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Johne’s disease is a category 2 health risk (as indicated in French legislation) and is still very widespread among ruminants. It is a difficult disease to eradicate because of its specificity and control policies. Most analyses carried out today are ELISA tests, the result of which depends on the stage of the infection. It may become possible to detect sub-clinical cases with the development of novel tests. Promising leads include bacteriophage tests, interferon tests, transcriptomic analysis or Mycobacterium avium ssp. paratuberculosis protein microarray tests., La paratuberculose, danger sanitaire de seconde catégorie, est une maladie encore très répandue chez les ruminants. Pour l’éradiquer, la difficulté tientà la fois à sa spécificité et aux politiques de contrôle. La plupart des analyses sont aujourd’hui réalisées par la méthode immuno-enzymatique Elisa, dont le résultat dépend du stade de l’infection. La détection de cas infracliniques pourrait devenir possible avec l’arrivée de nouveaux tests. Parmi les pistesprometteuses, citons les tests à bactériophages, à l’interféron, l’analyse transcriptomique ou encore les puces à protéines de Mycobacterium avium ssp.paratuberculosis.

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Reconstitution d'un modèle d'alvéole pulmonaire à partir de cellules primaires bovines pour étudier la physiopathologie de la tuberculose. 4. Conférence du MycoClub

Les bacteriocines de bacteries lactiques sont l'objet d'une attention toute particuliere depuis une dizaine d'annees en raison de l'interet tant fondamental qu'applique qu'elles suscitent. Produites par de nombreuses especes et dirigees contre des especes homologues ou plus eloignees, comme Listeria monocytogenes, leur structure primaire a permis de definir une classification en trois classes (lantibiotiques, petites bacteriocines non lantibiotiques et bacteriocines de grande taille). Leur mode d'action a ete egalement analyse et differents modeles existent pour expliquer la perforation des membranes des cellules cibles de ces bacteriocines. La formation de pores membranaires se fait via un recepteur proteique (non lantibiotiques) ou par une insertion directe dans les bicouches phospholipidiques (lantibiotiques), plusieurs molecules d'une meme bacteriocine agissant en synergie dans tous les cas. L'analyse des determinants genetiques des bacteriocines montre une situation relativement simple dans le cas de la divergicine A (utilisation de la voie generale d'exportation) et plus complexe dans tous les autres cas decrits (voies d'exportation specifiques faisant appel a des transporteurs de type ABC). La comprehension des mecanismes de production, d'immunite, de regulation, mais aussi du mode d'action des bacteriocines de bacteries lactiques et des resistances en emergence demande a etre affinee a l'echelle moleculaire avant de pouvoir envisager de reelles applications dans les produits laitiers et carnes.

Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map), the etiological agent of paratuberculosis, has evolved into two types called, S for "Sheep" and C for "Cattle." The small intestine is the primary site of Map infection but the molecular mechanisms involved in the establishment of bacilli are still unknown. The aim of my thesis was to identify and characterize the adhesins expressed by Map by genetic and biochemical approaches. I purified HBHA and LBP by affinity chromatography then identified them by mass spectrometry. The originality of this work is based on the polymorphism of these adhesins observed between strains of type C and S. This variability has been demonstrated in the binding domain involved in interaction with sulfated sugars of host cell influences adhesins affinity for heparin. This thesis has characterized for the first time these two adhesins produced by Map. Specific polymorphism highlighted related to the evolution of the species avium, opens large number questions on their role on the pathogenesis of Map including the cellular tropism, host preference or interest of these antigens to improve diagnostic., Mycobacterium avium ssp. paratuberculosis (Map), agent étiologique de la paratuberculose, a évolué en deux types dénommés, S pour« Sheep » et C pour « Cattle ». L’intestin grêle est le site primaire de l’infection à Map mais les mécanismes moléculaires impliqués dans l’implantation du bacille restent largement méconnus. L’objectif de mon projet de thèse visait à identifier et caractériser les adhésines exprimées par Map par des approches génétiques et biochimiques. J’ai ainsi purifié la HBHA et la LBP par chromatographie d’affinité puis les ai identifiés en spectrométrie de masse. L’originalité de ce travail repose sur le polymorphisme de ces adhésines observé entre les souches de type C et S. Cette variabilité a été mise en évidence sur le domaine d’interaction avec les sucres sulfatés de la cellule hôte influençant l’affinité des adhésines pour l’héparine. Ce travail de thèse a permis de caractériser pour la première fois ces deux adhésines produites par Map. Le polymorphisme de la HBHA et de la LBP, discriminant les types C et S, ouvre de nombreuses perspectives sur l’évolution de l’espèce M. avium et le rôle de ces adhésines sur le tropisme intestinal, la préférence d’hôte de Map ou encore leur potentiel diagnostic.

Diplôme : Dr. d'Université; Introduction : Mycobacterium avium ssp. paratuberculosis (Map) est l’agent étiologique de la paratuberculose, qui affecte les ruminants et est suspectée d’être transmissible à l’homme en lien avec la maladie de Crohn, une inflammation chronique de l’intestin. Le contrôle de cette maladie à forte prévalence, nécessite de mieux identifier et connaître son agent. Aujourd’hui, le typage des souches repose sur la RFLP-IS900 qui est peu discriminante et peu sensible. Objectif : Dans cette optique, mon projet de thèse a eu pour objectif de développer une méthode de typage moléculaire novatrice utilisant les minisatellites afin d’évaluer le degré de diversité génétique de la sous-espèce paratuberculosis. Ce travail nécessite la construction d’une collection de souches et le développement d’une méthode de typage hautement discriminante. Résultats : Nos résultats obtenus avec huit marqueurs MIRU-VNTR (Mycobacterial Interspersed Repetitive Unit-Variable Number Tandem Repeat) montrent que cette méthode est rapide, adaptée à Map et plus discriminante de la RFLP-IS900. Par ailleurs, ces mêmes marqueurs nous ont permis de typer une collection de souches de M. avium ssp. avium et M. avium ssp. hominissuis. Le typage MIRU-VNTR a également permis de différencier la souche vaccinale Map 316F, en fonction de son origine, laboratoire Weybridge (Royaume-Uni) et laboratoire Mérial (France). Dans le but d’affiner la discrimination de ces souches, nous nous sommes intéressés aux marqueurs microsatellites SSR (Short Sequence Repeat) analysés par séquençage. Onze loci SSR ont été analysés et évalués sur une collection de 127 souches de Map préalablement typées par MIRU-VNTR et RFLP- IS900. Les résultats suggèrent que la stratégie la plus adaptée pour la discrimination des souches consiste à utiliser dans un premier temps le typage MIRU-VNTR ; le typage SSR et la RFLP-IS900 peuvent permettre une discrimination complémentaire. Conclusion : Ce travail de thèse nous a permis de développer une méthode de typage rapide, fiable et discriminante pour l’étude de la sous-espèce paratuberculosis, mais également du complexe MAC.