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Donohue syndrome or leprechaunism is a severe congenital insulin-resistance syndrome. It is characterized by intra-uterine and neonatal growth retardation, typical dysmorphic features, and metabolic abnormalities with hyperinsulinism and hyperandrogenism. Problems in energy metabolism and loss of glucose homeostasis are responsible for early death in the first year of life. We describe a case with a novel homozygote mutation in the insulin receptor gene. This patient had hypertrophic cardiomyopathy with heart failure and bronchial compression leading to clinical deterioration over 5 days and subsequently death. A treatment with recombinant IGF-1 was tried without efficacy.

The acute coronary syndromes (ACS) are classified among the major causes of mortality in the industrialized countries. The increased angiotensin I converting enzyme (ACEI) activity related to a genetic polymorphism constitutes a hereditary predisposition to these syndromes.Evaluate the ACEI activity in Tunisian patients with coronary heart disease, and investigate the association between this activity and an intronic deletion of 287 pb on the intron 16 of the ACEI gene.Seventy-two coronary patients and 34 control subjects are recruited for our study. ACEI activity was measured by kinetic method. The intronic deletion was identified by PCR technique.An increased activity of ACEI was observed in patients compared with control subjects (84.38 ± 33.83 UI/L vs 59.06 ± 18.2 UI/L, P=10(-5)). The molecular study showed a raised relative frequency of D/D genotype (51.4%) among patients, whereas among the witnesses, I/I genotype prevailed (62%). D/D genotype is always associated with highest ACEI activity for the patients and the control subjects.The molecular studies and the biochemical investigations of the various parameters of cardiovascular risk (including the ACEI) direct towards a better treatment.

The aim of this review is to draw the attention to the numerous steps of gene expression which operate at the RNA level and which are significant drivers of the transformation process. The analysis of genomic abnormalities was at first limited to gross chromosomal alterations and to DNA point mutations. Then came the era of transciptomes which were originally believed, since they were mRNAs, to be a faithful reflection of the expressed proteins. As a matter of fact, this first-generation transcriptomics gave only a global, quantitative, assessment of gene expression at a given locus but overlooked the qualitative diversity of the messenger population generated by alternative splicing. We will show that beyond their essential role in the regulation of functions specific to metazoan like development, alternative splicing brings about an important vulnerability to mutations which is at the origin of many pathologies including cancer. The second aspect covered by this review is that of a rather novel category of RNAs, the microRNAs which, although non-coding, functionally behave as oncogenes or tumor suppressors through the negative control they exert on conventional oncogenes or suppressors. Beyond their diagnostic and prognostic interest, these two mechanisms offer entirely novel potential therapeutic targets.

Neurofilaments (NFs) are the major and specific Intermediate Filaments (IF) of neurons. They are required for the maintenance and proper function of axons. Among the three subunits, the high molecular NFH, is the last to appear during neurogenesis and synaptogenesis. However its precise role is unknown. Accumulation of cytoskeleton components is a fundamental event in neurodegenerative diseases, such as Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS), or in peripheral neuropathies, including Neurofilaments. Their aggregation in the cytoplasm or in axon may perturb the axonal flow. We develop a cellular and molecular tool through a fusion protein, NFHGFP, which allows us to follow the metabolism of NFH using the fluorochrome eGFP. The expression of NFHGFP, in cell culture experiments or in transgenic mice, does not modify the metabolism of IF, nor NFHGFP aggregation induced with specific IF toxic drugs or in double transgenic mice (NFHLacZ/NFHGFP). NFHGFP appears to be a new tool that could help to dissect the mechanisms of neuronal differentiation, intracellular and axono-myelinic interactions, neurotoxicity? We also show that regulatory elements are present in the second intron of NFH. These results are in accordance with those described for NFM and NFL. After having described, in mice, that a microtubule associated protein, STOP, is also associated with Neurofilaments, we demonstrated that STOP is also present in human nervous tissues and is associated with Neurofilaments. The protein is also aggregated in pathological neuronal structures known to be enriched in NFs, the spheroids. Finally, in axonal peripheral neuropathies of unknown aetiology, we point up that expression of Tubulin and NFs, is the same as in axonal growth and we postulate that chronic failure of regeneration may explain the pathophysiology of these neuropathies.; Le cytosquelette des neurones matures est majoritairement composé de Neurofilaments. Ils sont nécessaires à la mise en place et au maintien de l'axone. Parmi les trois sous unités qui composent le neurofilament, celle de haut poids moléculaire (NFH) apparaît le plus tardivement lors de la différentiation de la synapse et sa fonction précise est mal connue. Une perturbation du métabolisme des Neurofilaments (à l'échelon de la protéine et/ou du gène) est impliquée dans certaines pathologies du système nerveux. Dans les maladies neurodégénératives, en particulier dans la Sclérose Latérale Amyotophique (SLA) ou dans des neuropathies périphériques, l'agrégation de NFs dans le corps cellulaire et dans l'axone, avec perturbation du flux axonal, est un événement fondamental. Nous avons développé un outil cellulaire et moléculaire, utilisant une protéine de fusion NFHGFP, permettant, grâce à un fluorochrome (eGFP), de suivre le métabolisme de NFH. En culture de cellules ou chez des souris transgéniques, l'expression de cette protéine de fusion ne modifie pas leur fonctionnement ni leur comportement en présence notamment de drogues susceptibles d'entraîner leur agrégation. L'utilisation de cet outil, en particulier en association avec l'expression de la protéine NFHLacZ, ouvre la voie pour de nouvelles études en situation physiologique et pathologique : différentiation neuronale, interactions intracellulaires et axonomyéliniques, études de neurotoxicité... Les travaux présentés portent également sur les mécanismes de régulation intragénique de NFH. Nous avons montré que, comme pour les deux autres sous unités (NFL et NFM), les séquences introniques, en particulier le second intron, permettaient de contrôler dans le temps et dans l'espace l'expression d'un rapporteur. Dans un objectif de transposition des résultats de la recherche fondamentale et expérimentale à la recherche clinique, nous avons démontré qu'une protéine initialement décrite comme associée aux microtubules (STOP) était également associée aux neurofilaments dans les tissus humains normaux et pathologiques (SLA). Enfin nous avons pu établir que le profil d'expression de la tubuline et des Neurofilaments dans des neuropathies périphériques de cause indéterminée reproduisait celui de la croissance axonale, et qu'une régénération inefficace pouvait également être à l'origine de certaines neuropathies.

Neurofilaments (NFs) are the major and specific Intermediate Filaments (IF) of neurons. They are required for the maintenance and proper function of axons. Among the three subunits, the high molecular NFH, is the last to appear during neurogenesis and synaptogenesis. However its precise role is unknown. Accumulation of cytoskeleton components is a fundamental event in neurodegenerative diseases, such as Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS), or in peripheral neuropathies, including Neurofilaments. Their aggregation in the cytoplasm or in axon may perturb the axonal flow. We develop a cellular and molecular tool through a fusion protein, NFHGFP, which allows us to follow the metabolism of NFH using the fluorochrome eGFP. The expression of NFHGFP, in cell culture experiments or in transgenic mice, does not modify the metabolism of IF, nor NFHGFP aggregation induced with specific IF toxic drugs or in double transgenic mice (NFHLacZ/NFHGFP). NFHGFP appears to be a new tool that could help to dissect the mechanisms of neuronal differentiation, intracellular and axono-myelinic interactions, neurotoxicity? We also show that regulatory elements are present in the second intron of NFH. These results are in accordance with those described for NFM and NFL. After having described, in mice, that a microtubule associated protein, STOP, is also associated with Neurofilaments, we demonstrated that STOP is also present in human nervous tissues and is associated with Neurofilaments. The protein is also aggregated in pathological neuronal structures known to be enriched in NFs, the spheroids. Finally, in axonal peripheral neuropathies of unknown aetiology, we point up that expression of Tubulin and NFs, is the same as in axonal growth and we postulate that chronic failure of regeneration may explain the pathophysiology of these neuropathies., Le cytosquelette des neurones matures est majoritairement composé de Neurofilaments. Ils sont nécessaires à la mise en place et au maintien de l'axone. Parmi les trois sous unités qui composent le neurofilament, celle de haut poids moléculaire (NFH) apparaît le plus tardivement lors de la différentiation de la synapse et sa fonction précise est mal connue. Une perturbation du métabolisme des Neurofilaments (à l'échelon de la protéine et/ou du gène) est impliquée dans certaines pathologies du système nerveux. Dans les maladies neurodégénératives, en particulier dans la Sclérose Latérale Amyotophique (SLA) ou dans des neuropathies périphériques, l'agrégation de NFs dans le corps cellulaire et dans l'axone, avec perturbation du flux axonal, est un événement fondamental. Nous avons développé un outil cellulaire et moléculaire, utilisant une protéine de fusion NFHGFP, permettant, grâce à un fluorochrome (eGFP), de suivre le métabolisme de NFH. En culture de cellules ou chez des souris transgéniques, l'expression de cette protéine de fusion ne modifie pas leur fonctionnement ni leur comportement en présence notamment de drogues susceptibles d'entraîner leur agrégation. L'utilisation de cet outil, en particulier en association avec l'expression de la protéine NFHLacZ, ouvre la voie pour de nouvelles études en situation physiologique et pathologique : différentiation neuronale, interactions intracellulaires et axonomyéliniques, études de neurotoxicité... Les travaux présentés portent également sur les mécanismes de régulation intragénique de NFH. Nous avons montré que, comme pour les deux autres sous unités (NFL et NFM), les séquences introniques, en particulier le second intron, permettaient de contrôler dans le temps et dans l'espace l'expression d'un rapporteur. Dans un objectif de transposition des résultats de la recherche fondamentale et expérimentale à la recherche clinique, nous avons démontré qu'une protéine initialement décrite comme associée aux microtubules (STOP) était également associée aux neurofilaments dans les tissus humains normaux et pathologiques (SLA). Enfin nous avons pu établir que le profil d'expression de la tubuline et des Neurofilaments dans des neuropathies périphériques de cause indéterminée reproduisait celui de la croissance axonale, et qu'une régénération inefficace pouvait également être à l'origine de certaines neuropathies.

Bruton's disease is the most frequently primary X-linked immunodeficiency. Patients are more susceptible to early and recurring infections associated with hypo/agammaglobulinemia and a severe B-cell deficiency. Moreover, 400 mutations were found in the XLA gene which codes the Btk tyrosine kinase and were identified as responsible for Bruton's disease. Genetic study was carried out with one group of patients named NECKER, composed by five XLA patients and two parents whose XLA gene was sequenced by an Italian crew. Results were obtained by PCR of 19 exons and initial/terminal intron's parts, followed by PCR-sequencing with universal primers and sequencing. The results from this study allowed the validation of the sequencing technique by comparing NECKER group data (equivalent results with Italian data). In addition, the mutation multiplicity (described or not, coding/non coding) need an exact analysis that should be given to clinicians through clear and trustful results. In this way, a strategy to analyse untreated results was created based on the mutation type. The genetic analysis could help physicians for uncertain diagnosis in immune defficiencies, allows proposing a genetic advice to the patient's family and the construction of a data base permits a best understanding of this disease.

Twenty four patients suffering from osteopetrosis caused by carbonic anhydrase II deficiency are colliged. This pathology seems to be frequent in Tunisia. Mental retardation is present in 52%, 85% of patients have short stature and 25% have optic atrophy. All affected subjects show craniofacial disproportion and dental anomalies. Twenty patients have at least one bone fracture. Metabolic acidosis is constant: it is profound during the first life decade. A severe selective reduction of carbonic anhydrase II in erythrocyte is confirmed in 18 cases. Osteosclerosis and defective skeletal modelling are constant, cerebral calcification can be seen at the scanner approximately at the age of two years and six months. All patients are homozygous for a splice junction mutation in intron 2 of the carbonic anhydrase II gene, this mutation does not seem to protect patients from bone fractures nor induce a severe metabolic acidosis.

Non disponible / Not available, Mon travail de thèse a porté sur l'étude des paramètres définissant l'efficacité relative des sites d'épissage du transcrit primaire du virus HIV-1. La régulation de cette étape de l'expression des gènes viraux régit la production des différentes protéines, mais aussi de l'ARN génomique. L'épissage de l'ARN de HIV-1 est un processus complexe, puisque 4 sites donneurs et R sites accepteurs sont utilisés en combinaison les uns avec les autres et qu'une régulation négative globale exercée par la protéine Rev permet le transport d'ARN non épissé dans le cytoplasme où il est encapsidé dans les nouveaux virions. J'ai réalisé un ensemble de constructions génétiques qui m'a permis de déterminer par des expériences d'épissage in vitro, la force intrinsèque respective de chaque site d'épissage et couple de sites de l'ARN de HIV-l. Les sites donneurs se sont tous avérés efficaces, bien qu'à des degrés divers in vitro. Les résultats obtenus montrent que les régulations s'exercent majoritairement au niveau des sites accepteurs qui sont sous-optimaux. Plusieurs de ces sites ne sont pas fonctionnels in vitro. Il s'agit de la première étude exhaustive du comportement in vitro de l'ensemble des sites d'épissage de l'ARN du virus HIV-l. [...]

Non disponible / Not available, Le petit ARN nucléolaire U3 joue un rôle essentiel pour la maturation des ARN ribosomiques chez les eucaryotes. Il est essentiel pour la production de l'ARNr 18S. Le snoRNA U3 est codé par deux gènes chez la levure S. cerevisiae et notre équipe avait fait l'observation inattendue de la présence d'un intron épissé dans un spliceosome dans ces deux gènes. La structure secondaire du snoRNA U3 en solution avait été établie. Dans un premier temps, nous avons étudié la structure secondaire du précurseur du snoRNA U3A, ce qui a impliqué à la fois une étude expérimentale de l'ARN sauvage par emploi de sondes chimiques et enzymatiques et la production et l'étude de la structure secondaire de nombreux mutants afin d'aboutir à une proposition unique de structure secondaire en accord avec tous les résultats expérimentaux. Selon le modèle ainsi établi, une large part des motifs structuraux présents dans l'ARN mature sont déja formés dans le précurseur et l'intron est lui-même fortement structuré avec une longue structure tige-boucle centrale et une boîte 5' appariée au premier exon. Nous avons montré qu'en dépit des différences de séquences de l'intron, le précurseur du snoRNA U3B a la même architecture, d'où l'idée de l'influence de la structuration du précurseur sur l'efficacité d'épissage. C'est ce que nous avons pu confirmer par une étude de la relation structure-efficacité d'épissage de l'ARN précurseur basée sur la production de précurseurs mutés, l'étude de leur structure secondaire et de leur efficacité d'épissage in vitro et in vivo. Nous avons en particulier pu montrer l'additivité des effets de la présence de la boîte de branchement sous-optimale et d'un appariement de la boîte 5' et l'importance de la structure de la tige-boucle centrale. Ces travaux m'ont amené à développer un test génétique chez S. cerevisiae de la fonctionnalité du gène du snoRNA U3. [...]

Non disponible / Not available, Le petit ARN nucléolaire U3 joue un rôle essentiel pour la maturation des ARN ribosomiques chez les eucaryotes. Il est essentiel pour la production de l'ARNr 18S. Le snoRNA U3 est codé par deux gènes chez la levure S. cerevisiae et notre équipe avait fait l'observation inattendue de la présence d'un intron épissé dans un spliceosome dans ces deux gènes. La structure secondaire du snoRNA U3 en solution avait été établie. Dans un premier temps, nous avons étudié la structure secondaire du précurseur du snoRNA U3A, ce qui a impliqué à la fois une étude expérimentale de l'ARN sauvage par emploi de sondes chimiques et enzymatiques et la production et l'étude de la structure secondaire de nombreux mutants afin d'aboutir à une proposition unique de structure secondaire en accord avec tous les résultats expérimentaux. Selon le modèle ainsi établi, une large part des motifs structuraux présents dans l'ARN mature sont déja formés dans le précurseur et l'intron est lui-même fortement structuré avec une longue structure tige-boucle centrale et une boîte 5' appariée au premier exon. Nous avons montré qu'en dépit des différences de séquences de l'intron, le précurseur du snoRNA U3B a la même architecture, d'où l'idée de l'influence de la structuration du précurseur sur l'efficacité d'épissage. C'est ce que nous avons pu confirmer par une étude de la relation structure-efficacité d'épissage de l'ARN précurseur basée sur la production de précurseurs mutés, l'étude de leur structure secondaire et de leur efficacité d'épissage in vitro et in vivo. Nous avons en particulier pu montrer l'additivité des effets de la présence de la boîte de branchement sous-optimale et d'un appariement de la boîte 5' et l'importance de la structure de la tige-boucle centrale. Ces travaux m'ont amené à développer un test génétique chez S. cerevisiae de la fonctionnalité du gène du snoRNA U3. [...]

Non disponible / Not available, Mon travail de thèse a porté sur l'étude des paramètres définissant l'efficacité relative des sites d'épissage du transcrit primaire du virus HIV-1. La régulation de cette étape de l'expression des gènes viraux régit la production des différentes protéines, mais aussi de l'ARN génomique. L'épissage de l'ARN de HIV-1 est un processus complexe, puisque 4 sites donneurs et R sites accepteurs sont utilisés en combinaison les uns avec les autres et qu'une régulation négative globale exercée par la protéine Rev permet le transport d'ARN non épissé dans le cytoplasme où il est encapsidé dans les nouveaux virions. J'ai réalisé un ensemble de constructions génétiques qui m'a permis de déterminer par des expériences d'épissage in vitro, la force intrinsèque respective de chaque site d'épissage et couple de sites de l'ARN de HIV-l. Les sites donneurs se sont tous avérés efficaces, bien qu'à des degrés divers in vitro. Les résultats obtenus montrent que les régulations s'exercent majoritairement au niveau des sites accepteurs qui sont sous-optimaux. Plusieurs de ces sites ne sont pas fonctionnels in vitro. Il s'agit de la première étude exhaustive du comportement in vitro de l'ensemble des sites d'épissage de l'ARN du virus HIV-l. [...]

Non disponible / Not available, Au cours de ce travail de thèse, nous avons étudié la structure secondaire du snoRNA U3A de S cerevisiae libre et au sein de la snoRNP U3. Nous avons aussi étudié la structure secondaire des pré-snoRNA U3A et U3B et de l'intron de l'ARN prémessager de l'actine de S cerevisiae. Les résultats obtenus ont permis de proposer des modèles de structure secondaire pour les snoRNA U3 et pré-snoRNA U3 de levures des genres Kluyveromyces, Pichia et Hansenula, d'identifier les motifs et séquences conservés dans ces ARN. Enfin, nous avons réalisé une étude de la relation entre la structure secondaire du pré-snoRNA U3 et son efficacité d'épissage in vitro et in vivo. Nous montrons que le snoRNA U3 de S cerevisiae, qui est impliqué dans les premières étapes de maturation du pré-ARN ribosomique, est constitué de deux domaines. Un domaine 3'qui présente une structure à 4 branches, avec au centre et au sein d'une des hélices, quatre des boîtes phylogénétiquement conservées du snoRNA U3. Ces boîtes constituent comme nous l'avons montré, le site defixation des protéines de la snoRNP U3. Le rôle essentiel du domaine 3' doit être de fixer les protéines. Le domaine 5', de petite taille, comporte deux structures tige/boucle de faible stabilité. Ce domaine comporte deux séquences qui interagissent avec le pré-ARN ribosomique, la boite.A et un segment s'appariant à la région 5' ETS. Une grande partie de cette structuration de l'ARN mature est déjà formée dans l'ARN précurseur. L'intron du pré-snoRNA U3A comporte une longue structure tige/boude centrale et des structures tige/boucle renfermant le site 5' et le site 3' d'épissage. C'est la première structure secondaire complète établie pour un pré-ARN épissé dans un spliceosome. L'observation d'une structure tige/boucle centrale dans l'intron est un argument fort en faveur de l'hypothèse selon laquelle les longs introns chez S cerevisiae doivent avoir une structuration permettant de rapprocher le site 5'et la boîte de branchement afin de favoriser la formation des complexes spliceosomaux. Nous avons apporté d'autres arguments expérimentaux complémentaires en faveur de cette hypothèse, en étudiant l'intron du pré-ARNm de l'actine et en remodelant la région centrale de l'intron du pré-snoRNA U3A. Enfin, l'étude de pré-snoRNA d'autres levures apporte des arguments phylogénétiques enfaveur d'un rôle important de cette structure tige/boucle centrale. D'une manière générale, toutes les caractéristiques structurales du pré-snoRNA U3A sont conservées dans les autres pré-snoRNA U3A que nous avons étudiés, ce qui suggère une importance fonctionnelle de ces caractéristiques structurales. Le remodelage du pré-snoRNA U3A et la production de pré-ARN chimériques entre pré-snoRNA U3A et pré-ARNm de l'actine a montré l'importance de la structure secondaire dupré-ARN pour l'efficacité d'épissage chez S cerevisiae. Un appariement fort du site 5' ou de la boîte de branchement bloque l'épissage, un appariement du site 3' est mieux toléré. La structure secondaire du pré-snoRNA U3A a manifestement été sélectionnée de façon à assurer une forte efficacité d'épissage de ce pré-ARN, malgré une boîte 5' appariée et une boîte de branchement non canonique, d'où sans doute des possibilités de régulation. Nous avons montré l'importance qu'avait, pour le fort taux d'épissage observé, la présence d'une boîte de branchement en simple brin et de manière très inattendue, la présence d'un exon 2 très structuré. Cet exon peut même avoir un effet activateur en cis sur l'épissage d'un intron hétérologue.

Non disponible / Not available, Au cours de ce travail de thèse, nous avons étudié la structure secondaire du snoRNA U3A de S cerevisiae libre et au sein de la snoRNP U3. Nous avons aussi étudié la structure secondaire des pré-snoRNA U3A et U3B et de l'intron de l'ARN prémessager de l'actine de S cerevisiae. Les résultats obtenus ont permis de proposer des modèles de structure secondaire pour les snoRNA U3 et pré-snoRNA U3 de levures des genres Kluyveromyces, Pichia et Hansenula, d'identifier les motifs et séquences conservés dans ces ARN. Enfin, nous avons réalisé une étude de la relation entre la structure secondaire du pré-snoRNA U3 et son efficacité d'épissage in vitro et in vivo. Nous montrons que le snoRNA U3 de S cerevisiae, qui est impliqué dans les premières étapes de maturation du pré-ARN ribosomique, est constitué de deux domaines. Un domaine 3'qui présente une structure à 4 branches, avec au centre et au sein d'une des hélices, quatre des boîtes phylogénétiquement conservées du snoRNA U3. Ces boîtes constituent comme nous l'avons montré, le site defixation des protéines de la snoRNP U3. Le rôle essentiel du domaine 3' doit être de fixer les protéines. Le domaine 5', de petite taille, comporte deux structures tige/boucle de faible stabilité. Ce domaine comporte deux séquences qui interagissent avec le pré-ARN ribosomique, la boite.A et un segment s'appariant à la région 5' ETS. Une grande partie de cette structuration de l'ARN mature est déjà formée dans l'ARN précurseur. L'intron du pré-snoRNA U3A comporte une longue structure tige/boude centrale et des structures tige/boucle renfermant le site 5' et le site 3' d'épissage. C'est la première structure secondaire complète établie pour un pré-ARN épissé dans un spliceosome. L'observation d'une structure tige/boucle centrale dans l'intron est un argument fort en faveur de l'hypothèse selon laquelle les longs introns chez S cerevisiae doivent avoir une structuration permettant de rapprocher le site 5'et la boîte de branchement afin de favoriser la formation des complexes spliceosomaux. Nous avons apporté d'autres arguments expérimentaux complémentaires en faveur de cette hypothèse, en étudiant l'intron du pré-ARNm de l'actine et en remodelant la région centrale de l'intron du pré-snoRNA U3A. Enfin, l'étude de pré-snoRNA d'autres levures apporte des arguments phylogénétiques enfaveur d'un rôle important de cette structure tige/boucle centrale. D'une manière générale, toutes les caractéristiques structurales du pré-snoRNA U3A sont conservées dans les autres pré-snoRNA U3A que nous avons étudiés, ce qui suggère une importance fonctionnelle de ces caractéristiques structurales. Le remodelage du pré-snoRNA U3A et la production de pré-ARN chimériques entre pré-snoRNA U3A et pré-ARNm de l'actine a montré l'importance de la structure secondaire dupré-ARN pour l'efficacité d'épissage chez S cerevisiae. Un appariement fort du site 5' ou de la boîte de branchement bloque l'épissage, un appariement du site 3' est mieux toléré. La structure secondaire du pré-snoRNA U3A a manifestement été sélectionnée de façon à assurer une forte efficacité d'épissage de ce pré-ARN, malgré une boîte 5' appariée et une boîte de branchement non canonique, d'où sans doute des possibilités de régulation. Nous avons montré l'importance qu'avait, pour le fort taux d'épissage observé, la présence d'une boîte de branchement en simple brin et de manière très inattendue, la présence d'un exon 2 très structuré. Cet exon peut même avoir un effet activateur en cis sur l'épissage d'un intron hétérologue.

Non disponible / Not available, Nos travaux ont porté sur le petit ARN nucléolaire U3 (snoRNA), un des éléments essentiels à la maturation des ARN ribosomiques chez les eucaryotes. Au travers d'une étude des gènes de snoRNA U3 de différentes levures appartenant aux genres Saccharomyces, Pichia, Kluyveromyces et Hansenula, nous avons pu apporter des informations sur la structure secondaire du snoRNA U3 mature et de son précurseur, sur la relation structure/fonction du snoRNA U3 et sur l'évolution des gènes de snoRNA U3 chez les levures. Nous avons ainsi montré que la propriété particulière de la présence d'un intron épissé dans le spliceosome dans les gènes U3 de S. cerevisiae est partagée par les levures des 4 genres étudiés, avec néanmoins la coexistence de gènes avec et sans intron dans les genres Pichia et Kluyveromyces. Les pré-snoRNA U3 produits par les gènes contenant un intron se replient selon une structure secondaire présentant un grand nombre de caractéristiques communes, en particulier, au niveau des séquences essentielles à l'épissage et nous apportons la première démonstration phylogénétique de l'importance biologique de la présence d'une structure tige/boucle centrale rapprochant les sites fonctionnels des longs introns de levure. Nos résultats ont aussi permis d'affiner le modèle de structure secondaire du snoRNA U3 et de démontrer l'importance pour la fonction de cet ARN d'une complémentaire de 10 pb entre cet ARN et la région 5'ETS du pré-ARNR. Ce segment de 10 pb appartient au domaine 5' très conservé en séquence et structuré chez toutes les levures. Par contre, le domaine 3', cruciforme, est très variable en taille et en séquence. Nous avons montré que des snoRNA U3 issus d'espèces des genres Pichia et Kluyveromyces avec des domaines 3' très différents de ceux des ARN de S. cerevisiae sont néanmoins fonctionnels dans cette espèce.

Not available, Nous avons montré la présence d'un intron de type intron de gènes nucléaires de protéines, dans les gènes codant pour le snrna u3 de s. cerevisiae. Le pre-snrna u3 et épisse dans un spliceosome. S. cerevisiae contient deux gènes a et b codant pour le snrna u3. Dans chacun l'intron est situé à la même position, mais à une taille et une séquence différente. Le gène b est présent chez les saccharomyces, mais pas chez les kluyveromyces et les pichia. La séquence des introns de type a est très conservée chez les saccharomyces, kluyveromyces et pichia. La détermination de la structure secondaire du snrna u3 de levure, en solution montre qu'il est constitué: d'un domaine 3 fortement structuré qui fixe les protéines de la snrnp u3 et d'un domaine 5, de structure plus lâche, qui interagit avec le pre-arn ribosomique. Ce domaine a une structure secondaire différente chez les eucaryotes inferieurs et chez les eucaryotes supérieurs. Nous avons aussi déterminé la structure secondaire du pre-snrna u3. La majorité des éléments de structure de l'arn mature se retrouvent dans le pre-arn. L'intron présente une longue structure tige-boucle centrale. Les sites fonctionnels sont regroupés dans l'espace. Ce qui favorise, sans doute, l'assemblage du spliceosome. L'épissage in vitro de différents pre-arn u3 mutes et chimériques montre que la conformation et la séquence du site de branchement sont des paramètres essentiels pour l'efficacité d'épissage et que l'addition d'un segment très structuré en 5 du premier exon augmente le taux d'épissage in vitro, lorsque la boite de branchement est gactaac

Not available, Nous avons montré la présence d'un intron de type intron de gènes nucléaires de protéines, dans les gènes codant pour le snrna u3 de s. cerevisiae. Le pre-snrna u3 et épisse dans un spliceosome. S. cerevisiae contient deux gènes a et b codant pour le snrna u3. Dans chacun l'intron est situé à la même position, mais à une taille et une séquence différente. Le gène b est présent chez les saccharomyces, mais pas chez les kluyveromyces et les pichia. La séquence des introns de type a est très conservée chez les saccharomyces, kluyveromyces et pichia. La détermination de la structure secondaire du snrna u3 de levure, en solution montre qu'il est constitué: d'un domaine 3 fortement structuré qui fixe les protéines de la snrnp u3 et d'un domaine 5, de structure plus lâche, qui interagit avec le pre-arn ribosomique. Ce domaine a une structure secondaire différente chez les eucaryotes inferieurs et chez les eucaryotes supérieurs. Nous avons aussi déterminé la structure secondaire du pre-snrna u3. La majorité des éléments de structure de l'arn mature se retrouvent dans le pre-arn. L'intron présente une longue structure tige-boucle centrale. Les sites fonctionnels sont regroupés dans l'espace. Ce qui favorise, sans doute, l'assemblage du spliceosome. L'épissage in vitro de différents pre-arn u3 mutes et chimériques montre que la conformation et la séquence du site de branchement sont des paramètres essentiels pour l'efficacité d'épissage et que l'addition d'un segment très structuré en 5 du premier exon augmente le taux d'épissage in vitro, lorsque la boite de branchement est gactaac

Lipoprotein lipase plays a major role in the metabolism of circulating triglyceride-rich lipoproteins. In relation with this study, the fundamental results concerning the structure of human LPL gene are first summarized. Sequencing of this gene enabled us to characterize an Alu sequence. Interest of these repetitive sequences is exposed.