1. ������������������ ������ �������������������� ���������������� ������ ���������������������� ������������������ RPS5 ���� ������ in vitro �������������������������� ������ ���������������� MEL ������ �� ������������ �������������� �������������� ������ ������ �������������������������������� ����������������
- Subjects
RPS5 ,hemic and lymphatic diseases ,Ribosomopathies ,������������������������������ ,MEL - Abstract
Over the last few years, there has been a tremendous research interest in the extra-ribosomal functions of Ribosomal Proteins (RPs). It seems that some of these proteins play an important role in normal heamatopoiesis and especially at various stages of erythropoiesis. In particular, after the discovery that certain RP genes, are correlated with pathophysiologic disorders or impairment-failure of erythropoiesis, the term Ribosomopathies arose to describe such illnesses. Among theses, Diamond Blackfan Anemia (DBA) is considered as a study model, since more than 50% of DBA patients, exhibit mutations in at least one gene that encodes RPs (RPS19, RP24, RPS17, RPL35A, RPL5, RPL11). Moreover, del5q syndrome, a type of Myelodysplastic Syndrome (MDS), is thought to be the result of the loss of one out the two alleles of the gene that encodes RPS14. Previous work from our laboratory has shown that ribosomal protein S5 (RPS5) is implicated in the in vitro differentiation of murine erythroleukemia cells (MEL). The present Thesis aimed for: a) The correlation of the gene expression profiling of RPS5 with the ability of MELs to differentiate and commit to erythroid maturation upon their exposure to chemical inducers in culture and b) the assessment of the potential clinical relevance and impact of the gene expression of RPS5 in patients suffering from erythropoiesis disorders. Particularly, we studied the ability of MEL cells to differentiate in vitro in conditions where the RPS5 gene, has been modulated experimentally. The study has shown: (1) MEL-C14 cells (that overexpress RPS5) have exhibited a delay in the onset of differentiation after being incubated with a chemical inducer. This finding is in accordance with previously published results from our laboratory. (2) MEL-SiRPS5 cells (where expression of RPS5 has been knockdown with the use of RNA interference) have shown inability to differentiate to erythroid maturation upon exposure to chemical inducers in vitro. MEL-SiRPS5 cells, also presented with different morphological and phenotypical attributes (larger diameter, cell degradation) as compared to control cells.(3) The expression levels of the oncogene c-myc, were considerably higher in MEL-C14 cells, compared to parental cultures.Interestingly, such levels were maintained relatively high even 96 hr after the treatment with HMBA.(4) Last but not least, RT-PCR analysis of RNA samples isolated from the peripheral blood of two patients with Myelodysplastic/Myeloproliferative syndrome (MDS/MPS) has indicated low expression levels of RPS5 and c-myc genes compared to patients with MDS or DBA. Overall, differential expression of RPS5, seems to abrogate decision of MEL cells leading to a delay and an inability to initiate their erythroid maturation program, when exposed in culture to a chemical inducer of differentiation. It has also been observed, that changes in the expression level of RPS5, can lead to a modulation in the gene expression of c-myc oncogene and also to traceable distinct cellular morphological alterations. The potential importance of these changes in the pathophysiology of ribosomopathies, strengthens the need of further investigation of RPS5 role in erythropoiesis and by uncovering the molecular mechanisms of its extra-ribosomal functions., ���� ������������������ ������������ �������������� ������������ �������������������� �������������������� ������ ���� ������������ ������ ������-���������������������� ���������������������� ������ ���������������������� ������������������ (RPs). ������������������������ �������� ������������ ������ ������������������ ������ ���������� ������ ������������������ ���������������������������� ������������������ �������� �������� ���� ���������������������� �������������������� ������ ������ ������������ �������� ���� ������������ ������ ��������������������������. ����������������, �������� ������ ������������������ ������ �������������������������� ���������������������� ���� �������������� RPs, �������������������������� ���� �������������������������������� �������������������� �� ���������� ������ ���� �������������������� ������ ��������������������������, ���������������� �� �������� ������������������������������ ������ ���� �������������������������� �������� ������ ���������� ������ ������������������. ������������������, �� �������������� Diamond Blackfan (DBA), ������������������ �������������� ���� �������������� ������ ������ ������������������ ���������� ���������� ���� 50% ������ ��������������, ������������������ ���������������������� ���� ���������������������� ������ �������������� ������ ���������������������� ���������������������� ������������������ (RPS19, RPL35A, RPL5, RPL11). ����������������������, ������ ���� ���������������� del5q, �������� ���������� ���������������������������������� ������������������ (������), ���������������� ���� ������������������ �������� �������������� ������ �������� ���� ������ ������ ���������������� ������ ���������������� ������ ���������������������� ������ RPS14. ���� ���������������������� �������������� ������ �������� ���������� ������ �������������������� ������, �������� �������������� ������ �� �������������������� ���������������� S5 (RPS5), �������������������� �������� ���������������� ������ ������������������������ ���������������������������� ������ MEL ���������������� �������� ������ ������������ �������� ���� ���������������� ������������������. �� ������������������������ ������������������������ ���������������������� �������������� ���������������� ���������������� ���������� ������ ���������������������� ������ �������� ���� ����������: ��) ���� ������������������ ������ �������������������� ���������������� ������ RPS5, ���� ������ in vitro �������������������������� ������ ���������������� MEL ������ ������ ������������������ ���� ���������������� ������������������ ������ ���� ���������������� �������� ������ ���������������� ������ ������������ ������������ �������������������������������������� ������ ��) ���� �������������������� ������ �������������� ���������������� ���������������� ������ ���������������� �������������������� ���������������� ������ RPS5 ���� �������������� ���������������� �������������� ���� �������������������� ������ ����������������������������������������. ������ ������������������������ �������������������� �� ������������������ ������ MEL ���������������� ���� �������������������������������� ���� ���������������� ���������������������� �� ������������������ ���������������� ������ ���������������� ������ RPS5 ���� ���������� ���� ���� ������������ (parental) ��������������. H ���������� ������ ���������������� �������������������� ������������ ������ ������������������ ���� ���� ���������������� ���������������������� ������ parental ���������������� MEL ������ ������ ������������ ������ �������������������� ���������������� ������ RPS5, ���������� ������ �� RT-PCR �������������� ������������������ RNA ������ ������������������������ ������ ����������������, ������������ ������: (1) ���� �������������� MEL C14 (������ �������������������������� ������ RPS5), ���������������������� ������ ������������ ���������������������������� �������� ������ ������������ �������� �������� ���������������������� ���� ���� ������������ ���������������� HMBA. (2) ���� �������������� MEL-SiRPS5 (�������� ���� ���������������������� ������ RPS5 �������� �������������������� ���� ���� ���������� ������ ���������������� RNA interference) ������������������ ���� ������������������������������ ������ �������������������� ������������������������ ������ ������������������������ ���������������� (�������������������� ����������������, ������������ ������������������������������) ���� ���������������� ���� ������������������������ ����������������. (3) ���� �������������� ������ ������������������������ c-myc ���������� ������������������ ������ �������������� MEL-C14 ������������������������ ���� ���� �������������������� ������ parental ����������������. (4) ����������, �������� RT-PCR �������������� ������������������ RNA ������ ������������������������ ������ �������������������� �������� 2 �������������� ���� ��������������������������������/ ���������������������������������� ���������������� (������/������) ������������������������ ���������������� �������������� ������ ���������������� RPS5 ������ c-myc ���� ���������������� ���� ���������������� ���� ������ �� DBA.����������������������������, ���������������� ������ �� ���������������� ������ �������������� ������ RPS5, ������������ ���� ���������������������� �� ���������������� ���������� ���������������� ������ �������������������������� ������ ���������������� MEL in vitro. ������������������������ ������������ ������ ���� ������������������ ������ �������������� ���������������� ������ RPS5, �������������� ������ ���� ���������������� ������ �������������������� ���������������� ������ ������������������������ c-myc ������ MEL �������������� �������� ������ ���� ������������������������ ������������������������ ���������������� ������ ����������������. �� ������������ �������������� ���������� ������ ������������������ �������� ���������������������������� �������������������� ������ ���������������������� ������������������������ ���� ������������������������������, ���������������� ������ ������������������ �������������������� ������ ���������� ������ RPS5 �������� �������������������������������������� ������ ������ ������������������ ������ ���������������� �������������������� ������ ������-���������������������� ���������������������� ������.
- Published
- 2011
- Full Text
- View/download PDF