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The present study tested a comet assay that was modified for compatibility with Giemsa staining to assess the drug genotoxicity in the peripheral blood of rats. We analysed the peripheral blood of 16 female Wistar rats (N=8 rats/group) from a control group and from a group that was treated with an intraperitoneal injection of 50mg cyclophosphamide/kg. The comet assay was carried out with modifications of the blood volume and immersion time in the lysing solution and different combinations of electrophoresis conditions (running time, voltage and current), to Giemsa staining. The lysing time and electrophoresis conditions allowed for the expression of all classes of DNA damage during the electrophoresis run, and the comets were efficiently stained with Giemsa. The technique showed high reproducibility for the DNA classes. The results demonstrate that the modified comet assay with Giemsa staining can be standardized for routine laboratory procedures using a 20µL blood sample, 3h and 30min immersions in the lysing solution and electrophoresis runs with 23 to 25 V and 310 and 360mA of electrical current. The modified comet assay with Giemsa staining that was described in the present study was standardized to be applied in the laboratory routine. RESUMO O presente estudo testou um ensaio cometa modificado para a coloração de Giemsa para avaliar a genotoxicidade de fármacos no sangue periférico de ratos. Analisou-se o sangue periférico de 16 ratas Wistar (n=8 ratas/grupo) de um grupo controle e de um grupo que foi tratado com uma injeção intraperitoneal de 50mg/kg pv. de ciclofosfamida. O ensaio cometa foi realizado com modificações do volume sanguíneo e do tempo de imersão na solução de lise, bem como com diferentes combinações de condições de eletroforese (tempo de corrida, tensão e corrente), para coloração de Giemsa. O tempo de lise e as condições de eletroforese permitiram a expressão de todas as classes de danos no DNA durante a corrida de eletroforese, e os cometas foram eficientemente corados com Giemsa. A técnica mostrou alta reprodutibilidade para as classes de DNA. Os resultados demonstram que o ensaio cometa modificado com coloração de Giemsa foi padronizado para procedimentos laboratoriais de rotina usando-se uma amostra de sangue de 20µL, 3h30min de imersão na solução de lise e eletroforese com 23 a 25 V e 310 e 360mA. O ensaio cometa modificado com coloração de Giemsa descrito foi padronizado para ser aplicado na rotina laboratorial.

Relatório de Estágio do Mestrado Integrado em Ciências Farmacêuticas apresentado à Faculdade de Farmácia Nanopartículas - Um conceito emergente que se tem estendido amplamente pelo mundo, com inúmeras aplicações no campo biomédico, desde intervenções terapêuticas a diagnósticas. Contudo, quão perigosas estas “partículas do tamanho de vírus” poderão ser?Esta é uma questão que a Nanotoxicologia visa responder, particularmente pelo facto de que, devido ao tamanho extremamente pequeno das nanopartículas e pela sua reatividade aumentada, em comparação com as respetivas matérias-primas, estas partículas têm uma probabilidade acrescida de serem internalizadas pelas células e de interagirem com o material genético, com a possibilidade de induzirem danos no ADN.O Ensaio do Cometa, ou Eletroforese em Gel de Célula-Única (SCGE), destaca-se pela sua capacidade em detetar quebras nas cadeias de ADN, em células eucarióticas. Deste modo, este ensaio apresenta um grande potencial na avaliação das interações das nanopartículas com as células, no que diz respeito à genotoxicidade. Assim sendo, aqui apresentamos uma visão geral das características e etapas envolvidas no Ensaio do Cometa, assim como uma revisão e compilação de algumas das nanopartículas que estão mais propensas ao contacto com os sistemas biológicos e que, adicionalmente, possuem o potencial de induzir, direta ou indiretamente, genotoxicidade (ex:. nanopartículas metálicas), através de diversas vias de administração (nanoformulações orais, tópicas, inalatórias, oculares e parenterais).Na era do boom das nanopartículas, onde as guidelines para a sua avaliação ainda são bastante limitadas, é urgente garantir a sua segurança, juntamente com a sua qualidade e eficácia. Para alcançar esse objetivo, acreditamos que o Ensaio do Cometa poderá ser uma ferramenta essencial e uma fonte confiável para se alcançar uma melhor avaliação nanotoxicológica. Nanoparticles - An emerging concept widely used worldwide, with several applications in the biomedical field, from therapeutics to diagnostics. However, how much hazardous these “virus-sized particles” can be? This is a question that Nanotoxicology aims to answer, particularly when it comes to the fact that, due to the extremely small size of nanoparticles and enhanced reactivity compared to the respective bulk materials, these particles have a high probability of being internalized by cells and interact with the genetic material, with the possibility of inducing DNA damage.The Comet Assay, or Single-Cell Gel Electrophoresis (SCGE), stands out for its capacity of detecting DNA strand breaks in eukaryotic cells. Therefore, it has a huge potential in genotoxicity assessment of nanoparticles and respective cells’ interactions. Here we present an overview of the characteristics and steps involved in the Comet Assay, as well as a review and compilation of some of the nanoparticles that are mostly in contact with biological systems, and additionally have the potential of, direct or indirectly, inducing genotoxicity (e.g.metal nanoparticles), through several routes of administration (oral, skin, inhaled, ocular and parenteral nanoformulations). In a nanoparticles boom era, where guidelines for their evaluation are still very limited, it is urgent to guaranty their safety, along with their quality and efficacy. In order to do so, we believe that Comet Assay may be an essential tool and a reliable source for achieving a better nanotoxicology assessment.

The Doce River basin has suffered the largest environmental accident ever occurred in Brazil with the influx of tailings from Fundão and Santarém, belonging to Samarco mining company, due to the disaster in Mariana. A spill between 50 and 60 million m3 of tailings was estimated by the company. According to Samarco, the wastewater was composed mainly of clay, silt and heavy metals like iron, copper and manganese. Thereby, the objective of the present study was evaluated the genotoxic damage in juvenile of Geophagus brasiliensis (Quoy e Gaimard, 1824) exposed to Doce river water before (DRWBA – Doce River water before acident) and after (DRWAA – Doce River water after acident) the influx of tailings from the Germano and Santarém Dam disasters in Mariana, MG, Brazil. For this, 24 individuals of the species G. brasiliensis (obtained on IFES/ALEGRE fish culture) were submitted to a bioassay with three treatments and eight replicates. The treatments were: 1) Control water (water from the urban water supply system, filtered with a 0.45 µm membrane), 2) DRBA and 3) DRAA. After 96 h, these fishes were anesthetized to remove blood for evaluation of genotoxic damage (micronucleus and comet). For the bioassay, a total of 80 L of The Doce River water were collected before the influx of tailings and after the influx and then submitted to metal quantification analysis. Fish exposed to DRWBA and DRWAA treatments showed a significant increase in both the number of erythrocyte micronuclei and the DNA damage index in relation to the control fish; however, they did not present any differences between the two treatments. The results demonstrate that the DRWBA treatment was already genotoxic for the fish, mainly due to dissolved Cu concentrations in the water. The DRWAA treatment probably presented genotoxicity due to the increase in the dissolved fraction and synergistic effects of several metals found in the tailings of the Mariana accident. Resumo A bacia do Rio Doce sofreu o maior acidente ambiental com o influxo de rejeitos de Fundão e Santarém, pertencentes à empresa de mineração Samarco, devido ao desastre em Mariana. Um derramamento entre 50 e 60 milhões de m3 de rejeitos foi estimado pela empresa. De acordo com a Samarco, o rejeito despejado era composto principalmente de argila, silte e alguns metais pesados como ferro, cobre e manganês. Com isso, o presente estudo teve como objetivo avaliar os danos genotóxicos em juvenis de Geophagus brasilienses expostos a água do rio Doce antes (DRWAA – água do Rio Doce antes do acidente) e depois (DRWBA- água do Rio Doce depois do acidente) da chegada dos rejeitos do rompimento das barragens de Germano e Santarém em Mariana, MG, Brasil. Para isso, 24 indivíduos da espécie G. brasilienses (obtidos na piscicultura do IFES/ALEGRE) foram submetidos a um bioensaio com três tratamentos e oito réplicas. Os tratamentos eram: 1) Controle (com água do abastecimento urbano, filtrada com filtro analítico de 0,45 µm); 2) DRWBA e 3) DRWAA. Após um período de 96 h, esses peixes foram anestesiados para retirada de sangue para avaliação dos danos genotóxicos (micronúcleo e cometa). Para a realização do bioensaio, um total de 80 L de água do Rio Doce foram coletados antes da chegada dos rejeitos e outros 80 L foram coletados depois da chegada dos rejeitos e ambas foram submetidas a análises de quantificação de metal. Os peixes expostos ao DRWBA e ao DRWAA apresentaram um aumento significativo na quantidade de micronúcleos eritrocitários e no índice de danos do DNA em relação aos peixes controle, no entanto não apresentaram diferenças entre si. Os resultados obtidos demonstram que a DRWBA já era genotóxica para os peixes, principalmente, em função das concentrações de Cu dissolvido na água. A DRWAA apresentou genotixicidade, provavelmente, em função do aumento da fração dissolvida e do efeito sinérgico de diversos metais presentes nos rejeitos do acidente de Mariana.

The incidence of fungal infections has increased and it is necessary to seek new antifungals that also act against resistant strains. Palmatine is a protoberberine alkaloid noteworthy for its various pharmacological properties, including antifungal properties. The objective of this study was to evaluate the activity of palmatine against Candida spp. strains resistant to azole in planktonic cells and biofilm, and to elucidate the possible mechanism of cell death. Palmatine showed an antifungal activity with MICs ranging from 32 to 128 μg/mL. In the formed biofilms, palmatine reduced by 50% cell viability at the concentration of 20x MIC (C. albicans) and 10x MIC (C. tropicalis and C. parapsilosis). In the formed biofilms, the same percentage of inhibition was achieved at a concentration of 1x MIC (C. albicans) and 2x MIC (C. tropicalis and C. parapsilosis). It was found that palmatine causes damage to DNA, promotes mitochondrial depolarization and increasing the externalization of phosphatidylserine, suggesting cell death by apoptosis. The antifungal action of palmatine in Candida spp. resistant to azoles in planktonic cells and biofilm formed and in formation, as well as the fact of not having presented cytotoxicity in mammalian cells, point to a promising new anti-candida molecule.

The knowledge of the extent of DNA damage in aquatic organisms in polluted areas is an important issue because contamination may alter their health at sublethal levels. Although molluscs have been widely used to monitor water pollution, there are no records of in vivo genotoxicity studies. Heleobia cf. australis, is distributed in almost all Uruguayan coastal ecosystems, including highly polluted sites. The comet assay is a damage genetic biomarker based on the migration of negatively charged DNA fragments produced by mutagenic agents in individual cells. Live individuals were collected in the Montevideo Bay (impacted area) and Laguna Garzón (control) to analyze the presence of mutagenic agents in the former site through comet assay. Cells from organisms of the impacted area showed significantly higher levels of genetic damage than those obtained in the control population, measured by percentage of DNA in the tail. Although preliminary, this approach supports the idea that H. cf. australis could be used as a sentinel to evaluate the presence of mutagenic agents in estuarine environments, alerting to the impact of contamination in its early stages. ResumoO conhecimento dos danos no DNA em organismos aquáticos de áreas poluídas é uma questão importante, já que a contaminação pode vir a alterar os organismos em níveis subletais. Apesar dos moluscos terem sido amplamente utilizados para monitorar a poluição da água, não há registros de estudos in vivo de genotoxicidade. Heleobia cf. australis é um pequeno gastrópode amplamente distribuído em quase todos os ecossistemas costeiros uruguaios, inclusive em locais altamente poluídos. O ensaio do cometa é um biomarcador genético do dano baseado na migração de fragmentos de DNA com carga negativa produzidas por agentes mutagênicos. Foram coletados indivíduos vivos na Baía de Montevidéu (área impactada) e Laguna Garzón (área controle) para analisar a presença de agentes mutagênicos que ocasionassem dano genético. Células de organismos da área impactada apresentaram níveis significativamente mais elevados de danos genéticos do que os obtidos na área controle. Esse nível de dano foi medido pela porcentagem de DNA na cauda. Embora preliminar, esta abordagem apoia a noção de que H. cf. australispoderia ser usado como sentinela para avaliar a presença de agentes mutagênicos em ambientes estuarinos, alertando sobre o impacto da poluição em estágios iniciais.

Series of biomonitoring surveys were undertaken weekly in February 2012 to investigate the genotoxicity of the shallow waters around the Brazilian Antarctic Station "Comandante Ferraz" (EACF). The comet assay was applied to assess the damage to the DNA of hemocytes of the crustacean amphipods Gondogeneia antarctica collected from shallow waters near the Fuel Tanks (FT) and Sewage Treatment Outflow (STO) of the research station, and compare it to the DNA damage of animals from Punta Plaza (PPL) and Yellow Point (YP), natural sites far from the EACF defined as experimental controls. The damage to the DNA of hemocytes of G. antarctica was not significantly different between sites in the biomonitoring surveys I and II. In survey III, the damage to the DNA of animals captured in shallow waters near the Fuel Tanks (FT) and Sewage Treatment Outflow (STO) was significantly higher than that of the control site of Punta Plaza (PPL). In biomonitoring survey IV, a significant difference was detected only between the FT and PPL sites. Results demonstrated that the shallow waters in front of the station may be genotoxic and that the comet assay and hemocytes of G. antarctica are useful tools for assessing genotoxicity in biomonitoring studies of Antarctic marine coastal habitats. Séries de biomonitoramentos foram executadas semanalmente, durante o mês de fevereiro de 2012, para se investigar a genotoxicidade de ambientes costeiros rasos no entorno da Estação Antártica "Comandante Ferraz (EACF). O ensaio cometa foi aplicado para se avaliar os danos ao DNA hemocitário de crustáceos anfípodes Gondogeneia antarctica coletados em áreas rasas próximas aos tanques de armazenamento de combustível (FT) e saída de efluentes da estação de tratamento de esgoto (STO), em comparação aos danos ao DNA de animais provenientes de Punta Plaza (PPL) e Yellow Point (YP), locais naturais distantes da EACF, definidos como controles experimentais. O dano ao DNA hemocitário de G. antarctica não foi significativamente diferente entre locais, nos biomonitoramentos I e II. No biomonitoramento III, o dano ao DNA de animais coletados em águas rasas próximas aos tanques de combustível e saída de efluentes de esgoto foi significativamente maior do que aquele do controle de Punta Plaza. No biomonitoramento IV, a diferença foi significativa somente entre os locais dos tanques de combustível e de Punta Plaza. Estes resultados demonstram que a contaminação das águas em frente à EACF pode ser genotóxica e que, tanto o ensaio cometa quanto os hemócitos de G. antarcticasão ferramentas úteis na avaliação da genotoxicidade em estudos de biomonitoramento de habitats marinhos costeiros da Antártica.

Fipronil is a pesticide widely used for controlling fleas and ticks in domestic animals, and its short-term exposure can lead to serious effects on animals. However, the possible genotoxic effect of this compound has not been investigated in target animals. Based on the hypothesis that fipronil can induce genotoxicity, this study evaluated the effect of fipronil on DNA damage in peripheral blood cells. For that purpose, ten dogs of both sexes were used in the study. The product (6.7mg/kg) was applied on the dorsal neck region of each animal. Peripheral blood samples were collected immediately prior to application of the product, and at 3, 8 and 24 hours after the application. Samples were processed for comet assay. No statistically significant differences were found among the four time points. The current study suggests for the first time that a single exposure to this pesticide does not induce systemic genotoxic effect in dogs. RESUMO: O fipronil é um inseticida/herbicida amplamente utilizado para controle de pulgas e carrapatos em animais domésticos. Sua exposição a curto prazo tem acarretado efeitos deletérios em animais. Entretanto, o possível efeito genotóxico deste composto ainda não foi investigado em animais alvo. Baseando-se na hipótese de que o fipronil pode induzir genotoxicidade, o presente estudo avaliou o efeito deletério do fipronil no material genético de células de sangue periférico. Para isso, dez cães sadios, de ambos os sexos, foram utilizados neste estudo. O produto (6,7mg/kg) foi aplicado na região dorsal do pescoço de cada animal. As amostras de sangue foram coletadas imediatamente antes da aplicação do produto (controle) e após três, oito e 24 horas da aplicação. As amostras foram imediatamente processadas para condução do teste do cometa, a fim de se avaliar os danos basais no DNA. Não houve diferença significativa entre os quatro momentos de coleta em relação aos danos no material genético. O estudo sugere, pela primeira vez, que uma exposição única a este pesticida não induz efeito genotóxico sistêmico em cães.

Agricultural workers involved in the harvest of tobacco crops are regularly exposed to large quantities of pesticides. In order to determine how this exposure to pesticides induces genetic alterations in these workers, blood samples were obtained from 77 exposed individuals, as well as from 60 unexposed subjects. DNA damage was analyzed by the Comet assay and by the micronucleus (MN) test. The antioxidant profi le was evaluated by activity of superoxide dismutase (SOD), and the polymorphism of gene PON1 was used as a susceptibility biomarker. The content of inorganic elements in the blood samples was determined by PIXE analysis. Our results demonstrated that the damage frequency, damage index, the MN frequency, and the SOD activity were signifi cantly elevated in the exposed relative to the unexposed group. A modulation of the MN results for the PON1 gene was observed in the exposed group. The concentrations of inorganic elements in the exposed group were higher compared to those of the unexposed group. In this study, we observed that genetic damage, and change in oxidative balance were induced by the exposure of workers to complex mixtures of pesticides in the presence of inorganic compounds, whereby an infl uence of the genotype was evident.

O ensaio cometa é um dos ensaios de avaliação de genotoxicidade mais promissores de avaliação do risco humano, sendo recomendado para a monitorização de populações com exposição crónica a agentes genotóxicos. Os laboratórios são ambientes profissionais em que os trabalhadores podem encontrar-se expostos a agentes químicos. As drogas antineoplásicas são agentes químicos que são considerados carcinogénicos e, desta forma, medidas de protecção especiais devem ser adoptadas. O objectivo desta comunicação é contribuir para o desenvolvimento de um programa de biomonitorização que inclui a avaliação de genotoxicidade relacionada com biomarcadores de susceptibilidade genética.

Some water bodies in the Sinos River Basin (SRB) have been suffering the effects of pollution by residential, industrial and agroindustrial wastewater. The presence of cytotoxic and genotoxic compounds could compromise the water quality and the balance of these ecosystems. In this context, the research aimed to evaluate the genotoxicity and cytotoxicity of the water at four sites along the SRB (in the cities of Santo Antônio da Patrulha, Parobé, Campo Bom and Esteio), using bioassays in fish and cell culture. Samples of surface water were collected and evaluated in vitro using the Astyanax jacuhiensis fish species (micronucleus test and comet assay) and the Vero lineage of cells (comet assay and cytotoxicity tests, neutral red - NR and tetrazolium MTT). The micronucleus test in fish showed no significant differences between the sampling sites, and neither did the comet assay and the MTT and NR tests in Vero cells. The comet assay showed an increase in genetic damage in the fish exposed to water samples collected in the middle and lower sections of the basin (Parobé, Campo Bom and Esteio) when compared to the upper section of the basin (Santo Antônio da Patrulha). The results indicate contamination by genotoxic substances starting in the middle section of the SRB. Alguns corpos d’água da Bacia Hidrográfica do Rio dos Sinos (BHRS) vêm sofrendo os efeitos da poluição por efluentes domésticos, industriais e agroindustriais. A presença de compostos citotóxicos e genotóxicos pode comprometer a qualidade da água e o equilíbrio desses ecossistemas. Neste contexto, o objetivo do trabalho foi avaliar a genotoxicidade e a citotoxicidade da água em quatro pontos ao longo da BHRS (Santo Antônio da Patrulha, Parobé, Campo Bom e Esteio), utilizando bioensaios em peixes e em cultura celular. As amostras de água de superfície foram coletadas e avaliadas in vitro utilizando a espécie de peixe Astyanax jacuhiensis (teste de micronúcleo e ensaio cometa) e a linhagem celular tipo Vero (ensaio cometa e os testes de citotoxicidade vermelho neutro - VN e tetrazólio MTT). O teste de micronúcleos em peixes não apresentou diferenças significativas entre os pontos de coleta, assim como o ensaio cometa e os testes VN e MTT nas células Vero. O ensaio cometa demonstrou aumento nos danos genéticos em peixes expostos às amostras de água coletadas nos trechos médio e inferior da bacia (Parobé, Campo Bom e Esteio) em relação ao trecho superior da bacia (Santo Antônio da Patrulha). Os resultados indicam contaminação por substâncias genotóxicas a partir do trecho médio da BHRS.

OBJECTIVE: The aim of this study is to verify if oxidative stress is related to changes in content and pattern of β-catenin protein expression in an experimental model of diversion colitis. METHODS: Sixty Wistar rats were submitted to intestinal bypass. The animals were divided into three groups according to the sacrifice to take place in six, 12 and 18 weeks. For each group, five animals only underwent laparotomy (control). The presence of colitis was diagnosed by histological study, and its severity, by inflammation grading scale. Cellular oxidative stress was measured by comet assay. Tissue expression of β-catenin protein was analyzed by the immunohistochemistry and quantification of its tissue content by computerized morphometry. Statistical analysis was performed with the Student's t-test, median, Mann-Whitney, ANOVA and Kruskal-Wallis, adopting a significance level of 5% (p

Submitted by Guilherme Lemeszenski (guilherme@nead.unesp.br) on 2013-08-22T19:01:14Z No. of bitstreams: 1 S0103-90162010000400003.pdf: 136977 bytes, checksum: 964222892974315120d93ebc9b227da6 (MD5) Made available in DSpace on 2013-08-22T19:01:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 S0103-90162010000400003.pdf: 136977 bytes, checksum: 964222892974315120d93ebc9b227da6 (MD5) Previous issue date: 2010-08-01 Made available in DSpace on 2013-09-30T20:01:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S0103-90162010000400003.pdf: 136977 bytes, checksum: 964222892974315120d93ebc9b227da6 (MD5) S0103-90162010000400003.pdf.txt: 29743 bytes, checksum: f1b0e6f435cc5228bdf60e20d1c224eb (MD5) Previous issue date: 2010-08-01 Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-20T15:15:37Z No. of bitstreams: 2 S0103-90162010000400003.pdf: 136977 bytes, checksum: 964222892974315120d93ebc9b227da6 (MD5) S0103-90162010000400003.pdf.txt: 29743 bytes, checksum: f1b0e6f435cc5228bdf60e20d1c224eb (MD5) Made available in DSpace on 2014-05-20T15:15:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S0103-90162010000400003.pdf: 136977 bytes, checksum: 964222892974315120d93ebc9b227da6 (MD5) S0103-90162010000400003.pdf.txt: 29743 bytes, checksum: f1b0e6f435cc5228bdf60e20d1c224eb (MD5) Previous issue date: 2010-08-01 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Melatonin (MEL) atua como um potente redutor de radicais livres. Efeito direto da MEL na função gonadal também foi observado. Existem poucos estudos relacionados ao efeito da MEL durante a maturação no desenvolvimento embrionário in vitro. Avaliou-se a adição de MEL no meio de maturação (sem gonadotrofinas) nas taxas de maturação nuclear e de desenvolvimento embrionário e na incidência de fragmentação do DNA nos embriões produzidos in vitro. Complexos cumulus-ovócitos foram aspirados de ovários provenientes de matadouros e cultivados em meio de maturação (Meio TCM-199 suplementado com 10% de soro fetal bovino) a 39ºC e 5% CO2 em ar. Após 24 horas de cultivo em meio de maturação com 0,5 µg mL-1 de FSH e 5,0 µg mL-1 de LH; 10-9 M de MEL ou 10-9 M de MEL, 0,5 µg mL-1 de FSH e 5,0 µg mL-1 de LH, os ovócitos foram corados com Hoechst 33342 para avaliação da taxa de maturação nuclear. A fragmentação do DNA dos blastocistos foi avaliada pela técnica do Cometa. Não houve efeito da MEL adicionada ao meio de maturação, com ou sem gonadotrofinas, nas taxas de maturação nuclear, clivagem e blastocistos. Os percentuais variaram entre 88% a 90%, 85% a 88% e 42% a 46%, respectivamente. O grau de fragmentação do DNA também não foi afetado pela adição de MEL ao meio de maturação. A adição de 10-9 M de MEL ao meio de maturação não exerce influência nas taxas de maturação nuclear e de desenvolvimento embrionário e nem da incidência de fragmentação do DNA dos embriões produzidos in vitro, mas pode substituir as gonadotropinas durante a maturação in vitro. Melatonin (MEL) acts as a powerful scavenger of free radicals and direct gonadal responses to melatonin have been reported in the literature. Few studies, however, have evaluated the effect of MEL during in vitro maturation (IVM) on bovine embryos. This study tested the addition of MEL to maturation medium (MM) with no gonadotropins on nuclear maturation and embryo development rates and the incidence of DNA damage in resulting embryos. Cumulus-oocyte complexes were aspirated from abattoir ovaries and cultured in MM (TCM-199 medium supplemented with 10% fetal calf serum - FCS) at 39ºC and 5% CO2 in air. After 24 hours of culture in MM with 0.5 µg mL-1 FSH and 5.0 µg mL-1 LH; 10-9 M MEL) or 10-9 M MEL, 0.5 µg mL-1 FSH and 5.0 µg mL-1 LH, the oocytes were stained with Hoechst 33342 to evaluate nuclear maturation rate. After in vitro fertilization and embryo culture, development rates were evaluated and the blastocysts were assessed for DNA damage by Comet assay. There was no effect of melatonin added to the MM, alone or in combination with gonadotropins, on nuclear maturation, cleavage and blastocyst rates. These rates ranged between 88% to 90%, 85% to 88% and 42% to 46%, respectively. The extent of DNA damage in embryos was also not affected by MEL supplementation during IVM. The addition of 10-9 M MEL to the MM failed to improve nuclear maturation and embryo development rates and the incidence of DNA damage in resulting embryos, but was able to properly substitute for gonadotropins during IVM. USP FZEA Programa de Pós-Graduação em Qualidade e Produtividade Animal UNESP FVMA USP FZEA Depto. de Ciências Básicas USP FZEA Depto. de Zootecnia UNESP FVMA

Submitted by Guilherme Lemeszenski (guilherme@nead.unesp.br) on 2013-08-22T18:42:28Z No. of bitstreams: 1 S1519-69842009000500019.pdf: 125281 bytes, checksum: dae4b15f306c27dd0bb0f458bc061749 (MD5) Made available in DSpace on 2013-08-22T18:42:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 S1519-69842009000500019.pdf: 125281 bytes, checksum: dae4b15f306c27dd0bb0f458bc061749 (MD5) Previous issue date: 2009-11-01 Made available in DSpace on 2013-09-30T18:15:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S1519-69842009000500019.pdf: 125281 bytes, checksum: dae4b15f306c27dd0bb0f458bc061749 (MD5) S1519-69842009000500019.pdf.txt: 32509 bytes, checksum: d425a30e6ebccc776d36b88ffad6523e (MD5) Previous issue date: 2009-11-01 Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-20T13:31:40Z No. of bitstreams: 2 S1519-69842009000500019.pdf: 125281 bytes, checksum: dae4b15f306c27dd0bb0f458bc061749 (MD5) S1519-69842009000500019.pdf.txt: 32509 bytes, checksum: d425a30e6ebccc776d36b88ffad6523e (MD5) Made available in DSpace on 2014-05-20T13:31:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S1519-69842009000500019.pdf: 125281 bytes, checksum: dae4b15f306c27dd0bb0f458bc061749 (MD5) S1519-69842009000500019.pdf.txt: 32509 bytes, checksum: d425a30e6ebccc776d36b88ffad6523e (MD5) Previous issue date: 2009-11-01 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais (FAPEMIG) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) O possível efeito genotóxico da fração clorofórmica de cascas de caule de Austroplenckia populnea foi testado in vivo em células do sangue periférico de camundongos Suíços pelo ensaio cometa, e o seu possível efeito clastogênico foi investigado em células de sangue periférico de camundongos Suíços e células da medula óssea de ratos Wistar, respectivamente pelos testes do micronúcleo e de aberrações cromossômicas. Os animais foram tratados por via oral com três concentrações do extrato: 300, 600 e 900 mg.kg-1 de peso corpóreo. Células do sangue periférico dos camundongos foram coletadas 4 e 24 horas após o tratamento para a realização do ensaio cometa, e 48 e 72 horas para o teste do micronúcleo. Células da medula óssea dos ratos Wistar foram coletadas 24 horas após o tratamento para os testes do micronúcleo e de aberrações cromossômicas. Os resultados mostraram que a fração clorofórmica do extrato de A. populnea induziu um pequeno aumento no número médio de danos ao DNA nas células sanguíneas nas três concentrações testadas, mas tal aumento não foi estatisticamente significativo. Nos testes do micronúcleo e de aberrações cromossômicas não houve um aumento significativo no número médio de eritrócitos policromáticos micronucleados (EPM) dos camundongos, bem como nos EPM e aberrações cromossômicas nas células da medula óssea dos ratos, em nenhuma das doses testadas. Nossos resultados nos permitem concluir que, pelo ensaio cometa, a fração clorofórmica de cascas do caule de A. populnea não apresentou efeito genotóxico, e, pelos testes do micronúcleo e de aberrações cromossômicas, o extrato não mostrou efeitos clastogênicos e/ou aneugênicos nas células analisadas dos roedores. The genotoxic effect of the Austroplenckia populnea chloroform fraction from barkwood extract was tested in vivo on peripheral blood cells of Swiss mice with the comet assay (SCGE), and the clastogenic effect was investigated on peripheral blood cells of Swiss mice and bone marrow cells of Wistar rats, with the micronucleus and chromosome aberrations tests. The animals were treated by gavage with 3 concentrations of the extract: 300, 600 and 900 mg.kg-1. Peripheral blood cells of Swiss mice were collected 4 and 24 hours after the treatment to the SCGE assay and 48 and 72 hours to the micronucleus test. Bone marrow cells of Wistar rats were collected 24 hours after the treatment to the micronucleus and chromosome aberration tests. The results showed that the A. populnea chloroform fraction induced an increase in the average number of DNA damage in peripheral blood cells at the three concentrations tested, but this increase was not statistically significant. In the micronucleus and chromosome aberrations test, no significant increase was observed in the mean number of micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCE) of Swiss mice or MNPCE or chromosome aberrations for the rat bone marrow cells, for any of the tested doses. Our findings enable us to conclude that by the comet assay, A. populnea chloroform fraction from barkwood extract showed no genotoxic effects, and by the micronucleus and chromosome aberration tests, the extract fraction showed no clastogenic/aneugenic effects on the rodent cells tested. Universidade José do Rosário Vellano Faculdade de Farmácia Universidade do Vale do Itajaí Núcleo de Investigações Químico-Farmacêuticas Universidade de São Paulo Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto Universidade Estadual Paulista Faculdade de Filosofia e Ciências Departamento de Fonoaudiologia Universidade Estadual Paulista Faculdade de Filosofia e Ciências Departamento de Fonoaudiologia FAPESP: 00/57514-2 FAPEMIG: 1879/02) CNPq: 300544/2000-7

Made available in DSpace on 2019-09-12T16:25:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2018 Resumo A produção da aquicultura vem crescendo em todo o mundo e o cultivo de peixes marinhos no Brasil é ainda muito recente. Condições intensivas de aquicultura podem causar estresse fisiológico ao organismo do cultivo, o que pode ser avaliado por biomarcadores citogenotóxicos. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito genotóxico das condições de cultivo nos eritrócitos de juvenis de beijupirás Rachycentron canadum usando o ensaio cometa e o ensaio de micronúcleo e outras anormalidades nucleares. Juvenis de beijupirá foram cultivados por 13 semanas em um tanque indoor com circulação aberta de água e em um tanque-rede. O ensaio comera e o ensaio de anormalidades nucleares detectaram um maior dano ao DNA e uma maior frequência de anormalidades nucleares em eritrócitos de peixes cultivados no tanque indoor. Results showed that two methods are complementary. Além disso, beijupirás foram injetados com β-naftoflavona (BNF) nas concentrações de 2mgkg-1 e 10mgkg-1 em condições controladas de laboratório e mantidos por 7 dias em tanques separados para um melhor entendimento dos mecanismos de resposta dessa espécie a uma substância tóxica. O ensaio cometa não detectou nenhuma diferença significativa entre os peixes injetados com BNF e os da condição controle, enquanto que o ensaio das anormalidades nucleares apresentaram diferenças significativas entre peixes injetados com BNF e os do controle. Os danos identificados pelo ensaio cometa são quebras reparáveis na fita do DNA, enquanto que as anormalidades nucleares são permanentes. Possivelmente, o período de de manutenção dos peixes nos tanques após a injeção foi suficiente para limpar a BNF dos organismos e reparar as quebras na fita do DNA. Como os beijupirás parecem responder muito bem a compostos genotóxicos, o ensaio cometa e o ensaio de anormalidades nucleares podem ser ferramentas úteis para monitorar as condições de cultivo. Abstract Aquaculture production is continuously growing worldwide, and marine fish farming in Brazil is still in its infancy. Intensive farming conditions may cause physiological stress to the cultured organism, which can be evaluated by citogenotoxic biomarkers. The aim of this study was to assess the genotoxic effect of the rearing conditions in red blood cells of juvenile cobia Rachycentron canadum by using comet assay and micronucleus and other nuclear abnormalities assay. Juvenile cobia were reared for 13 weeks in indoor tank with open water circulation and in near shore cage. The comet assay and the nuclear abnormalities assay detected higher DNA damage and higher nuclear abnormalities frequency in erythrocytes of fish reared in the indoor tank. Results showed that two methods are complementary. Additionally, cobia were injected with ß-naphthoflavone (BNF) at concentrations of 2mgkg-1 and 10mgkg-1 in laboratory controlled conditions, and maintained for 7 days in separate tanks to better understand the response mechanisms of this species to a toxic substance. The comet assay did not detect any significant differences between BNF injected and control fish, whereas nuclear abnormalities assay showed significant differences between BNF injected and the control groups. The damages identified by the comet assay are repairable breaks in the DNA strands, whereas nuclear abnormalities may be permanent. Possibly the period of maintenance after injection was enough to clean BNF from the organisms and to repair the breaks in the DNA strands. As cobia seems to respond very well to genotoxic elements, comet assay and nuclear abnormalities assay would be useful tools to monitor farming conditions. [Botelho, Marina Tenório; Passos, Maria José de Arruda Campos Rocha; Hasue, Fabio Matsu; Lemos, Daniel; Yasumaru, Fanny; Phan, Ngan van; Gomes, Vicente] Universidade de São Paulo, Brazil Rodrigues, Edson] Universidade de Taubaté, Brazil

Background: Chronic heart failure (CHF) is a complex syndrome which comprises structural and functional alterations in the heart in maintaining the adequate blood demand to all tissues. Few investigations sought to evaluate oxidative DNA damage in CHF. Objective: To quantify the DNA damage using the comet assay in left ventricle (LV), lungs, diaphragm, gastrocnemius and soleus in rats with CHF. Methods: Twelve male Wistar rats (300 to 330 g) were selected for the study: Sham (n = 6) and CHF (n = 6). The animals underwent myocardial infarction by the ligation of the left coronary artery. After six weeks, the animals were euthanized. It was performed a cell suspension of the tissues. The comet assay was performed to evaluate single and double strand breaks in DNA. Significance level (p) considered < 0.05. Results: The CHF group showed higher values of left ventricle end-diastolic pressure (LVEDP), pulmonary congestion, cardiac hypertrophy and lower values of maximal positive and negative derivatives of LV pressure, LV systolic pressure (p < 0.05). CHF group showed higher DNA damage (% tail DNA, tail moment and Olive tail moment) compared to Sham (p < 0.001). The tissue with the highest damage was the soleus, compared to LV and gastrocnemius in CHF group (p < 0.05). Conclusion: Our results indicates that the CHF affects all tissues, both centrally and peripherically, being more affected in skeletal muscle (soleus) and is positively correlated with LV dysfunction. Resumo Fundamento: A insuficiência cardíaca crônica (ICC) é uma síndrome complexa que compreende alterações estruturais e funcionais no coração, mantendo demanda sanguínea adequada a todos os tecidos. Poucas investigações procuraram avaliar o dano oxidativo ao DNA na ICC. Objetivo: Quantificar o dano ao DNA utilizando o ensaio cometa no ventrículo esquerdo (VE), pulmões, diafragma, gastrocnêmio e sóleo em ratos com ICC. Métodos: Doze ratos Wistar machos (300 a 330 g) foram selecionados para o estudo: placebo (n = 6) e ICC (n = 6). Os animais foram submetidos a infarto do miocárdio através de ligadura da artéria coronária esquerda. Após seis semanas, os animais foram sacrificados. Foi realizada uma suspensão celular dos tecidos. O ensaio cometa foi realizado para avaliar as quebras de fita simples e dupla no DNA. Nível de significância (p) < 0,05. Resultados: O grupo ICC apresentou maiores valores de pressão diastólica final do ventrículo esquerdo (PDFVE), congestão pulmonar, hipertrofia cardíaca e menores valores de derivados máximos positivos e negativos da pressão do VE, pressão sistólica do VE (p < 0,05). O grupo ICC apresentou maior dano ao DNA (% de DNA da cauda, momento da cauda e momento da cauda de Olive) em comparação ao placebo (p < 0,001). O tecido com maior dano foi o sóleo, comparado ao VE e ao gastrocnêmio no grupo ICC (p < 0,05). Conclusão: Nossos resultados indicam que a ICC afeta todos os tecidos, de maneira central e periférica, sendo mais afetada no músculo esquelético (sóleo) e está positivamente correlacionada com a disfunção do VE.