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RESUMO O trabalho teve por objetivo avaliar a ação do fungicida sítio-específico carbendazim + tebuconazole e do fungicida multissítio clorotalonil, in vitro, sobre a germinação dos uredosporos de Phakopsora pachyrhizi, e in vivo sobre a severidade dos sintomas da doença em folíolos de soja. Os uredosporos de Phakopsora pachyrhizi empregados nos experimentos foram provenientes de Artur Nogueira-SP, coletados a partir de ensaios de campo realizados em três épocas de cultivo, dentro da safra 2016/17. Para cada época de semeadura foram utilizadas três cultivares distintas, obedecendo-se às recomendações segundo o grupo de maturação de cada uma (precoce, médio e tardio), todas suscetíveis à ferrugem asiática, perfazendo um total de 9 cultivares, ou seja, de 9 coletas. Avaliou-se a ação do fungicida multissítio clorotalonil e sítio-específico carbendazim + tebuconazole sobre a germinação in vitro de urediniosporos e a severidade da doença, pelo método de folhas destacadas, in vivo, tratadas preventivamente, antes da inoculação. Determinou-se as concentrações letais CL50 e CL95 pelo método Probit. O fungicida multissítio clorotalonil foi mais fungitóxico in vitro e in vivo que o fungicida específico carbendazim + tebuconazole para os uredosporos de P. pachyrhizi, em todas as coletas referentes, independente das safras e épocas de semeadura. A partir dos testes in vivo e in vitro, há indicação de haver interação significativa dos cultivares com cada fungicida. ABSTRACT The present study aimed to evaluate the action of both the site-specific fungicide carbendazim + tebuconazole and the multisite fungicide chlorothalonil, in vitro, on the germination of Phakopsora pachyrhizi uredospores and, in vivo, on the severity of symptoms of the disease in soybean leaflets. The uredospores of Phakopsora pachyrhizi used in the experiments were collected from Artur Nogueira, São Paulo State, during field trials carried out in three growing periods within the 2016/17 season. For each sowing period, three different cultivars, susceptible to Asian soybean rust, were used according to the recommendations for their respective maturation group (early, medium and late), totaling 9 cultivars, i.e., 9 samplings. The action of both the multisite fungicide chlorothalonil and the site-specific fungicide carbendazim + tebuconazole was evaluated on the germination of urediniospores, in vitro, and on the disease severity, in vivo, by the method of detached leaves, preventively treated before inoculation. Lethal concentrations LC50 and LC95 were determined by the Probit method. The multisite fungicide chlorothalonil was more fungitoxic in vitro and in vivo than the specific fungicide carbendazim + tebuconazole to P. pachyrhizi uredospores in all samplings, regardless of seasons and sowing times. The in vivo and in vitro tests indicated significant interaction of the cultivars with each fungicide.

RESUMO: Há várias bactérias que causam problemas para o cafeeiro, incluindo Pseudomonas cichorii, P. syringae pv. garcae, P. syringae pv. tabaci, Burkholderia andropogonis e Xylella fastidiosa, todas elas já descritas no Brasil. Tentativas de diferenciar essas bactérias por testes serológicos de dupla difusão em ágar (dda), com antissoros produzidos contra células íntegras de P. s. pv. garcae, mostraram reações cruzadas, principalmente entre P. s. pv. garcae e P. s. pv. tabaci. Dessa forma, foram produzidos antissoros contra P. s. pv. garcae (linhagem patotipo IBSBF-248 - Coleção de Culturas de Fitobactérias do Instituto Biológico - IBSBF), obtidos por meio de imunizações de coelhos com antígenos de proteínas do complexo proteico da membrana (CPM). Esses antissoros foram testados por dupla difusão em agarose (dda) contra diversas formas de antígenos extraídos de P. cichorii, P. s. pv. garcae e P. s. pv. tabaci [células autoclavadas, células tratadas com formol, exopolissacarídeos (EPS), glicoproteínas (GP) da cápsula bacteriana, proteínas de membrana e suspensão bacteriana (SB) em NaCl 0,85%]. Os resultados mostraram que, dependendo do antígeno e do meio suporte da dupla difusão (com ou sem MgCl2 e/ou azul de tripano), os antissoros reagem somente com P. s. pv. garcae. Desse modo, esses antígenos podem ser usados para a rápida diagnose da mancha aureolada do cafeeiro nos testes de dda. ABSTRACT: Some bacterial diseases have been described causing problems in coffee, whose causal agents are Pseudomonas cichorii, P. syringae pv. garcae, P. s. pv. tabaci and Burkholderia andropogonis, all of them also occurring in Brazil. Attempts to differentiate these bacteria by double diffusion agar (dda) technique with antisera produced against whole cells of P. s. pv. garcae showed cross-reactions, especially among P. s. pv. garcae and P. s. pv. tabaci. Thus, antisera were produced against P. s. pv. garcae (pathotype strain IBSBF-248 - Phytobacteria Culture Collection of Instituto Biológico - IBSBF), using rabbit immunizations with antigens of the protein complex of membranes. These antisera were tested against different kind of antigens (autoclaved cells, cells treated with formaldehyde, capsule polysaccharides, glycoproteins, bacterial membrane proteins and bacterial suspension in 0.85% NaCl) extracted from P. cichorii, P. s. pv. garcae and P. s. pv. tabaci. The results showed that depending on the kind of antigen and the medium used in the double diffusion test (with or without MgCl2 and/or trypan blue), the antiserum reacted only with P. s. pv. garcae. Thus, these antigens may be used as an auxiliary tool in the rapid diagnosis of bacterial halo blight of coffee in the double diffusion test.

A ocorrência de Pseudomonas viridiflava é descrita em sementes de couve chinesa (Brassica rapa var. pekinensis) importadas do Japão. Do ponto de vista epidemiológico, a detecção dessa bactéria é de extrema importância. Embora já existam, em nosso país, relatos desse patógeno nas culturas de alface, alho, cebola, cenoura, feijão e mandioca, sua presença em sementes de couve chinesa pode se constituir num risco potencial para outras espécies de brássicas aqui cultivadas. A natural occurrence of Pseudomonas viridiflava in chinese cabbage (Brassica rapa var. pekinensis) imported seeds from Japan is described. From the epidemiological point of view, this is a very important observation since the bacterium could be a source of inoculum for other cultived brassicas in Brazil.

Submitted by Guilherme Lemeszenski (guilherme@nead.unesp.br) on 2013-08-22T18:49:35Z No. of bitstreams: 1 S0100-54052010000100015.pdf: 125328 bytes, checksum: 7682fcfa39597eaa9c6d1fb9deaabe1f (MD5) Made available in DSpace on 2013-08-22T18:49:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 S0100-54052010000100015.pdf: 125328 bytes, checksum: 7682fcfa39597eaa9c6d1fb9deaabe1f (MD5) Previous issue date: 2010-03-01 Made available in DSpace on 2013-09-30T17:45:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S0100-54052010000100015.pdf: 125328 bytes, checksum: 7682fcfa39597eaa9c6d1fb9deaabe1f (MD5) S0100-54052010000100015.pdf.txt: 10444 bytes, checksum: 6c80c48ae3c97dca19b7065ca165ab86 (MD5) Previous issue date: 2010-03-01 Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-20T13:20:27Z No. of bitstreams: 2 S0100-54052010000100015.pdf: 125328 bytes, checksum: 7682fcfa39597eaa9c6d1fb9deaabe1f (MD5) S0100-54052010000100015.pdf.txt: 10444 bytes, checksum: 6c80c48ae3c97dca19b7065ca165ab86 (MD5) Made available in DSpace on 2014-05-20T13:20:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S0100-54052010000100015.pdf: 125328 bytes, checksum: 7682fcfa39597eaa9c6d1fb9deaabe1f (MD5) S0100-54052010000100015.pdf.txt: 10444 bytes, checksum: 6c80c48ae3c97dca19b7065ca165ab86 (MD5) Previous issue date: 2010-03-01 A ocorrência de Pseudomonas viridiflava é descrita em sementes de couve chinesa (Brassica rapa var. pekinensis) importadas do Japão. do ponto de vista epidemiológico, a detecção dessa bactéria é de extrema importância. Embora já existam, em nosso país, relatos desse patógeno nas culturas de alface, alho, cebola, cenoura, feijão e mandioca, sua presença em sementes de couve chinesa pode se constituir num risco potencial para outras espécies de brássicas aqui cultivadas. A natural occurrence of Pseudomonas viridiflava in chinese cabbage (Brassica rapa var. pekinensis) imported seeds from Japan is described. From the epidemiological point of view, this is a very important observation since the bacterium could be a source of inoculum for other cultived brassicas in Brazil. Instituto Biológico Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA) Mandioca e Fruticultura Tropical UNESP FCA Depto.de Produção Vegetal UNESP FCA Depto.de Produção Vegetal

Submitted by Guilherme Lemeszenski (guilherme@nead.unesp.br) on 2013-08-22T18:49:33Z No. of bitstreams: 1 S0100-54052009000200008.pdf: 1283462 bytes, checksum: d56ae9fa668e72e91d8b4bbcb126e6ae (MD5) Made available in DSpace on 2013-08-22T18:49:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 S0100-54052009000200008.pdf: 1283462 bytes, checksum: d56ae9fa668e72e91d8b4bbcb126e6ae (MD5) Previous issue date: 2009-06-01 Made available in DSpace on 2013-09-30T19:39:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S0100-54052009000200008.pdf: 1283462 bytes, checksum: d56ae9fa668e72e91d8b4bbcb126e6ae (MD5) S0100-54052009000200008.pdf.txt: 28578 bytes, checksum: 22bde35b00797b8b00038a72a837e87f (MD5) Previous issue date: 2009-06-01 Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-20T15:10:36Z No. of bitstreams: 2 S0100-54052009000200008.pdf: 1283462 bytes, checksum: d56ae9fa668e72e91d8b4bbcb126e6ae (MD5) S0100-54052009000200008.pdf.txt: 28578 bytes, checksum: 22bde35b00797b8b00038a72a837e87f (MD5) Made available in DSpace on 2014-05-20T15:10:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S0100-54052009000200008.pdf: 1283462 bytes, checksum: d56ae9fa668e72e91d8b4bbcb126e6ae (MD5) S0100-54052009000200008.pdf.txt: 28578 bytes, checksum: 22bde35b00797b8b00038a72a837e87f (MD5) Previous issue date: 2009-06-01 Em 2005, foi constatada em dois campos comerciais de tomate no Estado de São Paulo, a ocorrência da queima bacteriana, causada por Pseudomonas cichorii. em vista disso, foram desenvolvidos estudos visando a determinação da gama de hospedeiros de isolados de Pseudomonas cichorii (IBSBF 2309 e IBSBF 2323), obtidos de tomateiro, provenientes de campos comerciais localizados nos municípios de Bragança Paulista e Mogi Guaçú, SP. Plantas de abobrinha, alface, beldroega, berinjela, beterraba, cenoura, couvebrócolo, datura, fumo, girassol, jiló, melão, pepino, petúnia, pimentão, rabanete, repolho, rúcula, salsa e tomateiro foram inoculadas por pulverização, separadamente, com os dois isolados de P. cichorii de tomateiro e um isolado de girassol (GIR-1). Os isolados IBSBF 2309 e IBSBF 2323 foram patogênicos à beldroega, datura, girassol, pimentão e tomate; GIR-1 foi patogênico apenas à beldroega, datura e girassol, não sendo patogênico ao pimentão e ao tomateiro. No Brasil não se conhecem fontes de resistência dentro do gênero Lycopersicon ou a reação de cultivares de tomateiros a esta bactéria. Vinte e oito genótipos de tomateiro provenientes do Banco de Germoplasma da empresa Sakata Seed Sudamerica Ltda., foram avaliados quanto a reação aos isolados IBSBF 2309 e IBSBF 2323 de P. cichorii, pelo método de inoculação nas folhas. Os maiores níveis de resistência foram observados em AF 11768, AF 2521, AF 11766, AF 11772, AF 229, AF 5719-1 e AF 8162. O genótipo AF 5719-1, que possui o gene Pto, que confere resistência a P. syringae pv. tomato, apresentou um bom nível de resistência a P. cichorii. A identificação de genótipos que apresentem bons níveis de resistência a este patógeno é importante para utilização em programas de melhoramento genético do tomateiro, visando a incorporação de genes de resistência a P. cichorii. The occurrence of the bacterial blight, caused by Pseudomonas cichorii, was observed in two commercial tomato fields in the State of São Paulo in 2005. In view of this, studies were carried out in order to determine the host range of Pseudomonas cichorii isolates (IBSBF 2309 and IBSBF 2323), obtained from tomato plants at commercial fields located in the cities of Bragança Paulista and Mogi Guaçú, SP, Brazil. Caserta pumpkin, lettuce, purslane, eggplant, beet, broccoli, carrot, Jimson weed, sunflower, tobacco, scarlet eggplant, melon, cucumber, petunia, green pepper, radish, cabbage, arugula, parsley, and tomato plants were spray-inoculated separately with two isolates of P. cichorii obtained from tomato and one from sunflower (GIR-1). The isolates IBSBF 2309 and IBSBF 2323 were pathogenic to purslane, Jimson weed, sunflower, green pepper, and tomato; GIR-1 was only pathogenic to purslane, Jimson weed, and sunflower, but not pathogenic to green pepper or tomato. In Brazil, no sources of resistance to this bacterium are known within the Lycopersicon genus. The reaction of tomato cultivars to the bacterium is also unknown. Twenty-eight tomato genotypes from the Sakata Seed Sudamerica Ltda. Germplasm Bank were evaluated for their reaction to P. cichorii isolates IBSBF 2309 and IBSBF 2323, using the leaf inoculation method. The highest resistance levels were observed in tomato genotypes AF 11768, AF 2521, AF 11766, AF 11772, AF 229, AF 5719-1, and AF 8162. The genotype AF 5719-1, wich has the Pto gene imparting resistance to P. syringae pv. tomato, showed a good level of resistance to P. cichorii. The identification of genotypes with good levels of resistance to this pathogen is important, since they represent potential resources to be used in tomato breeding programs for incorporation of resistance genes against P. cichorii. UNESP FCA Sakata Seed Sudamerica Ltda Instituto Biologico UNESP FCA

Orientador: Tomomasa Yano Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A bacteriose do maracujazeiro (Pass/flora spp.), causada por Xanthomonas campestrls pv. pass/florae (XCP), é um das principais moléstias desta cultura, sendo fator limitante para sua exploração comercial. Cinquenta e quatro linhagens de X. c. pv. passtnorae foram analisadas pelas técnicas de serologla, por meio de testes de dupla difusão em ágar e de eletroforese em gel de poliacrilamida com sódio dodecil sulfato (PAGE/SDS) de protefnas totais. Foram produzidos amissoros para duas linhagens de X. c. pv. passllJorae originárias de PassllJora a/ata (AS - XCP-444-P.a/ata e AS-XCP-1171-P.a/ata) e um antlssoro para X. c. pv. passlflorae isolada de P.edulls (AS-XCP-748-P.edulls). Antfgenos nas formas de suspensão bacteriana (SB), suspensão bacteriana autoclavada (SBA), exopolissacarfdeos (EPS), complexo proteico das membranas (CPM) e glicoprotefnas (GP) foram testados por dupla difusão em ágar com os três antissoros. As cinqüenta e quatro linhagens foram submetidas â PAGE/SDS da fração SB. Para dez das linhagens testadas, as frações SBA, EPS, CPM e GP também foram submetidas â PAGE/SDS. Os resultados mostraram que os antrgenos na forma de SB e CPM são os mais indicados para experimentos visando a diagnose de X. c. pv. pass/florae em material suspeito de infecção. Os antfgenos na forma de SBA, EPS e GP não devem ser utilizados para diagnose de X. c. pv. passfflorae mas, se purificados, podem ser utilizados em estudos visando a separação de X. c. pv. paa.lnorae em serogrupos. Os perfis de proternas totais das frações S8 apresentaram grande similaridade e também para a PAGEISDS, S8 e CPM foram as frações que revelaram os melhores resultados. Os perfis protéicos obtidos para X. c.pv. passfflorae foram comparados com perfis de Xanthomonaa axonopodls pv. manglferalndlcae, X. a. pv. phaseoll, X. campestrls pv. campestrls e X. ves/catorla. Não foi possrvel detectar-se bandas que pudessem ser consideradas como marcadoras para o pv. pass/florae. As linhagens originarias de P. alata não são diferenciadas daquelas Isoladas de P. edulla por nenhuma das técnicas utillizadas. Além disso, todas as linhagens testadas apresentam grande similaridade, independente do hospedeiro e localização geografica de origem Abstract: The paisson-fruit (Passtnora spp.) bacteriosis caused by Xanthomonas campestrls pv. passlf1orae is the main disease of this culture, belng a IImlt factor for its commercial exploitation. Fifty-four X. c. pv. passlf1orae strains were analysed by serology through agar double diffusion tests (a.d.d) and by soluble proteins electrophoresis in polyacrylamide gel with sodium dodecyl sulphate (PAGElSDS). Antisera were produced from two Xanthomonas campestrls pv. passlf1orae strains of P. a/ata (AS-XCP-444 P. a/ata and AS-XCP-1171- P. a/ata) and one antiserum trom a Xanthomonas campestrls pv. passlf1orae straln Isolated from P. edulls (AS-XCP-748-P. edulls). Antigens in the forms of bacterial suspenslon (BS), autoclaved bacterial suspension (ABS), extracellular polysaccharides (EPS), membrane protein complex (MPC) and glycoprotein (GP) were tested by agar double diffusion with the three antisera. The as fraction of the fifty-four strains were submitted to PAGE/SDS. Ten strains were also submitted to the ABS, EPS, MPC and GP to PAGE/SDS. The results showed that the BS and MPC antigens were the most indicated for the experiments almond de X. c. pv. passlflorae dlagnosls, In the material under suspection of infection. The ABS, EPS and GP cannot be employed for X. c. pv. passtnorae diagnosis. However if purified, they can be used in studies aiming X. c. pv. passlf1orae strain separation in serogroups. The profiles of soluble proteins showed similarity as for PAGE/SDS, the 5S and MPC fractions generated the best results. The profiles of soluble proteins from X. c. pv. passlflorae were compared with Xanthomonas axonopodls pv. mangNeralndlcae, X. a. pv. phaseolJ, X. campestrls pv. campestrls e X. ves/catorla. However It was not posslble to detect bands that could be used as a pattern to X. c. pv. paaamorae. The strains of P. alata and P. edu/Ia could not be differed from each other by the above mentioned techniques. Furthermore, all the strains that were tested showed similarity, not depending upon host or geographical origin Doutorado Microbiologia Doutor em Ciências Biológicas

O Plano Safra da Agricultura Familiar Mais Alimentos almejou reforçar a atividade de milhões de propriedades de agricultores familiares, responsáveis por mais de dois terços dos alimentos presentes na mesa dos brasileiros, e se embasou em três pilares: crédito, comercialização e conhecimento. O artigo aborda este último pilar, por meio da experiência do Programa no Estado de São Paulo entre Ministério do Desenvolvimento Agrário, Agência Paulista de Tecnologia dos Agronegócios, Coordenadoria de Assistência Técnica Integral, Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária, Federação dos Trabalhadores da Agricultura Familiar (FAF) e Federação dos Trabalhadores na Agricultura do Estado de São Paulo (Fetaesp). Estrutura de gestão, integração entre diversas instituições, construção coletiva do processo, formação de agentes locais de apoio a projetos de Assistência Técnica e Extensão Rural (ATER) e pesquisa e inserção do jovem agricultor serviram de base para a metodologia utilizada. Foram realizadas inúmeras atividades em dois territórios no estado, envolvendo os produtos abacaxi, goiaba, leite, limão, mandioca, pêssego e tomate, além de oficinas de formação de agentes locais de pesquisa e de ATER. A avaliação dos resultados do projeto no estado foi bastante satisfatória.

A couve-flor está entre as folhosas mais produzidas na região do Cinturão Verde de São Paulo. A planta apresenta alto valor nutricional para os consumidores e relevante importância econômica e social para os agricultores. Em campos comerciais, têm sido observadas plantas exibindo sintomas de enfezamento e deformação da inflorescência, além da necrose dos vasos condutores. A doença foi denominada de enfezamento e a sua incidência e severidade têm se tornado mais intensas nos últimos anos, afetando a produção e levando ao abandono do cultivo. O quadro sintomatológico levantou a suspeita de que a doença pudesse estar sendo causada por fitoplasmas. Desta forma, este trabalho teve como objetivos detectar e identificar os fitoplasmas associados às plantas doentes de couve-flor, demonstrar a sua patogenicidade, buscar possíveis insetos vetores do agente patogênico e analisar a distribuição espacial da doença no campo. Amostras de plantas coletadas na região do Cinturão Verde ou enviadas de outras localidades tiveram o DNA total extraído e submetido a reações de PCR. A amplificação de fragmentos genômicos de 1,2 kb evidenciaram a presença de fitoplasmas nos tecidos de 66% das plantas sintomáticas. A detecção de fitoplasmas em plantas assintomáticas revelou a ocorrência de infecção latente e que plantas sem sintomas aparentes podem ser portadoras do patógeno. O emprego de PCR com primers específicos, análises convencionais e virtuais de RFLP e análise filogenética permitiram a identificação de fitoplasmas afiliados aos grupos 16SrIII-J, 16SrXIII e 16SrXV-A, com predominância para a ocorrência do grupo 16SrIII. Secções histológicas feitas à mão da região vascular de plantas de couve-flor doentes observadas em microscópio de luz revelaram que a região do floema apresentava-se escurecido e com início de degeneração celular. Fitoplasmas do grupo 16SrXIII foram encontrados em cigarrinhas da espécie Balclutha hebe coletadas em campo cultivado com couve-flor. Estes insetos foram utilizados em experimentos de transmissão e foram capazes de inocular fitoplasmas em plantas sadias de couve-flor e vinca. A transmissão também ocorreu a partir de plantas doentes de couve-flor para plantas sadias de vinca, através do emprego da planta parasita cuscuta. Análise epidemiológica da doença foi feita em dez campos de cultivo de couve-flor, localizados no município de Sorocaba-SP. Análises do índice de dispersão, lei de Taylor modificada e áreas isopatas evidenciaram que plantas de couveflor com sintomas de enfezamento encontraram-se agregadas no campo, e que os focos da doença tinham início nos bordos da cultura. O presente trabalho demonstrou que o enfezamento da couve-flor está associado aos fitoplasmas, os quais podem estar sendo transmitidos por cigarrinhas, sendo que, em termos epidemiológicos, a doença tem padrão agregado de distribuição no campo. Cauliflower is among the most produced vegetable in the region of the Green Belt of Sao Paulo State. It has high nutritional value and relevant social and economic importance for farmers. In commercial fields, it has been observed plants exhibiting symptoms of stunting, deformation of the inflorescence and conductive vessel necrosis. The disease was named cauliflower stunt and its incidence and severity have become more intense in the past years, the production is being affected and the field is abandoned by the growers. The symptomatology raised the suspect that the disease could be caused by phytoplasmas. Thus, this study aimed to detect and identify phytoplasmas associated to diseased cauliflowers, demonstrate its pathogenicity, look for possible insect vectors of the pathogen and analyse the spatial distributions of disease in the field. Plant samples collected in the region of the green belt or sent from other locations had the total DNA extracted and subjected to PCR reactions. Amplification of genomic fragments of 1.2 kb revealed the presence of phytoplasmas in 66% of the symptomatic plants. The detection of phytoplasmas in asymptomatic plants revealed the occurrence of latent infection and that plants without visible symptoms may be infected. The use of specific primers, conventional and virtual RFLP analysis and phylogenetic analysis allowed the identification of phytoplasmas affiliated to 16SrIII-J, 16SrXIII and 16SrXV-A groups, and predominantly the occurrence of 16SrIII group. Histological sections made by hand of the vascular region of symptomatic cauliflower were observed under light microscope and revealed that the phloem was darkened and with beginning of cellular degeneration. The 16SrXIII phytoplasma was found in Balclutha hebe from cauliflower field. These insects were used in experiments and were able to transmit phytoplasmas to healthy cauliflower and periwinkle. The transmission also occurred from diseased cauliflower to healthy periwinkle through the parasitic plant dodder. Epidemiological analysis of the disease was made in ten plots of cauliflower, located in Sorocaba, SP. Dispersion index, modified Taylors law and isopath areas analysis showed that cauliflower plants with symptoms of stunting were aggregated in field and initial foci were at the edge of the plot. This study demonstrated that cauliflower stunt is associated with phytoplasmas, that may be being transmitted by insects (Homoptera) and, in epidemiological terms, the diseased plants show aggregated pattern of distribution in the field.

A ocorrência de Pseudomonas viridiflava é descrita em sementes de couve chinesa (Brassica rapa var. pekinensis) importadas do Japão. Do ponto de vista epidemiológico, a detecção dessa bactéria é de extrema importância. Embora já existam, em nosso país, relatos desse patógeno nas culturas de alface, alho, cebola, cenoura, feijão e mandioca, sua presença em sementes de couve chinesa pode se constituir num risco potencial para outras espécies de brássicas aqui cultivadas. Made available in DSpace on 2011-04-09T16:27:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 scieloHallenpdf15.pdf: 125328 bytes, checksum: 7682fcfa39597eaa9c6d1fb9deaabe1f (MD5) Previous issue date: 2010-10-14 Disponivel em:< http://www.scielo.br/pdf/sp/v36n1/15.pdf.>. Acesso em:26 out. 2010.

Fitoplasmas são procariotos sem parede celular, pertencentes à classe dos Mollicutes, que habitam os vasos de floema e causam doenças de relevância econômica em uma ampla gama de espécies vegetais. A videira (Vitis sp) é a terceira fruteira mais cultivada no mundo e apresenta elevada importância econômica no Brasil. Aspectos fitossanitários se constituem em fatores limitantes da produção, com destaque para as doenças causadas por fitoplasmas, denominadas de amarelos. Essas doenças estão amplamente disseminadas nos continentes europeu e americano, ocorrendo em tradicionais países produtores. Plantas exibindo sintomas característicos da doença têm sido também observadas em cultivos comerciais localizados em algumas áreas do território brasileiro. Visando investigar este tipo de doença, plantas sintomáticas foram amostradas em parreirais comerciais dos Estados de São Paulo e Paraná e mantidas em casa de vegetação. O presente estudo visou demonstrar a associação entre fitoplasmas e os amarelos, identificar e analisar filogeneticamente os fitoplasmas detectados, demonstrar sua transmissão para plantas sadias e determinar o melhor estádio fenológico da planta para amostragem de tecidos, para confirmação da diagnose. Para isto, durante 45 meses, amostras foram coletadas de plantas doentes envasadas sendo usado o método de PCR, análise de RFLP, sequenciamento das bases nucleotídicas e enxertia de tecidos entre plantas de videira. Os produtos amplificados em PCR evidenciaram a presença de fitoplasmas em todas as plantas portadoras de amarelos. Estes fitoplasmas foram identificados como representantes dos grupos 16SrI-B e 16SrIII, os quais ocorreram em infecções simples ou mistas. Os fitoplasmas apareceram em todas as fases de desenvolvimento da planta, porém com maior freqüência nas amostras coletadas no estádio fenológico correspondente à brotação de ramos e aparecimento de folhas novas. Esta fase se mostrou a mais indicada para as amostragens, visando à detecção de fitoplasmas para fins de diagnose. A transmissão dos fitoplasmas por enxertia foi alta, demonstrando que estes são os agentes causais da doença e que inspeções devem ser adotadas como medida de controle para evitar sua disseminação via material de propagação vegetativa. Phytoplasmas are wall-less prokaryotes, phloem-limited plant pathogens, belonging to Mollicute class. They are agents of diseases that cause serious damage to a diversity of cultivated especies. Grapevine (Vitis sp) is the third most cultivated fruit crop in the world and it has high economical impact in Brazil. Phytossanitary aspects are important production constraint factors, especially regarding diseases caused by phytoplasmas, which are generally known as grapevine yellows. These diseases are widely spread throughout main producer countries, located in Europe and North America. Plants exhibiting typical symptoms of the disease have also been observed in crops located in some areas of Brazilian territory. In order to investigate this kind of malady, symptomatic plants were sampled from commercial vineyards located in the States of São Paulo and Paraná, Brazil and kept in greenhouse conditions. The present study aimed to: demonstrate the association between phytoplasmas and yellows; identify and analyse phylogenetically the detected phytoplasmas; demonstrate their transmission to healthy plants and determinate optimal phenologycal stage for phytoplasma detection to diagnosis confirmation. Samples were collected from diseased plotted plants grown during 45 months. PCR method, RFLP analyses, sequencing of nucleotide bases from 16S rRNA, and grafting technique were used in this study. Amplified genomic fragments revealed the presence of phytoplasmas in all plants with symptoms of yellows. Those phytoplasmas were identified as representatives of the groups 16SrI-B and 16SrIII, occurring in simple and mixed infections. Phytoplasmas were detected in all phenological stages evaluated, but they occurred with high frequences in material collected during budburst. These stage may be considered as the most indicated for sampling to confirm diagnosis based on symptomatology. Phytoplasmas transmission by grafting of healthy scion grafts onto infected rootstocks was high, demonstrating that they are the disease agents and inspection is a control practice that must be adopted to prevent their dissemination through propagative material.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-06-20Bitstream added on 2014-06-13T18:35:02Z : No. of bitstreams: 1 silvajunior_taf_me_botfca.pdf: 480549 bytes, checksum: f7d5fb8db585125d630421fa598b3be8 (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Recentemente, em dois campos comerciais de tomateiro dos tipos Salada e Italiano, localizados respectivamente em Bragança Paulista e Mogi Guaçú, SP, foram observados sintomas de queima generalizada nas folhas. Em observações ao microscópio óptico de tecidos infectados foi constatada a presença de exsudação bacteriana. Isolamentos realizados em meio de cultura permitiram obter bactérias com formato bastonete, Gramnegativas, com colônias de coloração branca e produtoras de pigmento fluorescente em meio B de King. Isolados bacterianos foram submetidos a testes bioquímicos e fisiológicos, entre eles, LOPAT, sendo enquadrados no grupo III de LOPAT (- + - - +) e, portanto, identificados como sendo Pseudomonas cichorii. Esses resultados foram corroborados por testes serológicos de imunofluorescência indireta, com antissoros produzidos para isolado tipo de P. cichorii. Esta bactéria causa doença em várias culturas de importância econômica e ainda não havia sido constatada em nosso país, na cultura do tomateiro. Isolados bacterianos encontramse depositados na Coleção de Culturas de Fitobactérias do Instituto Biológico, sob os números de acesso IBSBF 2309 e IBSBF 2323. Foram desenvolvidos também estudos visando a determinação da gama de hospedeiras e a reação de 28 genótipos de tomateiro aos isolados de P. cichorii. Plantas de abobrinha, alface, beldroega, berinjela, beterraba, cenoura, couvebrócolo, datura, fumo, girassol, jiló, melão, pepino, petúnia, pimentão, rabanete, repolho, rúcula, salsa e tomateiro, no estágio de um par de folhas verdadeiras, foram inoculadas por pulverização com os isolados IBSBF 2309 e IBSBF 2323 e um isolado de P. cichorii de girassol (GIR-1). Os isolados IBSBF 2309 e IBSBF 2323 mostraram-se patogênicos à beldroega, à datura, ao girassol, ao pimentão e ao tomateiro, enquanto que o isolado de girassol foi... Recently, generalized blight symptoms were observed in tomato leaves of the Salada and Italiano types, in two commercial fields located, respectively, in Bragança Paulista and Mogi Guaçú, SP, Brazil. The presence of bacterial exudation was verified in observations of infected tissues under the optical microscope. Rod-shaped, Gram-negative bacteria were obtained from isolations in culture medium; the colonies were white and produced fluorescent pigment in King's B medium. Bacterial isolates were submitted to biochemical and physiological tests, including LOPAT, and were classified into LOPAT group III (- + - - +); consequently, they were identified as Pseudomonas cichorii. These results were corroborated by indirect immunofluorescence tests, using antisera produced for the type isolate of P. cichorii. This bacterium causes diseases in several crops of economic importance and had not yet been observed in tomato in Brasil. Bacterial isolates were deposited in Phytobacteria Culture Collection of Instituto Biológico, under accession numbers IBSBF 2309 and IBSBF 2323. Studies were also carried out in order to determine the host range and reaction of 28 tomato genotypes to P. cichorii isolates. Caserta pumpkin, lettuce, purslane, eggplant, beet, broccoli, carrot, Jimson weed, sunflower, tobacco, scarlet eggplant, melon, cucumber, petunia, green pepper, radish, cabbage, arugula, parsley, and tomato plants, all with one pair of true leaves, were spray-inoculated with isolates IBSBF 2309 and IBSBF 2323 and one P. cichorii isolate from sunflower (GIR-1). Isolates IBSBF 2309 and IBSBF 2323 were pathogenic to purslane, Jimson weed, sunflower, green pepper, and tomatoe, while the sunflower isolate was only pathogenic to purslane, Jimson weed, and sunflower, but not to green pepper or... (Complete abstract click electronic access below)

O tomateiro é a segunda hortaliça em importância econômica no mundo, sendo uma das culturas mais exigentes em cuidados fitossanitários, devido ao grande número de doenças que a acometem e pela elevada capacidade destrutiva e difícil controle dos patógenos. A mancha-bacteriana, causada por espécies do gênero Xanthomonas (X. euvesicatoria, X. gardneri, X. vesicatoria e X. perforans), é uma das mais importantes doenças do tomateiro estaqueado ou rasteiro, que afeta a planta em qualquer estádio de desenvolvimento, podendo ocorrer em toda parte aérea, provocando redução em quantidade e qualidade da produção. Para diminuir a disseminação do patógeno e determinar medidas de controle nas áreas de cultivo, é importante que haja a detecção eficiente do patógeno em plantas e sementes. Assim, existe a necessidade de análises que possibilitem detectar bactérias em sementes, especialmente quando o nível de infecção ou incidência é muito baixo. O objetivo deste trabalho foi desenvolver métodos de detecção e diferenciação de Xanthomonas spp. em sementes de tomate. Desenvolveu-se um meio semi-seletivo, constituído por dextrose (5,0 g/L), NaCl (5,0 g/L), KH2PO4 (1,4 g/L), K2HPO4 (3,6 g/L), extrato de carne (1,0 g/L), peptona (5,0 g/L), extrato de levedura (2,0 g/L), cefaclor (40,0 mg/L), nistatina (50,0 mg/L), benomil (10,0 mg/L) e ágar (14,0 g/L), que mostrou baixa repressividade a Xanthomonas spp. e supressividade moderada aos microrganismos não-alvos associados a sementes de tomate e elevada sensibilidade, além de baixo custo. Por PCR-RFLP de um fragmento do gene rpoB, foi possível diferenciar as diferentes espécies causadoras da mancha-bacteriana em tomateiro. The tomato is the second economical important horticultural crop in the world, being one of the most exigent cultures in phytosanitary cares, due to the large number of diseases that attack the culture and for the high destructive capacity and difficult control of the pathogens. The bacterial-spot, caused by species of the genus Xanthomonas (X. euvesicatoria, X. gardneri, X. vesicatoria and X. perforans), is one of the most important tomato diseases, affecting plant in any development stage, being able to occur in all aerial part, provoking reduction in quantity and quality of the production. To reduce the pathogen dissemination and to determine control measures in the cultivation areas, it is important that the pathogen detection in plants and seeds has been efficient. So, it is necessary to carry out analysis to detect bacteria in seeds, especially when the infection level or incidence is very low. The objective of this work was to develop detection and differentiation methods of Xanthomonas spp. in tomato seeds. A semi-selective medium was developed, constituted by dextrose (5,0 g/L), NaCl (5,0 g/L), KH2PO4 (1,4 g/L), K2HPO4 (3,6 g/L), meat extract (1,0 g/L), peptone (5,0 g/L), yeast extract (2,0 g/L), cefaclor (40,0 mg/L), nistatine (50,0 mg/L), benomyl (10,0 mg/L) and agar (14,0 g/L), wich showed low repressivity to the Xanthomonas spp. and moderate supressivity to the non-target microorganisms associated to tomato seeds and high sensibility, besides low cost. By PCR-RFLP of a rpoB gene fragment, it was possible to differentiate the species of the tomato bacterial-spot.

Orientador: Marcos Hikari Toyama Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O uso de toxinas isoladas de venenos como ferramentas moleculares na compreensão de diversos eventos fisiológicos e patológicos tem sido comprovadas por vários trabalhos na literatura. A serpente Crotalus durissus cascavella é encontrada nas áreas de caatinga do nordeste do Brasil, desde o Maranhão até norte do estado de Minas Gerais, e apesar de pouco estudada sua picada constitui um importante problema da saúde pública (Martins et al, 1998). A agregação platequetária é bem caracterizada para a convulxina isolada do veneno de Crotalus durissus cascavella e Crotalus durissus terrificus. O objetivo principal do projeto foi avaliar a atividade de agregação plaquetária induzida por outras frações biológicas e farmacologicamente importantes do veneno total de Cotalus durissus cascavella, que neste projeto foram a crotoxina e giroxina. Através de uma combinação de varias metodologias em HPLC como exclusão molecular, troca iônica e de fase reversa conseguimos isolar os principais constituintes da crotoxina (PLA2, crotapotina e as proteínas ¿trombina-like¿) e a L-aminoácido oxidase a partir da giroxina. Durante o fracionamento do veneno total em coluna de HPLC de exclusão molecular foram detectados dois picos de atividade serino protease, um na fração giroxínica e outro na fração crotoxínica, sendo que na fração crotoxínica encontrou-se uma nova protease até então não caracterizada e na fração giroxínica foram monitoradas a atividade L-aminácido oxidase. Através da cromatografia em HPLC de troca iônica em DEAE 5PW obteve-se a fração Laminoácido oxidase cujo grau de homogeneidade molecular foi confirmado por HPLC de fase reversa. Da fração crotoxínica foram obtidos três grupos principais de proteínas (PLA2, crotapotinas e proteases) e da fração proteolítica foram isoladas três isoformas principais denominadas de F201, F202 e F203, sendo a fração F202, a fração majoritária. F202 foi obtida com maior homegeneidade molecular com massa molecular de 28kDa e mostrou uma alta quantidade de ácido aspártico, ácido glutâmico e outros aminoácidos importantes como histidina, cisteína e lisina. Esta proteína mostrou alta especificidade para BApNA e mostrou um comportamento Michaelis-Menten com Vmáx estimado em 5,64 µM/min e um Km de 0,58mM para este substrato. Neste trabalho foi investigada a habilidade desta proteína em degradar fibrinogênio e observou-se que F202 clivou ambas as cadeias a e ß. A atividade enzimática assim como a agregação plaquetária foi inibida fortemente com a incubação com TLCK, um inibidor específico para serinoproteases. O N-terminal da seqüência de aminoácidos de F202 mostrou alta homologia com outras proteínas ¿trombina-like¿, mas foi significantemente diferente da ¿trombina-like¿ isolada da fração giroxina. Crotalus durissus cascavella apresenta uma fração menos estudada denominada giroxina que tem sido descrita como uma proteína ¿trombina-like¿ como relatado por Raw et al. (1986) e Alexander et al. (1988). Neste trabalho foi demonstrado que a giroxina é uma fração heterogênea composta de uma ¿trombina-like¿ e proteína LAO, a qual parece estar envolvida em várias atividades Abstract: The use of the isolated toxins from poisons as molecular tools in the understanding of diverse physiological and pathological events has been proved by some works in literature. The serpent Crotalus durissus cascavella is found in the areas of Caatinga Northeast of Brazil, since Maranhão until North of the state of Minas Gerais, and in spite of it hasn¿t been studied a lot, its bite constitutes an important problem to the public health (Martins et al, 1998). The platelet aggregation is well characterized to the isolated convulxin of the poison of Crotalus durissus cascavella and Crotalus durissus terrificus. The main objective of the project was to evaluate the activity of platelet aggregation induced by gyroxin and crotoxin that are biological and pharmacological important fractions of the total poison of Cotalus durissus cascavella. Through a combination of various methodologies in HPLC -as molecular exclusion, ionic exchange and the reverse phase- we managed to isolate the main constituent of the crotoxin (PLA2, crotapotin and the thrombin-like proteins) and the L-amino acid oxidase from the gyroxin. During the fragmentation of the total poison in column of HPLC of molecular exclusion two peaks of serine protease were found: one in the gyroxin fraction and another one in the crotoxin fraction. In the crotoxin fraction a new protease in not characterized yet and in the gyroxin fraction was found the L-amino acid activity oxidase. Through the chromatography in HPLC of ionic exchange in DEAE 5PW that allowed to the attainment of the fraction L-amino acid oxidase whose degree of molecular homogeneity was confirmed by HPLC of reverse phase. From the crotoxin fraction three main groups of proteins (PLA2, crotapotin and proteases) were isolated, and from the named proteolyitic fraction three isoforms of F201, F202 and F203, noticing that the F202 fraction is the major one. The fraction F202 showed a high quantity of aspartic acid, glutamic acid and others amino acids very important as histidine, cysteine and lysine and so more molecular homogeneity could be obtained and with molecular mass of 28kDa. This protein whose behavior Michaelis-Menten with Vmáx measured in 5,64 µM/min and one Km de 0,58 mM to this substratum showed high specificity to BapNA. In this work was investigated the ability of this protein in degrading the fibrinogen and was observed that the F202 made the cleavage into both chains a and ß. The enzymatic activity as well as the platelet aggregation were strongly inhibited with the incubation with TLCK, a specific inhibitor to serine protease. The N-terminal of the amino acid sequence of F202 showed the high homology with other proteins thrombin-like, but it was significantly different from thrombin-like isolated fro m the gyroxin fraction. Crotalus durissus cascavella presents a fraction less studied named gyroxin that has been described as a protein thrombin-like as related by Raw et al. (1986) and Alexander et al. (1988). In this work was demonstrated that the gyroxin is a composed heterogeneous fraction of one thrombin-like and protein LAO, and this seems to be involved in some activities Mestrado Bioquímica Mestre em Biologia Funcional e Molecular