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Resumo Objetivo: O objetivo deste trabalho é examinar se a percepção da insegurança no emprego afeta negativamente a justiça procedimental, que pode estar relacionada ao comportamento de cidadania organizacional (CCO). Finalmente, testamos se o apoio percebido do supervisor tem um efeito moderador na relação entre a justiça procedimental e o CCO. Projeto/metodologia/abordagem: Os dados foram coletados de uma amostra de 707 funcionários de uma empresa metal-mecânica no Chile. A análise da regressão foi utilizada para analisar os efeitos de mediação e moderação. Resultados: Descobriu-se que a justiça procedimental medeia inteiramente a relação entre insegurança no emprego e CCO, de tal modo que a insegurança no emprego está negativamente relacionada à justiça procedimental, que por sua vez está positivamente relacionada ao CCO. Além disso, o apoio percebido do supervisor modera a relação entre a justiça procedimental e o CCO. Originalidade/valor: O trabalho oferece novos insights teóricos sobre os efeitos que a insegurança percebida no emprego exercem no CCO, oferecendo um insight empírico dos efeitos mediador e moderador que ajudam na compreensão desta relação. Abstract Purpose: The aim of this paper is to examine whether the perception of job insecurity negatively affects procedural fairness, which may relate to the Organizational Citizenship Behavior (OCB). Finally, we have tested whether perceived supervisor support has a moderating effect in the relationship between procedural fairness and OCB. Design/methodology/approach: Data were collected from a sample of 707 employees in a metal-mechanic company in Chile. Regression analysis was used to analyze the mediating and moderating effects. Findings: It was found that procedural fairness fully mediates the relationship between Job Insecurity and OCB, such that Job Insecurity is negatively related to procedural fairness, which in turn is positively related to OCB. Also, perceived supervisor support moderates the relationship between procedural fairness and OCB. Originality/value: The paper provides new theoretical insights on the effects that perceived job insecurity has on OCB, giving an empirical insight of the mediator and moderator effects that aid in the comprehension of this relationship.

No presente trabalho, tivemos como objetivo o estudo das interações de porfirinas com sistemas de interesse biológico, visando aplicações no transporte de fármacos e aplicação fotodinâmica. Foram avaliadas as interações das porfirinas aniônica meso-tetrakis(psulfonatofenil) porfirina (TPPS4) e catiônica meso-tetrakis(4-metil-piridil)porfirina (TMPyP) com albumina de soro bovino (BSA), anticorpos, DNA e nanopartículas biocompatíveis de maghemita. Para obter as constantes de ligação e parâmetros termodinâmicos foram empregandas as técnicas espectroscópicas de absorção UV/vis e fluorescência. As constantes de ligação indicam uma maior afinidade da porfirina TPPS4 pelas proteínas em comparação com a TMPyP. Os parâmetros termodinâmicos mostraram que as interações eletrostática e hidrofóbica mediam as interções da BSA com as porfirinas TPPS4 e TMPyP, respectivamente. Por outro lado, a natureza das interações das porfirinas com anticorpos apresentam um comportamento oposto ao observado para a BSA (eletrostática para TMPyP e hidrofóbica para a TPPS4), indicando que o local de ligação da porfirina TMPyP nos anticorpos, provavelmente, possui uma carga líquida negativa. Na interação da porfirina TPPS4 com a nanopartícula de maghemita, além de obter os parâmetros de ligação da interação, foi possível estimar o número de 21 porfirinas acopladas em cada nanopartícula. Com relação à interação do DNA com as porfirians TPPS4, TMPyP e seus complexos com zinco, foi observado que a ZnTMPyP possui maior afinidade pelo DNA que a TMPyP, enquanto que a TPPS4 e ZnTPPS4 não se ligam ao DNA, o que explica os resultados de fotodegração do DNA por essas porfirinas. The purpose of this work was to study the interactions of porphyrins in systems of biological interest aiming at drug transport and photodynamic applications. Interactions of anionic meso-tetrakis(p-sulphonatephenyl) porphyrin (TPPS4) and cationic meso-tetrakis (4- methyl-pyridyl) porphyrin (TMPyP) porphyrins with bovine serum albumin (BSA), antibodies, DNA and biocompatible nanoparticles of maghemite were evaluated. To obtain the binding constants and thermodynamic parameters, spectroscopic UV/Vis absorption and fluorescence techniques were used. Binding constants indicate a higher affinity of porphyrin TPPS4 for proteins compared to TMPyP. Thermodynamic parameters showed that electrostatic and hydrophobic interactions mediated the BSA interactions with the porphyrins TPPS4 and TMPyP, respectively. On the other hand, the nature of porphyrin-antibody interactions shows a behavior opposite to that observed for BSA (electrostatic for TMPyP and hydrophobic for TPPS4), indicating that the binding site of porphyrin TMPyP in the antibodies is likely to have a net negative charge. In the porphyrin TPPS4 interaction with maghemite nanoparticles, besides obtaining the binding parameters of the interaction, it was possible to estimate the number of 21 porphyrins coupled in each nanoparticle. Regarding the interaction of DNA with the porphyrins TPPS4, TMPyP and its complexes with zinc, it was observed that ZnTMPyP has higher affinity for DNA than TMPyP, whereas TPPS4 and ZnTPPS4 do not bind to DNA, which explains the results of photodegradation of DNA by these porphyrins. Keywords: Photodynamic Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A Miltefosina (MT) é um alquilfosfolipídio originalmente desenvolvido para o tratamento de câncer de mama e outros tumores sólidos. Atualmente é utilizada no tratamento da leishmaniose, uma doença infecto-parasitária causada pelo protozoário do gênero Leishmania, sendo o primeiro fármaco de uso oral aprovado para tal fim. No entanto, seu mecanismo de ação ainda é pouco conhecido. A espectroscopia de Ressonância Paramagnética Eletrônica (RPE) de um marcador de spin lipídico (5-DOXIL estearato) e outro específico de grupo tiol (4-maleimido-TEMPO) na membrana de amastigotas axênicas de L. (Leishmania) amazonensis e de macrófagos extraídos de peritônio de camundongos BALB/c, mostrou que a MT causa um aumento significativo na dinâmica destas membranas para concentrações similares àquelas que inibem o crescimento do parasito ou que são citotóxicas ao macrófago. Embora essas alterações possam ser detectadas usando um marcador de spin lipídico, nossos resultados experimentais indicaram que a MT interage predominantemente com a componente proteica da membrana. Utilizando um método para incorporação rápida da MT na membrana, esses efeitos foram medidos imediatamente após o tratamento. Ensaios de citotoxicidade, estimada via contagem microscópica de células vivas e mortas, indicaram que ~80% dos parasitos e dos macrófagos estão mortos na concentração de MT no qual a espectroscopia de RPE detectou uma mudança significativa na dinâmica da membrana. A viabilidade celular, quantificada pela redução do sal MTT ((3-4,5- Dimetiltiazol-2yl)-2,5 difenil brometo de tetrazolina), mostrou que a concentração de MT que inibe 50% da proliferação celular (IC50) depende da concentração celular usada no ensaio. Esta dependência foi analisada utilizando uma equação teórica envolvendo parâmetros biofísicos tais como o coeficiente de partição membrana-água e concentrações de MT na membrana e no meio aquoso. Os dados mostraram que as células mais sensíveis à MT são respectivamente: eritrócitos, formas promastigotas e amastigotas da Leishmania e macrófagos. O valor do IC50 da MT para 4 x 107 parasitos/mL foi de 24,35 M. Para esta mesma concentração de células, foi detectada uma alteração significativa na fluidez lipídica da membrana dos parasitos com 15 M de MT. Os espectros de RPE do marcador de spin ligados a proteínas da membrana foram consistentes com as conformações mais expandidas e dinâmicas das proteínas expostas no solvente, sugerindo uma ação semelhante à de detergente, com uma possível formação de estruturas tipo micelas em volta das cadeias polipeptídicas. Miltefosine (MT) is a alkylphospholipid originally developed for treatment of breast cancer and other solid tumors. It is currently used in the treatment of leishmaniasis, an infectious parasitic disease caused by protozoa of the genus Leishmania, being the first oral drug adopted for this purpose. However, its mechanism of action remains unclear. Electron paramagnetic resonance (EPR) spectroscopy of a spin-labeled lipid (5-DOXIL stearate) and a thiol-specific spin label (4-maleimido-TEMPO) in the membrane of axenic amastigotes of L.(Leishmania) amazonensis and peritoneal macrophages from Balb/c mice showed that MT causes significant increase in membrane dynamics at similar concentrations that inhibit parasite growth or are cytotoxic to macrophage. Although these alterations can be detected using a spin-labeled lipid, our experimental results indicated that MT interacts predominantly with the protein component of the membrane. Using a method for the rapid incorporation of MT into the membrane, these effects were measured immediately after treatment. Cytotoxicity, estimated via microscopic counting of living and dead cells, indicated ~80% parasites and macrophages death at the concentration of MT at which EPR spectroscopy detected a significant change in membrane dynamics. Cell viability, analyzed using the MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide tetrazolium) reduction assay, showed that 50% inhibitory concentration (IC50) of MT depends on the cell concentration used in the assay. This dependence was analyzed using a theoretical equation involving biophysical parameters such as the partition coefficient of watermembrane and MT concentrations on the membrane and in the aqueous medium. The data showed that cells more sensitive to MT are respectively: erythrocytes, Leishmania promastigotes and Leishmania amastigotes and macrophage. The IC50 value of MT for 4 x 107 parasites/mL was 24,35 M. For the same cell concentration, a significant alteration was detected in the membrane lipid fluidity of parasites to 15 M of MT. The EPR spectra of spinlabeled membrane-bound proteins were consistent with more expanded and solvent exposed protein conformations, suggesting a detergent-like action, with a possible formation of micelle-like structures around polypeptide chains. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Este trabalho descreve o desenvolvimento e caracterização de nanopartículas lipídicas sólidas magnéticas contendo paclitaxel para aplicação em magnetohipertermia. Nanopartículas magnéticas foram obtidas pelo método de coprecipitação de sais de Fe(II) e Fe(III) em meio alcalino. Nanopartículas lipídicas sólidas magnéticas contendo paclitaxel foram preparadas pelo método de emulsificação-difusão de solvente. O sistema nanoestruturado foi caracterizado quanto à morfologia, diâmetro médio e distribuição de tamanho, eficiência de encapsulação do paclitaxel, estabilidade e propriedades magnéticas de magnetometria e magnetohipertermia. As nanopartículas lipídicas sólidas magnéticas contendo paclitaxel apresentaram diâmetro médio de aproximadamente 200nm com índice de polidispersão de 0,189 e 67% de eficiência de encapsulação do PTX. O estudo de estabilidade realizado em amostras liofilizadas mostrou redução de aproximadamente 15% do paclitaxel encapsulado no período de 30 dias. Pelo estudo de magnetometria os nanocarreadores apresentaram curva de magnetização condizente com material em regime perparamagnético e o efeito de magnetohipertermia foi verificado pelo aumento da temperatura de aproximadamente 25ºC do nanocarreador.A taxa de liberação do paclitaxel foi aumentada em 3 vezes quando a temperatura foi elevada de 25ºC para 43ºC no ensaio de liberação in vitro indicando que o aquecimento dos nanocarreadores pode representar um mecanismo desencadeador do processo de liberação do fármaco, possibilitando a obtenção de sistemas de liberação controlada por magnetohipertermia. This work describes the development and characterization of magnetic solid lipid nanoparticles (SLNMP) containing paclitaxel for magnetohyperthermia applications. Magnetic nanoparticles were prepared by coprecipitation of Fe(II) and Fe(III) salts in an alkaline medium. SLNMP containing paclitaxel were prepared by emulsification – solvent diffusion. Characterization of the nanostructured system included morphology analysis, average diameter and size distribution, encapsulation efficiency for paclitaxel, stability and magnetic properties of magnetometry and magnetohyperthermia. Magnetic SLNMP containing paclitaxel exhibited an average diameter of 200nm with a polydispersity index of 0,189; which was confirmed by Atomic Force Microscopy. Stability studies conducted with lyophilized samples showed a decrease of approximately 15% in the amount of encapsulated paclitaxel in 30 days. Magnetometry data confirmed the superparamagnetic behavior of the nanocarriers and magnetohyperthermia effect was demonstrated by an increase of 25°C of the temperature of the nanocarrier. A three fold increase in the drug release rate was obtained when the temperature was raised from 25 to 43°C in the in vitro release assay. This indicated that temperature increase acts as a trigger mechanism for drug release, allowing the preparation of nanostructured controlled drug delivery systems controlled by magnetohyperthermia. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Sistemas poliméricos e lipídicos nanoestruturados são capazes de melhorar o índice terapêutico dos fármacos encapsulados, principalmente quando se trata de fármacos antitumorais. Neste trabalho a co-encapsulação do paclitaxel (PTX) e da genisteína (GEN) foi obtida através do desenvolvimento de nanocápsulas poliméricas (NC) recobertas por bicamada lipídica para a liberação controlada desses fármacos. NC contendo PTX encapsulado foram obtidas através do método de deposição interfacial do polímero pré-formado. Em seguida, as NC foram recobertas por bicamada lipídica contendo GEN e suas propriedades físicoquímicas foram caracterizadas. As NC recobertas mostraram eficiência de encapsulação de aproximadamente 98% para ambos os fármacos, apresentandose na faixa de 150 nm, com distribuição monomodal. Análise das NC recobertas por multiple light scattering a 25 °C por 24 horas apresentou aumento de apenas 2% no perfil de backscattering tanto no topo quanto no fundo da amostra, indicando sutil sedimentação e cremagem, ambos fenômenos reversíveis. A cinética de liberação in vitro mostrou que a GEN foi completamente liberada nas primeiras 48 horas, enquanto que nesse mesmo período, menos de 10% do PTX foi liberado, atingindo 70% de liberação após 60 dias de análise. Esses resultados demonstram a obtenção de um dispositivo biodegradável para liberação controlada de GEN e PTX em diferentes estágios. Nos ensaios de atividade antitumoral in vivo em camundongos portadores do tumor ascítico de Ehrlich, foi avaliada a administração intra-tumoral da formulação desenvolvida com 3 concentrações diferentes de PTX na presença ou ausência de GEN. A inibição de mais de 90% do tumor comparada a um grupo controle foi alcançada com uma dose de PTX cerca de 5 vezes menor que a dose equivalente utilizada na quimioterapia convencional com PTX. Quando uma baixa dose de PTX (0,2 mg/kg/dia) foi usado para o tratamento, foi obtida uma inibição tumoral de 11%, mas, quando associada a uma dose de 12 mg/kg/dia de GEN, houve 44% de inibição do tumor e uma diminuição de cerca de 58% nos níveis do fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) em comparação com animais tratados com nanopartículas sem fármaco. O efeito antiangiogênico da GEN foi evidente quando associada ao PTX, inibindo a formação de nova rede vascular formada por vasos tortuosos e congestos na região peritoneal quando em comparação com grupos tratados apenas com PTX. A co-encapsulação de GEN e PTX em um nanosistema multicompartimental de liberação controlada promoveu efeito combinado da atividade antiangiogênica aliada à atividade antitumoral, mostrando-se uma formulação com grande potencial para tratamento antineoplásico. Nanostructured polymeric and lipid systems are capable of improving therapeutic index of encapsulated drugs, especially when it comes to antitumor drugs. In this work, co-encapsulation of paclitaxel (PTX) and genistein (GEN) was obtained by developing a multilayered nanocarrier for controlled release of drugs. Nanocapsules (NC) encapsulating PTX were obtained by interfacial deposition of preformed polymer method. They were further coated with a phospholipid bilayer entrapping GEN and their physical-chemical properties were characterized. Coated nanoparticles presented an entrapment efficiency of about 98% for both drugs. Particles were in the range of 150 nm and showed a monomodal distribution. Multiple light scattering analyses presented an increase of only 2% of the backscattering profile both in the top and in the bottom of the sample, indicating a slight sedimentation and creaming behaviors, both reversible phenomena. In vitro drug release showed that GEN was completely released within 48 hours, whereas in that same period, less than 10% of PTX was released and reached almost 70% after 60 days of analysis. The results suggest that we have developed a biodegradable device for a sustained release of GEN and PTX in different stages. In vivo antitumor activity assays with Ehrlich ascites tumor (EAT) bearing mice evaluated intra-tumoral administration of the developed formulation in three different concentrations of PTX in the presence or absence of GEN. Results presented more than 90% tumor inhibition in EAT-bearing mice compared to the control group when a dose of nanostructured PTX about 5 times lower than the equivalent dose used in conventional chemotherapy was used. When a low dose of PTX (0.2 mg/kg/day) was used in the treatment, 11% tumor inhibition was achieved, but when associated with a dose of 12 mg/kg/day of GEN, there was 44% tumor inhibition and a decrease of about 58% in VEGF levels compared to animals treated with blank nanoparticles. The antiangiogenic effect of GEN was evident when associated with PTX, inhibiting formation of new vascular network formed by tortuous and congested vessels in peritoneal region of mice when compared with groups treated only with PTX. Co-encapsulation of GEN and PTX in a controlled-release multicompartimental nanosystem promoted additive effect of antiangiogenic activity associated with antitumor effect, intending to be a formulation with high potential for anticancer treatment. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Orientador: Eneida de Paula Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Surfatantes ou detergentes são compostos anfifílicos que, na presença de água, têm a característica de formar agregados micelares. Surfatantes induzem a desestruturação de outros agregados como bicamadas sendo, por isso, usados para ruptura celular ou solubilização de lipídios e proteínas de membrana. A capacidade lítica dos surfatantes resulta de sua estrutura química, que determina o modo de interação dos mesmos com as membranas. Em concentrações mais altas (acima da concentração micelar crítica), os surfatantes desestabilizam as bicamadas lipídicas, levando à formação de micelas-mistas. Ensaios hemolíticos são bons modelos para estudo do efeito lítico de surfatantes em biomembranas. Aplicando em eritrócitos humanos o tratamento quantitativo proposto por Lichtenberg (1985) para estudo da solubilização de bicamadas lipídicas mensurou-se, neste trabalho, as concentrações para início (Csat) e 100% de hemólise (Csol), induzidas por 25 surfatantes clássicos, pertencentes a cinco diferentes famílias. A variação dos valores de Csat, Csol determinada com diferentes hematócritos permitiu o cálculo da constante de ligação surfatante/membrana e da razão surfatante/lipídio de membrana (Re) para início e 100% de hemólise. O parâmetro Re foi usado para classificar os detergentes como fortes, médios ou fracos agentes solubilizantes, com boa correlação com dados da literatura o que nos permitiu propor seu uso para descrever o efeito lítico de surfatantes, como uma alternativa simples e aplicável as membranas biológicas. As transições durante o processo hemolítico foram acompanhadas pela técnica de Ressonância Paramagnética Eletrônica, com uso marcador de spin 5 doxil-estearato (incorporado a 1 mol% nas membranas de eritrócito) e lise induzida pelo surfatante não iônico Triton X100. Concomitante ao aparecimento de hemoglobina e fosfato livres no sobrenadante - indicadores da ruptura da membrana, medidas do parâmetro de ordem daquele marcador de spin permitiram estudar as transições que acontecem durante (membrana:membrana mista) e após (membrana mista:micela mista) a hemólise Abstract: Surfactants or detergents are amphiphilic compounds that form micellar aggregates in the presence of excess water. Surfactants are able to induce disruption of lamellar aggregates, justifying their use for cell lysis or in the extraction of membrane constituents such as lipids and proteins. The lytic capacity of a given surfactant is determined by its chemical structure, that rules its interaction with the membranes. At high concentration (above the critic micelle concentration), surfactants destabilize lipid bilayer leading to mixed micelle formation. Hemolytic assays are a good model to study the lytic effect of surfactants on biomembranes. In this study we have applied to human erythrocytes the quantitative treatment proposed by Lichtenberg (1985) to describe the solubilization of model lipid membranes. The concentration for onset (Csat) and complete (Csol) hemolysis induced by 25 classic surfactants from five different families were measured. Changes in Csat and Csol values at different hematocrits allowed the determination of the surfactant/membrane lipid molar ratio (Re) for beginning and 100% lysis. The Re arameter was used to classify the surfactants as strong, medium or weak membrane solubilizers. The classification was in good correlation with data in the literature, allowing us to recommend the use of Re parameter to describe the lyric effect of surfactants on biomembranes. The transitions in the hemolytic process were accompanied by Electron Paramagnetic Resonance, using the 5-doxyl-stearate spin-probe (1 mol%, incorporated in the erythrocyte membrane) and the non-ionic surfactant Triton X100. Simultaneously to the appearance of hemoglobin and phosphate released in the supernatant, measurements of the order parameter of the spin probe were used to characterize the transitions that take place during (membrane :mixed membrane) and after (mixed: membrane: mixed micelle) hemolysis Doutorado Bioquímica Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Antonio Celso Novaes de Magalhães Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Em várias espécies de plantas superiores tropicais esubtropicais, tais como o café (Coffea arabica L.), a exposição a baixas temperaturas pode causar grandes danos aos tecidos. Estas condições geralmente induzem inibição do crescimento, alterações nas taxas metabólicas e alterações funcionais em membranas. Esta pesquisa buscou identificar as alterações no crescimento da raiz, em plântulas de café de 30 dias de idade, as quais foram submetidas ao estresse por resfriamento por 6 dias, nas temperaturas de 5, 10, 15, 20 e 25°C, no escuro. O protocolo experimental incluiu medidas das taxas de calor metabólico, peroxidação de lipídios e fluidez de membranas, em adição às atividades de algumas enzimas antioxidantes. Foram utilizadas basicamente técnicas não invasivas, tais como microcalorimetria, medidas de liberação de eletrólitos e EPR espectroscopia. Os resultados mostraram que o crescimento da raiz foi completamente inibido após exposição a 5 e 10°C, e o processo foi irreversível após o retorno das plantas à temperatura controle (25°C). Os tecidos de raiz submetidos a temperaturas abaixo de 15°C, apresentaram taxas de calor metabólico sensivelmente mais baixas em comparação com o controle e os valores mostraram-se estreitamente correlacionados com a inibição do crescimento da raiz. Em paralelo, a liberação de eletrólitos pelas raízes aumentou significativamente nas plântulas expostas a 5 e 10°C, as quais também exibiram irreversibilidade quando as plantas retornaram à temperatura de 25°C. o tratamento a10°C induziu ainda aumento significativo na peroxidação de lipídios de membrana, quando comparado com 15 e 25°C. Os espectros de EPR mostraram que os marcadores de spin 5-, 12 e16-DAS (ácido doxil esteárico), foram capazes de intercalar com os lipídios de membrana celular de tecidos de raiz em segmentos apicais intactos. À profundidade do 5° e 16° átomos de carbono da cadeia acílica, radical nitróxido do marcador de spin detectou membranas mais rígidas em plântulas submetidas à temperatura de 10°C, comparado com as amostras tratadas a 15 e 25°C. Na posição do C-12 da cadeia a sonda apresentou um movimento muito restrito e foi insensível às alterações induzidas pelo resfriamento nas membranas. As atividades de algumas enzimas antioxidantes, tais como ascorbato peroxidase, guaiacol peroxidase e catalase, mostraram respostas variadas em tecidos submetidos à baixa temperatura (10°C). Ascorbato peroxidase ecatalase não apresentaram alterações significativas em condições de resfriamento, enquanto aatividade da guaiacol peroxidase aumentou 55%, comparado ao controle, a 25°C. Por outro lado, a atividade de glutationa redutase diminuiu, paralelamente àcapacidade de redução de TTC (cloreto de trifeniltetrazólio) . Nossos resultados mostraram que o estresse por resfriamento em plântulas de café expostas a lOoe por 6 dias pode ser interpretado como um estresse oxidativo, que resultou em peroxidação de lipídios, aumento na rigidez de membranas, vazamento de eletrólitos e redução na atividade metabólica Abstract: In several tropical and sub-tropical higher plant species, such as coffee (Coffea arabica L.), exposure to low temperature can cause extensive tissue damage. These conditions usually induce growth inhibition, changes in metabolic rates, and functional membrane alterations. The present research attempted to nvestigate the changes in root growth, in 30 days old coffee seedlings which were subjected to chilling stress for 6 days, at temperatures of 5, 10, 15, 20, and 25°C, in darkness. The experimental protocol included measurements of metabolic heat rates, lipid peroxidation, membrane fluidity, in addi tion to the activities ok selected antioxidative enzymes. The investigation utilized basically non invasive techniques such as microcalorimetry, electrolyte leakage and EPR sprectroscopy. The results showed that root growth was completely inhibited after exposure to 5and 10°C, the process being irreversible after 6 days of incubation at these temperatures. Root tissues subjected to temperatures below 15°C presented significant lower rates of metabolic heat compared with controls at 25 ºC, and the values wereclosely correlated with the observed root growth inhibition. In parallel, figures on electrolyte loss significantely increased in root samples of 5 and 10°C incubated plants, which also exhibited irreversibility upon being transferred to the control temperature. In addition, the 10°C treatment induced a significant increase in the leveI of lipid peroxidation of root cell membranes. In root tip tissues the electron paramagnetic resonance spectra showed that the spin probes 5-, 12- and 16-doxylstearic acid were capable to intercalate within the cellular membrane lipids. Indeed, at the depth of the 5th and 16th carbon atoms of the alkyl chains the nitroxide radical detected more rigid membranes in seedlings exposed to 10°C compared with 15 and 25°C treated samples. At C-12 position of the chains the probe showed very restrict motion and was insensi tive to chilling induced membrane alterations. The activities of some antioxidative enzymes, such as ascorbate peroxidase, guaiacol peroxidase and catalase showed varied responses in tissues subjected to low temperatures (10°C) for 6 days. Actually, ascorbate peroxidase and catalase did not show any appreciable change under chilling conditions, while guaiacol peroxidase acti vi ty increased 55% compared te the control, at 25°C. On the other hand, glutathione reductase activity decreased, in parallel to a significant reduction in reduced TTC values. Our results showed that the chilling stress in seedlings of coffee exposed to 10°C for 6 days, might be interpreted as an oxidative stress, which resulted in lipid peroxidation, increase ln membrane rigidity, electrolyte leakage ane reduction in metabolic activity Doutorado Doutor em Ciências