Lang, Siegmund, Brockhoff, Gero, Gueorguiev, Boyko, Huber, Michaela, Zellner, Johannes, Angele, Peter, Prantl, Lukas, Nerlich, Michael, Gehmert, Sebastian, and Loibl, Markus
Zusammenfassung Hintergrund Ziel dieser Arbeit waren die Charakterisierung und Optimierung eines kommerziell verfügbaren PRP-Kits. Zusätzlich wurde der Einfluss von leukozytenarmen PRP auf die Proliferation von mesenchymalen Stammzellen aus Fettgewebe (ASCs) untersucht. Material und Methoden Autologes konditioniertes Plasma (ACP) wurde mit drei verschiedenen Zentrifugationseinstellungen von 30 männlichen Probanden (Alter 21-50 Jahre) hergestellt und anhand des Blutbilds und eines Wachstumsfaktorprofils charakterisiert. In einem autologen Zellkulturmodell mit ASCs von vier Patienten wurde der Einfluss von ACP als Medienzusatz auf den Zellzyklus nach 48 Stunden Inkubation mittels Durchflusszytometrie analysiert. Ergebnisse Unabhängig von den Zentrifugationseinstellungen wurden Thrombozyten signifikant im Vergleich zu venösem Blut angereichert (P < 0,01), Erythrozyten und Leukozyten wurden signifikant reduziert (P < 0,01). Durch Deaktivierung der Bremse bei gleicher Geschwindigkeit der Zentrifuge wurde die Anzahl der weißen Blutkörperchen im Vergleich zur Standardeinstellung weiter reduziert (P < 0,05). Die Zellzyklusanalyse zeigte einen höheren prozentualen Anteil von Zellen in der S-Phase unter Einwirkung von 20% ACP im Vergleich zu 10% ACP und 20% Fetales Rinderserum (FCS). Schlussfolgerungen Bereits geringfügige Einstellungsänderungen der Zentrifuge bei der ACP-Herstellung beeinflussen die Zusammensetzung des Produkts. Durch Deaktivierung der Bremse bei gleicher Geschwindigkeit der Zentrifuge konnte eine weitere Reduktion der weißen Blutkörperchen erreicht werden. Es existiert ein dosisabhängiger, proliferationsfördernder Effekt von leukozyten-armen ACP auf ASCs. Summary Background Clinical application of platelet-rich plasma (PRP) and stem cells has become more and more important in regenerative medicine during the last decade. This study aimed to characterize and optimize a commercially available PRP preparation kit. Moreover, the objective was to evaluate the effect of leukocyte-reduced PRP on the proliferation of adipose tissue derived mesenchymal stem cells (ASCs). Materials and Methods Autologous conditioned plasma (ACP) was obtained by using three different centrifugation settings from 30 male donors (aged 21-50 years) and has been characterized based on a hemogram and a growthfactor profile. The influence of ACP as medium supplement on to ASCs of 4 patients has been analysed in an autologous cell culture setting with the use of flow cytometry after 48 hours of incubation. Results Thrombocytes in ACP were with significantly higher amount in comparison to venous blood (P < 0.01), whereas erythrocytes, and white blood cells (WBC) were significantly reduced (P < 0.01), independent of centrifugation settings. Disabling the brake during centrifugation further reduced significantly the number of WBCs in comparison to the standard settings (P < 0.05). Cell cycle analysis demonstrated a higher percentage of cells in the S-phase in the presence of 20% ACP in comparison to 10% ACP and 20% Fetal calf serum (FCS), which advocates the proliferation stimulation of ASCs. Conclusion Minimal changes in the centrifugation process during ACP preparation significantly influence the composition of the product. Deactivation of the brake during centrifugation further reduced the WBC count. A dose-dependent stimulation of proliferation of leukocyte-reduced PRP on ASCs may be suspected. [ABSTRACT FROM AUTHOR]