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Introduzione. Le faringiti da Neisseria gonorrhoeae sono in aumento tra gli omosessuali maschi (MSM). Queste infezioni decorrono generalmente in maniera asintomatica e possono fungere da serbatoio per la diffusione di casi di gonorrea, dal momento che spesso sono asintomatiche e possono persistere nel tempo. Inoltre, per capire l’importanza di tali quadri, è importante sottolineare come a livello faringeo ci siano varie neisserie commensali, che possono trasferire geni di resistenza alle cefalosporine a N. gonorrhoeae. Lo scopo di questo studio è stato quello di valutare i profili della comunità batterica del microbioma faringeo in corso di infezione da gonorrea, in soggetti MSM. Materiali e metodi. Sono stati analizzati 70 tamponi faringei provenienti da pazienti afferenti all’ambulatorio MTS del Policlinico S. Orsola Malpighi di Bologna. Sulla base delle indagini molecolari ottenute mediante una Real-Time PCR (VERSANT® CT/GC 1.0 Assay, Siemens), attualmente utilizzata nella routine diagnostica della U.O. di Microbiologia, i pazienti sono stati divisi in due gruppi: soggetti non infetti (n=45) and pazienti con gonorrea faringea (n=25). Partendo dal DNA genomico estratto, sono state amplificate e sequenziate le regioni V3-V4 del gene 16S, per analizzare la composizione del microbioma faringeo (MiSeq Illumina). Per valutare la distribuzione e la bio-diversità dei microrganismi sono state eseguite valutazioni di α- e β-diversità. Le differenze di abbondanza tassonomica tra i gruppi in studio sono state analizzate mediante il Mann-Whitney t-test. Un p-values < 0.05 è stato considerato significativo. Lo studio ha ricevuto parere favorevole da parte del comitato etico del Policlinico (78/2017/U/Tess). Risultati. L’analisi di α-diversità non ha evidenziato differenze significative nei soggetti infetti. Seppure il microbioma faringeo di tutti i soggetti fosse dominato dalle famiglie Prevotellaceae, Veillonellaceae e Streptococcaceae, è stato possibile mettere in evidenza una differenza significativa nell’abbondanza relativa di batteri anaerobi, più elevata in soggetti con gonorrea. Il loro microbioma, infatti, era più ricco in batteri dei generi Treponema, Parvimonas, Peptococcus e della famiglia Prevotellaceae, con una contemporanea riduzione di generi aerobi come Pseudomonas and Escherichia. Conclusioni. Il nostro studio è il primo a far luce sulla composizione del microbioma faringeo in corso di gonorrea. I dati ottenuti, sebbene preliminari, possono contribuire a comprendere la patogenesi delle infezioni faringee da gonorrea e a sviluppare strategie innovative per limitare la loro diffusione.

Introduzione. Le infezioni faringee da Neisseria gonorrhoeae sono alquanto frequenti tra i soggetti omosessuali (MSM). Questo dato è di particolare rilevanza, dal momento che l’oro-faringe rappresenta un sito cruciale per l’emergenza di resistenze multiple in N. gonorrhoeae. Infatti, è stato riportato che la struttura a mosaico penA, osservata in alcuni isolati di gonococco e associata a una ridotta suscettibilità e resistenza alle cefalosporine a spettro esteso, è dovuta alla ricombinazione con geni penA, ritrovabili in ceppi di N. meningitidis o specie di Neisseria commensali dell’oro-faringe. Nel nostro lavoro abbiamo voluto investigare la prevalenza della struttura mosaico del gene penA nell’oro-faringe di MSM, negativi per infezioni faringee da gonorrea. Materiali e metodi. Da Gennaio 2016 a Giugno 2018, sono stati arruolati 351 pazienti afferenti l’ambulatorio MTS del policlinico S. Orsola-Malpighi di Bologna, che riportavano rapporti orali non protetti e negativi per N. gonorrhoeae a livello faringeo. I tamponi faringei sono stati analizzati tramite una multiplex Real-Time PCR (Versant CT / GC DNA 1.0 Assay, Siemens), che rileva, simultaneamente, la presenza del genoma di N. gonorrhoeae e C. trachomatis. A partire dal DNA estratto dei campioni negativi, è stata seguita una Real-Time PCR per la rilevazione del mosaico penA. Per confermare la presenza della struttura mosaico, gli amplificati sono stati sequenziati e gli elettroferogrammi ottenuti sono stati analizzati tramite BLAST (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi). Per valutare le differenze statisticamente significative è stato utilizzato il t-test per confrontare i dati quantitativi, mentre i dati categorici sono stati analizzati con il test Chi-quadro. Un valore di P

INTRODUZIONE-SCOPO: La sifilide è un’infezione sistemica cronica causata da Treponema pallidum subsp. pallidum. Rappresenta una delle principali infezioni batteriche a trasmissione sessuale (IST) e costituisce tuttora un rilevante problema di salute pubblica a livello mondiale. Un’accurata conoscenza dello scenario epidemiologico di tale infezione permette di comprendere meglio le dinamiche di trasmissione e di mettere in atto strategie per il controllo della sua diffusione. L’obiettivo di tale lavoro è stato quello di indagare la prevalenza di sifilide e le caratteristiche associate a tale infezione in un gruppo di soggetti afferenti ad un ambulatorio dedicato alla gestione delle IST. MATERIALI E METODI: Sono stati raccolti in maniera retrospettiva i dati riguardanti i pazienti che da gennaio 2016 a dicembre 2017 si sono recati presso l’ambulatorio IST della U.O. di Dermatologia del Policlinico Sant’Orsola di Bologna e che si sono sottoposti a indagini sierologiche per sifilide. L’iter seguito nella U.O. Microbiologia si basa sull’algoritmo inverso, che prevede l’esecuzione di un test di screening treponemico (CMIA, Architect), seguito, in caso di positività, da un secondo test treponemico di conferma (TPHA, Randox), da un test non-treponemico (RPR, Randox) e, in casi selezionati, da un eventuale WB (Mikrogen), per un migliore inquadramento diagnostico. Per tutti i pazienti con sierologia positiva sono stati raccolti dati riguardanti l’età, il sesso, la nazionalità e la presenza di altre IST. RISULTATI: Nel periodo di studio hanno effettuato screening sierologico per sifilide 5609 pazienti (65.8% maschi). Di questi, 692 (12.3%), di cui 613 maschi, sono risultati positivi ai test treponemici. L’età media dei pazienti positivi era di 41.8 anni, significativamente maggiore dei soggetti negativi (32.3 anni; P

Introduzione. Nel tratto genitale femminile coesistono diverse specie batteriche in un equilibrio dinamico, che può variare in risposta a molteplici fattori quali età, gravidanza, uso di farmaci, infezioni o patologie croniche. Le infezioni genitali e le disbiosi colpiscono ogni anno oltre un miliardo di donne, con un significativo impatto sulla qualità di vita e sulla salute riproduttiva. La vaginosi batterica (BV) è la disbiosi più comune, caratterizzata da una riduzione delle specie normalmente dominanti (Lactobacillus), che vengono sostituite da una comunità polimicrobica anaerobia. Tra le infezioni urogenitali più comuni si riscontrano la candidiasi vulvovaginale e le infezioni da Chlamydia trachomatis (CT), che rappresentano la più comune infezione batterica a trasmissione sessuale nel mondo. L’obiettivo di tale lavoro è stato quello di analizzare la composizione del microbiota vaginale in donne con diverse condizioni fisiologiche e patologiche del tratto genitale. Materiali e metodi. Sono state incluse nello studio 21 donne sane, 20 donne con BV, 18 con candidiasi vaginale e 21 con infezione da CT. Per lo studio del microbiota, è stato estratto il DNA genomico a partire da un tampone vaginale e successivamente sono state amplificate e sequenziate le regioni V3-V4 del gene 16S rRNA batterico (MiSeq Illumina). La classificazione tassonomica è stata condotta fino al livello di genere per tutti i microrganismi, ad eccezione dei lattobacilli, che sono stati identificati fino a livello di specie, per mezzo di un database specifico di riferimento. Per valutare la variabilità della composizione del microbiota inter- e intra-gruppo, sono state eseguite valutazioni di α- e β-diversità, rispettivamente. Risultati. Le donne sane erano caratterizzate da un basso indice di α-diversità, con un microbiota dominato da diverse specie di lattobacilli (Firmicutes). Al contrario, le donne con BV mostravano il più alto grado di diversità microbica, con un microbiota depleto di lattobacilli e ricco di molteplici specie batteriche differenti. Nelle donne con infezione da CT e candidiasi, la composizione del microbiota è apparsa simile, più vicina a quella delle donne sane rispetto, che a quelle con BV. Il microbiota vaginale di questi ultimi due gruppi, infatti, era sempre dominato da Firmicutes, ma la loro abbondanza relativa diminuiva progressivamente passando dalle donne sane a quelle con clamidia, candidiasi e BV. Conclusioni. I nostri risultati hanno confermato l’elevato grado di diversità tra il microbiota vaginale di donne sane e di donne con BV, e hanno dimostrato come la candidiasi e l’infezione da CT rappresentino una condizione intermedia fra questi due estremi.

Introduzione. Le infezioni da Chlamydia trachomatis (CT) e Neisseria gonorrhoeae (GC) rappresentano le più comuni infezioni batteriche a trasmissione sessuale (IST) nel mondo. Al di là delle localizzazioni genitali, tali microorganismi possono ritrovarsi in sede faringea, in caso di rapporti orali non protetti. Tali infezioni sono spesso asintomatiche e, se non vengono correttamente diagnosticate, rappresentano un significativo serbatoio per la trasmissione. Obiettivo di tale lavoro è stato quello di indagare l’epidemiologia delle infezioni faringee da CT e GC in un gruppo di soggetti afferenti ad un ambulatorio dedicato alla gestione delle IST. Materiali e metodi. Sono stati raccolti retrospettivamente i dati dei pazienti che da gennaio 2016 ad agosto 2018 si sono recati presso l’ambulatorio di Malattie a Trasmissione Sessuale (U.O. Dermatologia) del Policlinico Sant’Orsola-Malpighi di Bologna e che hanno eseguito un tampone faringeo per la ricerca degli acidi nucleici di CT e GC. Tutti i soggetti sottoposti a tale indagine riportavano rapporti orali non protetti. I campioni sono stati testati con una real-time PCR (VERSANT® CT/GC 1.0 Assay, Siemens) attualmente utilizzata nella routine diagnostica della U.O. di Microbiologia del Policlinico. Per ogni paziente sono stati raccolti i dati riguardanti l’età e il sesso. Risultati. Nel periodo di studio sono stati testati complessivamente 842 tamponi faringei, di cui l’85.6% provenienti da uomini. Globalmente, 145 campioni (17.2%) sono risultati positivi per CT e/o GC: in particolare il 2.5% è risultato positivo solo per CT, il 13.3% solo per GC e l’1.4% presentava una positività per entrambi i patogeni contemporaneamente. L’età media dei pazienti positivi è risultata significativamente inferiore rispetto ai negativi (32.9 ± 9.7 vs 34.7 ± 10.1 anni; P=0.04). Inoltre, non è stata rilevata nessuna differenza significativa nella distribuzione delle infezioni da CT e GC in base al sesso (P > 0.05). Infine, analizzando i dati di positività, si è evidenziata una prevalenza similare e senza differenze significative negli anni di studio (21% nel 2016, 12.6 nel 2017, 17.8% nel 2018, P = 0.07). Viceversa, si è registrato un notevole aumento dei campioni inviati per il test molecolare nell’ultimo anno (180 nel 2016, 213 nel 2017 e ben 449 negli 8 mesi del 2018). Conclusioni. Le infezioni faringee da CT e GC rappresentano una condizione molto frequente e spesso sottostimata. I nostri dati suggeriscono un’implementazione delle indagini molecolari per tali infezioni nella routine diagnostica.

I lattobacilli rappresentano un vasto genere di microrganismi che colonizzano diverse sedi dell’organismo umano, dove svolgono un ruolo chiave nel mantenimento dell’omeostasi microbica. Sebbene il loro ruolo come microrganismi ‘health-promoting’ sia ben riconosciuto, la loro identificazione a livello di specie pone ancora numerose difficoltà e si basa sulla combinazione di approcci fenotipici e genotipici. Scopo del presente studio è stato quello di comparare diverse metodiche per l’identificazione specie-specifica di 40 ceppi di lattobacilli isolati da campioni clinici (tamponi vaginali/orali, feci) o presenti in formulazioni di probiotici. In particolare, il classico approccio basato sul sequenziamento del gene 16s rRNA è stato confrontato con un’analisi proteomica ribosomale mediante spettrometria di massa MALDI-TOF e con lo studio dei metaboliti batterici tramite spettroscopia di risonanza magnetica nucleare (1H-RMN). Il sequenziamento del gene 16s rRNA ha portato alle seguenti identificazioni: 7 L. crispatus, 7 L. gasseri, 5 L. acidophilus, 5 L. delbrueckii, 2 L. vaginalis, 2 L. reuteri, 6 L. plantarum, 1 L. pentosus, 2 L. rhamnosus, 2 L. casei/paracasei e 1 L. brevis. Il relativo albero filogenetico è stato costruito mediante software MEGA. L’analisi spettrometrica è stata condotta dopo estrazione proteica con acido formico/acetonitrile a partire da un pellet batterico di 6x109 cfu. I campioni sono stati analizzati con lo strumento Bruker MicroFlex MALDI-TOF MS e l’identificazione di specie è stata ottenuta confrontando lo spettro proteico con un database dedicato. Inoltre, a partire dallo spettro medio di ogni ceppo batterico, è stato costruito un dendrogramma, tramite il software Biotyper 3.1. L’analisi metabolica in 1H-RMN è stata eseguita con lo spettrometro AVANCE III (Bruker) sia sull’intero set di metaboliti intracellulari, dopo opportuna lisi batterica, sia sul gruppo di metaboliti extracellulari, a seguito di una crescita batterica di 18-24 ore in brodo MRS. La spettrometria di massa MALDI-TOF si è dimostrata altamente affidabile nell’identificazione specie-specifica dei diversi lattobacilli, come dimostrato dall’assoluta sovrapponibilità del dendrogramma proteomico con quello genomico basato sul gene 16s rRNA. L’analisi metabolomica invece non ha consentito un raggruppamento filogenetico delle varie specie, ma ha permesso di identificare metaboliti marker caratteristici, che potrebbero chiarire i meccanismi che stanno alla base dell’effetto protettivo svolto da alcune specie.

L’elevata incidenza di infezioni muco-cutanee da Candida spp., associata a emergenti fenomeni di resistenza ai farmaci azoli, ha portato alla necessità di cercare nuove strategie per il loro trattamento. In questo contesto, numerosi composti naturali sono stati testati per la loro potenziale attività anti-microbica ma solo pochi si sono rivelati efficaci e privi di effetti tossici. Diverse specie di microalghe, come Spirulina platensis, sono note per la loro capacità di produrre un’ampia varietà di metaboliti con effetti antimicrobici. Scopo di questo studio è stata la valutazione in vitro dell’attività anti-Candida di un estratto acquoso di Spirulina platensis. Inoltre, per escludere una potenziale tossicità, è stata valutata l’attività dell’alga sul muscolo liscio di differenti tessuti ed è stata saggiata la capacità di inibire microrganismi commensali del microbiota umano. L’estratto di Spirulina platensis è stato fornito da Alchemistry srl e caratterizzato chimicamente. I ceppi di Candida spp. sono stati isolati da tamponi orali (N=8) e vaginali (N=18), pervenuti all’U.O. di Microbiologia dell’Ospedale Sant’Orsola di Bologna. Per i 26 ceppi di Candida spp., è stata determinata l’attività anti-fungina della microalga tramite un saggio di diluizione in brodo, allestito secondo le linee guida EUCAST. La minima concentrazione inibente (MIC) è stata definita come la più bassa concentrazione di alga capace di inibire la crescita fungina di almeno il 50%, mentre la minima concentrazione fungicida (MFC) come la più bassa concentrazione capace di impedire la crescita fungina del 99-99.5%. Sono stati condotti studi funzionali sulla contrattilità spontanea di muscolo liscio di organi adiacenti ad aree prossime all’ubicazione di Candida spp: utero, esofago e trachea di cavia per escludere la capacità di indurre contrazioni aberranti. Inoltre, è stata valutata l’attività antibatterica della microalga nei confronti di diversi isolati umani di Lactobacillus e Bifidobacterium, con un saggio di agar diluizione. I principali componenti del fitocomplesso acquoso di Spirulina platensis, sono ficocianina, clorofilla e carotenoidi. Questo estratto, ha mostrato effetto fungicida, con valori di MIC e MFC compresi fra 0.125 e 0.5 mg/ml. I ceppi di C. glabrata, C. parapsilosis e C. guillermondii hanno evidenziato i valori di MIC più elevati. La contrattilità spontanea dei muscoli lisci studiati non è stata alterata dalla microalga e nessun effetto anti-batterico è stato evidenziato nei confronti di lattobacilli e bifidobatteri. Per il suo effetto anti-fungino e l’assenza di tossicità, l’estratto di Spirulina platensis potrebbe essere utilizzato in formulazioni topiche per la terapia di candidosi orali e vaginali.

INTRODUZIONE. Le infezioni del tratto genitale femminile rappresentano una condizione frequente con un importante impatto economico e sociale. Per alcune di queste, come la vaginosi batterica (BV), specifiche alterazioni nella composizione del microbiota vaginale sono alla base dell’eziopatogenesi. Per altre, invece, come la candidosi e le infezioni da Chlamydia trachomatis (CT) e Neisseria gonorrhoeae (GC), il ruolo che il microbiota svolge nella protezione e nell’evoluzione di tali patologie è ancora da chiarire. Scopo preliminare del presente lavoro è stato quello di valutare la prevalenza delle più significative infezioni genitali in una popolazione selezionata di donne con l’obiettivo finale di studiare la composizione del microbiota vaginale associata ai vari quadri patologici. MATERIALI E METODI. Da dicembre 2015 a luglio 2016, sono state arruolate nello studio donne in età fertile afferenti all’ambulatorio per le malattie a trasmissione sessuale del Policlinico Sant’Orsola di Bologna. Lo studio ha ricevuto approvazione da parte del Comitato Etico. Criteri di esclusione comprendevano l’etnia non caucasica, un BMI>30, la recente assunzione di antibiotici o l’impiego di ovuli vaginali, la gravidanza, l’uso di farmaci anti-concezionali e la presenza di patologie croniche. Per ogni paziente sono stati raccolti i dati riguardanti l’anamnesi e la presenza di sintomi a livello genitale. Sono stati raccolti inoltre un campione di urina e un tampone vaginale per la diagnosi molecolare di infezioni da CT e GC (Versant CT/GC DNA 1.0; Siemens). Infine, ogni paziente ha eseguito una visita e la raccolta di secrezioni vaginali mediante tampone per la diagnosi di vaginosi batterica (criteri di Amsel), candidosi (positività alla microscopia e/o alla coltura) e vaginite aerobia (aumento della flora batterica aerobia di origine intestinale). RISULTATI. Un totale di 202 donne, con una età media di 28 anni (range 18-47), sono state arruolate durante il periodo in esame. Di queste 56 (27,7%) hanno ricevuto una diagnosi di candidosi, 30 (14,8%) di infezione da clamidia, 22 (10,9%) di vaginosi batterica, 9 (4,5%) di vaginite aerobia e 3 (1,6%) di gonorrea. Le restanti pazienti presentavano quadri di infezioni miste (6,4%) o sono risultate negative a tutte le indagini (34,1%). Da segnalare che il 50% delle pazienti con infezione da CT era completamente asintomatica. I casi di candidosi erano sostenuti prevalentemente da C. albicans e i sintomi più spesso riportati erano prurito e perdite vaginali. Le pazienti con diagnosi di BV lamentavano più spesso secrezioni con cattivo odore. CONCLUSIONI.Dal presente studio emerge come candidosi e clamidia rappresentino le infezioni genitale femminili più frequenti in età fertile. La natura asintomatica delle infezioni da CT suggerisce l’implementazione di programmi di screening nel nostro Paese. Lo studio del microbiota vaginale di queste pazienti permetterà di comprendere quali alterazioni possono favorire queste infezioni o esserne la conseguenza.

INTRODUZIONE. I lattobacilli rappresentano un ampio genere di microrganismi anaerobi Gram positivi di forma cocco-bacillare. Essi risiedono in differenti regioni anatomiche umane dove svolgono un ruolo chiave nel mantenere l’omeostasi microbica attraverso effetti diretti e capacità immuno-modulanti. Scopo di questo lavoro è stato quello di utilizzare lo studio dei metaboliti batterici tramite spettroscopia di risonanza magnetica nucleare (1H-RMN), come approccio innovativo per l’identificazione di specie di lattobacilli. MATERIALI E METODI. Un totale di 40 ceppi di lattobacilli di diversa origine sono stati inclusi nello studio. L’identificazione di specie, ottenuta mediante sequenziamento del gene 16s rRNA ha permesso di identificare 7 L. crispatus, 7 L. gasseri, 5 L. acidophilus, 5 L. delbrueckii, 2 L. vaginalis, 2 L. reuteri, 6 L. plantarum, 1 L. pentosus, 2 L. rhamnosus, 2 L. casei/paracasei e 1 L. brevis. L’analisi metabolica in 1H-RMN è stata eseguita con lo spettrometro AVANCE III (Bruker) sia sull’intero set di metaboliti intracellulari, dopo opportuna lisi batterica, sia sul gruppo di metaboliti extracellulari. Partendo dal dendrogramma basato sulle sequenze del gene 16s rRNA, i lattobacilli sono stati suddivisi in 7 gruppi e le differenze nella composizione del metaboloma sono state studiate con opportuni test statistici. RISULTATI. L’analisi in 1H-RMN ha permesso di identificare 30 e 17 molecole nel metaboloma extracellulare e intracellulare, rispettivamente. Tali molecole erano rappresentate prevalentemente da aminoacidi, alcoli, monosaccaridi e acidi organici. I diversi gruppi di lattobacilli hanno mostrato complessivamente lo stesso tipo di metaboliti ma con significative differenze per quanto riguarda la concentrazione di singole molecole. In particolare, 4 molecole nel metaboloma extracellulare (acetoina, acetone, piruvato, glucosio) e 8 in quello intracellulare (AMP, lattato, lisina, NAD+, propionato, succinato, uracile e valina) hanno mostrato una differenza statisticamente significativa. Ad esempio, il gruppo dei L. crispatus ha mostrato il maggior consumo di glucosio (P=1x10-3) mentre la produzione di lattato è apparsa più significativa per le specie L. casei-L. paracasei-L. rhamnosus (P=1x10-3). CONCLUSIONI. L’analisi metabolomica ha permesso di identificare metaboliti marker caratteristici di alcuni gruppi di lattobacilli, che potrebbero chiarire i meccanismi che stanno alla base dell’effetto antimicrobico svolto da alcune specie.

INTRODUZIONE. I lattobacilli rappresentano un vasto genere di batteri che colonizzano diverse sedi dell’organismo umano, dove svolgono un ruolo chiave nel mantenimento dell’omeostasi microbica. Sebbene il loro ruolo come microrganismi ‘health-promoting’ sia ben riconosciuto, la loro identificazione a livello di specie pone ancora numerose difficoltà e si basa sulla combinazione di differenti approcci. Scopo del presente lavoro è stato quello di valutare l’accuratezza della spettrometria di massa MALDI-TOF per l’identificazione di specie di ceppi di lattobacilli, comparando tale metodica con il classico approccio basato sul sequenziamento del gene 16s rRNA. MATERIALI E METODI. Sono stati inclusi nello studio 40 ceppi di lattobacilli, isolati da campioni clinici (n=27), presenti in formulazioni di probiotici (n=8) o di origine alimentare (n=5). L’identificazione di specie è stata ottenuta mediante sequenziamento del gene 16s rRNA e il relativo albero filogenetico è stato costruito mediante software MEGA 6. L’analisi spettrometrica è stata condotta sia direttamente da colonia batterica su terreno solido sia dopo estrazione proteica con acido formico/acetonitrile. I campioni sono stati analizzati con lo strumento Bruker MicroFlex MALDI-TOF MS e l’identificazione è stata ottenuta confrontando lo spettro proteico con il database di riferimento. Inoltre, a partire dallo spettro medio di ogni ceppo, è stato costruito un dendrogramma, tramite il software Biotyper 3.1. RISULTATI. Il sequenziamento del gene 16s rRNA ha portato alle seguenti identificazioni: 7 L. crispatus, 7 L. gasseri, 5 L. acidophilus, 5 L. delbrueckii, 2 L. vaginalis, 2 L. reuteri, 6 L. plantarum, 1 L. pentosus, 2 L. rhamnosus, 2 L. casei/paracasei e 1 L. brevis. L’analisi MALDI-TOF ha evidenziato elevati score identificativi (score medio≥1,9) sia in caso di analisi diretta, sia dopo estrazione proteica. Tale approccio ha consentito di identificare correttamente a livello di specie tutti i ceppi di lattobacilli tranne uno (L. pentosus vs L. plantarum), con una percentuale di concordanza con il sequenziamento del 97,5%. A tale riguardo, la stretta relazione filogenetica fra le due specie spiega questo risultato. In alcuni casi, a differenza del sequenziamento, la spettrometria di massa ha addirittura consentito l’identificazione batterica a livello di sub-specie (es. L. delbrueckii). Infine, il dendrogramma proteomico ha mostrato un’elevata sovrapponibilità con quello costruito mediante analisi genomica. CONCLUSIONI. La spettrometria di massa MALDI-TOF si è dimostrata altamente affidabile nell’identificazione di specie di diversi lattobacilli, rappresentando un’ottima alternativa al sequenziamento genico, grazie alla sua rapidità e semplicità di utilizzo. Inoltre, potrebbe rappresentare un metodo innovativo per studi tassonomici dei lattobacilli.

INTRODUZIONE E’ noto che un’alterazione del microbioma vaginale con riduzione del numero e della varietà di lattobacilli è associata a maggior rischio di infezioni genitali sessualmente trasmesse. Tra queste l’infezione da Chlamydia trachomatis si distingue non solo per l’elevata incidenza, ma anche per la frequenza e la severità delle sequele. Pochissimi sono ad oggi gli studi mirati a indagare i meccanismi di interazione tra lattobacilli e Chlamydia. Il nostro studio in vitro si propone di analizzare l’interazione diretta tra diversi ceppi di lattobacilli o loro insieme di metaboliti e i corpi elementari di C. trachomatis prima del loro ingresso nelle cellule (killing extracellulare). METODI Diciassette ceppi di lattobacilli sono stati isolati da tamponi vaginali di donne sane in età fertile e coltivati in brodo MRS over-night. Dopo determinazione turbidimetrica della concentrazione di lattobacilli, le colture sono state centrifugate per separare il pellet batterico dal surnatante. Abbiamo quindi messo a contatto i pellet e i corrispettivi surnatanti alle diverse concentrazioni di 5×107, 5×106 e 5×105 con corpi elementari (CE) di Chlamydia, sierotipo D (5×103 CFU). Sono stati valutati 3 diversi tempi di contatto (7, 15 e 60 minuti) a 37°C. Al termine di ogni incubazione abbiamo centrifugato la sospensione per eliminare le cellule batteriche e inoculato il surnatante contenente i CE in tubini contenenti un vetrino sterile su cui erano state coltivate cellule HeLa a confluenza del 100% circa. Dopo 48 ore di incubazione i vetrini sono stati fissati e colorati con anticorpo monoclonale diretto contro LPS di Chlamydia coniugato con fluoresceina (Meridian, Cincinnati, OH, USA). Abbiamo contato il numero di inclusioni al microscopio a fluorescenza in 30 campi (ingrandimento 200×) e confrontato i valori medi con quelli di colture cellulari infettate con la stessa quantità di CE in assenza di contatto con lattobacilli. I risultati sono stati analizzati con test ANOVA. Un valore di p

INTRODUZIONE Nonostante lo screening per le infezioni rettali e faringee da Chlamydia trachomatis e Neisseria gonorrhoeae sia una componente essenziale del management delle infezioni a trasmissione sessuale, nessun sistema per la determinazione degli acidi nucleici ha ricevuto fino ad oggi la marcatura CE per le analisi di tamponi raccolti da tali siti anatomici. Per questo motivo, negli ultimi anni molti laboratori hanno condotto prove di validazione interna. In questo studio riportiamo la validazione, condotta presso la Microbiologia del Policlinico S. Orsola-Malpighi di Bologna, del test VERSANT® CT/GC DNA 1.0 Assay, Siemens, per la contemporanea determinazione del DNA di clamidia e gonococco. Inoltre è stata effettuata una valutazione dell’idoneità di due diversi sistemi di raccolta per i tamponi: E-SwabTM e eNATTM, Copan. METODI La soglia di sensibilità (limit of detection=LOD) del test VERSANT® su tamponi faringei e rettali è stata determinata analizzando in triplicato un serie di concentrazioni note di DNA di C. trachomatis e N. gonorrhoeae (da 102 a 10-1 copie/ml), appartenenti al programma di controllo qualità QCMD 2013. Per simulare campioni clinici, i diversi DNA sono stati diluiti in un pool di 10 tamponi di origine rettale e altrettanti di origine faringea, raccolti in doppio con E-Swab e con eNAT, da soggetti sani, testati per escludere i più comuni patogeni a trasmissione sessuale, delle vie respiratorie e gastrointestinali e che dichiaravano di non aver avuto rapporti a rischio. Inoltre, come controllo per escludere una eventuale presenza nei liquidi di raccolta di agenti interferenti, sono stati testate concentrazioni note di DNA di clamidia e gonococco, diluite in un pool di 10 sospensioni di liquido di trasporto, rispettivamente per tamponi E-Swab e eNAT. Tutti i campioni sono stati processati per estrazione e successiva amplificazione sul sistema VERSANT®. L’estratto di DNA refluo è stato utilizzato per metodiche di PCR home-made che avevano come bersaglio il gene omp1 e porA, rispettivamente per clamidia e gonococco, al fine di valutare i LOD anche di queste due metodiche. RISULTATI Il LOD per C. trachomatis del test VERSANT®, sia su tamponi clinici simulati che su terreni di trasporto, è risultato pari a 10 copie/ml, mentre quello per N. gonorrhoeae era pari 1 copia/ml. Le metodiche di PCR home-made hanno invece mostrato LOD lievemente più alti: 50 copie/ml per clamidia e 5 copie/ml per gonococco. Non sono state notate differenze significative né riguardo alle sedi di prelievo dei campioni clinici simulati, né per quanto riguarda il tipo di sistema di raccolta (E-Swab o eNAT). CONCLUSIONI Il test VERSANT® CT/GC DNA 1.0 Assay ha mostrato ottimi livelli di sensibilità per la determinazione del DNA di C. trachomatis e N. gonorrhoeae, sia su tamponi faringei che rettali. I LOD estremamente bassi permettono di escludere l’ipotesi di eventuali risultati falsamente negativi dovuti alla presenza di inibitori presenti in sede faringea o rettale. Inoltre, entrambi i sistemi di raccolta (E-Swab o eNAT) sono risultati idonei per essere processati sul sistema VERSANT®.

INTRODUZIONE Le infezioni faringee e rettali da Chlamydia trachomatis e Neisseria gonorrhoeae sono in aumento, in particolare in gruppi ad alto rischio. Queste localizzazioni possono dare forme asintomatiche che spesso rimangono misconosciute, fungendo così da serbatoio per la trasmissione. Grazie alle loro elevate performance, le tecniche di biologia molecolare rappresentano oggi il metodo di riferimento per la diagnosi di tali infezioni. Nel presente studio riportiamo la prevalenza di infezioni extra-genitali da clamidia e gonococco in una popolazione selezionata afferente all’ambulatorio per le malattie a trasmissione sessuale (MTS) del Policlinico Sant’Orsola-Malpighi di Bologna. METODI Da Gennaio 2013, tutti i pazienti visitati presso l’ambulatorio MTS del Policlinico e che riferiscono rapporti anali e/o orali non protetti, vengono invitati a sottoporsi alla raccolta, mediante tamponi, di secrezioni prelevate da tali sedi anatomiche per la ricerca degli acidi nucleici di C. trachomatis e N. gonorrhoeae, oltre alla raccolta ormai classica di campioni di urina. Le indagini molecolari vengono eseguite tramite multiplex Real-Time PCR (VERSANT® CT/GC DNA 1.0 Assay; Siemens). In caso di positività per gonococco, i risultati sono confermati con una PCR home-made per il gene porA, mentre la tipizzazione molecolare per le clamidie è condotta con analisi RFLP degli amplificati del gene omp1. RISULTATI Da Gennaio 2013 a Marzo 2014 sono stati analizzati campioni provenienti da 146 uomini omosessuali, 29 uomini eterosessuali e 45 donne, per un totale di 220 urine, 182 tamponi faringei e 119 tamponi rettali. Gli omosessuali sono risultati significativamente più sintomatici (P=0.001) e con più alti tassi di infezione da HIV e sifilide (P

Introduzione La tendenza all’accorpamento dei laboratori e il conseguente aumento del numero di richieste giornaliere pone sempre più la necessità di adottare sistemi ad elevata automazione. Negli ultimi anni, nell’ambito dello screening in gravidanza per le infezioni del complesso TORCH, sono stati proposti diversi sistemi automatizzati “random access”. In questo studio sono stati confrontati i dati relativi allo screening sierologico per Toxoplasma gondii (TG), Cytomegalovirus (CMV) e virus della Rosolia ottenuti con due diversi analizzatori: IMMULITE® 2000 (Siemens) e BioPlex® 2200 (Bio-Rad). Metodi Sono stati studiati 288 sieri pervenuti al Laboratorio dell’U. O. Microbiologia con richiesta contemporanea di screening IgG e IgM per TG, CMV e virus della Rosolia. Tutti i sieri sono stati analizzati con BioPlex® 2200 e IMMULITE® 2000. I test per il sistema BioPlex® 2200 sfruttano la tecnologia del “Multiplex Flow Immunoassay”, in grado di rilevare contemporanemente la presenza di anticorpi nei confronti di diversi analiti, mentre i kit per IMMULITE® 2000 sono basati sul principio della chemiluminescenza amplificata. Nel caso di risultati discordanti per il dosaggio delle IgM sono stati utilizzati come conferma i test ELFA Vidas (bioMerieux). Risultati La concordanza per IgG tra i due sistemi è stata, rispettivamente, del 98.2% per TG, 95.8% per CMV e 98.6% per Rosolia. Per IgM la concordanza è stata, rispettivamente, pari a 92.7% per TG, 95.8% per CMV e 96.5% per Rosolia. Tutti i sieri con risultati discordanti per IgM sono risultati negativi quando analizzati con i test ELFA. Conclusioni Entrambi i sistemi “random access” hanno dimostrato valide performance analitiche e, grazie all’alta capacità produttiva e alla completa automazione, sia BioPlex® 2200, sia IMMULITE® 2000 risultano adatti nella gestione della routine di laboratorio per lo screening del complesso TORCH. In caso di riscontro di anticorpi di classe IgM, è consigliabile affiancare un adeguato metodo di conferma.

Introduzione Lo screening sierologico per il complesso TORCH riveste un ruolo fondamentale nella prevenzione delle infezioni a trasmissione materno-fetale. L’elevato numero di analisi quotidiane impone ai laboratori l’adozione di nuove metodiche, caratterizzate da tempi rapidi di esecuzione e alto tasso di automazione. Nel presente studio vengono messi a confronto i dati relativi allo screening sierologico per Toxoplasma gondii (TG), Cytomegalovirus (CMV) e virus della Rosolia ottenuti con IMMULITE® 2000 (Siemens), un analizzatore “random access” basato sulla metodica di chemiluminescenza (CMIA), con quelli ottenuti mediante le tradizionali metodiche immunoenzimatiche (EIA) in micropiastra. Metodi Sono stati analizzati 536 sieri pervenuti al laboratorio dell’U.O. di Microbiologia per lo screening sierologico di infezioni da CMV, TG e Rosolia. I sieri sono stati analizzati per la ricerca di IgM e IgG sul sistema BEP III mediante metodica EIA con micropiastre Enzygnost (Siemens) e su IMMULITE® 2000. Come metodi di conferma, sono stati utilizzati i test ELFA Vidas (bioMerieux). Risultati La concordanza dei test IgG IMMULITE® con le rispettive analisi in micropiastra è stata, rispettivamente, del 98.7% per TG, 98.2% per CMV e 99.8% per Rosolia. Infine, per i test IgM la concordanza tra i due sistemi è stata del 97.9% per TG, 99% per CMV e 97.2% per Rosolia. Conclusioni Il sistema IMMULITE® 2000 permette di effettuare fino a 200 test/ora, garantendo al laboratorio un notevole risparmio di tempo rispetto alle analisi in micropiastra. I valori di concordanza ottenuti, unitamente all’alto livello di automazione e alla elevata produttività rendono il sistema IMMULITE® 2000 una buona alternativa per lo screening anticorpale del complesso TORCH. Per quanto riguarda la ricerca di anticorpi di classe IgM, si consiglia di affiancare a tale sistema un adeguato metodo di conferma, per completezza di risposta

Introduzione. Il linfogranuloma venereo (LGV) è una malattia a trasmissione sessuale (MTS), sostenuta dai sierotipi L1, L2, L3 di Chlamydia trachomatis (CT). L’infezione sta riemergendo nei Paesi industrializzati in uomini omosessuali (MSM) e tende a manifestarsi con sintomi ano-rettali. Nel presente studio riportiamo i dati epidemiologici dell’infezione da LGV in una popolazione ad alto rischio afferente all’ambulatorio MTS del Policlinico Sant’Orsola-Malpighi, Bologna. Metodi. Da gennaio 2012, a tutti i pazienti con sintomi ano-rettali o che riportavano rapporti anali non protetti, è stato offerto uno screening per LGV. Un campione di urina e un tampone rettale sono stati analizzati con il kit Versant CT/GC DNA 1.0 (Siemens) e in caso di positività per CT, la corrispondente genotipizzazione è stata eseguita con metodica RFLP per il gene omp1. Risultati. Sono stati arruolati 108 pazienti, di cui 99 MSM e 9 donne. Dei 23 tamponi rettali positivi per CT, 13 (12%) sono stati identificati come L2 grazie alla tipizzazione molecolare. Nessun campione di urina ha mostrato positività per genotipi L. Tutti i casi di proctite da LGV erano sintomatici e sono stati identificati in MSM con multipli partner sessuali. In 12 di loro è stata confermata la presenza di altre MTS. L’analisi statistica ha rivelato una differenza significativa fra i pazienti LGV-positivi e LGV-negativi per quanto riguarda la presenza di sintomi (100% vs. 20%), l’età media (43 vs. 34 anni) e la coinfezione da HIV (69,2% vs. 10,5%), sifilide (69,2% vs. 16,8%) e HBV (30,8% vs. 3%). All’analisi multivariata, HIV e sifilide sono risultati fattori di rischio per infezione da LGV. Conclusioni. Le caratteristiche dell’infezione da LGV nella popolazione studiata sono in linea con la letteratura internazionale. I nostri dati suggeriscono di eseguire uno screening per infezione da LGV in tutti gli MSM positivi a HIV o sifilide, in presenza di sintomi ano-rettali.

AIMS Congenital Toxoplasmosis (CT) in newborns results from primary maternal infection with T. gondii (TG). Most infected children show no symptoms at birth but are at great risk of sequelae during the first year of life or in early childhood [1]. Polymerase chain reaction (PCR) analysis of dried blood samples on the Guthrie card has been proposed as a sensitive method to screen for congenital CMV infection, but there are no data about the use for TG screening. The aim of present study was to assess the utility of PCR analysis of dried blood samples for the retrospective diagnosis of CT. METHODS A retrospective study was performed with 18 infants born between January 2010 and June 2012. Transmitters mothers seroconverted in the second trimester of pregnancy (mean 23.5 ± 7.9 weeks). At birth, serological tests (Enzygnost Toxoplasmosis IgG, IgM, IgA-Siemens Healthcare Diagnostics; Vidas Toxo IgMbioMerieux) as well as IgM-IgG WB (LDBio Toxoplasma WB IgG/IgM-LDBio Diagnostics) were performed in all mother-child pairs.Nucleic acids were extracted from Guthrie cards with VERSANT kPCR Sample Preparation system (Siemens) and Toxoplasma Q-PCR Alert Kit (Nanogen) was used for the amplification of TG target region AF 146527. RESULTS In 7/18 (38.9%) infants, CT was diagnosed by IgM-WB positivity at birth. The remaining 11 were considered non-infected (61.1%) and became IgG negative within 12 months of life. Infected infants received one-year therapy (pyrimethamine/sulfadiazine) and were followed according to our protocol. Four of these had a pathological neuroimaging (4/4 calcifications, 2/4 ventriculomegaly). None had hearing loss. TG DNA was detected in only one of the Guthrie cards of the infected newborns, while all the others were negative. CONCLUSIONS Although serological methods remain basic in the diagnosis of CT, TG DNA detection in Guthrie cards could be considered a retrospective method to evaluate infants (> 1 year of age) with clinical signs suggestive of CT. More studies with a larger number of infected cases are needed to assess the sensitivity of this method.

Introduzione. I nati da madri con infezione da Chlamydia trachomatis (CT) sono a rischio di infezioni oculari e polmonari. Nel presente studio riportiamo i casi di due neonati, entrambi nati da madri con infezioni asintomatiche da CT, che nella seconda settimana di vita hanno sviluppato una congiuntivite follicolare. Metodi. I tamponi congiuntivali dei neonati e i campioni di urina delle madri sono stati analizzati in Real-Time PCR con il kit commerciale Versant CT/GC DNA 1.0 (Siemens). E’ stata successivamente eseguita la genotipizzazione, con metodica RFLP per il gene omp1. Risultati. Entrambi i neonati, normali per età gestazionale, sono nati con parto spontaneo e sono stati dimessi in terza giornata in buone condizioni cliniche. Il successivo ricorso alle cure dell’U.O. Neonatologia è avvenuto in un caso per presenza di ittero neonatale e controlli per sospetta infezione congenita da Toxoplasma gondii, e nell’altro per presenza di difficoltà alimentari, scarso accrescimento ponderale ed edema palpebrale. La consulenza oculistica richiesta ha permesso in entrambi i casi di diagnosticare una congiuntivite follicolare. I tamponi congiuntivali effettuati sono risultati positivi per CT e la tipizzazione ha evidenziato rispettivamente il genotipo F ed E. In entrambi i neonati è stata instaurata una terapia con Claritromicina, 10 mg/kg/die in due somministrazioni, proseguita per 2 settimane; in un caso si è aggiunta una terapia topica con Ofloxacina collirio 0.3%, 1 goccia per occhio, 4 volte/die. La visita oculistica di controllo ha dimostrato per entrambi completa risoluzione della congiuntivite. Le madri sono state inviate presso l’ambulatorio MTS per ulteriori accertamenti e terapia. Conclusioni. L’infezione da CT nelle donne decorre spesso in maniera asintomatica: da qui deriva la necessità di effettuare in gravidanza uno screening per CT, almeno nelle donne più giovani o con fattori di rischio (numero elevato di partner, nuovo partner) per prevenire infezioni, anche gravi, nei neonati.

Introduzione: La diagnosi di laboratorio di sifilide, basata principalmente sull’utilizzo di indagini sierologiche, riveste un ruolo chiave nella corretta gestione dei pazienti luetici. Nel presente studio è stata valutata la performance diagnostica di BioPlex® 2200 Syphilis IgG (Bio-Rad), un test innovativo basato sulla tecnologia ‘Multiplex Flow Immunoassay’, in paragone con ARCHITECT® Syphilis TP (Abbott). Come conferma sono stati utilizzati TPHA e Western Blot (WB). Metodi: Sono stati studiati i seguenti pannelli di sieri: 200 campioni provenienti da pazienti sifilitici (di cui 100 con RPR positivo), 53 campioni positivi secondo ARCHITECT ma negativi ai test di conferma, 100 campioni di donatori di sangue e 200 campioni non selezionati arrivati al laboratorio per lo screening sierologico di sifilide. I sieri sono stati analizzati con le seguenti metodiche: BioPlex 2200 Syphilis; ARCHITECT Syphilis TP; TPHA ed RPR (Randox); WB “home made”, allestito con lisato totale del microrganismo. Risultati: Nel gruppo dei 200 sieri di pazienti sifilitici, sia BioPlex 2200 Syphilis IgG che ARCHITECT Syphilis TP hanno mostrato il 100% di concordanza con i test di conferma. Tutti i campioni dei donatori di sangue sono risultati negativi alle metodiche utilizzate, mentre 2 sieri del gruppo dei non selezionati sono risultati positivi a tutti i test. Per quanto concerne infine i 53 sieri positivi solo ad ARCHITECT, BioPlex Syphilis IgG ne ha valutati 23 come positivi e 1 come border-line. Conclusioni: La sensibilità mostrata dai due sistemi messi a confronto in questo studio è stata del 100%, mentre la specificità relativa di Bioplex 2200 Syphilis IgG rispetto a WB e TPHA è stata superiore a quella di ARCHITECT Syphilis TP (93,2% e 84,9% rispettivamente). Considerato l’eccellente livello di automazione e gli ottimi risultati in termini di sensibilità e specificità, BioPlex Syphilis IgG può rappresentare un valido test di screening per la diagnosi di sifilide

Introduzione La diagnosi molecolare di infezioni respiratorie a partire da campioni fortemente mucosi, quali aspirati faringo-nasali o lavaggi bronco-alveolari (BAL), può essere problematica per difficoltà operative, sia nella fase di estrazione, che in quella di amplicazione degli acidi nucleici. In questo studio proponiamo l’uso della soluzione SL (Sputum Liquefying Solution, Copan), per la processazione di materiali respiratori sui quali eseguire successivamente indagini molecolari per la ricerca di Chlamydia pneumoniae e Mycoplasma pneumoniae. Metodi All’arrivo in laboratorio, i materiali respiratori (aspirati faringo-nasali o BAL) sono stati trattati con SL Solution, un mucolitico pronto all’uso che permette l’emulsione del muco rendendo il campione più omogeneo e idoneo per le successive manipolazioni. Da tali materiali è stata eseguita l’estrazione del DNA su sistema automatizzato Nuclisens® easyMag (bioMérieux). In seguito sono stati amplificati i geni bersaglio di C. pneumoniae e M. pneumoniae con metodica di Real-time PCR su strumento Applied Biosystems ABI PRISMTM, con i rispettivi kit CHLAMYDOPHILA pn. Q – PCR Alert kit e MYCOPLASMA pn. Q-PCR Alert Kit (Nanogen Advanced Diagnostics). Risultati Prove interne, condotte testando in parallelo campioni con e senza pre-trattamento con SL Solution, hanno evidenziato l’assoluta validità nell’utilizzo di tale mucolitico. Per questo motivo proponiamo il seguente semplice protocollo di processazione dei materiali respiratori su cui eseguire metodiche NAAT: 1. All’arrivo in laboratorio, i campioni vengono diluiti 1:1 con SL solution in un volume finale di 1 ml. 2. Le provette vengono agitate su vortex per circa 30 secondi. 3. Le provette vengono lasciate riposare a temperatura ambiente per almeno 15 minuti. 4. I materiali vengono congelati a -20°C fino al momento dell’indagine molecolare. 5. Prima della dispensazione per estrazione le provette vengono nuovamente agitate. Conclusioni La soluzione SL si è dimostrata idonea per il trattamento dei materiali mucosi su cui eseguire l’indagine molecolare di infezione respiratoria da batteri atipici.

Introduzione: Lo screening sierologico nei confronti dei principali agenti infettivi del gruppo TORCH, quali Toxoplasma gondii (TG), Cytomegalovirus (CMV) e virus della Rosolia è di fondamentale importanza per la corretta gestione delle gravide, nell’ottica di prevenzione delle infezioni materno-fetali. Poiché tale screening genera un notevole carico di lavoro per il laboratorio, è forte la necessità di sviluppare nuovi test, che puntino sulla rapidità e sull’automazione. Nel presente studio è stata valutata la performance di BioPlex® 2200 ToRC (Bio-Rad), basato sulla tecnologia del ‘Multiplex Flow Immunoassay’, in confronto alle tradizionali metodiche immunoenzimatiche in micropiastra. Metodi: Sono stati analizzati 300 sieri non selezionati, giunti al laboratorio per il routinario screening sierologico per TG, CMV e Rosolia. Sono stati utilizzati i seguenti test: BioPlex 2200 ToRC IgM e IgG, per il rilevamento di IgG e IgM con metodica immuofluorescente multiplex, e micropiastre Enzygnost su sistema automatizzato BEPIII (Siemens). Come metodi di conferma, sono stati utilizzati i test ELFA Vidas (bioMerieux). Risultati: Per quanto riguarda i test IgG, Bioplex 2200 ToRC ha mostrato un’elevata concordanza (variabile tra il 97.6% e il 100%, a seconda degli analiti) con i saggi Enzygnost. I livelli di concordanza per le IgM sono stati i seguenti: 96% per CMV, 89% per TG e 98% per Rosolia. Conclusioni: Il sistema Bioplex permette di effettuare 300 analisi/ora (100 campioni/ora) per la ricerca di IgG e 210 analisi/ora (70 campioni/ora) per le IgM, garantendo al laboratorio un notevole risparmio di tempo rispetto alle analisi in micropiastra. Bioplex 2200 ToRC IgG, per l’elevata automazione e gli ottimi livelli di concordanza con le metodiche tradizionali, si è dimostrato una valida alternativa per lo screening anticorpale del complesso TORCH. Per quanto riguarda la ricerca dianticorpi di classe IgM, si consiglia di affiancare a tale sistema un adeguato metodo di conferma, per completezza di risposta.

Introduzione. Il linfogranuloma venereo (LGV) è una malattia sistemica, a trasmissione sessuale (MTS), sostenuta dai sierotipi L1, L2, L3 di Chlamydia trachomatis (CT). L’infezione, scomparsa nei Paesi industrializzati, sta nuovamente riemergendo negli uomini omo o bi-sessuali (MSM) e tende a manifestarsi con sintomi e segni ano-rettali. Nel presente studio riportiamo 5 casi di LGV, identificati nel periodo compreso tra novembre 2011 e luglio 2012 presso l’ambulatorio MTS del Policlinico Sant’Orsola-Malpighi, Bologna. Metodi. I tamponi rettali sono stati analizzati con il kit Versant CT/GC DNA 1.0 (Siemens). E’ stata successivamente eseguita lagenotipizzazione per CT, con metodica RFLP per il gene omp1. Risultati. I pazienti erano sintomatici, presentando lesioni ulcerative perianali e proctite in 2 casi, ulcerazione perianale isolata in2 casi e proctite isolata nell’ultimo caso. Linfoadenopatia inguinale monolaterale dolente è stata riportata in 2 casi. I pazienti con proctite presentavano tenesmo, dolore anale, stipsi e secrezioni muco-ematiche. Ad esclusione di un paziente, per il quale non sono state rivelate coinfezioni a trasmissione sessuale, sono state riportateall’anamnesi infezioni da HIV (3/5), Treponema pallidum (3/5), gonococco (1/5) e HBV (2/5). Tutti sono giunti alla diagnosi da LGV dopo un percorso diagnostico tortuoso: a seconda dei casi erano stati presi in considerazione recidive da HSV, patologie intestinali di pertinenza specialistica gastroenterologica o esiti di natura traumatica. Tutti i casi sono stati attribuiti al genotipo L2, mediante RFLP. Per tutti si è instaurata una terapia con Doxiciclina 100 mg 2 dosi/die per 21 giorni, proposta anche ai partner fissi. La valutazione clinica e laboratoristica di controllo ha dimostrato completa risoluzione dell’infezione. Conclusioni. Le manifestazioni cliniche dovute a LGV pongono serie problematiche nella diagnosi differenziale. La diagnosi molecolare di infezione da CT e la successiva tipizzazione permettono di giungere alla diagnosi corretta e di instaurare un adeguato trattamento antibiotico.

Introduzione: A seguito dei focolai epidemici del 2007-2008 il numero delle richieste di esami sierologici per morbillo è notevolmente aumentato, specialmente per il controllo degli operatori sanitari. Da gennaio 2011 a Bologna e provincia si sono riscontrati nuovamente focolai epidemici. Di seguito vengono riportati i dati riguardanti i casi studiati. Metodi: I sieri sono stati analizzati su sistema automatizzato BEPIII (Siemens Healthcare Diagnostics) con i kit Enzygnost Measles IgG e IgM (Siemens Healthcare Diagnostics). Risultati: Dal 1 Novembre 2010 al 31 luglio 2011 sono stati testati 2154 sieri. Per trentadue pazienti è stata posta la diagnosi sierologica di morbillo, per la presenza di IgM positive. A 8 pazienti è stato ripetuto un prelievo a distanza di 5-7 giorni e per 5 si è evidenziata la sieroconversione delle IgG. La distribuzione nei mesi presi in esame ha evidenziato un primo picco epidemico a gennaio 2011 (11 casi), seguito da una forte diminuzione a febbraio (1 caso). Più allineati i numeri negli altri mesi: 3 casi a marzo, 5 ad aprile, 2 a maggio, 3 a giugno. Infine, a luglio si è evidenziato un nuovo picco (7 casi). I pazienti sono risultati omogenei per sesso (16 maschi e 16 femmine), con un’età variabile tra 1 e 69 anni (29.5±13.20anni). Conclusioni: E’ interessante sottolineare come in un periodo di 9 mesi durante l’epidemia del 2007-2008 (settembre 2007-maggio 2008) le richieste per la diagnosi sierologica di morbillo fossero state meno di un quinto (402) di quelle attuali. Tale numero risultava comunque in forte aumento rispetto allo stesso periodo dell’anno precedente (180 richieste), a dimostrazione del fatto che i focolai epidemici hanno indotto un aumento delle richieste di accertamento sierologico. Infine, dai dati raccolti si evidenzia come l’epidemia sia tuttora in corso e siano quindi necessari ulteriori approfondimenti per indagarne le cause.

Introduzione. In corso di toxoplasmosi è raro isolare il DNA del microrganismo da sangue di pazienti immunocompetenti a causa della fugace parassitemia. Nel presente studio riportiamo il caso di un paziente di 42 anni con infezione recente da Toxoplasma gondii (TG), risultato positivo alla ricerca di DNA di TG nel sangue periferico, in assenza di disturbi dell’immunità. Metodi. Indagini anticorpali. Sono stati utilizzati i kit Enzygnost, Siemens Healthcare Diagnostics, per la ricerca di anticorpi anti-TG, anti-CMV, anti-EBV e i kit Vidas, BioMérieux, a conferma dei risultati IgM positivi o dubbi e per il dosaggio dell’avidità per TG. Per i test sierologici anti-HIV, HBV e HCV sono stati utilizzati i test Architect, Abbott. PCR per TG. E’ stato utilizzato il kit Toxoplasma Q-PCR Alert Kit, Nanogen Advanced Diagnostics, il cui target è la regione altamente ripetuta AF 146527 del genoma protozoario. L’estrazione del DNA è stata eseguita su sistema Nuclisens® easyMag, BioMérieux. Risultati Al momento del prelievo il paziente lamentava febbre intermittente e intensa astenia da circa tre settimane, con abbondante sudorazione ed intensa linfoadenopatia diffusa, in particolare in sede laterocervicale e ascellare. Gli esami ematochimici mostravano lieve leucocitosi con linfocitosi relativa e assoluta, associata a note di attivazione linfocitaria allo striscio di sangue periferico. Il dosaggio delle transaminasi risultava lievemente alterato. Gli esami sierologici per HIV, HBV e HCV risultavano negativi, mentre i valori sierologici anti-CMV ed EBVportavano ad escludere un’infezione recente. Il dosaggio delle IgM e delle IgG anti-TG risultava positivo, con basso indice di avidità delle IgG. La ricerca di DNA su sangue periferico è risultata positiva. A distanza di due mesi, a sintomatologia risolta, tale esame è stato ripetuto ed è risultato negativo. Conclusioni. In casi selezionati di toxoplasmosi acuta, la ricerca di DNA da sangue periferico può essere un dato diagnostico aggiuntivo anche nell’individuo immunocompetente.

Introduzione: Le infezioni da Chlamydia trachomatis (CT) e Neisseria gonorroheae (GC) sono tra le malattie a trasmissione sessuale (MTS) più comunemente diffuse nel mondo occidentale. Negli ultimi anni, per la diagnosi di tali infezioni, sono state messe a punto metodiche di amplificazione degli acidi nucleici, con caratteristiche di sensibilità e specificità maggiori rispetto alle metodiche tradizionali di coltura e/o identificazione di antigeni. Nel presente studio sono riassunti i dati relativi alle analisi effettuate nel nostro laboratorio nel periodo Agosto 2010-Luglio 2011, dopo l’introduzione di una metodica in Real-Time PCR come esame diagnostico di routine. Metodi: E’ stato impiegato il kit VERSANT® CT/GC DNA 1.0 (Siemens Healthcare Diagnostics), basato su una procedura di PCR cinetica (kPCR) per la rilevazione del DNA di C. trachomatis e N. gonorrhoeae. Risultati: In 12 mesi le richieste di analisi per CT/GC sono state 2423: in particolare, sono stati analizzati 2321campioni di urine, 86 tamponi cervicali, 9 tamponi congiuntivali, 6 tamponi uretrali e 1 tampone anale. Quasi metà delle urine (1142) proveniva dall’ambulatorio MTS del nostro Policlinico. In totale 169 campioni sono risultati positivi per CT e 53 per GC, con una prevalenza rispettivamente del 6.9% del 2.2%. Tale prevalenza sale al 10% (115/1142) per CT e al 4.5% (51/1142) per GC, se calcolata sui soli pazienti provenienti dall’ambulatorio MTS. In 9 casi i campioni erano positivi per entrambi i patogeni. Conclusioni: I nostri dati confermano l’elevata prevalenza di infezioni da CT e GC, in particolare in una popolazione considerata più a rischio, come quella dei pazienti afferenti all’ambulatorio MTS. La metodica di Real-Time PCR è risultata un efficace strumento diagnostico, permettendo la ricerca simultanea del DNA di entrambi i patogeni. Infine, la diagnosi su urina permette di evitare l’esecuzione di tamponi genitali, generalmente poco graditi dai pazienti, in particolare di sesso maschile.

Introduzione: I nati da madri con infezione tardiva da Toxoplasma gondii sono i più esposti al rischio di toxoplasmosi congenita, con percentuali variabili tra il 25-30% nelle infezioni del secondo trimestre di gravidanza e 65-75% nelle infezioni dell’ultimo trimestre. Per identificare i bambini realmente infetti e procedere solo in questi casi al trattamento terapeutico è fondamentale l’uso di metodiche di laboratorio sensibili e specifiche; la tecnica di Western Blot risponde a tali requisiti. Tra luglio 2009 e luglio 2011 sono state studiate dal punto di vista sierologico 30 coppie madre/figlio; per tali casi il dato era di sieroconversione certa materna oltre la 20a settimana di gestazione. I sieri erano giunti al nostro laboratorio da vari centri neonatali. Metodi: I sieri sono stati saggiati mediante Enzygnost Toxoplasmosis (Siemens Healthcare Diagnostics) per la ricerca di IgG, IgM e IgA; Vidas Toxo (Biomerieux) per la determinazione di IgM, IgG e avidità anticorpale materna; Western Blot IgG/IgM (LDBio), per una comparazione delle reattività del neonato e della madre, alla nascita, o per una comparazione delle reattività del siero del neonato alla nascita e di quelle nei mesi successivi, entro il terzo mese. Tutti i bambini sono stati inseriti in follow-up, fino all’anno di vita. Risultati: In tutti questi casi si è riscontrata positività per IgM in WB, in 2 casi si evidenziava anche la presenza di IgG reattive verso antigeni diversi da quelli materni; solo in 3/8 casi le IgM erano positive anche con metodiche classiche, mentre in un altro caso risultavano positive le IgA in immunoenzimatica. In 7 casi la diagnosi è avvenuta entro il primo mese di vita, in un solo caso nel secondo mese. Conclusioni: Il WB comparativo si conferma il test più affidabile per la diagnosi di toxoplasmosi congenita, permettondo di giungere ad una diagnosi corretta nel minor tempo possibile.

Introduzione: Ureaplasma urealyticum e Micoplasma hominis possono essere trasmessi al neonato o durante il passaggio nel canale del parto o per rottura precoce delle membrane o per infezione del liquido amniotico. Possono causare infezioni respiratorie, cerebrali e setticemie nei neonati. Nei nati dopo almeno 34 settimane di gestazione raramente si hanno infezioni clinicamente significative mentre in neonati prematuri, per lo scarso passaggio di immunoglobuline di origine materna, i quadri clinici possono essere molto più severi. Riportiamo di seguito la casistica dell’isolamento di micoplasmi urogenitali da materiale di origine respiratoria in neonati prematuri. Metodi: Tra luglio 2009 e luglio 2011 sono stati analizzati mediante coltura i campioni respiratori (aspirati faringonasali e/o lavaggi bronco-alveolari) di 23 neonati prematuri con sintomatologia e/o quadri radiologici sospetti per infezione da micoplasmi urogenitali. Per l’isolamento e l’eventuale determinazione dell’antibiogramma, i campioni sono stati inoculati nelle gallerie del kit MycoView® (Zeakon Diagnostics). In 5 casi è stato eseguito un solo prelievo di materiale mentre in tutti gli altri casi sono stati ripetuti più prelievi successivi nel tempo. Risultati: In 20 casi la coltura è risultata positiva al primo campione analizzato; in 2 casi si è evidenziata una crescita nei campioni successivi al primo, mentre in un solo caso non si è verificata nessuna crescita. Dei 22 casi positivi, 18 hanno mostrato la contemporanea presenza di U. urealyticum e M. hominis, con resistenza ai macrolidi, una sostanziale sensibilità alle tetracicline e un comportamento variabile nei confronti dei fluorochinolonici. In 4 casi la sola crescita di U. urealyticum è stata caratterizzata da una generale sensibilità del patogeno alle tetracicline e una variabile sensibilità a fluorochinolonici e macrolidi. Conclusioni: Dai dati raccolti si evidenzia come nei casi clinicamente sospetti l’isolamento di micoplasmi urogenitali in neonati prematuri sia un evento estremamente frequente. E’ da approfondire il ruolo patologico di tali microrganismi.

Introduzione. Il Laboratorio di Microbiologia del Policlinico S. Orsola si occupa di diagnosi di infezioni da Chlamydia fin dal 1975: all’epoca non erano disponibili kit commerciali, pertanto le indagini microbiologiche prevedevano l’inoculo dei tamponi in colture cellulari e la colorazione del monostrato cellulare per evidenziare le inclusioni. Solo a metà degli anni ’80 cominciò la commercializzazione dei primi test immunoenzimatici per la ricerca di LPS e dei primi test molecolari, basati o sull’uso di sonde di ibridazione o su metodiche di amplificazione del DNA (LCR e PCR). Negli ultimi anni, infine, sono stati sviluppati nuovi metodi in Real-Time PCR per la determinazione contemporanea di DNA di C. trachomatis e Neisseria gonorrhoeae. Metodi. VERSANT® CT/GC DNA 1.0. Il test VERSANT® CT/GC DNA 1.0 (Siemens Healthcare Diagnostics) è basato su una procedura di PCR cinetica (kPCR) per la rilevazione del DNA di C. trachomatis e N. gonorrhoeae. IDEIA™ PCE Chlamydia. Il test IDEIA™ PCE Chlamydia (Oxoid) è un metodo immunoenzimatico per la determinazione di LPS di C. trachomatis. Risultati. Nel centro MTS del Policlinico S. Orsola sono stati eseguiti tamponi uretrali o cervicali. Dopo l’esecuzione, i pazienti sono stati invitati a procedere alla raccolta di un campione di urine. I tamponi sono stati analizzati con il metodo immunoenzimatico e solo il 5.0% di essi è risultato positivo. I campioni di urine sono stati studiati con il metodo molecolare e la percentuale di positività è aumentata a 11.9%. Conclusioni. La Real-Time PCR per la diagnosi delle infezioni da clamidia appare la metodica più sensibile e permette di analizzare campioni di urine, evitando in questo modo il ricorso a prelievi invasivi o dolorosi. Tale metodica sembra dunque particolarmente adatta per lo screening che, se applicato su larga scala, ci potrebbe dare una stima più realistica della prevalenza di questa infezione.

INTRODUZIONE: Gardnerella vaginalis (GV) è un batterio anaerobio facoltativo, pleomorfico, Gram-variabile. GV è la specie batterica più comunemente ritrovata a livello vaginale in corso vaginosi batterica (BV), condizione caratterizzata da una deplezione di lattobacilli e un’eccessiva crescita di anaerobi. Nonostante sia la specie più diffusa e più virulenta trovata in BV, GV fa parte del microbiota vaginale in una proporzione significativa di donne sane. Oltre a questo aspetto, è meno noto il ruolo di GV in altre condizioni cliniche che interessano il tratto genitale delle donne, come la candidosi vulvo-vaginale e le infezioni da Chlamydia trachomatis (CT). Lo scopo di questo studio è stato valutare e confrontare la distribuzione di GV nel tratto vaginale in 4 diversi gruppi: donne sane, con BV, con candidosi o con infezione da CT. METODI: A partire da luglio 2016 sono state arruolate tutte le donne in età fertile afferenti all’ambulatorio MTS del Policlinico Sant’Orsola-Malpighi di Bologna e che soddisfacevano uno dei seguenti criteri: presenza di sintomi vulvo-vaginali (es: perdite vaginali, sanguinamento anomalo, prurito) o presenza di fattori di rischio per l'infezione da CT (età

INTRODUZIONE: Mycoplasma hominis (MH), Ureaplasma parvum (UP) e Ureaplasma urealyticum (UU), sono membri della classe dei Mollicutes, che possono essere frequentemente ritrovati nel tratto urogenitale di soggetti sani, come comuni microrganismi commensali. Il loro eventuale ruolo patologico è piuttosto controverso e molti aspetti della loro fisio-patologia devono ancora essere chiariti. I farmaci antimicrobici usati per il trattamento dei Mollicutes comprendono i chinolonici, i macrolidi e le tetracicline, anche se, a causa dell'eccessivo e improprio uso di farmaci, stanno emergendo sempre più resistenze. Lo scopo di questo studio è stato quello di valutare la prevalenza e il profilo di resistenza di MH e UU/UP isolati da campioni genitali, in un periodo di due anni. METODI: Sono stati raccolti ed analizzati i dati relativi agli esami colturali per ureaplasmi/micoplasmi a partire da campioni urogenitali, presso la U.O. Microbiologia del Policlinico Sant’Orsola di Bologna, nel periodo gennaio 2015-dicembre 2016. La coltura, l’identificazione differenziale di Ureaplasma (UU/UP) e MH e le prove di suscettibilità antimicrobica sono state eseguite con un kit commerciale (Mycoview, Zeakon Diagnostics) che permette di testare i seguenti antimicrobici: azitromicina, roxitromicina, josamicina, minociclina, doxiciclina, ofloxacina e ciprofloxacina. RISULTATI: Nel periodo di studio, sono stati testati complessivamente 4660 campioni (di cui 84,4% provenienti da donne) ed è stata rilevata una positività per Mollicutes pari al 30,9%. E’ stata ritrovata una percentuale di positività quasi doppia nelle donne rispetto agli uomini (33,3% vs 17,8%). In generale, la positività per Mollicutes tendeva a diminuire con l’aumentare dell’età dei soggetti. Gli ureaplasmi sono risultati le specie più comunemente isolate (prevalenza del 24,2%), nel 6,5% dei casi si è osservata la crescita sia di ureaplasmi che di MH, mentre MH è stato isolato solo nel 3,9% dei campioni. I ceppi di ureaplasma hanno mostrato livelli significativi di resistenza ai chinoloni, in particolare alla ciprofloxacina (77%), mentre i ceppi di MH erano resistenti ad azitromicina e a roxitromicina in circa il 90% dei casi. In caso del contemporaneo ritrovamento di ureaplasmi e MH, il livello di resistenza agli antimicrobici era significativamente maggiore rispetto ai casi di infezioni singole. Rispetto al 2015, nel 2016 si è assistito a un aumento significativo della prevalenza delle infezioni da MH e a un incremento del tasso di resistenza ad azitromicina e roxitromicina (P

INTRODUZIONE: Negli ultimi anni si è assistito ad un notevole aumento dei fenomeni di resistenza ai farmaci carbapenemici in ceppi di Klebsiella pneumoniae (KP), per lo più mediati dalla produzione di carbapenemasi di tipo KPC. Lo studio del profilo metabolico di questi microorganismi rappresenta un approccio innovativo in grado di fornire informazioni utili per la messa a punto di nuove metodiche diagnostiche e lo sviluppo di nuovi agenti terapeutici. Lo scopo del presente lavoro è stato quello di valutare il profilo metabolico di diversi ceppi di KP, caratterizzati da specifici fenotipi di resistenza, mediante spettrometria di risonanza magnetica nucleare. METODI: Sono stati inclusi nello studio 59 ceppi di KP, di cui 27 non-produttori di carbapenemasi (16 wild-type e 11 produttori di ESBL) e 32 produttori di carbapenemasi (24 KPC, 4 MBL e 4 OXA-48). I ceppi sono stati isolati da vari campioni clinici provenienti da pazienti ricoverati presso il Policlinico Sant’Orsola-Malpighi di Bologna. Tramite micro-diluizione in brodo secondo linee guida EUCAST, sono state calcolate le minime concentrazioni inibenti (MIC) del meropenem. Dopo una crescita O/N in brodo Mueller-Hinton (MH), la sospensione batterica di ogni ceppo è stata standardizzata a 2.8 McF ed è stata centrifugata al fine di separare il pellet batterico dal surnatante. Il surnatante è stato filtrato e congelato, fino al momento dell’analisi metabolica, mentre i metaboliti intracellulari sono stati estratti processando il pellet con metanolo freddo. L’analisi metabolomica è stata condotta a partire da 700 μL di surnatante e da 100 μL di lisato intracellulare, tramite spettroscopia di risonanza magnetica nucleare (1H-NMR), con spettrometro AVANCE III (Bruker). Lo stesso protocollo è stato inoltre utilizzato per studiare il profilo metabolico di 8 ceppi di KP (4 wild-type e 4 KPC produttori) in condizioni di ‘stress’, facendo crescere i ceppi in presenza di meropenem ad una concentrazione pari a 1/8 della MIC. RISULTATI: I risultati preliminari evidenziano la presenza di differenze nel profilo metabolico fra ceppi produttori e non produttori di carbapenemasi. Per i ceppi non-carbapenemasi produttori le MIC del meropenem erano comprese tra 0.008 e 0.25 mg/L, mentre per i ceppi produttori variavano tra 0.5 e 512 mg/L. In caso di ‘stress’ indotto da concentrazioni subletali di meropenem, emerge una maggior ‘perturbazione metabolica’ nei ceppi KPC-produttori. CONCLUSIONI: Lo studio metabolomico permetterà di ampliare la conoscenza delle basi fisiologiche della cellula batterica e dei meccanismi di virulenza associati. Inoltre, l’identificazione di biomarker metabolici specifici potrebbe aprire nuovi scenari per l’approccio diagnostico e terapeutico delle infezioni da ceppi di KP produttori di carbapenemasi

INTRODUZIONE: Chlamydia trachomatis (CT) e Neisseria gonorrhoeae (NG) rappresentano gli agenti eziologici delle più comuni infezioni batteriche a trasmissione sessuale al mondo. Nelle donne, le infezioni urogenitali da CT e GC sono spesso asintomatiche e possono provocare severe complicanze come la malattia infiammatoria pelvica e infertilità. Grazie alle ottime performance in termini di sensibilità e specificità e alla elevata automazione, i test di amplificazione degli acidi nucleici (NAATs) rappresentano i test di riferimento per la diagnosi di infezione da CT e GC. Lo scopo del presente studio è stato quello di valutare la performance del test Aptima Combo 2 per la diagnosi di infezione da CT e GC in un gruppo selezionato di donne in età fertile. Inoltre è stata valutata l’adeguatezza del sistema di raccolta con tampone E-Swab (Copan) per tale sistema NAAT. METODI: Attualmente, per le donne afferenti all’ambulatorio MTS del Policlinico Sant’Orsola-Malpighi di Bologna che presentano sintomi uro-genitali o che riportano rapporti sessuali non protetti, viene effettuata una visita clinica e vengono raccolti un campione di urina e un tampone vaginale per la ricerca di CT e GC tramite una duplex real-time PCR (Versant CT/GC DNA 1.0 assay; Siemens). A partire da gennaio 2016, sono state selezionate 100 pazienti e i loro campioni (urine e tamponi vaginali) sono stati testati in parallelo con il test Aptima Combo 2 su sistema Panther (Hologic). In particolare, a partire da campioni precedentemente congelati, 2 mL di urine e 100 μL del secreto vaginale raccolto in E-Swab sono stati trasferiti nei sistemi di raccolta dedicati per i test Aptima. Infine, è stato eseguito un confronto fra i due sistemi NAAT, stratificato per il tipo di campione analizzato e per singolo analita. RISULTATI: Nel gruppo di donne selezionate sono state incluse 25 pazienti positive per CT, 4 per GC, con un caso di co-infezione da entrambi i microorganismi. Con il test NAAT utilizzato di routine, tutti i casi di positività sono stati riscontrati contemporaneamente sia sul campione di urine che sul tampone vaginale, con l’eccezione di 3 infezioni da CT e una da GC, riscontrate solo su uno dei due campioni. Dal confronto con il test Aptima, è stata rilevata un’ottima concordanza, con valori di k di Cohen variabili tra 0.85 e 1.0 a seconda dell’analita e del materiale preso in considerazione. CONCLUSIONI: Il nostro studio conferma le ottime performance diagnostiche dei test Aptima Combo 2 e VERSANT CT/GC DNA 1.0 Assay, entrambi altamente automatizzati e di facile impego per gli utilizzatori. Da questo studio si è visto che è possibile analizzare con Aptima Combo 2 su sistema Panther anche campioni raccolti in E-Swab, potendo così procedere contemporaneamente a diagnosi molecolare e colturale nei casi di sospette infezioni gonococciche

INTRODUZIONE: Chlamydia trachomatis e Neisseria gonorroheae sono i principali patogeni ad eziologia batterica coinvolti nelle infezioni sessualmente trasmesse. Sebbene siano microorganismi dalle caratteristiche molto diverse, portano a manifestazioni cliniche simili e spesso confondenti. Negli ultimi anni, per la diagnosi di laboratorio di tali batteri, si è ampiamente diffuso l’uso di metodiche di amplificazione degli acidi nucleici, caratterizzate da sensibilità e specificità maggiori rispetto alle metodiche tradizionali di coltura e/o identificazione di antigeni. In particolare, si è affermato l’uso di test multiplex, che permettono di determinare parallelamente più patogeni a partire dallo stesso campione biologico. Lo scopo di questo studio è stato quello di valutare le performance del BD ProbeTec CT/GC Qx DNA Amplified assay su piattaforma BD Viper LT per la diagnosi delle infezioni da clamidia e gonococco, in comparazione ai dati ottenuti con il test VERSANT CT/GC 1.0 (Real-time PCR) (Siemens). METODI: Sono stati analizzati, in maniera retrospettiva, 352 campioni progressivi pervenuti al laboratorio di Microbiologia del Policlinico Sant’Orsola-Malpighi di Bologna per la ricerca di acidi nucleici di C. trachomatis e N. gonorrhoeae. In totale, 232 campioni erano stati raccolti da soggetti recatisi in poliambulatori presenti sul territorio comunale e provinciale di Bologna (26 tamponi e 141 urine), mentre 120 urine e 65 tamponi provenivano da pazienti dell’ambulatorio di Malattie a Trasmissione Sessuale (MTS) del Policlinico. I campioni sono stati testati con il kit VERSANT CT/GC 1.0, attualmente utilizzato nella routine diagnostica e successivamente con il BD ProbeTec CT/GC Qx DNA Amplified assay su piattaforma BD Viper LT. Le due metodiche si avvalgono di sistemi altamente automatizzati per le fasi di estrazione, allestimento piastre e rivelazione. RISULTATI: Le due metodiche hanno mostrato ottimi valori di concordanza tra loro; in particolare, la concordanza è stata del 98.4% per la determinazione delle infezioni da clamidia sulle urine e del 98.9% sui tamponi. Invece, la concordanza per le infezioni da gonococco è stata del 100% sulle urine e del 98.9% sui tamponi. La prevalenza di casi da N. gonorrhoeae nella popolazione afferente all’ambulatorio MTS è risultata del 4%, mentre è stata pari allo 0.8% nella popolazione a minor rischio di infezioni sessualmente trasmesse. Infine, la prevalenza di C. trachomatis nella popolazione a più alto rischio è risultata pari al 9.1%, mentre nella la popolazione generale è stata del 2.4%. CONCLUSIONI: Il nostro studio conferma le ottime performance diagnostiche dei test BD ProbeTec CT/GC Qx DNA Amplified assay su piattaforma BD Viper LT e VERSANT CT/GC DNA 1.0 Assay, entrambi altamente automatizzati e di facile impego per gli utilizzatori.

INTRODUZIONE: Il microbiota vaginale comprende numerose specie batteriche, fra cui microorganismi della classe dei Mollicutes. I più importanti Mollicutes che si ritrovano nel tratto genitale femminile sono rappresentati da Ureaplasma urealyticum (UU), Ureaplasma parvum (UP), Mycoplasma hominis (MH) e Mycoplasma genitalium (MG). Nonostante numerosi studi abbiano indagato il loro ruolo fisio-patologico nel microambiente vaginale, molti aspetti rimangono ancora da chiarire. L’obiettivo del presente studio è stato quello di valutare la presenza di micoplasmi e ureaplasmi nel microbiota vaginale in diverse condizioni cliniche: donne ‘sane’, donne con vulvo-vaginite da Candida, donne con infezione da Chlamydia trachomatis (CT) e donne con vaginosi batterica. METODI: Tramite saggi di PCR real-time quantitativi, sono stati valutati sia la presenza che il rispettivo ‘bacterial load’ dei principali Mollicutes (UU, UP, MH, MG) nel microbiota vaginale di donne caucasiche in età riproduttiva, afferenti all’ambulatorio MTS del Policlinico Sant’Orsola-Malpighi di Bologna. I criteri di inclusione comprendevano la presenza di sintomi uro-genitali o la presenza di fattori di rischio per infezioni a trasmissione sessuale. La recente assunzione di antibiotici, la gravidanza, un BMI > 30 e l’uso di farmaci anti-concezionali rappresentavano i principali criteri di esclusione. Per ogni paziente, dopo la visita clinica, è stato raccolto un tampone vaginale per la diagnosi molecolare di infezione da CT (Versant CT/GC DNA 1.0; Siemens) e per l’esecuzione di indagini microscopiche e colturali. In base ai risultati ottenuti, le donne sono state suddivise in quattro gruppi: 29 donne ‘sane’ (assenza di sintomi urogenitali e negatività alle principali indagini microbiologiche), 25 donne con infezione da C. trachomatis (positività per CT al test Versant CT/GC DNA 1.0 Assay su tampone vaginale), 23 donne con vulvo-vaginite da Candida (presenza di lieviti all’esame microscopico e/o colturale) e 21 donne con vaginosi batterica (presenza di almeno 3 dei 4 criteri di Amsel e score di Nugent > 7). RISULTATI: Complessivamente, le percentuali di positività per i diversi Mollicutes nella coorte delle 98 donne sono state le seguenti: 67.3% per UP, 14.3% per MH, 9.2% per UU e 3.1% per MG. Con l’eccezione di un caso, non è stata mai individuata una contemporanea positività per UU e UP. MH ha mostrato una significativa maggior prevalenza e più elevati ‘bacterial loads’ nelle donne con vaginosi batterica rispetto agli altri gruppi (P < 0.05). Sia dal punto di vista qualitativo che quantitativo, le donne con infezione da Candida e da CT hanno mostrato un pattern vaginale per Mollicutes simile a quello delle donne sane. CONCLUSIONI: I Mollicutes, in particolare UP, possono essere frequentemente ritrovati nel microbiota vaginale di donne ‘sane’. Sebbene non sempre presente, MH è fortemente associato alla condizione di vaginosi batterica