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L’étude des populations lymphocytaires est d’un intérêt particulier lors d’un diagnostic ou d’un suivi immunologique au cours d’un dysfonctionnement du système immunitaire. La cytométrie en flux reste la technique de référence pour cet immunophénotypage. Les lymphocytes T (LT) constituent un réseau dynamique formé par une diversité cellulaire. L’activation des LT naïfs, suite à une stimulation antigénique, permet à long terme la constitution d’un pool de LT mémoires caractérisé par une hétérogénéité cellulaire : ce sont les LT centraux mémoires, les LT effecteurs mémoires et les LT à différenciation terminale.L’objectif de ce travail est, donc de détailler la répartition des sous-ensembles lymphocytaires T naïfs et mémoires, afin de comprendre leur évolution en conditions physiologiques et pathologiques.Au cours de la vie de l’individu, des changements s’opèrent afin d’alimenter ce pool de LT mémoires. De plus, l’altération du compartiment T entraîne un large éventail de maladies immunitaires qui nécessitent un diagnostic rapide et précis afin d'adopter une prise en charge thérapeutique ciblée. En effet, ces voies peuvent fournir des informations importantes sur les mécanismes de virulence, notamment sur le risque de maladie du greffon contre l’hôte, une des complications majeures lors d’une allogreffe de cellules souches hématopoïétiques, conduisant à de nouvelles approches de différenciation du phénotype immunologique au sein de ces cellules chez l'homme. Mais les éléments apportés sur la reconstitution immunitaire sont rares surtout dans la population pédiatrique. Les valeurs de références sont bien déterminées chez l’adulte alors que dans la population pédiatrique, elle est plus limitée. Il est important de mettre en place ces valeurs de références pour les différentes tranches d’âge, de la naissance à l’adolescence, chez des sujets sains pédiatriques.

La lymphohistiocytose hémophagocytaire familiale (LHF) est une entité clinique-biologique-histologique rare due à un défaut d’homéostasie du système immunitaire caractérisée par une hyperactivation des lymphocytes et des histiocytes. Étant donné son taux de mortalité élevé, il s’agit d’une urgence diagnostique et thérapeutique. L’étude des gènes responsables de la HLH a permis de caractériser ses différents sous types et de faciliter son diagnostic. Cependant, le rendu des résultats de génétique peut être long, d’où l’intérêt du développement de tests de dépistage diagnostique plus rapides, comme les tests fonctionnels des cellules NK. Ces analyses permettant d’évaluer leur activité sont les tests de dégranulation, l’analyse de l’expression de la perforine et la cytotoxicité lymphocytaire.Actuellement, ces tests biologiques d’aide au diagnostic se font par cytométrie en flux sur des cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) isolées du sang du patient par séparation sur gradient de Ficoll et incubées dans différents milieux. La stimulation des cellules NK est réalisée avec des cellules cibles (cellules K562 et P815 recouvertes d’anticorps anti-P815). Ces tests d’exploration fonctionnelle des cellules NK se sont montrés pertinents pour les 8 patients présentés, avec selon les cas, des anomalies de l’expression de la perforine ou de la capacité à dégranuler des cellules NK.Au vu du caractère urgent du diagnostic, il est important d’avoir un test prêt à l’emploi réalisable dans le cadre d’une routine hospitalière capable de s’affranchir des cultures de lignées : la mise en place de ce test est en cours au laboratoire.