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Toutes les cellules de l’organisme relarguent de façon constitutive des nucléotides dans l’espace extracellulaire. Ces nucléotides extracellulaires agissent comme des molécules de signalisation, entre autres, via les récepteurs P2Y (P2YRs) qui sont des récepteurs couplés aux protéines G (GPCRs). Les P2YRs sont exprimés, pour la majorité, de façon ubiquitaire dans l’organisme. L’analyse phénotypique des lignées de souris knockout pour les P2YRs (P2YR-/-) a permis de confirmer l’importance de cette voie de communication dans différents processus physio/pathologiques. Au sein de notre laboratoire, grâce à l’utilisation de souris P2YR-/-, nous étudions depuis quelques années le rôle de ces récepteurs dans la biologie des cellules stromales mésenchymateuses multipotentes (MSCs). Ces cellules se caractérisent par une faible immunogénicité et surtout par la propriété de multipotence, i.e. capacité de se différencier en plusieurs types cellulaires (adipocytes, chondroblastes, ostéoblastes). Cette dernière propriété suscite l’intérêt de la médecine régénérative qui vise à exploiter la multipotence de ces cellules en thérapie cellulaire. Toutefois, leur utilisation à des fins thérapeutiques est encore limitée, notamment parce que les mécanismes régulateurs de ces processus de différenciation sont encore mal compris. Il est donc fondamental de continuer à étudier les voies de signalisation régulant les processus de différenciation de ces cellules pour leurs applications cliniques.Dans ce travail de recherche, nous avons investigué l’implication de la signalisation dépendant des P2YR dans le modèle expérimental des MSCs dérivées du tissu adipeux sous-cutané inguinal (ATMSCs) murin. D’abord, nous avons montré que parmi les 7 sous-types connus de récepteur P2Ys, les ATMSCs expriment le P2Y2R (récepteur à l’ATP et l’UTP) et le P2Y6R (récepteur à l’UDP) et que ces récepteurs sont fonctionnels. Par une approche combinant l’analyse quantitative de leur expression, l’effet de leur activation pharmacologique et enfin l’effet de l’invalidation de leur gène (P2ry2 ou P2ry6), nous avons montré que ces deux récepteurs influencent à des degrés divers le processus de différenciation adipogénique et ostéoblastogénique des ATMSCs in vitro.Concernant le P2Y2R, nos données montrent que l’expression de son messager diminue dans les ATMSCs différenciées en adipocytes tandis que son activation et que l’invalidation de son gène sont sans effet sur l’intensité de différenciation adipogénique. Par ailleurs, après une différenciation ostéoblastogénique, le niveau d’expression du messager codant P2Y2R n’est pas modifié. Par contre, les ATMSCs P2Y2R-/- ont un potentiel de différenciation ostéoblastogénique diminué par rapport aux WT. Cet effet pourrait être lié à une diminution de l’expression de gènes codant des facteurs de signalisation des voies Wnt et/ou BMP, connues pour contrôler la production d’ostéoblastes à partir des MSCs.Le récepteur P2Y6R semble intervenir à la fois dans l’adipogénèse et l’ostéoblastogénèse des ATMSCs. En effet, l’expression du messager codant P2Y6R n’est pas modulée dans les adipocytes matures et l’activation du récepteur n’a pas d’effet sur le processus de différenciation adipogénique. Par contre, les ATMSCs P2Y6R-/- ont un potentiel de différenciation adipogénique réduit ce qui est corrélé à une diminution de l’expression du messager codant PPARγ2. D’autre part, nous avons constaté que l’augmentation de tissu adipeux est moindre chez les souris P2Y6R-/- âgées sous régime normal ou riche en graisse. Par ailleurs, l’expression du messager codant P2Y6R est diminuée après différenciation ostéoblastogénique. L’activation de P2Y6R par l’UDP altère la maturation complète des ATMSCs en ostéoblastes et l’invalidation du gène P2ry6 augmente l’activité principale de cette phase tardive, c’est-à-dire la production de minéralisation. Ces données suggèrent que la voie UDP-P2Y6R régule négativement le processus de différenciation ostéoblastogénique dans le modèle cellulaire étudié dans ce travail.Avec le modèle pathologique des cellules musculaires lisses vasculaires (VSMCs), modélisant une différenciation ectopique, nous avons montré que l’invalidation des gènes P2ry2 et P2ry6 affecte la transdifférenciation de ces cellules en cellules minéralisantes.En résumé, notre travail a permis de définir les rôles des P2Y2R et P2Y6R dans les processus de différenciation adipogénique et ostéoblastogénique des ATMSCs et de transdifférenciation des VSMCs en cellules calcifiantes. Des études complémentaires devront être réalisées pour établir la signification physio/pathologique de ces données expérimentales., Doctorat en Sciences, info:eu-repo/semantics/nonPublished

Les récepteurs P2Y sont exprimés à la surface de bon nombre de cellules y compris les cellules du système immunitaire. De nombreuses études réalisées in vitro suggèrent une influence des nucléotides sur la biologie de ces cellules. Toutefois pour certains d’entre eux, l’implication in vivo n’est pas clairement établie. Le présent travail, basé sur l’analyse phénotypique de souris invalidées, vise donc à étudier le rôle de trois de ces récepteurs, à savoir P2Y2, P2Y6 et P2Y12, dans la physiologie des phénomènes inflammatoires. Leur rôle a été abordé plus particulièrement dans deux types cellulaires :les macrophages et les cellules dendritiques.En ce qui concerne les macrophages péritonéaux recrutés, nous avons démontré in vitro que le récepteur P2Y2 participe, avec un récepteur P1, à la production d’IL-6 en réponse au LPS. Par contre, il ne semble pas impliqué dans l’internalisation d’antigènes par macropinocytose. Le récepteur P2Y6 favorise la production d’IL-6 et de MIP-2 en réponse au LPS et stimule l’endocytose par macropinocytose de dextran-FITC.Pour ce qui est des cellules dendritiques (DCs), l’étude du rôle du récepteur P2Y12 dans leur biologie in vitro avait été investigué auparavant dans notre laboratoire. Toutefois, certains paramètres devaient être confirmés ainsi que l’implication in vivo du récepteur dans l’établissement d’une réponse immune. Nous avons contribué à démontrer que l’endocytose par macropinocytose est augmentée suite à l’activation du récepteur P2Y12 par l’ADPβS au niveau de DCs spléniques murines et de DCs dérivées de monocytes humains. L’ADPβS favorise la capacité des DCs à activer les lymphocytes T spécifiques d’un antigène. Enfin, la signification de ces observations a été testé in vivo par l’immunisation de souris P2Y12+/+ et P2Y12-/-. Les résultats obtenus montrent une production d’IgG1 diminuée dans les souris invalidées pour le récepteur par rapport aux souris sauvages suggérant que le récepteur P2Y12 favoriserait le développement d’une réponse immune Th2 et ce principalement via l’augmentation de la captation d’antigènes par les DCs. Suite aux données obtenues et à celles de la littérature, nous avons investigué l’implication du récepteur P2Y6 dans la réponse immune adaptative in vivo. Pour ce faire, nous avons immunisé des souris P2Y6+/+ et P2Y6-/- selon le protocole utilisé lors de notre précédente étude. Les souris P2Y6 KO montrent une diminution significative de la production d’IgG2c spécifiques de l’antigène suggérant l’implication du récepteur dans le développement d’une réponse pro-Th1. Plusieurs paramètres ont été mesurés pour expliquer ce phénomène. Nous avons tout d’abord démontré que le récepteur P2Y6 est exprimé et fonctionnel dans les cellules dendritiques dérivées de la moelle. Nous avons ensuite montré que l’activation du récepteur par l’UDP favorise la capture d’antigènes in vitro, potentialise l’expression de molécules de co-stimulation (CD80 et CD86) et la production d’IL-12 p70 et de TNF-α en réponse au CpG ODN indiquant que la modulation de la réponse immune observée in vivo s’explique, en partie du moins, par les effets du récepteur sur différentes fonctions des DCs., Doctorat en Sciences, info:eu-repo/semantics/nonPublished