClpV and IcmF are highlighted due to their importance to maintain T6SS functional. Therefore, the aim of the present work was to analyze the role of T6SS through ClpV and IcmF in inflammasome activation during innate immune response. Taken together, odemonstrated that T6SS is crucial to control intracellular bacterial replication in macrophages by modulating cytokines release, cell redox metabolism and inflammasome activation through caspase 1 cleavage. The NLRP3 receptor, as well as caspases 1 and 11, are necessary to increase IL-1β release induced by E. coli. We showed that the presence of caspases 1 and 11 and NLRP3 can influence in other process and cellular mechanisms active during E. coli infection, such as, lipid antigen presentation, generation of oxygen reactive species, nitric oxide and other pro-inflammatory cytokines production. The absence of inflammasome components improved bacterial intracellular replication and the colonization of the liver and spleen in mice. We also investigated the role of lipid metabolism during infection through analyses of lipid droplet biogenesis and verified that intracellular bacterial replication can be associated with fatty acid synthase. Therefore, this work characterized the different mechanisms involved during innate immune response activation upon infection with a pathogenic strain of E. coli focusing in the role of bacterial T6SS, using strains where its effector proteins are absent, and the relevance of inflammasome components in this process.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências Médicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2016. A infecção pela bactéria Helicobacter pylori ocorre em todo o mundo. Sua prevalência varia de acordo com o desenvolvimento de diferentes países e está associada a inúmeras doenças gástricas. A presença da bactéria na mucosa gástrica induz resposta inflamatória ativa que determina danos em diferentes graus: de atrofia, metaplasia intestinal, displasia e carcinoma gástrico, na presença ou não de bacilos detectáveis na mucosa. Estas manifestações estão associadas ao estabelecimento do câncer da mucosa gástrica. Após a inflamação aguda, pode ocorrer aumento da permeabilidade do epitélio gástrico, exposição contínua ao antígeno do H. pylori, recrutamento de células T e ainda a produção de anticorpos pelas células B. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo geral avaliar a densidade de linfócitos T CD8+ em gastrites e adenocarcinoma gástrico de pacientes portadores ou não de infecção pelo H. pylori. Para esta análise, foram utilizados 25 casos de gastrite inativa, 26 casos de gastrite ativa leve, 25 casos de gastrite ativa moderada e 14 casos de adenocarcinoma gástrico, amostras coletadas do período de março de 2014 a abril de 2016 dos arquivos do Laboratório de Imunopatologia de Brasília. Para verificar a expressão dos linfócitos T CD8+ nos casos estudados, foi realizado o teste de imunohistoquímica e as células imunomarcadas foram obtidas, utilizando o programa ImageJ (1.32j). A maioria dos casos de gastrite foi de pacientes do sexo feminino (71,2%) e nos casos de adenocarcinoma gástrico foram pacientes do sexo masculino (71,4%). Verificou-se a progressão da resposta inflamatória à colonização da mucosa gástrica pelo H. pylori. Foram identificados mecanismos de migração celular, aparentemente associados à liberação de antígenos do bacilo no microambiente estabelecido no curso da infecção. Averiguou-se a participação das células inflamatórias na erradicação de bacilos e a presença de linfócitos T CD8+ que podem aparentemente exercer duas funções, tanto modular a inflamação como participar de mecanismos ontogênicos. Estes resultados demonstram que a colonização da mucosa gástrica pelo H. pylori estabelece uma resposta inflamatória, além de promover alterações em subpopulações de linfócitos. Esses importantes mecanismos que participam do controle da erradicação dos bacilos também estão presentes no estabelecimento do carcinoma gástrico. Helicobacter pylori infection occurs worldwide. Its estimate of agreement with the development of different countries and is associated with numerous diseases. The presence of the bacterium in the gastric mucosa induces an active inflammatory response that determines gastric mucosa damage in different degrees: atrophy, intestinal metaplasia, dysplasia and gastric carcinoma, in the presence or not of detectable mucosa bacilli. These manifestations are associated with the establishment of cancer of the gastric mucosa. After an acute inflammation, there may be an increase in the permeability of the gastric epithelium, a continuous exposure to the H. pylori antigen, a recruitment of T cells, and an antibody production on B cells. In view of this, to evaluate a density of CD8+ T lymphocytes in gastritis and gastric adenocarcinoma of patients with or without H. pylori infection. We analyzed 25 cases of inactive gastritis, 25 cases of moderate active gastritis and 14 cases of gastric adenocarcinoma, samples collected from March 2014 to April 2016 from the archives of the Laboratory of Immunopathology De Brasilia. To verify the expression of CD8+ T lymphocytes in the cases studied, the immunohistochemical test was performed and the immunolabellated cells were obtained using the ImageJ program (1.32j). Most cases of gastritis were female (71.2%) and cases of gastric adenocarcinoma were male patients (71.4%). A progression of the inflammatory response to H. pylori colonization of the gastric mucosa has been reported. Cell migration mechanisms were identified, apparently associated with the release of bacillus antigens without microenvironment established in the course of infection. There was a participation of inflammatory cells in the eradication of bacilli and a presence of CD8+ T lymphocytes that may apparently exert two functions as modulating an inflammation as participating in oncogenic mechanisms. These results demonstrate that colonization of the gastric mucosa by H. pylori is an inflammatory response, besides promoting the development in subpopulations of lymphocytes. These important mechanisms that participate in the control of eradication of bacilli are also present in the establishment of gastric carcinoma.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:24:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-31. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:30:13Z : No. of bitstreams: 1 000853211.pdf: 1398658 bytes, checksum: c344bd138e41aaee8de5f99ea0007ff7 (MD5) O setor florestal tem uma grande importância para a economia brasileira, sendo este, fornecedor de matéria-prima para uso em reflorestamento de áreas degradadas assim como para indústrias como de papel e celulose, carvão, moveleira, entre outras. No entanto para obtenção de bons resultados é necessária a utilização de mudas florestais sadias e livres de doenças. A mancha bacteriana do eucalipto e a mancha causada por Cylindrocladium são duas doenças muito comuns em viveiros e, embora os agentes etiológicos sejam diferentes, seus sintomas são bem parecidos, podendo causar dúvidas em um momento de diagnose. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver uma rede neural artificial (RNA) que seja capaz de classificar as duas doenças citadas utilizando imagens digitais. Imagens de ambas doenças foram processadas, utilizando a técnica de limiarização a fim de remover o fundo da imagem, e utilizados seus histogramas para treinamento de uma RNA do tipo perceptron multicamadas com algoritmo backpropagation. Foram realizados dez ensaios com cinco topologias diferentes, sendo elas com 34, 128, 248, 368 e 511 neurônios na camada intermediária. Todas as topologias atingiram em média 95% de acertos, sendo considerada a mais adequada aquela que possuía 256 neurônios. The forest sector has great importance for the Brazilian economy, whose, is raw materials supplier for reforestation of degraded areas as well as for industries like pulp and paper, coal, furniture, among others. However to achieve good results is necessary to use healthy forest seedlings. Bacterial stain of the eucalyptus and the stain caused by Cylindrocladium are two common diseases in nurseries and although the etiologic agents are different, their symptoms are similar, and may cause doubts in a diagnosis moment. The aim of this study was to develop an artificial neural network (ANN) to classify the two cited diseases using digital images. Images of both diseases were processed using a threshold technique to remove the image background, and their histograms were used to training a multilayer perceptron ANN with backpropagation algorithm. Ten essays with five different topologies ( 34, 128, 248, 368 and 511 neurons in the hidden layer) were carried out. All topologies reached on average 95% of correct classifications. The topology with 256 neurons in hidden layer was considered the most suitable one for this project

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:22:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-12. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:28:40Z : No. of bitstreams: 1 000841294_20160212.pdf: 455091 bytes, checksum: cf5f5b68871cf0cd54c8c50a907eee6f (MD5) Bitstreams deleted on 2016-02-12T10:30:03Z: 000841294_20160212.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-12T10:30:40Z : No. of bitstreams: 1 000841294.pdf: 1238916 bytes, checksum: 3073f4f03baf2b589d8ee875c0fca572 (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Pró-Reitoria de Pós-Gradução da UNESP (ProPG) A vaginose bacteriana é o tipo mais comum de flora vaginal anormal e pode ser definida pela diminuição, ou mesmo depleção, dos lactobacilos vaginais. Tal condição está associada ao aumento do risco de parto prematuro e aquisição de diversas infecções sexualmente transmissíveis. A eficácia a curto prazo do tratamento da vaginose bacteriana com metronidazol é baixa. Portanto, o objetivo desse trabalho foi caracterizar o proteoma do fluido cérvico-vaginal de mulheres com vaginose bacteriana e comparar o perfil proteômico entre as mulheres que foram tratadas com sucesso em relação àquelas que falharam em restabelecer a microbiota lactobacilar após 7 dias de metronidazol. A presença da vaginose bacteriana foi definida de acordo com os critérios de Nugent após coloração de Gram dos esfregaços vaginais. Os perfis proteômicos do fluido cérvico-vaginal foram determinados utilizando a metodologia de shotgun LC MS/MS. As análises comparativas do proteoma das 38 mulheres com vaginose bacteriana e 39 com microbiota vaginal normal identificaram e determinaram a abundância relativa de 116 proteínas. Entre elas, catepsina G e a região BRO da cadeia pesada V-III de imunoglobulina foram exclusivas de vaginose bacteriana e o inibidor de elastase de leucócitos, involucrina e a proteína associada a diferenciação de neuroblastos AHNAK exclusivas de microbiota vaginal normal. Além disso, 20 (17.2%) proteínas foram diferencialmente expressas na vaginose bacteriana, das quais 9 são envolvidas na resposta imune. Entretanto, a comparação do proteoma do fluido cérvico-vaginal das 24 mulheres com vaginose bacteriana que foram tratadas com sucesso e 11 que persistiram com esta condição após o tratamento com metronidazol não apresentou diferença. Portanto, pudemos demonstrar que a vaginose bacteriana altera significantemente o proteoma local, mas o perfil proteômico cérvico-vaginal do hospedeiro não influencia a resposta ao... Bacterial vaginosis is the most common type of abnormal vaginal flora and defined by the depletion of vaginal lactobacilli. This condition increases the risk of premature labor and acquisition of several sexually transmitted infections. Short-term efficacy of bacterial vaginosis metronidazole treatment is low. Thus, we aimed to characterize the cervicovaginal fluid proteome of women with bacterial vaginosis and to compare the proteomic profile between women who were successfully treated with those who failed to reestablish lactobacillar flora after the 7-days course of metronidazole. Presence of bacterial vaginosis was defined according to Nugent criteria on Gram-stained vaginal smears. Proteomic profile of cervicovaginal fluids were determined using shotgun LC MS/MS. Comparative analysis of the proteome of 38 women with bacterial vaginosis and 39 with normal vaginal flora identified and determined the relative abundance of 116 proteins. Among them, cathepsin G and Ig heavy chain V-III region BRO were exclusive of bacterial vaginosis while leukocyte elastase inhibitor, involucrin and neuroblast differentiation-associated protein AHNAK of normal flora. Moreover, 20 (17.2%) proteins were differentially expressed in bacterial vaginosis, of which 9 are involved in immune response. However, the cervicovaginal proteome of 24 women with bacterial vaginosis who were successfully treated and 11 who persisted with this condition did not differ between each other. Therefore, we showed that bacterial vaginosis significantly changes the local proteome, but cervicovaginal host's proteins do not influence the response to metronidazole treatment FAPESP: 2012/16800-3

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-15Bitstream added on 2015-04-09T12:47:49Z : No. of bitstreams: 1 000817020.pdf: 534648 bytes, checksum: 11c69d3fa68bf1f916051c710c3dd25f (MD5) Campylobacter sp é o patógeno mais envolvido em casos de infecção alimentar no mundo. Uma das principais fontes identificadas é a carne de frango, seja por má preparação antes do consumo ou contaminação cruzada durante sua manipulação. Atualmente, o mercado tem buscado produtos com alto valor agregado e algumas empresas tem utilizado o método de maturação, que consiste em manter o músculo da ave em baixa temperatura ambiente por determinado período de tempo até que enzimas naturais confiram à carne maior suculência e maciez. O objetivo deste estudo foi identificar se Campylobacter sp é um perigo biológico a ser considerado na Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle na produção de peito de frango maturado. Para isso, seis lotes de aves de integrados diferentes foram testados para a presença de Campylobacter coli, Campylobacter lari e Campylobacter jejuni antes do abate (n= 1500), pelo método PCR-RT Multiplex, utilizando um kit comercial. Em seguida, amostras dos respectivos lotes foram retiradas na Evisceração, antes e após o Ponto Crítico de Controle para contaminação fecal visível (n=30 cada etapa) e analisadas pelo método qPCR-RT Multiplex, para as três espécies, além de contagem total de coliformes e E. coli, utilizando Placa Petrifilm 3M®. Os mesmos parâmetros foram analisados antes e após o Pré-resfriamento, antes e após a Maturação e após o Congelamento, além de dois pontos da superfície de equipamentos em contato com produto (n = 30 por etapa e n=06, cada equipamento). Dos três sorotipos pesquisados, apenas Campylobacter jejuni e Campylobacter coli foram recuperados a partir das amostras. Apenas um dos seis lotes foi positivo para Campylobacter jejuni antes do abate, entretanto, ao menos um dos dois sorotipos identificados foi recuperado a partir de amostras coletadas dos demais lotes em uma das etapas do ... Campylobacter sp is the pathogen involved in most cases of foodborne diseases in the world. A major source is chicken meat due to poor preparation or cross-contamination during its handling. Nowadays, customers seek for chicken products with higher added value and some slaughterhouses have used aging procedures , which consists of keeping meat under low temperature for a certain period of time, untill natural enzymes confer more tenderness to it. The aim of this study was to identify whether Campylobacter sp is a biological hazard to be considered in the hazard analysis of aged chicken breast production. To do that, six flocks from different farms were tested for the presence of Campylobacter coli, Campylobacter jejuni and Campylobacter lari before slaughter (n=1500) using a commercial kit for Multiplex RT-PCR assay. Consecutively, samples from those flocks were taken at the evisceration before and after the Critical Control Point for visible ingesta contamination; before and after chilling; before and after aging (24 h) and after freezing, besides surface swabs of two equipments in contact with products. For each step thirty samples were gathered (n = 240) and six swabs per equipment (n = 12) to be analyzed by the Multiplex qRT-PCR method for the three Campylobacter serovars, including total coliforms and E. coli counts by Petrifilm plates. From the three serovars tested, Campylobacter jejuni and Campylobacter coli were recovered from the samples, but not Campylobacter lari. Although only one of the six flocks was pre-slaughter positive for Campylobacter jejuni, positive samples were recovered from all the other flocks, at least for one of the serovars tested in one of the steps. E.coli and total coliforms counts decreased significantly throughout process. The number of positive samples for one of the two species ...

Tese (doutorado)–Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2014. O trabalho teve como objetivo estudar a filogenia, a variabilidade genética e caracterizar espécies silvestres, comerciais e híbridos interespecíficos de maracujazeiro como fontes de resistência à antracnose, bacteriose e virose. A análise filogenética foi utilizada para verificar a identidade de 48 acessos de um banco ativo de germoplasma de Passiflora, representando 43 diferentes espécies de interesse para o melhoramento genético do maracujazeiro azedo, doce e ornamental. As regiões de DNA utilizadas foram um loco ITS de DNA nuclear ribossomal e quatro locos do DNA de cloroplasto (matK, espaço intergênico psbA-trnH, rbcL e trnL-F). Correlacionando os dados obtidos de filogenia com as informações do programa de melhoramento de espécies de Passiflora, observou-se que a compatibilidade dos cruzamentos interespecíficos é maior quando os genitores foram selecionados a partir do mesmo subgênero. Tais análises permitiram também a obtenção de importantes informações taxonômicas, evolutivas e filogenéticas. No estudo da variabilidade genética de genótipos elites de maracujazeiro obtidos por programas de retrocruzamento, envolvendo espécies silvestres e comerciais com base em marcadores moleculares RAPD, foram analisados 32 genótipos de Passiflora. Os marcadores evidenciaram variabilidade genética entre os genótipos estudados e confirmaram a eficiência da recuperação do genoma recorrente dentro do programa de retrocruzamento. Também foi avaliado meios de cultura e métodos de inoculação artificial de Colletotrichum gloeosporioides em maracujazeiro azedo. Foram avaliados quatro meios de cultura (Aveia, BD, V8 e Ágar) e 3 três metodologias de inoculação baseadas em ferimentos com furador de couro adaptado, agulhas e atomização da suspensão de conídios. O meio de aveia (farinha de aveia Quaker© 6% + ágar 1,2% em água) apresentou a melhor condição para a produção de conídios de C. gloeosporioisdes e o método de inoculação que proporcionou maior desenvolvimento de sintomas e maior precisão na avaliação da antracnose em mudas de maracujazeiro foi o ferimento por agulhas no caule. No estudo da caracterização e quantificação da resistência de cultivares comerciais de maracujazeiro azedo à antracnose foram caracterizados os cultivares BRS Gigante Amarelo, BRS Sol do Cerrado, BRS Ouro Vermelho, Sol Amarelo Azedo Graúdo Brilhante (Feltrin) e BRS Rubi do Cerrado. As cultivares que apresentaram maior resistência a antracnose foram BRS Rubi do Cerrado seguido das cultivares BRS Sol do Cerrado e BRS Ouro Vermelho. A cultivar com maior susceptibilidade a antracnose foi BRS Gigante Amarelo seguido da cultivar Sol Amarelo Azedo Graúdo Brilhante (Feltrin). No estudo da caracterização e quantificação da resistência de espécies silvestres de maracujazeiro e genótipos obtidos por retrocruzamento à antracnose, o acesso da espécie silvestre Passiflora maliformes foi o que apresentou menor comprimento de lesão. Entre os genótipos obtidos por retrocruzamento, EC4-121 EC4-128 e a cultivar BRS Rubi do Cerrado apresentaram resistência à antracnose com comprimento de lesão estatisticamente iguais às obtidas pelo P. maliformes. No estudo da caracterização e quantificação da resistência de genótipos obtidos por retrocruzamento e de cultivares de maracujazeiro azedo à bacteriose, a cultivar BRS Rubi do Cerrado foi a mais resistente à bacteriose, e a cultivar BRS Gigante Amarelo foi a mais suscetível. Entre os genótipos obtidos por retrocruzamento, destacam-se EC4-223, ES4-239, EC4-325, EC4-124 e ERE-476 que apresentaram níveis de resistência iguais à cultivar BRS Rubi do Cerrado em pelo menos uma das características avaliadas. No estudo da caracterização e quantificação de espécies silvestres de maracujazeiro e genótipos obtidos por retrocruzamento à virose do endurecimento dos frutos, considerando apenas a incidência no estudo das espécies silvestres, verificou-se que P. misera e P. suberosa não manifestaram sintomas. Os acessos das espécies Passiflora cerradense, P. coccinea e P. setacea apresentaram resistência moderada com incidência de 10%, 25% e 30% respectivamente. Na avaliação da resistência dos genótipos obtidos por retrocruzamento à virose, observou-se 100% de incidência, porém com diferentes níveis de resistência com base na severidade. As cultivares comerciais apresentaram maior severidade da doença quando comparadas com os genótipos obtidos por retrocruzamento. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT The work aimed to study the phylogeny, genetic variability and to characterize wild and commercial species and interspecific hybrids of passion fruit as sources of resistance to anthracnose, bacterial disease and viruses. Phylogenetic analysis was used to verify the identity of 48 accessions of Passiflora active germplasm bank, representing 43 different species of potential interest for the improvement of sour, sweet and ornamental passionfruit. The DNA loci used were nuclear ribosomal ITS and four chloroplast loci, matK, psbA-trnH intergenic spacer, rbcL and trnL-trnF. Correlating the obtained phylogenies with data from breeding programs, Passiflora species were much more likely to be compatible in interspecific crosses if the parents were selected from the same subgenus. These analyzes also allowed us to obtain important taxonomic, evolutionary and phylogenetic informations. In the study of genetic variability of elite genotypes of passion fruit obtained in backcross programs involving wild and commercial species based on RAPD markers, we analyzed 32 genotypes of Passiflora. Cluster analysis showed that the elite genotypes were grouped with the commercial cultivars used as recurrent parent. The markers showed genetic variability among genotypes and confirmed the efficiency of recurrent genome recovery within the backcross program. In the evaluation of the culture media and inoculations methods of C. gloeosporioides in passionfruit plants, we analyzed four culture media (Oatmeal, BDA, V8 and Agar) and three inoculation methods based on injuries by adapted leather puncher and needles and leaves atomization with conidia suspension. The culture media Quaker© oatmeal 6% + Agar 1.2% in water showed the best condition for conidia production of C. gloesporioisdesand the inoculation method based on injuries in the stem by needles proportioned the best results. In the characterization and quantification of the resistance of passion fruit cultivars to anthracnose were characterized BRS Gigante Amarelo, BRS Sol Cerrado, BRS Ouro Vermelho, Sol Amarelo Azedo Graúdo Brilhante (Feltrin) and BRS Rubi do Cerrado Cerrado cultivars. The cultivar with highest resistance to anthracnose was BRS Rubi do Cerrado followed by BRS Sol do Cerrado and BRS Ouro Vermelho. The cultivar more susceptible to anthracnose was BRS Gigante Amarelo followed by Sol Amarelo Azedo Graúdo Brilhante (Feltrin) cultivar. In the study of characterization and quantification of the resistance of passion fruit wild species and genotypes to anthracnose obtained by backcrossing,. the access of P. maliformes showed the lowest mean of lesion length. Among the genotypes obtained by backcrossing EC4-121, EC4-128 and BRS Rubi do Cerrado cultivar, showed the same level of resistance to that obtained by P. maliformes access. In the study of characterization and quantification of the resistance genotypes obtained by backcrossing and passionfruit cultivars to bacterial, the BRS Rubi do Cerrado cultivar was the most resistant to bacterial disease and BRS Gigante Amarelo was the most susceptible. Among the genotypes obtained by backcrossing CPAC-EC4-223, CPAC-ES4-239, CPAC-EC4-325, CPAC-EC4-124 e CPAC-ERE-476 showed the same resistance level of the BRS Rubi do Cerrado at least one of the characteristic analyzed. In the evaluation of the resistance of accessions of wild species of passion fruit and backcrossing genotypes to the CABMV, considering only the disease incidence, P. misera and P. suberosa did not express symptom the virus. Passiflora cerradence, P. coccinia and P. setacea showed moderate resistance with disease incidence of 10%, 25% and 30% respectively. In the backcross breeding study, 12 genotypes were evaluated and showed 100% of CABMV incidence, but with different resistance levels considering the disease severity. The cultivars showed more disease severity compared with the genotypes obtained by backcrossing.