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OBJETIVO: Determinar o efeito de gatifloxacina 0,3% tópica, nas culturas de humor aquoso humano, instilada quatro vezes ao dia por três dias antes de facoemulsificação comparada a uma gota gatifloxacina 0,3% tópica instilada imediatamente antes da cirurgia. MÉTODOS: Trinta e sete pacientes com catarata sem outras afecções oculares foram distribuídos aleatoriamente nos Grupos A e B antes da facoemulsificação. Os pacientes do Grupo A receberam uma gota de gatifloxacina 0,3% imediatamente antes da cirurgia e o Grupo B recebeu gatifloxacina 0,3% quatro vezes ao dia três dias antes do procedimento. Após a facoemulsificação, o humor aquoso foi aspirado e semeado em meios de ágar-sangue, ágar-chocolate, Saboraud e TSB. Foi realizado esfregaço para bacterioscopia. RESULTADOS: O Grupo B apresentou 40% das lâminas bacterioscópicas com cocos gram +. O Grupo B apresentou 17,6% de cocos gram + na bacterioscopia, estes resultados não foram estatisticamente significativos (p=0,098). Cinco casos (25%) do Grupo A apresentaram culturas positivas para Staphylococos epidermidis, resultado significativamente maior do que o Grupo B, que não apresentou nenhuma cultura positiva para bactérias ou fungos. CONCLUSÃO: Neste estudo, a gatifloxacina 0,3% instilada três dias antes da facoemulsificação diminuiu significativamente o número de culturas do humor aquoso positivas quando comparada à instilação imediata de uma gota. Purpose: To determine the effect on human aqueous humor cultures of topical gatifloxacin 0.3% applied four times a day three days before phacoemulsification compared to topical gatifloxaxin 0.3% applied and same-day surgery. METHODS: Thirty-seven patients with cataract without other ocular diseases were randomly assigned to Groups A and B before phacoemulsification. Group A received topical gatifloxacin 0.3% same-day surgery and Group B received gatifloxacin 0.3% four times a day three days before phacoemulsification. After the procedure the aqueous humor was aspirated for cultures on agar-blood, agar-chocolate, saboraud and TSB and smeared for bacterioscopy. RESULTS: Group A presented 40% of the bacterioscopies with cocci gram +, Group B presented 17.6% of the bacterioscopies with cocci gram +. These results are not statistically significant (p=0,098). Five cases (25%) from Group A presented positive cultures for S. epidermidis, which was significantly higher than Group B, which did not present positive cultures for any bacteria or fungus (p=0,027). CONCLUSION: Gatifloxacin 0.3% applied three days before phacoemulsification significantly lowered the rate of positive aqueous humor cultures when compared to immediate application of this antibiotic before surgery in this study.