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Articles correspondant à plusieurs colloques organisés dans le cadre des séminaires du CTPS en 2012.; National audience; GLRaV-2 belonging to the Closterovirus genus of the family Closteroviridae is one of the 5 virus species responsible for leafroll disease of grapevine. GLRaV-2 species encompasses 6 molecular variants exhibiting up to 30% nucleotide divergence. Development of a GLRaV-2 detection test by real-time RTPCR has required design of specific and universal primers towards these different variants. This realtime RT-PCR detection method was validated with a panel of 85 vine samples collected worldwide, 10 of them being negative with ELISA method but readily detected with this new method. Its detection sensivity was increased 125 times compared to a conventional single-tube RT-PCR. Use of this method for detection of GLRaV-2 in rootstocks has shown its higher sensitivity and reliability especially for root tissues.; Le GLRaV-2, appartenant au genre Closterovirus de la famille des Closteroviridae est l’une des 5 espèces virales impliquée dans la maladie de l’enroulement viral de la vigne. Il est constitué de 6 variants moléculaires présentant jusqu’à 30% de divergence nucléotidique. La mise au point d’un test de détection du GLRaV-2 par RT-PCR en temps réel a nécessité le dessin d’amorces spécifiques et universelles vis-à-vis de ces différents variants. Cette méthode de détection a été validée sur un panel international de 85 échantillons de vigne dont 10 étaient négatifs avec la technique ELISA et positifs par cette nouvelle méthode. Un gain de sensibilité d’un facteur 125 de la RT-PCR en temps réel par rapport à la RT-PCR classique a été constaté et son application à la détection du GLRaV-2 dans des porte-greffes a montré sa supériorité en particulier au niveau racinaire.

Le GLRaV-2, appartenant au genre Closterovirus de la famille des Closteroviridae est l’une des 5 espèces virales impliquée dans la maladie de l’enroulement viral de la vigne. Il est constitué de 6 variants moléculaires présentant jusqu’à 30% de divergence nucléotidique. La mise au point d’un test de détection du GLRaV-2 par RT-PCR en temps réel a nécessité le dessin d’amorces spécifiques et universelles vis-à-vis de ces différents variants. Cette méthode de détection a été validée sur un panel international de 85 échantillons de vigne dont 10 étaient négatifs avec la technique ELISA et positifs par cette nouvelle méthode. Un gain de sensibilité d’un facteur 125 de la RT-PCR en temps réel par rapport à la RT-PCR classique a été constaté et son application à la détection du GLRaV-2 dans des porte-greffes a montré sa supériorité en particulier au niveau racinaire., GLRaV-2 belonging to the Closterovirus genus of the family Closteroviridae is one of the 5 virus species responsible for leafroll disease of grapevine. GLRaV-2 species encompasses 6 molecular variants exhibiting up to 30% nucleotide divergence. Development of a GLRaV-2 detection test by real-time RTPCR has required design of specific and universal primers towards these different variants. This realtime RT-PCR detection method was validated with a panel of 85 vine samples collected worldwide, 10 of them being negative with ELISA method but readily detected with this new method. Its detection sensivity was increased 125 times compared to a conventional single-tube RT-PCR. Use of this method for detection of GLRaV-2 in rootstocks has shown its higher sensitivity and reliability especially for root tissues.

International audience

National audience

National audience

National audience

The closterovirus-like particles serotype III, associated with grapevine leafroll disease, were extracted from leaves by PEG precipitation and purified by differential centrifugation. The purification schedule steps were examined by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The loss of virus during purification and the concentration of the preparations were estimated and the virus particles were visualised by electron microscopy.

National audience

non disponible, Le virus des taches foliaires chlorotiques du pommier (apple chlorotic leaf spot virus ou aclsv) est classe parmi les closterovirus. Ce virus infecte la plupart des especes fruitieres et ornementales de la famille des rosacees. Le genome viral constitue d'un arn monocatenaire polyadenyle de 7555 nucleotides a ete clone et sequence. Trois cadres ouverts de lecture chevauchants codent respectivement pour des proteines de 216 kda (orf 1), 50 kda (orf 2) et 28 kda (orf 3). L'analyse par northern blotting des arn bicatenaires montre qu'en plus des formes bicatenaires du genome viral et de deux arn subgenomiques pour les orf 2 et 3, trois autres especes d'arn bicatenaires sont detectees. Deux d'entre elles sont 5 co-terminales avec l'arn genomique. Un modele de production des arn bicatenaires a ete propose. D'apres des homologies de sequences avec des proteines virales de fonction connue, la proteine de 50 kda serait la proteine de transport de l'aclsv. La proteine de 216 kda contient deux motifs de sequence conserves parmi les proteines virales associees a la replication. Sur la base de ces sequences, l'aclsv est classe dans le super groupe des virus alpha-associes au cote des potex-, carla- et tymovirus. La proteine de capside de 22 kda peut etre produite par initiation interne au niveau du second codon d'initiation de l'orf 3. Cette proteine ne montre aucune homologie de sequences avec la proteine de capside du byv (membre type des closterovirus). Ces resultats joints a la difference dans l'organisation de la region 3 du genome de l'aclsv et du byv et aux differences biologiques existant entre ces deux virus, nous conduisent a envisager la classification de l'aclsv dans un nouveau groupe de virus

Diplôme : Dr. d'Université; non disponible; Le virus des taches foliaires chlorotiques du pommier (apple chlorotic leaf spot virus ou aclsv) est classe parmi les closterovirus. Ce virus infecte la plupart des especes fruitieres et ornementales de la famille des rosacees. Le genome viral constitue d'un arn monocatenaire polyadenyle de 7555 nucleotides a ete clone et sequence. Trois cadres ouverts de lecture chevauchants codent respectivement pour des proteines de 216 kda (orf 1), 50 kda (orf 2) et 28 kda (orf 3). L'analyse par northern blotting des arn bicatenaires montre qu'en plus des formes bicatenaires du genome viral et de deux arn subgenomiques pour les orf 2 et 3, trois autres especes d'arn bicatenaires sont detectees. Deux d'entre elles sont 5 co-terminales avec l'arn genomique. Un modele de production des arn bicatenaires a ete propose. D'apres des homologies de sequences avec des proteines virales de fonction connue, la proteine de 50 kda serait la proteine de transport de l'aclsv. La proteine de 216 kda contient deux motifs de sequence conserves parmi les proteines virales associees a la replication. Sur la base de ces sequences, l'aclsv est classe dans le super groupe des virus alpha-associes au cote des potex-, carla- et tymovirus. La proteine de capside de 22 kda peut etre produite par initiation interne au niveau du second codon d'initiation de l'orf 3. Cette proteine ne montre aucune homologie de sequences avec la proteine de capside du byv (membre type des closterovirus). Ces resultats joints a la difference dans l'organisation de la region 3 du genome de l'aclsv et du byv et aux differences biologiques existant entre ces deux virus, nous conduisent a envisager la classification de l'aclsv dans un nouveau groupe de virus

non disponible, Le virus des taches foliaires chlorotiques du pommier (aclsv) est un closterovirus capable d'infecter un grand nombre d'arbres fruitiers. Treize anticorps monoclonaux (acm) specifiques de la souche p863 de l'aclsv ont ete obtenus. L'etude de leur specificite epitopique a montre qu'ils definissent 7 domaines antigeniques distincts au sein du virus. L'analyse de la specificite des acm pour 29 isolats d'aclsv biologiquement differents de la souche p863 indique qu'il possede une structure antigenique tres conservee malgre la grande diversite biologique de ses souches. Les acm caracterises par une forte reactivite en elisa indirect ont ete utilises pour la detection de l'aclsv. L'emploi de trois acm dans le cadre d'un test elisa sandwich (2 acm, adsorbes sur les plaques de microtitration, retenant le virus, et le troisieme revelant sa fixation) conduit a une nette amelioration par rapport au meme procede utilisant des anticorps polyclonaux, augmentant d'un facteur dix la sensibilite de detection. Ce test, capable de detecter les 29 isolats d'aclsv, est tout a fait adapte a l'identification en routine du virus

Peters D., Roseboom P., van der Want J.P.H. Les Aphides : facteurs écologiques dans la dispersion des virus aux végétaux. In: Bulletin de la Société entomologique de France, volume 89 (1-4), Janvier-avril 1984. Livre du Cent Cinquantenaire. Premier congrès international des entomologistes d'expression française. Paris, 6-9 juillet 1982. Comptes rendus des travaux. V. pp. 710-715.

Des particules virales de type closterovirus ont ete purifiees de vignes atteintes d'enroulement. Ces particules sont extraites par une precipitation fractionnee au polyethyleneglycol (PEG 6000) permettant de reduire la proportion de contaminants vegetaux. Elles sont finalement purifiees par centrifugation dans un gradient de saccharose. Les nucleoproteines virales sont injectees a un lapin afin de produire les immunoglobulines necessaires a leur detection en ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Parallelement, les memes particules virales ont servi a l'immunisation d'une poule et a l'extraction d'immunoglobulines a partir des œufs recueillis