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Il apparaît au grand jour que de nombreuses substances telles que les perturbateurs endocriniens sont introduites quotidiennement dans l’environnement. Ces molécules organiques bien souvent d’origine anthropique peuvent être employées dans d’innombrables circonstances : pharmaceutique, médecine, agriculture, cosmétique, agroalimentaire pour citer quelques exemples. Parmi ce large panel de composés, se trouvent les hormones stéroïdiennes. Un certain nombre de maladies et de modifications aussi bien comportementales que physiologiques tant chez l’humain que sur la faune aquatique sont attribuées à l’usage et aux rejets chroniques de ces perturbateurs endocriniens. Il est donc indispensable de développer une approche portée sur la prévention et l’étude des niveaux de contamination selon un seul maître-mot : précaution. Dans ce contexte, ce projet de doctorat visait à développer de nouvelles méthodes de détection des hormones stéroïdiennes à niveau ultra-trace dans diverses matrices environnementales. La sélection des composés ciblés dans ce projet s’est basée sur la nouvelle liste de perturbateurs endocriniens prioritaires de l’agence de protection de l’environnement des États-Unis (US EPA), récemment élargie à d’autres classes de substances dont le bisphénol A. Les méthodes analytiques ont été développées non seulement dans l’eau du robinet (EPA 539), mais également dans d’autres matrices plus complexes (eaux de surface, eaux usées). Commune à l’ensemble des procédures testées, la phase de validation analytique a permis de vérifier la conformité avec les exigences de performance de l’EPA. La première méthode mise au point repose sur une pré-concentration rapide de l’échantillon par extraction sur phase solide en ligne (on-line SPE) couplée à la chromatographie liquide à ultra-haute performance (UHPLC) et à la spectrométrie de masse en tandem (MS/MS). La méthode validée présente de nombreux avantages—reproductibilité, automatisation, temps d’analyse minimal, logistique réduite et surtout des limites de détection de 0,10 ng·L-1 à 7,5 ng·L-1 selon les différentes matrices étudiées. Cette méthode apparaît particulièrement adaptée pour la détection des hormones dans les eaux usées, en lien avec les plus fortes concentrations attendues. Cependant, il est apparu pertinent d’améliorer encore la sensibilité des méthodes dans certains contextes, notamment dans le cadre des iv analyses d’eau de surface, compte tenu des critères de qualité applicables. La principale modification fut apportée au niveau de l’extraction et de la purification des échantillons. Amendée à la faveur des différentes matrices, l’étape d’extraction par SPE hors-ligne automatisée (off-line SPE) a permis d’atteindre des limites de détection adéquates variant de 0,010 ng·L-1 à 6,0 ng·L-1 dépendamment de la matrice et du composé. Un aspect original de cette étude a consisté à étudier de façon plus systématique les facteurs de robustesse de la méthode lorsque soumise à certaines variations, tant au niveau de l’analyse instrumentale (phases mobiles, volume d’injection) que des protocoles (emploi de différents agents de conservation, par exemple). L’analyse de la phase dissoute ne saurait être suffisante pour comprendre le devenir environnemental des perturbateurs endocriniens dans les milieux aquatiques, notamment leur distribution. Dans cette optique, la phase particulaire en suspension dans la colonne d’eau (SPM) fut également étudiée après optimisation et validation de la méthode d’extraction. Les limites de détection obtenues étaient comprises entre 0,10 ng/g et 3,0 ng/g, un degré de performance adéquat au regard des teneurs attendues dans l’environnement. De telles méthodes ne trouveraient pas de fondement si elles n’étaient pas employées à l’analyse d’échantillons réels. C’est pourquoi, pour chaque méthode développée, une série d’échantillons d’eau a été analysée pour toutes les matrices étudiées. La quantification des hormones stéroïdiennes a permis de rendre compte des niveaux de concentrations retrouvés dans l’environnement. Une étude saisonnière d’un cours d’eau a également été réalisée durant quatre saisons (hiver, printemps, été et automne) afin d’évaluer les éventuelles variations saisonnières en termes d’occurrence et de concentration., It is now admitted that many substances such as endocrine disruptors are released daily into the environment. This process can be of natural origin but is predominantly linked to human activity. Endocrine disruptors originate from numerous fields: medicine, agriculture, cosmetics, and the food industry, to name a few. Steroid hormones belong to this wide array of compounds. A significant number of human diseases and behavioral and physiological changes in both humans and aquatic life have been attributed to the use and chronic release of these endocrine disruptors. The effects of such a cocktail of substances are difficult to understand and evaluate. To date, the synergistic mechanisms or the potential cumulative effects are not well known. It remains essential to develop an approach focused on the prevention and the study of contamination levels with one key word in mind: precaution. In this context and aiming to detect steroid hormones in tap water, surface water and wastewater at trace levels, new analytical methods have been developed within the framework of this project. The first method developed is based on high performance liquid chromatography (HPLC) coupled with tandem mass spectrometry (MS / MS). LC-MS/MS hyphenation involved using an electrospray ionization source at atmospheric pressure with heating element (H-ESI). Pre-concentration and purification of the samples were executed by on-line solid phase extraction (on-line SPE). The validated method presents several advantages: reproducibility, automation, minimum analysis time, reduced logistics and above all, detection limits ranging from 0.10 ng·L-1 to 7.5 ng·L-1 considering the different matrices studied. The second approach proposed herein is based on the development of an analysis method allowing lower detection limits compared to the previous workflow. The same detection method was used, but a modification was made to the sample extraction and purification. Allowing for greater pre-concentration than online SPE, manual SPE (off-line SPE) was used in this method. Depending on the particular matrix, the extraction step allowed to reach adequate detection limits for the analysis of environmental aqueous samples: 0.010 ng·L-1 up vi to 6.0 ng·L-1 from the matrix-free sample to the most complex matrices. The use of an automated system also made it possible to make the extraction step robust and reproducible. The analysis of the dissolved phase of water samples cannot be sufficient to understand and comprehensively assess the contamination of aquatic environments. The particulate phase in suspension in the water column (SPM) was also studied. The extraction method was optimized and validated. Coupled with the previous method of analysis, it was possible to quantify the steroid hormones attached to suspended materials. The obtained detection limits ranged from 0.10 ng/g to 3.0 ng/g dry weight. For each developed method, dissolved phase samples were analyzed for all the studied matrices (tap water, surface water and wastewater). Quantification of steroid hormones allowed the comprehension of concentration levels found in the environment under usual discharge conditions in multiples matrices. A seasonal study of a watercourse was also carried out during the winter, spring, summer and fall seasons to observe possible seasonal variations in terms of occurrence and concentration.

Staphylococcal food poisoning outbreaks (SFPO) are caused by the ingestion of food contaminated with staphylococcal enterotoxins (SE), produced by certain strains of coagulase-positive staphylococci. To date, 35 SE are described in the literature (SEA to SEl33) but only five types, SEA to SEE, are routinely detectable via the EN ISO 19020 standard or ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) techniques because specific antibodies are not available for all SE. During an SFPO, it regularly happens that no SEA-SEE type SE is found even though a typical symptomatology of staphylococcal poisoning has been identified. In addition, epidemiological data highlight the frequent presence of other seg, seh and sei type genes in S. aureus strains derived from SFPO. It is therefore necessary to develop analytical and confirmatory tools targeting a wide range of SE. Mass spectrometry (MS) provides a high specificity in complex media and ability for multiplex analyses. Moreover, it does not necessarily requires the production of specific antibodies for each SE (except for particular formats, such as immunocapture). Thus, MS appears to be a relevant alternative, particularly for the detection of known or recently described SE for which no specific antibodies exist.During this doctoral thesis, a very sensitive MS method was developed first for the quantification and characterization of the first eight SE (SEA-SEE and SEG-SEI) in food matrix. This method uses an extraction step of SE by immunocapture (commercial or CEA antibodies) followed by a trypsin digestion (bottom-up). The specificity of our method allowed the detection of all eight SE in food matrices. This method was optimized to reach a limit of detection between 0.1 and 0.5 ng/g. These concentrations correspond to the concentrations found during SFPO episodes. This MS method was successfully applied to a variety of SFPO matrices, giving results consistent with available ELISA and PCR (Polymerase Chain Reaction) tests. In the meantime, in order to obtain more information on variants and their sequence, a top-down analysis (intact protein) was developed. The top-down analysis allows a global analysis of the sequence of the targeted SE as opposed to the bottom-up mode which only detects certain peptides. An optimization of MS parameters and data processing was performed and an internal standard was selected. This allowed us to obtain an absolute quantification method for SEA with a sensitivity close to the bottom-up technique. To illustrate the interest of this new method, it was applied to 13 SEA variant-producing strains, in parallel with genomic analyses. Finally, we decided to extend the quantification beyond the first eight SE. Thus, we optimized a sample preparation method that does not use antibodies. The method was applied to SE produced by S. aureus strains in culture medium. We were able to identify 24 SE types and more than 162 variants for the first time. Peptides specific of each type and common to all variants were identified. Subsequently, a "label free" quantification method was proposed, based on the "Hi3" protocol, which consists in using the three most intense peptides of each SE for the quantification. By using this method, we were able to identify the ES produced in high quantity and to establish their kinetics of production by S. aureus in culture medium, giving new indications on the priority SE during SFPO., Les toxi-infections alimentaires collectives (TIAC) à staphylocoques sont causées par l'ingestion d’aliments contaminés par des entérotoxines staphylococciques (ES), produites par certaines souches de staphylocoques à coagulase positive. À ce jour, 35 ES sont décrites dans la littérature (SEA à SEl33) mais seules cinq types, SEA à SEE, sont détectables en routine via la norme EN ISO 19020 ou via des techniques ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) car des anticorps spécifiques ne sont pas disponibles pour l’ensemble des ES. Lors d’épisodes de TIAC, il arrive régulièrement qu’aucune ES de type SEA-SEE ne soit retrouvée alors qu’une symptomatologie typique d’intoxication à staphylocoques a été identifiée. De plus, les données épidémiologiques soulignent la présence fréquente d’autres gènes types seg, seh et sei dans des souches de S. aureus issus de TIAC. Il est donc impératif de disposer d’outils d’analyse et de confirmation capables de viser une large gamme d’ES. La spectrométrie de masse (SM) apporte une grande spécificité d’analyse au sein de milieux complexes et une capacité élevée de multiplexage des analyses. D’autre part, elle ne nécessite pas obligatoirement la production d’anticorps spécifiques de chaque ES (sauf formats particuliers, type immunocapture). Ainsi, la SM apparaît comme une alternative pertinente, particulièrement pour la détection des ES connues ou récemment décrites pour lesquelles il n’existe pas d’anticorps spécifiques. Lors de cette thèse, une méthode par SM a tout d’abord été développée pour la quantification et la caractérisation des huit premières ES (SEA-SEE et SEG-SEI) en matrice alimentaire. Cette méthode utilise l’approche analytique la plus sensible d’après la littérature, c.a.d. une extraction des ES par immunocapture (anticorps commerciaux ou produits au CEA) suivie d’une digestion trypsique (bottom-up). La spécificité de notre méthode a permis de détecter les huit ES dans des matrices alimentaires, et nous avons pu atteindre une limite de détection comprise entre 0,1 et 0,5 ng/g. Ces concentrations correspondent aux concentrations retrouvées lors des investigations d’épisodes de TIACs. Cette méthode LCMS a été appliquée avec succès à des matrices variées issues de TIACs, donnant des résultats concordants avec les tests ELISA disponibles et les analyses PCR (Polymerase Chain Reaction). En parallèle, et de manière à mieux discriminer les variants de séquence, une quantification par approche top-down (analyse de protéine intacte) a été développée. L’analyse top-down permet une analyse globale de la séquence de l’ES ciblée à l’inverse du mode bottom up qui ne détecte que certains peptides. Une optimisation des paramètres SM et du traitement des données a été réalisée et un étalon interne a été sélectionné. Cela nous a permis d’obtenir, pour la SEA, une méthode de quantification absolue avec une sensibilité proche de la technique bottom-up. La méthode a finalement été confrontée à des analyses génomiques et ELISA lors de l’analyse de 13 souches productrices de variants de SEA. Enfin, nous avons souhaité élargir la quantification des ES au-delà des huit premières. Ainsi nous avons optimisé une méthode de préparation de l’échantillon sans anticorps. La méthode a été appliquée à des ES produites par des souches de S. aureus en milieu de culture. Nous avons pu identifier pour la première fois 24 types d’ES et plus de 162 variants. Des peptides spécifiques à chaque type et commun à l’ensemble des variants ont pu être identifiés. Par la suite, une méthode de quantification « label free » a été proposée, basée sur le principe « Hi3 » où le signal des trois peptides les plus intenses de chaque ES est exploité. A l’aide de cette méthode, nous avons pu identifier les ESs produites en forte quantité et établir leur cinétique de production par le S. aureus en milieu de culture, donnant de nouvelles indications sur les ES à rechercher en priorité lors d’épisodes de TIAC.

Les ignifuges sont ajoutés à divers produits afin de les rendre conformes aux normes d’inflammabilité. Les plus communs sont les polybromodiphényléthers (PBDE) et les esters d’organophosphorés (OPE), qui sont détectés en forte proportion dans la population générale. Quelques industries, comme celle du recyclage électronique, peuvent exposer les travailleurs à des niveaux élevés de ces ignifuges, dont certains sont soupçonnés d’être des perturbateurs endocriniens. L’objectif de cette thèse était d’évaluer l’exposition à des ignifuges chez les travailleurs et d’étudier les effets endocriniens associés. Trois types de données ont été utilisés. D’abord, deux bases de données populationnelles ont permis de déterminer les valeurs biologiques de base des PBDE chez les travailleurs des populations générales canadienne et états-unienne, et d’identifier les secteurs industriels les plus exposés. Ensuite, une revue systématique de littérature a recensé les niveaux d’exposition professionnelle aux ignifuges dans diverses industries en portant un regard critique sur les méthodes de prélèvement. Finalement, des prélèvements d’air en poste personnel, d’urine et de sang ont été réalisés auprès de 100 travailleurs dans six entreprises de recyclage électronique et une de recyclage commercial. Des modèles Tobit et des régressions de Cox inversées ont identifié les tâches les plus exposantes. L’association entre les mesures biologiques d’exposition et les niveaux d’hormones thyroïdiennes et sexuelles a été explorée avec des modèles Tobit et des régressions sur composantes principales. L’analyse des données populationnelles a révélé que les travailleurs canadiens, tous secteurs confondus, avaient des concentrations sériques de PBDE 10 à 20% plus élevées que celles des non-travailleurs. La revue systématique a identifié les milieux du recyclage électronique, de la fabrication de câbles, du transport aérien et des casernes d’incendie comme étant parmi les plus exposants aux ignifuges, particulièrement au BDE209. Cependant, les méthodes de prélèvement utilisées dans ces études étaient généralement peu appropriées pour les ignifuges. L’analyse des données de l’étude terrain a mis en évidence des concentrations d’ignifuges dans l’air plus élevées dans le recyclage électronique que dans le recyclage commercial, avec une concentration en BDE209 plus élevée que toutes les valeurs publiées à ce jour (moyenne géométrique [MG] : 5100 ng/m³). Les tâches de démantèlement et de compactage étaient respectivement associées à des expositions en moyenne 2,2 et 1,4 fois plus élevées que celle de supervision. Finalement, les concentrations sanguines de BDE209 (MG : 18 ng/g lipides) chez les travailleurs du recyclage électronique étaient plus élevées que dans le recyclage commercial (MG : 1,7 ng/g lipides), mais moins élevées que celles rapportées dans la fabrication de câbles (moyenne : 54 ng/g lipides). On a estimé chez l’homme des diminutions de 18% de la testostérone libre et totale pour un doublement de la concentration de tb-TPhP (métabolite OPE), et une augmentation de 16% de l’estradiol pour un doublement de la concentration de o-iPr-DPhP (métabolite OPE). Cette thèse montre que l’exposition aux ignifuges est très répandue, particulièrement chez les travailleurs de quelques industries. Les concentrations plus élevées de certains ignifuges dans le recyclage électronique par rapport aux autres industries, et l’association entre l’exposition aux OPE et les niveaux d’hormones sexuelles chez l’homme ont été identifiées pour la première fois. Bien que devant être reproduits, ces résultats justifient des efforts préventifs de maîtrise de l’exposition aux ignifuges dans cette industrie., Flame retardants are added to various products to comply to flammability standards. The most common are polybrominated diphenyl ethers (PBDEs) and organophosphate esters (OPEs), which are detected in high proportion in the general population. A few industries, such as electronic recycling, can expose workers to high levels of flame retardants, some of which are suspected of being endocrine disruptors. The objective of this thesis was to evaluate the exposure to flame retardants in workers and to study the associated endocrine effects. Three types of data were used. First, two population databases were used to determine baseline PBDE levels for workers in the general population in Canada and the United States, and to identify the major industrial sectors that are exposed the most. Then, a systematic literature review identified levels of occupational exposure to flame retardants in various industries while critically examining sampling methods. Finally, personal air, urine and blood samples were collected from 100 workers in six electronic recycling and one commercial recycling companies. Tobit models and reverse Cox regressions identified the most exposing tasks. The association between biological concentrations of flame retardants and thyroid and sex hormone levels was explored with Tobit models and principal component regressions. The analysis of the population data revealed that Canadian workers, taking all sectors into consideration, had serum PBDE levels 10 to 20% higher than those of non-workers. The systematic review identified electronic recycling, cable manufacturing, air transport and fire stations as some of the workplaces where flame retardants were found in the highest concentrations, particularly BDE209. However, the sampling methods used in these studies were generally not optimal for flame retardants. Analysis of the field study data revealed higher air concentrations of flame retardants in electronic recycling than in commercial recycling, with a higher BDE209 concentration than all values published to date (geometric mean [MG]: 5100 ng/m³). Dismantling and bailing tasks were associated with exposures averaging 2.2 and 1.4 times higher than supervisory tasks, respectively. Finally, blood concentrations of BDE209 (MG: 18 ng/g lipid) in electronic recycling workers were higher than in commercial recycling (MG: 1.7 ng/g lipid), but lower than those reported in cable manufacturing (average: 54 ng/g lipid). Decreases of 18% in free and total testosterone were estimated in humans for a doubling of the concentration of tb-TPhP (OPE metabolite), and a 16% increase in estradiol for a doubling of the concentration of o-iPr-DPhP (OPE metabolite). This thesis shows that exposure to flame retardants is widespread, particularly among workers in a few industries. The higher concentrations of some flame retardants in electronic recycling compared with other industries, and the association between exposure to OPEs and sex hormone levels in humans were identified for the first time. Although these results must be reproduced, they justify preventive efforts to control exposure to flame retardants in this industry.

Vines have always been present in Gironde but it was in the 19th century that viticulture saw its development. The discovery of Bordeaux mixture based on copper sulphate in 1885 and then the first organic substances around 1960 enabled viticulture to fight against vine diseases affecting production.With the intensive and repeated use of phytosanitary products, wine-growing soils have been and are subject to a strong anthropogenic input of organic and inorganic substances. The soil is the initial receptacle for the fallout, either direct or indirect, of phytosanitary products. As the soil is a living and complex matrix, the physicochemical and biological processes occurring there make the fate of these phytosanitary products still poorly understood in in-situ conditions and difficult to extrapolate to the large panel of these substances.The objective of this work is to better understand the in-situ dynamic of pesticides found in wine-growing soils subject to various phenomena that can lead to their transfer by highlighting three questions:How to explain the current surface contamination of soils?Is there a deep migration of contaminants and how to explain it?Is there a significant dynamic of pesticide dissipation in wine-growing soils that varies over time?These questions were explored on an experimental watershed of Blayais with pedological and chemical variability, from acidic to neutral soils conducive to transfers.Chapter 1 presents a broad characterization of the surface contamination of the soils of the experimental site. Out of 205 molecules and 4 metals sought, 63 molecules and copper were found with concentrations varying from 0.01 ng/g to 1170 ng/g for organics and ranging from 6 to 197 mg/kg for copper. The use-presence relationship made it possible to link the presence of each molecule to its past or present use and thus to establish an index of their persistence in soils. The increased persistence for some now banned molecules is also visible for molecules still in use.Chapter 2 focuses on the vertical mobility of these contaminants via a one-meter coring of soil. For copper, old use strongly marks the soils with a gradual incorporation up to 60 cm in depth with the years of wine use and a total stock of up to 1.8 tonnes of copper per hectare in the oldest plots. While few organic molecules exceed 45 cm in depth, some, current or past, such as triazines metabolites or fluopicolide can be found up to a minimum of 75 cm in depth in some sampled soils.Chapter 3 highlights these phenomena of vertical transfers on a smaller temporal scale and in-situ with the monitoring over one year of the outgoing flows of phytosanitary products via agricultural drainage, strongly linked to rainfall. In parallel, a temporal dynamic of soil-solution exchanges was also shown over a year of cultivation via the monitoring of both the soil solution and the soil. By comparing active-passive sampling, the hypothesis of an increase in the available fraction of copper at the end of winter when the mineralization resumes by the microbial communities of the soils is put forward. This dynamic is also visible for a large number of organic molecules present in solution throughout the year, even for metabolites of molecules not authorized for 15 years.These in-situ monitoring made it possible to identify the most persistent pesticides but also those presenting the highest risk of transfers either to aquatic ecosystems, or to non-target organisms in the soil, or to both, taking into account the temporal variability related to actual environmental condition., Les vignes ont de tout temps été présentes en Gironde mais c’est au 19ème siècle que la viticulture voit son essor. L’apparition de la bouillie bordelaise à base de sulfate de cuivre en 1885 puis celle des premières substances organiques vers 1960 permet à la viticulture de combattre les maladies de la vigne impactant la production.Avec l’usage intensif et répété de produits phytosanitaires, les sols viticoles ont été et sont soumis à un fort apport anthropique de substances organiques et inorganiques. Le sol est le réceptacle initial des retombées, soit directes, soit indirectes, des produits phytosanitaires. Le sol étant une matrice vivante et complexe, les processus physico-chimiques et biologiques s’y produisant rendent le devenir de ces produits phytosanitaires encore mal connus en conditions in-situ et difficilement extrapolable au large panel de ces substances.L’objectif de ces travaux est de mieux comprendre la dynamique in-situ des pesticides retrouvés dans les sols viticoles soumis à des phénomènes variés pouvant entrainer leur transfert en mettant en avant trois questions :Comment expliquer la contamination en surface actuelle des sols ?Existe-t-il une migration des contaminants en profondeur et comment l’expliquer ?Existe-t’il une dynamique de dissipation des pesticides dans les sols viticoles importante et variable au cours du temps ?Ces questions ont été explorés sur un bassin versant expérimental du Blayais avec une variabilité pédologique et chimique, des sols acides à neutres propices aux transferts.Le chapitre 1 présente une caractérisation large de la contamination de surface des sols du site expérimental. Sur 205 molécules et 4 métaux recherchés, 63 molécules et le cuivre ont été retrouvés avec des concentrations variant de 0,01 ng/g à 1170 ng/g pour les organiques et allant de 6 à 197 mg/kg pour le cuivre. La mise en relation usage-présence a permis de relier la présence de chaque molécule à son utilisation passée ou présente et ainsi d’établir un indice de leur persistance dans les sols. La persistance accrue pour certaines molécules aujourd’hui interdites est également visible pour des molécules toujours utilisées.Le chapitre 2 se focalise sur la mobilité verticale de ces contaminants via un carottage d’un mètre de sol. Pour le cuivre, l’usage ancien marque fortement les sols avec une incorporation progressive jusqu’à 60 cm de profondeur avec les années d’usage viticole et un stock total pouvant atteindre 1,8 tonnes de cuivre par hectare dans les parcelles les plus anciennes. Si peu de molécules organiques dépassent les 45 cm de profondeur, certaines, actuelles ou passées, telle que des métabolites de triazines ou le fluopicolide peuvent être retrouvées jusqu’à a minima 75 cm de profondeur dans certains sols échantillonnés.Le chapitre 3 met en évidence ces phénomènes de transferts verticaux à plus faible échelle temporelle et in-situ avec le suivi sur une année des flux sortants de produits phytosanitaires via le drainage agricole fortement liés à la pluviométrie. En parallèle, une dynamique temporelle des échanges sol-solution a également été montré sur une année de culture via le suivi à la fois de la solution de sol et du sol. Par comparaison prélèvement actif-passif, l’hypothèse d’une augmentation de la fraction de cuivre disponible à la fin de l’hiver lors de la reprise de la minéralisation par les communautés microbiennes des sols est émise. Cette dynamique est également visible pour un grand nombre de molécules organiques présentes en solution tout au long de l’année et ce, même pour des métabolites de molécules non autorisées depuis 15 ans.Ces suivis in-situ ont permis d’identifier les pesticides les plus persistant mais également ceux présentant les plus forts risques de transferts soit vers les écosystèmes aquatiques, soit vers les organismes non cibles du sol, soit vers les deux, en prenant en compte la variabilité temporelle liés aux conditions environnementales réelles.

National audience; La problématique des contaminants émergents fait l'objet d'une considération croissante depuis leur mise en évidence dans l'environnement grâce aux avancées techniques. Parmi ces contaminants, les produits pharmaceutiques sont continuellement rejetés dans l’environnement au travers des stations d'épuration du fait de leur consommation (Santos et al., 2010). La venlafaxine (VEN) est un antidépresseur utilisé pour soigner la dépression et divers troubles de l'anxiété (Noordam et al., 2015). Son mode d'action (MoA) thérapeutique la modulation de la neurotransmission du cerveau humain en bloquant les transporteurs de sérotonine et noradrénaline sur les neurones présynaptiques pour augmenter leur disponibilité (Nelson, 2010). Bien que peu détectée dans l'eau de mer (Alygizakis et al., 2016), la VEN a pu être quantifiée à des concentrations comprises entre 3,0 ng/g (Martínez Bueno et al., 2014) et 36,1 ng/g dans des mollusques collectés sur les côtes européennes avec un taux de détection de 100% (Alvarez-Muñoz et al., 2015a; Álvarez-Muñoz et al., 2015b). La présence de résidus de VEN dans des mollusques marins pose la question de ses effets chez ces organismes même à de faibles doses d’exposition. Il a été montré que la VEN pouvait avoir un impact sur la reproduction (Galus et al., 2013), le comportement de prédation (Bidel et al., 2016 ; Bisesi et al., 2014 ; Painter et al., 2009) et la réponse au stress (Best et al., 2014 ; Ings et al., 2012).L'objectif de cette étude est d'étudier les effets moléculaires de la VEN sur Mytilus galloprovincialis par une approche métabolomique, ce type d’étude ayant déjà démontré son potentiel pour mettre en évidence les effets moléculaires d’une exposition à un xénobiotique (Campillo et al., 2019; Ji et al., 2016). Pour cet objectif, 49 moules ont été acclimatées 7 jours puis 26 ont été exposées pendant 3 jours à 10 µg/L de venlafaxine. Les dissections ont eu lieu à J1 et J3 pour prélever les glandes digestives et l’analyse a été réalisée par LC-HRMS pour générer des empreintes métaboliques à comparer entre contrôles et exposés.Après tri des données, 1336 signaux ont été détectés en mode négatif, dont 451 sont sur-modulés et 309 sous-modulés lorsqu'on compare les exposés aux contrôles sur les deux jours. La sérotonine ainsi que la dopamine ont été annotées, ce qui permet de supposer que le MoA de la VEN chez la moule est semblable à celui chez l’Homme. Il semblerait donc qu'une exposition à la VEN ait un effet sur le métabolome de Mytilus galloprovincialis, malgré la courte période d'exposition. Il convient maintenant de définir plus précisément l’identité des métabolites modulés pour mettre en avant les principales voies métaboliques impactées et ainsi émettre des hypothèses sur les fonctions biologiques pouvant être perturbées par une exposition.

National audience; Les contaminants organiques tels que les pesticides et les médicaments présents dans les cours d'eau peuvent se fixer sur les litières de feuilles, les sédiments et les matières en suspension. Ces substances potentiellement toxiques peuvent donc avoir une incidence sur le fonctionnement des écosystèmes lotiques. La détermination des niveaux de contaminations dans ces matrices solides environnementales est donc primordiale pour comprendre et appréhender les effets de ces contaminants dans les milieux aquatiques. Ces analyses de micropolluants à l'état de traces dans de telles matrices constituent un défi de taille, car elles requièrent des techniques analytiques efficaces pour atteindre une sensibilité et une spécificité appropriées. L'extraction et la purification avant analyse chromatographique sont des étapes cruciales qui nécessitent une optimisation afin de maximiser les rendements d'extraction et de minimiser les effets de matrices. En comparaison avec d'autres techniques classiques, la méthode QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged and Safe), couramment utilisée pour la sécurité alimentaire depuis 2003, présente l'avantage d'être, simple à mettre en oeuvre, adaptable à tous types de matrices solides, plus respectueuse de l'environnement et permet d'obtenir des extraits relativement propres. L'objectif de cette étude est donc d'optimiser les étapes d'extraction et de purification par QuEChERS. La quantification de 15 pesticides agricoles dans les litières de feuilles et de 49 contaminants d'origine urbaine dans les sédiments est ensuite réalisée par chromatographie liquide ultra haute performance couplée à la spectrométrie de masse en tandem (UHPLC-MS-MS). Le premier groupe de 15 pesticides (2 herbicides et 2 métabolites, 6 fongicides et 5 insecticides) a été sélectionné en fonction de la fréquence de détection de ces composés dans les cours d'eau soumis aux contaminations agricoles diffuses. Le deuxième groupe de 49 substances est représentatif de pollutions urbaines (8 pesticides, 5 bétabloquants, 10 antibiotiques, 4 médicaments hypolipémiants, 2 bronchodilatateurs, 4 benzodiazépines, 2 antidépresseurs, 1 analgésique, 1 diurétique, 1 antidiabétique et 6 métabolites). Ces composés ont été choisis en fonction de leur présence dans les effluents de stations d'épuration. Tous ces composés présentent une large gamme de caractéristiques physico-chimique (-0.5 < log Kow < 5). Afin de sélectionner la méthode d'extraction la plus efficace pour chacun des deux groupes de micropolluants, nous avons tout d'abord comparé la méthode QuEChERS avec une méthode d'extraction liquide sous pression (PLE). Un plan d'expérience a été réalisé pour optimiser la masse et la nature des sels d'extraction et des sels de purification, les temps d'extraction et de centrifugation. Enfin, pour réduire les effets de matrice qui induisent une suppression de signal en UHPLC-MS-MS, des étapes supplémentaires de purification en "Pass through" sur Solid Phase Extraction (SPE) et de dilution des extraits ont été effectuées. Les extractions QuEChERS optimisées couplées à l'analyse par UHPLC-MS-MS permettent d'obtenir des rendements d'extraction compris entre 45 et 135 % en fonction des composés et les écart-types relatifs obtenus sont inférieurs à 20% (n=3). De faibles limites de quantification, allant de 2 ng/g sec à 200 ng/g sec selon le composé et la matrice ont été obtenues. Nous devons maintenant valider et déterminer les incertitudes de ces deux méthodes spécifiques et sensibles avant leur application pour des études de cas réelles.

The Directive 2013/39/EU amending Directives 2000/60/EC and 2008/105/EC on priority substances in aquatic ecosystems introduced 15 new priority substances and promulgated environmental quality standards (NQEs). Among the recently introduced substances, the so-called "short-chain" chlorinated paraffins (C10-C13), consisting of complex mixtures of polychlorinated n-alkanes that fulfill the PBT criteria (persistence, bioaccumulation and toxicity). These compounds, as well as the medium chain (C14-C17) and long chain (C20-C30) chlorinated paraffins, are hydrophobic, chemically and thermally stable, and they have been used in numerous industrial applications. Existing data suggest the ubiquitous character of these compounds, which have been produced in large quantities on a global scale; however, these data remain relatively fragmentary due to the difficulty of analyzing and quantifying these compounds. The work carried out in this study led to the development and validation of a method for the determination of long and medium chain chlorinated paraffins in fish tissues. This method is based on the use of microwave assisted extraction, the purification of organic extracts by adsorption chromatography and the use of gas chromatography coupled with high resolution mass spectrometry (Time of Flight technology, resolution 15000 at m / z = 400) for the detection of analytes. The optimization of the method allowed to obtain detection limits in the range 0.03-0.4 ng/g pf for the different groups (CnH2n+2-zClz), compatible with the expected environmental levels. The application of this method to the analysis of fish tissue (barbel) taken from the Rhône basin confirmed the ubiquitous nature of these micropollutants; in the selected samples, MCCP levels (1.25-72.7) appear 2 to 57 times higher than SCCPs (0.16-10.6 ng/g fresh weight), the latter consistently being below the EQSbiota for SCCPs (16.6 µg/g).; La Directive 2013/39 /UE modifiant les Directives 2000/60/CE et 2008/105/CE concernant les substances prioritaires dans le domaine de l'eau a introduit quinze nouvelles substances prioritaires au niveau communautaire, et promulgué les normes de qualité environnementale (NQE) correspondantes. Parmi les substances récemment introduites, on trouve les chloroalcanes dits « à chaine courte » (C10 à C13), constitués de mélanges complexes de n-alcanes polychlorés, composés répondant aux critères PBT (persistants, bioaccumulables et toxiques). Ces composés, ainsi que les chloroalcanes à chaine moyenne (C14-C17) et longue (C20-C30), sont hydrophobes, chimiquement et thermiquement stables, sont ou ont été employés dans de nombreuses applications industrielles. Les données existantes suggèrent le caractère ubiquiste de ces composés produits en quantité importantes à l'échelle globale ; ces données demeurent néanmoins relativement fragmentaires en raison de la difficulté à analyser et quantifier ces composés. Les travaux réalisés dans le cadre de cette étude ont permis le développement et la validation d'une méthode de dosage des chloroalcanes à chaine longue et moyenne dans les tissus de poisson. Cette méthode repose sur l'utilisation de l'extraction assistée par micro-ondes, sur la purification des extraits organiques par chromatographie d'adsorption et sur l'utilisation de la chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse haute résolution de type « temps de vol » (résolution de 15000 à m/z = 400) pour la détection des analytes. L'optimisation de la méthode a permis l'obtention de limites de détection dans la gamme 0,03-0,4 ng.g-1 pf pour les différents groupes (CnH2n+2-zClz), compatibles avec les niveaux environnementaux attendus. L'application de cette méthode à l'analyse de tissus de poisson (barbeau) prélevés dans le bassin du Rhône a permis de confirmer le caractère ubiquiste de ces micropolluants ; dans les échantillons sélectionnés, les niveaux de MCCP (1,25 - 72,7) apparaissent 2 à 57 fois plus élevés que ceux des SCCP (0,16 - 10,6 ng.g-1 poids frais), ces derniers étant systématiquement inférieurs à la NQEbiote applicable aux SCCP (16,6 µg.g-1 pf).

Hexabromocyclododecane (HBCD) is a brominated flame retardant used into materials such as polystyrenes. Its presence in some animal origin food samples may contribute to human exposure to this endocrine disruptor. A total of 56 barrows (LWxLd) Piétrain (27.7 kg) were individually given, for total fattening or only growing period, feeds containing 32 or 297 μg α-HBCD per kg or controls. Serial slaughtering of 3 pigs per exposed or decontaminated group was performed at days 19, 49, 70, 91, and 112 to get the liver and backfat and semimembranosus muscle samples. Performance was not affected by α-HBCD exposure. With the 297 μg/kg diet, α -HBCD concentration in the muscle quickly increased up to 116 ng/g lipid at day 49. It declined down to 31 ng/g after 63 d of depuration, partly because of the body weight gain. HBCD concentration was higher in the adipose tissue than in the muscle and was lower in the liver. A Physiologically Based Pharmacokinetic (PBPK) modelling combining mechanistic - physiological and pharmacokinetic approaches was undertaken using the Vensim®software. The model represented different compartments : liver, ham and loin muscles, subcutaneous adipose tissue, all irrigated by plasma, and was calibrated to determine the contaminant transfer to the tissues. Model predictions were validated by experimental data. This generic model may be used to simulate animal exposure scenario. It is concluded that HBCD accumulation in pig tissues is possible, justifying a monitoring of exposure sources.; L’hexabromocyclododécane (HBCD) est un retardateur de flamme bromé incorporé dans des matériaux tels que les polystyrènes. Sa présence dans certains échantillons de denrées alimentaires d’origine animale pourrait contribuer à une exposition humaine à ce perturbateur endocrinien. Un total de 56 porcs mâles castrés (LWxLd) Piétrain (27,7 kg) ont reçu individuellement des aliments témoin ou contenant 32 ou 297μg d’ - HBCD par kg pendant l’engraissement ou uniquement la période de croissance. Des abattages séquentiels de trois porcs par groupe en exposition ou élimination ont été effectués après 19, 49, 70, 91, et 112 j afin de prélever le foie et des échantillons de gras dorsal et de muscle semi-membraneux. Les performances ne sont pas affectées par l’exposition. Avec l’aliment contenant 297 μg/kg d’ - HBCD, la concentration dans le muscle augmente rapidement pour atteindre 116 ng d’ - HBCD /g de lipides après 49 j. Elle est de 31 ng/g après 63 j d’élimination, en partie en raison de l’accroissement du poids corporel. Les concentrations dans le foie sont inférieures alors que celles dans le tissu adipeux sont supérieures à celles du muscle. Un modèle de type PBPK, combinant des approches de physiologie mécanistique et de pharmacocinétique basée sur la circulation sanguine, a été paramétré parallèlement avec le logiciel Vensim®. Les compartiments représentés : foie, muscles du jambon et de la longe, tissu adipeux sous - cutané, tous irrigués par le plasma, permettent d’étudier le transfert du contaminant vers les tissus. Les prédictions du modèle sont validées par les données expérimentales et permettront la simulation de scénarios d’exposition des animaux. Il est conclu que l’accumulation d’HBCD dans les tissus porcins apparaît possible, justifiant une surveillance des sources d’exposition.

La contamination en alkylphenols (AP) et en bisphenol A (BPA) des eaux de ruissellement urbaines est averee. Les sources potentielles de ces contaminants dans les eaux de ruissellement sont endogenes au bassin versant et sont liees en particulier a la circulation automobile et au lessivage des materiaux constituant l’enveloppe bâtie et les infrastructures urbaines. Cet article synthetise les resultats d’un travail experimental mene sur une selection de materiaux de construction, de materiaux et de consommables automobiles entrant en contact avec la pluie afin d’evaluer leur potentiel d’emission des AP, alkylphenols ethoxyles et BPA dans le ruissellement. 36 echantillons de materiaux, neufs et usages, appartenant a sept grandes familles de materiaux de construction (PVC, beton, polycarbonate, bitume modifie SBS, materiaux de drainage) et de materiaux automobiles (carrosserie, pneus) ont ete soumis a des tests de lixiviation au methanol puis, pour une selection d’entre eux, a des tests de lixiviation a l’eau. Trois types de fluides automobiles (liquide de frein, lave-glace et liquide de refroidissement) ont ete extraits directement. Les resultats demontrent la presence ubiquiste des composes recherches dans les materiaux urbains, ainsi que leur caractere extractible a l’eau. Les composes avec les plus forts taux d’emission sont le BPA et le nonylphenol (NP). Les emissions dans l’eau en BPA les plus importantes (10 a 300 ng/g) ont ete mesurees pour le polycar bonate, les pneumatiques, certaines carrosseries de voiture et les PVC. Le NP a ete lixivie par l’eau en quantite importante (1 a 10 ng/g) depuis les PVC, certains betons, les bitumes modifies SBS et les echantillons de carrosserie. Les pneus sont les seuls materiaux presentant une forte emission en octylphenol (OP) (1 a 10 ng/g). L’analyse de fluides automobiles a confirme la presence du BPA (0, 3 a 5, 5 g/L) et du NP (2, 3 a 2, 9 mg/L) dans les liquides de frein, tandis que les AP et le BPA peuvent etre trouves a l’etat de traces dans les liquides de refroidissement et lave-glaces.

The NLRP3 inflammasome activity is abnormally elevated in many human inflammatory diseases, including cardiovascular and metabolic diseases such as atherosclerosis and type 2 diabetes mellitus (T2DM) respectively. Therefore, there is considerable interest in the identification of effective therapeutics that selectively inhibit the NLRP3 inflammasome pathway. In this study, we have identified Arglabin as a potential small molecule inhibitor that targets the NLRP3 inflammasome activity in cell culture and in an animal model, the ApoE2.Ki mice fed a high-fat Western-type diet (HFD). Arglabin, a plant sesquiterpene lactone, has been used extensively as an herbal remedy that proved effective in treating cancer of the liver, lungs and breast at early stages. Arglabin inhibited, in a concentration-dependent manner, IL-1β and IL-18 production in lipopolysaccharide and cholesterol crystal-activated cultured mouse peritoneal macrophages. In addition, Arglabin activated autophagy as evidenced by the increase in LC3-II protein. Intraperitoneal injection of Arglabin (2.5 ng/g body weight twice daily for 13 weeks) into female ApoE2.Ki mice fed a HFD resulted in a decreased IL-1β plasma level and reduced plasma levels of total cholesterol and triglycerides. Treatment of ApoE2.Ki mice fed a HFD with Arglabin significantly reduced the plasma concentration of anti-oxLDL antibodies. Moreover, Arglabin oriented the proinflammatory M1 macrophages into the anti-inflammatory M2 phenotype in spleen and arterial lesions. Consequently, a marked reduction in atherosclerotic lesions was observed in the median areas in the sinus and whole aorta. In comparison to vehicle-treated mice, Arglabin reduced plasma levels of glucose and insulin. Immunohistochemical analysis revealed the presence of active caspase 3 in Langerhans islets of ApoE2.Ki mice fed a HFD that was significantly inhibited by Arglabin treatment. Moreover, Arglabin reduced susceptibility to apoptosis in cultured INS-1 cells by increasing concentration-dependently Bcl-2 levels, which led to concomitantly decreased Bax/Bcl-2 ratio. In cultured INS-1 cells, Arglabin increased the expression of the autophagic markers Becline 1 and LC3-II in a concentration-dependent manner. Consequently, our results indicate survival-promoting properties of the Arglabin molecule in pancreatic β-cells.In conclusion, our findings demonstrate that Arglabin may represent a promising new drug to treat atherosclerosis and T2DM., L’inflammasome NLRP3, un complexe protéique pro-inflammatoire, joue un rôle essentiel dans le processus pathologique de l’athérosclérose et du diabète de type 2 (DT2). Il est responsable de la maturation de la pro-IL-1β et de la pro-IL-18 respectivement en IL-1β et IL-18 biologiquement actives. L’objectif de cette étude consiste à identifier et caractériser un inhibiteur spécifique de l’inflammasome NLRP3 qui pourrait contribuer à limiter l’évolution des plaques d’athérome et l’installation du DT2. Au cours de cette thèse, nous avons isolé l’Arglabine d’une plante, Artemisia glabella, connue pour ses vertus anti-tumorales. L’effet de l’Arglabine a été étudié au niveau des macrophages et des cellules β-pancréatiques, et chez des souris ApoE2.Ki et ApoE2.Ki/NLRP3-/- placées sous régime High Fat Diet (HFD). Les résultats in vitro montrent que l’Arglabine réduit, d’une façon dose-dépendante, l’activité de l’inflammasome NLRP3 et inhibe l’expression des protéines Nlrp3, IL-1β et caspase-1. Elle induit l’autophagie en augmentant significativement l’expression de la LC3-II au niveau des macrophages murins en culture. L’injection intra-péritonéale de deux doses journalières d’Arglabine (2.5 ng/g de m.c.) à des souris ApoE2.Ki placées sous régime HFD, normalise le profil lipidique et réduit l’oxydation des LDL au niveau du plasma des souris. Elle réduit le nombre des monocytes pro-inflammatoires (Ly-6Chigh) et augmente le nombre des monocytes anti-inflammatoires (Ly-6Clow). Au niveau des lésions artérielles, l’Arglabine oriente les macrophages présents vers un phénotype anti-inflammatoire M2. L’ensemble de ces résultats montre un rôle athéroprotecteur de l’Arglabine : elle réduit la surface des lésions artérielles au niveau du sinus aortique ainsi qu’au niveau de la totalité de l’aorte des souris ApoE2.Ki placées sous régime athérogène. De plus, le traitement par l’Arglabine normalise le profil glycémique et insulinémique des souris ApoE2.Ki. Elle réduit également l’activité de la caspase 3 au niveau des îlots de Langerhans et augmente de manière dose-dépendante l’expression de la protéine Bcl-2 au niveau des cellules β-pancréatiques. Par ailleurs, nous avons montré une augmentation de l’expression de protéines impliquées dans l’autophagie telles que la Becline 1 et la LC3-II sous l’effet de l’Arglabine. Ainsi, l’Arglabine réduit non seulement l’activité de l’inflammasome NLRP3 mais améliore aussi la survie des cellules β-pancréatiques. L’Arglabine constitue donc une molécule très prometteuse dans le traitement des maladies cardiovasculaires et le DT2.

The NLRP3 inflammasome activity is abnormally elevated in many human inflammatory diseases, including cardiovascular and metabolic diseases such as atherosclerosis and type 2 diabetes mellitus (T2DM) respectively. Therefore, there is considerable interest in the identification of effective therapeutics that selectively inhibit the NLRP3 inflammasome pathway. In this study, we have identified Arglabin as a potential small molecule inhibitor that targets the NLRP3 inflammasome activity in cell culture and in an animal model, the ApoE2.Ki mice fed a high-fat Western-type diet (HFD). Arglabin, a plant sesquiterpene lactone, has been used extensively as an herbal remedy that proved effective in treating cancer of the liver, lungs and breast at early stages. Arglabin inhibited, in a concentration-dependent manner, IL-1β and IL-18 production in lipopolysaccharide and cholesterol crystal-activated cultured mouse peritoneal macrophages. In addition, Arglabin activated autophagy as evidenced by the increase in LC3-II protein. Intraperitoneal injection of Arglabin (2.5 ng/g body weight twice daily for 13 weeks) into female ApoE2.Ki mice fed a HFD resulted in a decreased IL-1β plasma level and reduced plasma levels of total cholesterol and triglycerides. Treatment of ApoE2.Ki mice fed a HFD with Arglabin significantly reduced the plasma concentration of anti-oxLDL antibodies. Moreover, Arglabin oriented the proinflammatory M1 macrophages into the anti-inflammatory M2 phenotype in spleen and arterial lesions. Consequently, a marked reduction in atherosclerotic lesions was observed in the median areas in the sinus and whole aorta. In comparison to vehicle-treated mice, Arglabin reduced plasma levels of glucose and insulin. Immunohistochemical analysis revealed the presence of active caspase 3 in Langerhans islets of ApoE2.Ki mice fed a HFD that was significantly inhibited by Arglabin treatment. Moreover, Arglabin reduced susceptibility to apoptosis in cultured INS-1 cells by increasing concentration-dependently Bcl-2 levels, which led to concomitantly decreased Bax/Bcl-2 ratio. In cultured INS-1 cells, Arglabin increased the expression of the autophagic markers Becline 1 and LC3-II in a concentration-dependent manner. Consequently, our results indicate survival-promoting properties of the Arglabin molecule in pancreatic β-cells.In conclusion, our findings demonstrate that Arglabin may represent a promising new drug to treat atherosclerosis and T2DM., L’inflammasome NLRP3, un complexe protéique pro-inflammatoire, joue un rôle essentiel dans le processus pathologique de l’athérosclérose et du diabète de type 2 (DT2). Il est responsable de la maturation de la pro-IL-1β et de la pro-IL-18 respectivement en IL-1β et IL-18 biologiquement actives. L’objectif de cette étude consiste à identifier et caractériser un inhibiteur spécifique de l’inflammasome NLRP3 qui pourrait contribuer à limiter l’évolution des plaques d’athérome et l’installation du DT2. Au cours de cette thèse, nous avons isolé l’Arglabine d’une plante, Artemisia glabella, connue pour ses vertus anti-tumorales. L’effet de l’Arglabine a été étudié au niveau des macrophages et des cellules β-pancréatiques, et chez des souris ApoE2.Ki et ApoE2.Ki/NLRP3-/- placées sous régime High Fat Diet (HFD). Les résultats in vitro montrent que l’Arglabine réduit, d’une façon dose-dépendante, l’activité de l’inflammasome NLRP3 et inhibe l’expression des protéines Nlrp3, IL-1β et caspase-1. Elle induit l’autophagie en augmentant significativement l’expression de la LC3-II au niveau des macrophages murins en culture. L’injection intra-péritonéale de deux doses journalières d’Arglabine (2.5 ng/g de m.c.) à des souris ApoE2.Ki placées sous régime HFD, normalise le profil lipidique et réduit l’oxydation des LDL au niveau du plasma des souris. Elle réduit le nombre des monocytes pro-inflammatoires (Ly-6Chigh) et augmente le nombre des monocytes anti-inflammatoires (Ly-6Clow). Au niveau des lésions artérielles, l’Arglabine oriente les macrophages présents vers un phénotype anti-inflammatoire M2. L’ensemble de ces résultats montre un rôle athéroprotecteur de l’Arglabine : elle réduit la surface des lésions artérielles au niveau du sinus aortique ainsi qu’au niveau de la totalité de l’aorte des souris ApoE2.Ki placées sous régime athérogène. De plus, le traitement par l’Arglabine normalise le profil glycémique et insulinémique des souris ApoE2.Ki. Elle réduit également l’activité de la caspase 3 au niveau des îlots de Langerhans et augmente de manière dose-dépendante l’expression de la protéine Bcl-2 au niveau des cellules β-pancréatiques. Par ailleurs, nous avons montré une augmentation de l’expression de protéines impliquées dans l’autophagie telles que la Becline 1 et la LC3-II sous l’effet de l’Arglabine. Ainsi, l’Arglabine réduit non seulement l’activité de l’inflammasome NLRP3 mais améliore aussi la survie des cellules β-pancréatiques. L’Arglabine constitue donc une molécule très prometteuse dans le traitement des maladies cardiovasculaires et le DT2.

Les marqueurs fécaux semblent être de bons outils pour évaluer l'activité de la rectocolite hémorragique (RCH). But : comparer la performance de cinq marqueurs [calprotectine (fCal), lactoferrine (fLact), fM2PK, néopterine (fNéo), zonuline (fZonu)] à prédire la réponse à un traitement d'induction et d'entretien par infliximab (IFX) dans la RCH. Nous avons prospectivement inclus 31 patients avec une RCH active requérant l'introduction d'IFX : à S14, 19 patients (61%) étaient en réponse clinique, dont 13 en réponse endoscopique. 11/19 patients (58%) étaient en réponse soutenue à S52. Les taux médians de fCal, fLact et fM2PK diminuaient significativement entre S0 et S14 uniquement chez les patients répondeurs. Pour prédire la réponse clinique au traitement d'induction, la fCal, la fLact et la fM2PK à S2 étaient des marqueurs performants avec des seuils à 800 µg/g pour la fCal, à 20000 ng/g pour la fLact et à 50 U/mL pour la fM2PK (sensibilités (Se) de 82%, 81% et 88%, spécificités (Sp) de 69%, 70% et 80% respectivement). La fLact était le meilleur marqueur à S2 pour prédire la rémission endoscopique à S12, avec un seuil de 32891 ng/g (Se et Sp à 72%). Les trois marqueurs à S14 étaient performants pour la prédire la réponse clinique à S52 avec des seuils à 146µg/g pour la fCal, 3457 ng/g pour la fLact, et à 2,25 U/mL pour la fM2PK (Se de 90%, 100% et 88%, et Sp de 72%, 80% et 70% respectivement). Ces mêmes marqueurs étaient également bien corrélés aux scores de sévérité endoscopiques. La fCal, la flact et la fM2PK peuvent donc prédire précocement la réponse au traitement d'induction par IFX, ainsi que la réponse clinique soutenue à un an dans la RCH. Leur dosage au cours du suivi pourrait être utile pour distinguer précocement les patients répondeurs des patients à risque d'échec à l'IFX.

INTRODUCTION : GÉNÉRALITÉS SUR LE MERCURE DANS LES ORGANISMES AQUATIQUES Les concentrations de Hg dans les différents organismes aquatiques sont très variables, allant de 50 à 500 ng/g (poids sec) dans le zooplancton et la plupart des macro-invertébrés jusqu’à 20 000 ng/g (poids sec), soit 4 000 ng/g (poids frais), dans les poissons, toutes espèces et tailles confondues. Elles sont également très différentes d’un milieu aquatique à l’autre. Cette forte hétérogénéité des concentrations en merc...

Several chemical products are dispersed in the environment and the consequences can be sometimes harmful for humans and the ecosystems. Among these substances appear the antibiotics and the hormonal steroids. Nowadays, only few data are available on the presence and the fate of these substances in the environment in particular for solid matrices, mainly due to a lack of methodologies. Consequently, methods to analyze traces of « emergent » contaminants in water and soil were carried out. Therefore, multi-residues and inter-families procedures based on LC-MS/MS analysis were established. Concerning the aqueous samples, 23 analytes are extracted with the SPE technique (OASIS HLB). MLQs are between 0.09 and 34 ng/L. For the solid matrix, the extraction procedure of 31 compounds is inspired from the method called QuEChERS and followed by a purification step. This methodology was validated and MLQs between 0.013 and 3 ng/g were obtained. Two antibiotics families, tetracyclines and fluoroquinolones, were studied separately as they have specific physical/chemical properties and are therefore difficult to extract from soil with an inter-families method. Then, the method developed for the soil matrix allowed a statistic study which showed the impact of the soil parameters on the recoveries and matrix effects. Finally, the methodologies were applied to a soil column study which allowed obtaining data on the transfer, accumulation and degradation of the substances in soil, De nombreux produits chimiques se retrouvent dispersés dans l'environnement avec des conséquences parfois néfastes pour les hommes et les écosystèmes. Parmi ces substances figurent les antibiotiques et les stéroïdes hormonaux. Peu de données sont disponibles quant à la présence et le devenir de ces substances dans l'environnement notamment pour le sol, par manque de méthodologies. Nous avons donc mis au point des procédures d'analyse de traces de ces contaminants émergents, dans l'eau et le sol. Nous avons développé des méthodes multi-résidus et inter-familles basées sur des analyses LCMS/ MS. Pour les échantillons aqueux, l'extraction est menée sur phase solide (SPE, OASIS HLB). Les MLQs sont comprises entre 0.09 et 34 ng/L. Pour la matrice solide, la procédure d'extraction est inspirée de la méthode appelée QuEChERS suivie d'une purification SPE. Elle a été validée et des MLQs entre 0.013 et 3 ng/g ont été atteintes. Les tétracyclines et les fluoroquinolones, ont été étudiées séparément car elles ont des propriétés physico-chimiques bien spécifiques les rendant difficiles à extraire correctement du sol avec une méthode inter-familles. La méthode développée sur la matrice sol a permis une étude statistique mettant en exergue l'impact de certains paramètres du sol sur les rendements d'extraction et les effets matrice. Les méthodes ont été appliquées à une étude en colonnes de sol pour obtenir des données sur le transfert, l'accumulation et la dégradation des composés dans le sol