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Il passaggio del Virus dell'Influenza Aviaria (AIV) dal serbatoio naturale rappresentato dalle specie aviarie selvatiche alle specie aviarie domestiche, può indurre cambiamenti aminoacidici a livello delle glicoproteine di superficie e delle proteine interne strutturali. Lo studio, di cui si presentano alcuni dati preliminari, ha l'obiettivo di identificare le modificazioni nucleotidiche a livello dei geni virali interni PA, PB1 e PB2 a seguito di trasmissione sperimentale di un virus isolato da anatra selvatica in due diverse specie aviarie domestiche, tacchino e quaglia. A tale scopo è stato utilizzato il virus A/Mall/It/33/01 (A/H7N3), identificato quale precursore diretto dei virus A/H7N3 a bassa patogenicità circolati negli allevamenti italiani dal 2002 al 2004. Le principali modificazioni amminoacidiche tra virus A/H7N3 isolati nel corso dell'epizoozia nel pollame ed il virus isolato dall'anatra, sono state identificate come sostituzioni di due amminoacidi nell'emoagglutinina, delezione di 23 amminoacidi nello stalk della neuraminidasi ed un numero limitato di cambiamenti a carico delle proteine strutturali interne. Metodi. Per lo studio molecolare sono stati selezionati 4 isolati virali da 10 passaggi (ps.) seriali del virus A/H7N3 effettuati rispettivamente in tacchino e quaglia ed indicati Tk-p.4 (4° ps. in tacchino), Tk-p.10 (10° ps. in tacchino), Qu-p.6 (6° ps. in quaglia), Qup. 10 (10° ps. in quaglia). Per ciascuno dei passaggi indicati sono state ottenute le sequenze dei geni interni PA (bp.1-2233), PB1 (bp.1-2341) e PB2 (bp.1-2341). L'assemblaggio e l'allineamento con sequenze di virus aviari, sono stati effettuati col software DNASTAR-Lasergene. Risultati e conclusioni. L'analisi molecolare dei geni interni PA, PB1 e PB2, relativi ad alcuni passaggi in vivo del virus A/Mall/It/33/01 ed il confronto di analoghe sequenze ottenute dal precursore selvatico, hanno evidenziato mutazioni sinonime e non sinonime nei geni in studio rispetto al ceppo originale; inoltre alcune sostituzioni amminoacidiche distinguono gli isolati ottenuti in quaglia rispetto a quelli replicati in tacchino. I risultati 55 dello studio contribuiscono alla identificazione dei cambiamenti molecolari che possono avere un ruolo importante nella trasmissione interspecie degli AIV dalle specie aviarie selvatiche a quelle domestiche.

Tra gli uccelli acquatici gli Anseriformi rappresentano il principale serbatoio dei virus influenzali di tipo A e possono albergare la maggior parte dei sottotipi virali caratterizzati sino ad oggi da 16 emoagglutinine e 9 neuroaminidasi diverse. Occasionalmente virus influenzali aviari possono essere trasmessi ad altre specie, compresi i volatili domestici ed i mammiferi. Scopo del lavoro è stato quello di valutare sia la circolazione di virus influenzali tipo A in Anatidi selvatici sia i patterns di prevalenza correlati a stagionalità, sesso e classi di età degli animali campionati all’interno dell’Oasi WWF “Laguna di Orbetello” (GR) nel periodo ottobre 2005/settembre 2006. L’RNA virale è stato estratto da 146 tamponi cloacali prelevati da anatre di superficie catturate con gabbie ad invito. Mediante one-step RT-PCR diretta ad amplificare un tratto specifico del gene M, sono stati identificati i campioni contenenti virus influenzali. Tali campioni sono stati quindi inoculati, per l’isolamento virale, nella cavità allantoidea di uova embrionate di pollo all’undicesimo giorno di incubazione. I liquidi allantoidei ottenuti sono stati analizzati in prove di emoagglutinazione ed ELISA diretta verso la nucleoproteina virale e sono stati considerati positivi i liquidi allantoidei emoagglutinanti positivi ad entrambe queste metodiche. I test del Chi-quadrato ed Esatto di Fisher sono stati utilizzati al fine di evidenziare differenze statisticamente significative in funzione dell’età e sesso dei soggetti campionati e di tre periodi di campionamento (sovrapponibili rispettivamente alla migrazione di discesa, allo svernamento ed al periodo post-riproduttivo). La prevalenza totale è risultata del 26% in RT-PCR e del 9,6% nelle prove di isolamento su uova embrionate. Durante l’intero anno di campionamento nessuna differenza significativa è stata riscontrata tra le classi di età, di sesso e tra i diversi periodi di campionamento mentre dal confronto degli isolamenti ottenuti in adulti e giovani, durante la stagione di svernamento (gennaio/marzo 2006) emerge una differenza significativa (P

Pheasant coronavirus (PhCoV) has been isolated in the UK and Italy in the last few decades. A serological survey was carried out in the Emilia-Romagna Region (Northern Italy) in order to establish the occurrence and diffusion of coronavirus infection in farm-bred and free-living pheasants. Seven hundred and four sera were obtained during 1998 from 16 game farms. 275 sera were collected from 1995 to 2002 from free-living pheasants, belonging to a natural population: these were classified as “wild” and “restocked” (a few reared birds released in the study area). A blocking ELISA (Svanovir) test was employed for the detection of cross reactive antibodies anti-fowl coronavirus (Infectious Bronchitis Virus) in sera. Seropositive animals were detected in 5 out 16 game farms examined, while only two free-living pheasants (a restocked bird and an unclassified one) were seropositive. These data confirm that the infection was present in Italian-reared pheasants, but the free-living sampled population appeared to be free from the infection. The authors emphasise the risk of spreading the infection to wild bird populations by game restocking activities.

La diffusione dei focolai di influenza aviaria A/H5N1 e gli episodi di mortalità nell’uomo registrati nei paesi del Sud-Est asiatico, hanno determinato un crescente allarme nella comunità scientifica e nell’opinione pubblica a causa del potenziale pandemico rappresentato dalla evoluzione del virus. La tempestiva identificazione del virus nelle specie aviarie domestiche e selvatiche, attraverso l’impiego di strumenti diagnostici altamente sensibili, specifici e di rapida esecuzione, è essenziale per l’adozione rapida ed efficace delle misure sanitarie di controllo. La real-time RT-PCR, basata sull’impiego di sonde fluorescenti, rappresenta lo strumento diagnostico in grado di garantire l’identificazione dei virus influenzali, sia umani che aviari, presentando notevoli vantaggi in termini di rapidità, sensibilità e specificità rispetto alle metodiche classiche di isolamento del virus e alle altre metodiche molecolari. Nell’ottica di un continuo miglioramento dell’iter diagnostico per l’identificazione del virus dell’influenza aviaria, è stato sviluppato un saggio di real-time RT-PCR, impiegando una sonda fluorescente Minor Groove Binder, che presenta una serie di innovazioni rispetto alle piattaforme per real-time sinora disponibili per la diagnostica virologica. Il sistema diagnostico è stato calibrato e ottimizzato in termini di specificità, utilizzando un panel di virus influenzali aviari, di origine suina, equina, oltre che umana, dimostrando inoltre una sensibilità tale da renderlo applicabile per lo screening di campioni biologici prelevati dalle specie aviarie domestiche e selvatiche.