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Infectious bovine rhinotracheitis (IBR) is a highly infectious disease of cattle caused by bovine herpesvirus 1 (BHV-1) that causes considerable economic losses to the dairy and beef industry. This report describes the results of two surveys in which prevalence of serum antibodies against BHV-1 in Galicia (NW Spain) was determined. The first was performed on the entire cattle population of the region (year 2000) and the second on the herds included in a voluntary livestock health programme, which comprises IBR, conducted by a group of farms designated ADSG (Health Defence Groups) in this same region (year 2004). Anti-BHV-1 antibodies were determined by anti-gB ELISA in serum samples from all animals aged over one year in the area rsquo;s dairy and beef herds. Mean individual animal and herd prevalence recorded in 2000 were 38.4% (ranging 37.3%-39.5%; 43.2% dairy, 26.8% beef) and 50.4% (ranging 46.4%- 54.4%; 58.3% dairy, 48.1% beef), respectively. Mean true prevalence by herd and animal for the ADSG farms were 47.2% (44.9%-49.5%; 51.5% dairy, 45.2% beef, 42.3% mixed) and 35.7% (35.3%-36.1%; 37.8% dairy, 33.1% beef, 25.5% mixed), respectively. However, the use of non-maker vaccines make difficult to develop a control and eradication program based on serological analysis., La rinotraqueitis infecciosa bovina (IBR) es una enfermedad infecciosa del ganado producida por el herpesvirus bovino tipo 1 (BHV-1) que causa considerables pérdidas económicas en la industria láctea y cárnica. Este artículo describe los resultados de dos estudios de prevalencia en los que se determina la presencia de anticuerpos frente al BHV-1 en Galicia (NO de España). El primero fue realizado sobre toda la población bovina de la región (año 2000) y el segundo sobre los rebaños pertenecientes a las asociaciones de defensa sanitaria ganaderas (ADSG) en la misma región (año 2004), que realizan un programa de vigilancia que incluye la IBR. La presencia de anticuerpos se determinó con un ELISA anti-gB en las muestras de suero de todos los animales mayores de 1 año de los rebaños estudiados. Las prevalencias medias por animal y por rebaño halladas en 2000 fueron 38,4% (intervalo 37,3%-39,5%; 43,2% en leche y 26,8% en carne) y 50,4% (intervalo 46,4%-54,4%; 58,3% en leche y 48,1% en carne) respectivamente. La prevalencia real media de rebaño y animal para las granjas de las ADSG fue de 47,2% (44,9%-49,5%; 51,5% en leche, 45,2% en carne y 42,3% en mixtas) y 35,7% (35,3%-36,1%; 37,8% en leche, 33,1% en carne y 25,5% en mixtas) respectivamente. Sin embargo, el uso de vacunas no marcadoras dificulta el desarrollo de programas de control y erradicación basados en el análisis serológico.

The effect of cotton leaf curl disease found at Burewala (Pakistan) on the ginning out turn (GOT) and the physical and chemical characteristics of cotton fibre was evaluated by comparing healthy and cotton leaf curl disease (CLCuD)- infected plants of four cotton varieties. A highly susceptible response to CLCuD was found in all varieties tested. The disease incidence ranged from 42.6 to 81.4%. Significant differences were observed between the fibre of healthy and diseased cotton plants, of all varieties, for GOT, fibre length, fibre uniformity index, short fibre index, fibre fineness, fibre bundle strength, reflectance degree (Rd-value), yellowness (+b value) and maturity ratio. The cv. CIM-473 exhibited the highest reduction in all the quality parameters studied with the exception of Rd-value which was the lowest in cv. NIAB-999. The disease also significantly affected cellulose, protein, wax and pectin content. CLCuD adversely deteriorated the cotton fibre characteristics, however the varietal difference exists. The varieties with less deteriorated fibre by CLCuD should be an essential criterion for the selection of resistant germplasm against CLCuD., En Burewala (Paquistán) se evaluó el efecto de la enfermedad del enrollado de la hoja del algodón (CLCuD) sobre el porcentaje de hilas en las semillas (GOT) y las características físico-químicas de la fibra de algodón, comparando cuatro variedades de plantas de algodón sanas y con la enfermedad. Todas las variedades estudiadas fueron altamente susceptibles a CLCuD. La incidencia a la enfermedad varió entre el 42,6 y el 81,4%. Se observaron diferencias significativas entre las fibras de las plantas sanas y enfermas, en todas las variedades, para GOT, longitud, índice de uniformidad, índice de fibras cortas, finura, fuerza de los paquetes de fibras, reflectancia (valor Rd), amarilleamiento (valor +b) y madurez de las fibras. El cv. CIM-473 fue el que más redujo los parámetros de calidad estudiados, a excepción del valor Rd, que fue menor en el cv. NIAB-999. La enfermedad también afectó significativamente al contenido en celulosa, proteínas, ceras y pectinas. Las variedades con fibras menos deterioradas por CLCuD deben ser tenidas en cuenta en la selección de germoplasma contra el CLCuD.

An epidemiological and serological survey of bovine herpesvirus 1 (BHV1) infection was conducted in Andalusia from January to April of 2000. A total of 4,035 blood samples were collected from 164 herds. A questionnaire, which included variables potentially associated with infection, was filled out for each herd. Serum samples were obtained to identify specific BHV1 antibodies and were tested using a blocking ELISA test. The observed crude odds ratio (OR) (estimate of the chance of a particular event occurring in an exposed group in relation to its rate of occurrence in a nonexposed group) for vaccination is 9.8 (95% confidence interval: 8.3-11.7). The vaccinated group comprised large dairy farms. This study can only be considered as representative of unvaccinated, small to medium size dairy farms and beef farms in Andalusia. True seroprevalence of the BHV1 virus in nonvaccinated bovine populations in Andalusia reached 45.7% of individuals and 70.4% of herds. Risk factors for BHV1 infection in bovine Andalusian nonvaccinated herds are nonexistence of specific cattle infrastructure (OR: 3.07), beef crossbreeding (OR: 7.90), affiliation with Livestock Health Defence Associations (OR: 2.57), a history of reproductive disorders (OR: 8.39), external replacement (OR: 2.74), proximity to an urban area (OR: 6.11) and herd size (41.98). To control for confounding effects, a binomial logistic regression model was developed. From this regression, BHV1 infections are concentrated in large herds, with external replacement, located close to urban areas. This is the first published report on BHV1 prevalence in the South of Spain., Desde enero a abril de 2000 se ha realizado un estudio epidemiológico y serológico sobre la infección por el herpesvirus bovino tipo 1 (HVB1) en Andalucía, donde se tomaron un total de 4035 muestras de sangre procedentes de 164 rebaños, donde además se cumplimentó un cuestionario que incluye variables potencialmente asociadas a la infección. Mediante un kit ELISA de bloqueo se evaluó la presencia de anticuerpos frente al HVB1. El valor de odds ratio (OR) (probabilidad que tiene un suceso de ocurrir en un grupo expuesto a un factor en relación a la probabilidad en un grupo no expuesto) cruda para la vacunación frente al HVB1 es de 9,8 (IC 95%: 8,3-11,7). Al haberse vacunado las granjas grandes, que fueron eliminadas, el estudio es representativo sólo de granjas de pequeño y mediano tamaño. La prevalencia real en animales no vacunados es del 45,7%, mientras que la dispersión es del 70,4%. Los factores de riesgo detectados son: inexistencia de infraestructuras específicas (OR: 3,07), animales de razas no puras (OR: 7,90), pertenencia a asociaciones de defensa sanitaria (OR: 2,57), historial de trastornos reproductivos (OR: 8,39), reemplazo externo (OR: 2,74), proximidad a zonas urbanas (OR: 6,11) y tamaño del rebaño (41,98). Para limitar el impacto de variables confusoras, se generó un modelo mediante regresión logística, que señala que las infecciones se concentran en grandes rebaños con reemplazo externo en las proximidades de áreas urbanas. Este es el primer trabajo acerca de la prevalencia del HVB1 en el sur de España.

A polymerase chain reaction (PCR) assay to detect Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) has been developed and evaluated. This assay was based on the amplification of a viral thymidine kinase (tk) gene fragment, for which a novel pair of primers and different PCR conditions were tested. Under optimal conditions, no amplification was observed from heterologous herpesviruses or other bovine viruses. However, a 202 bp band from BoHV-1 was obtained confirming the specificity of the assay. An analytical sensitivity of 0.15 TCID50 per reaction led to the detection of BoHV-1 in nasal swab supernatants up to 11 days after experimental infection of cattle. There was a 100% match on the results until six days post-infection when PCR was compared with virus isolation and fluorescent antibody test (FAT). Starting the seven day post-infection and until the end of the experiment most of the positive samples were obtained by PCR. This simple PCR strategy do not use co-solvents in order to eliminate non-specific products or increase the efficiency of the amplification, provides a rapid method for diagnosis of BoHV-1 diseases in contrast with semi-nested or nested protocols with more time-consuming and a higher contamination rate, moreover, can be easily used in all diagnosis laboratories., Se ha desarrollado y evaluado un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la detección de herpesvirus bovino 1 (BoHV-1). Este se basó en la amplificación de una porción del gen de la timidina quinasa (tk) viral, para lo cual se ensayaron un nuevo par de cebadores y diferentes condiciones de la PCR. Bajo condiciones óptimas, no se observó amplificación de herpesvirus heterologos u otros virus bovinos. Sin embargo, se obtuvo una banda de 202 pb lo que confirma la especificidad del ensayo. Una sensibilidad analítica de 0.15 DICT50 por reacción permitió la detección de BoHV-1 en sobrenadantes de exudado nasal hasta 11 días después de la infección experimental de bovinos. Hubo un 100% de concordancia entre resultados hasta el día siete post-infección cuando la PCR fue comparada con el aislamiento viral y la prueba de anticuerpos fluorescentes (FAT). Desde el día ocho post-infección y hasta el final del experimento la mayoría de las muestras positivas se obtuvieron por PCR. Esta estrategia de PCR simple no usa co-solventes con el propósito de eliminar productos no específicos o incrementar la eficiencia de la amplificación, provee un método rápido para el diagnóstico de las enfermedades de BoHV-1 en contraste con el semi-nested o nested PCR con más consumo de tiempo y altas posibilidades de contaminación, además, puede ser fácilmente usada en todos los laboratorios de diagnostico.

In this study, we examined the role of the nucleotides flanking AUG initiator codons in modulating translation of vaccinia virus genes. First, the sequence around initiation codons in the genomic sequence of vaccinia was analyzed. A preference for A in position –3 and for A or G in position +4, relative to the A of the initiator AUG codon was noted. These results are in broad agreement with known optimal consensus for the translation of eukaryotic mRNAs. Nucleotides –3 and +4, which are known to affect the efficiency of translation of cellular mRNAs over a 20-fold range, were examined by site-directed mutagenesis and functional assays in the context of vaccinia-infected cells. A collection of virus recombinants expressing beta-Galactosidase (beta-Gal) under the control of a strong promoter and containing all possible nucleotide substitutions in those positions was generated. Quantitation of beta-Gal mRNA and beta-Gal activity showed that the efficiency of translation was not affected significantly by nucleotide substitutions in positions –3 and +4. Therefore, despite the high occurrence of purine nucleotides in those positions in vaccinia mRNAs, no effect of those positions was noted in conditions where â-Gal was overexpressed., En este estudio hemos examinado el papel de los nucleótidos próximos al AUG iniciador en la modulación de la traducción en genes del virus vaccinia. En primer lugar, hemos analizado la secuencia alrededor de los codones de iniciación en la secuencia genómica de vaccinia. En este análisis se detectó una preferencia por A en la posición –3, y por A ó G en la posición +4, relativa a la A en el codon de iniciación. Estos resultados coinciden en términos generales con las secuencias conocidas para la traducción óptima de mRNAs eucarióticos. Los nucleótidos –3 y +4, que afectan a la eficiencia de traducción de mRNAs celulares en un rango de hasta 20 veces, fueron examinados por mutagénesis dirigida y ensayos funcionales en el contexto de células infectadas por vaccinia. Hemos generado una colección de virus recombinantes que expresan beta-galactosidasa (beta-Gal) bajo el control de un promotor fuerte, y conteniendo todas las posibles sustituciones en esas posiciones. La cuantificación del mRNA de beta-Gal, y de la actividad beta-Gal, mostró que la eficiencia de traducción no se alteraba significativamente por las sustituciones nucleotídicas en las posiciones –3 y +4. Por tanto, a pesar de la alta frecuencia de nucleótidos de purina en esas posiciones en los mRNAs de vaccinia, no se detectó efecto de dichas posiciones en condiciones en las que la â-Gal era sobreexpresada.

A logistic regression model was compared to logistic, Gompertz and log-logistic growth functions for analyzing a set of data describing the incidence of Alfalfa mosaic virus infection in lucerne fields aged from one to five years, and located in three different ecological areas of the Ebro Valley, Northeast Spain. Models were fitted in the form of generalized linear models, and none of them explained well the high variability of the field data, although they were useful to analyze the interdependence among epidemiological factors associated with estimated parameters in the models. The logistic regression model proved more sensitive than classical growth function models to detect significant differences in parameters such as the rate of incidence increase with age of lucerne field or the initial amount of disease, and to detect differences associated to explanatory variables such as the ecological area. Results indicate that logistic regression may be a method well suited to statistical analyses in plant epidemiology., Se ha comparado un modelo de regresión logística con modelos de función de crecimiento logístico, de Gompertz y log-logístico para el análisis de un conjunto de datos que describen la incidencia de infección del virus del mosaico de la alfalfa en campos de alfalfa con edades comprendidas entre uno y cinco años, localizados en tres áreas ecológicas distintas del Valle del Ebro en España. Ninguno de los modelos, que se ajustaron como modelos lineales generalizados, explicaron suficientemente la alta variabilidad existente en los datos de campo, pero fueron útiles para analizar la interdependencia entre determinados factores epidemiológicos asociados con los parámetros estimados por los modelos. El modelo de regresión logística proporcionó mayor sensibilidad que los modelos clásicos de crecimiento para detectar diferencias significativas en los parámetros, como el índice de aumento de la incidencia con la edad del alfalfar o la cantidad inicial de infección, y diferencias asociadas con las variables explicativas del modelo, como el área ecológica. Los resultados indican que la regresión logística puede ser un método adecuado de análisis estadístico para estudios de epidemiología vegetal.

The black queen-cell virus (BQCV) is a RNA virus recently classified within the Family Dicistroviridae, genus Cripavirus. Although BQCV is found worldwide, it has never been previously reported in Spain in spite of the fact that this country is the main producer of honey bees (Apis mellifera) in the European Union. This study presents a clinical and laboratory description of a BQCV outbreak in honey bees within an apiary made up of 80 colonies in the province of Toledo (Spain). Mortality was associated with signs of diarrhoea, enlarged abdomen, oedema in the midgut, and distended rectum filled with a transparent liquid. The parasite Nosema apis has been reported in BQCV outbreaks. The acute clinical picture, with symptoms of diarrhoea and massive deaths of adult bees, could be related to the association between N. apis and the BQCV since, under normal circumstances, cases of nosemosis caused by N. apis reported in Spain over the last 10 years were always anecdotal and in chronic form, with no associated clinical symptoms whatsoever detected in the beehives. On the other hand, in cases of nosemosis linked to N. ceranae, the clinical symptoms are entirely different, with no evidence at all of diarrhoea and massive deaths around the beehive but only a progressive decrease in the population. The sample of adult bees was analysed by the polymerase chain reaction method for BQCV and a fragment of 700 bp sequenced (Acc. No. DQ132875). It was also noted that this sample had a high spore count of N. apis epidemiologically related to BQCV. The possible role of BQCV in the mortality and associated signs is discussed in this work., El virus de la realera negra (BQCV) es un virus RNA que ha sido recientemente clasificado dentro de la familia Dicistroviridae, género Cripavirus. Aunque BQCV se halla distribuido mundialmente, nunca había sido descrito con anterioridad en España, a pesar de ser este país el principal productor de abejas melíferas en la Unión Europea. En el presente estudio, se realiza una descripción clínica y laboratorial del brote de BQCV en un colmenar profesional compuesto por 80 colmenas ubicado en Toledo (España). Se observó mortalidad asociada a signos de diarrea, abdomen aumentado, edema en el ventrículo, y distensión del abdomen, relleno con líquido transparente. Este cuadro clínico agudo probablemente es debido a una potenciación de la acción patógena de Nosema apis por el citado virus, dado que en España, en los últimos 10 años, la nosemosis debida a N. apis se manifiesta exclusivamente de forma crónica, sin síntomas aparentes y sin mortalidad o debilidad asociada en las colmenas, a diferencia de la nosemosis debida a N. ceranae que provoca despoblamiento de las colmenas y muerte en un periodo variable de tiempo. La muestra de abejas adultas fue positiva a BQCV, mediante la reacción en cadena de la polimerasa, y se secuenció un fragmento de 700 pb (No. acc. DQ132875). Esta muestra también poseía un elevado recuento de esporos de N. apis, microsporidio relacionado epidemiológicamente con BQCV. Se discute en el presente trabajo el posible papel de BQCV en la mortalidad y en los signos asociados.

Information on the distribution of Faba bean necrotic yellows virus (FBNYV) in Spain was gathered by sampling different legume crops (faba bean "Muchamiel", forage faba bean, pea and chickpea) in four regions (Murcia, Andalucía, Castilla y León, and Extremadura). The virus was detected by TAS-ELISA in faba bean "Muchamiel" and peas only in the Murcia region. A portion of 272 bp within the C5 component of a FBNYV from Murcia was amplified by IC-PCR and directly sequenced. The Spanish FBNYV was 93.75% identical to two previously sequenced isolates of FBNYV from Syria and Egypt. Periodic samplings of faba bean "Muchamiel" over one growing season (Oct. 1999 to Jan. 2000) in Murcia provided no clear evidence of any spread of the disease either within or beyond the affected fields. Mixed infections of FBNYV and Tomato spotted wilt virus (TSWV), Bean leaf roll virus (BLRV) and Bean yellow mosaic virus (BYMV) were commonly observed. The necrotic symptoms developed on the leaf borders were more pronounced in these mixed infections. Transmission experiments using a Spanish isolate as inoculum source and the aphid species Acyrthosiphon pisum and Aphis craccivora showed that both are efficient FBNYV vectors. In these experiments, the faba bean cvs. "Aguadulce", "Muchamiel" and "Valenciana"were all susceptible to FBNYV., Para obtener información de la distribución del virus del amarilleamiento necrótico del haba (Faba bean necrotic yellows virus, FBNYV) en España, se realizaron muestreos extensivos en cuatro comunidades autónomas españolas (Andalucía, Castilla y León, Extremadura y Murcia), en diferentes cultivos de leguminosas (haba "Muchamiel", habas forrajeras, guisantes y garbanzos). Los análisis realizados por ELISA-TAS demostraron que FBNYV estaba presente solo en habas y guisantes de Murcia. Se amplificó por IC-PCR un fragmento de 272 pb del componente C5 del FBNYV aislado de un haba de Murcia, cuya secuencia fue 93,75% idéntica a dos aislados previamente secuenciados de Siria y Egipto. Muestreos periódicos en campos de haba "Muchamiel" de Murcia durante una campaña (octubre 1999 a enero 2000) no evidenciaron claramente la dispersión de la enfermedad. Se encontraron frecuentes infecciones mixtas de FBNYV con el virus del bronceado del tomate (TSWV), el virus del enrollado de la judía (BLRV) y el virus del mosaico amarillo de la judía (BYMV) y los síntomas necróticos desarrollados en los bordes de las hojas fueron más pronunciados en las infecciones mixtas. Experimentos de transmisión utilizando un aislado español del FBNYV como inóculo, mediante los pulgones Acyrthosiphon pisum y Aphis craccivora, pusieron de manifiesto la eficiencia de éstos como vectores del FBNYV, y que los cultivares de haba "Aguadulce", "Muchamiel" y "Valenciana" fueron susceptibles a la infección por FBNYV.

Transmissible gastroenteritis (TGE) is a highly contagious enteric disease of pigs caused by an enteropathogenic coronavirus, TGEV. The sequence of the 5' end of the spike glycoprotein (S) gene best distinguishes this virus from related coronavirus. Since February 2003, a large number of unexplained outbreaks of gastroenteritis have occurred on pig farms in Havana. The problem was identified as TGE for the first time in May 2003. This paper describes the virological and molecular studies that led to this diagnosis. The disease was experimentally reproduced in susceptible piglets, a sow, and in weaned pigs. TGEV recovered from the diarrheic faeces of the sick piglets was identified by electron microscope negative staining, viral isolation in secondary swine kidney cultures, and by RT-PCR using previously reported primers. The PCR product amplified from the 5' end of the S gene was directly sequenced. The nucleotide sequence and the deduced amino acid residues of the amplified region are reported. A phylogenetic analysis was performed by comparing a 393-414 nucleotide stretch near the 5' end of the S gene in 36 viruses from different countries and with different isolation dates. The virus causing the outbreak in Cuba seems to be closely related to a TGEV previously isolated in the US Midwest. The source of infection remains unknown., La gastroenteritis transmisible (TGE) es una enfermedad entérica y altamente contagiosa de los cerdos causada por un coronavirus enteropatogénico, el TGEV. El extremo 5' del gen de la glicoproteina S de las espículas de la envoltura, difiere en gran medida de otros coronavirus relacionados. A partir de febrero del 2003, se produjeron numerosos brotes de gastroenteritis en granjas de cría de cerdos de la provincia de La Habana; la enfermedad fue caracterizada como TGE y reportada por primera vez en mayo del 2003. Se presentan los resultados de los estudios virológicos y moleculares que condujeron a este diagnóstico. La enfermedad fue reproducida experimentalmente en cerditos susceptibles, una cerda y su camada. El TGEV fue aislado de heces diarreicas provenientes de cerditos enfermos recién nacidos; se confirmó su identidad por tinción negativa al microscopio electrónico, aislamiento viral en cultivo primario de riñón de cerdo y RT-PCR usando cebadores específicos previamente descritos. El producto de PCR amplificado a partir del extremo 5' del gen de la proteína S fue secuenciado directamente. Se reporta la secuencia nucleotídica y la de aminoácidos deducida de la región amplificada. El análisis filogenético comparando las secuencias de un fragmento de 393-414 nucleótidos del extremo 5' del gen S de 36 virus de diferentes países y fechas de aislamiento, muestra que el virus que causó los brotes en Cuba parece estar muy relacionado con un aislado del medio oeste de EEUU, pero la fuente de la infección permanece sin esclarecer.

Transmission experiments of different isolates of Cucumber mosaic virus (CMV), Watermelon mosaic virus (WMV) and Zucchini yellow mosaic virus (ZYMV) were conducted using established colonies of Aphis gossypii Glover, Myzus persicae (Sulzer), A. fabae Scopoli and A. craccivora Koch as vectors. The transmission procedure used provided an estimate of the virus transmission efficiency for each aphid species. Two different virus isolates/aphid clones were tested for each virus species using the most efficient aphid species as A. gossypii was the most efficient vector of CMV (100 +/- 0%), while M. persicae showed the highest efficiency of transmiting WMV (67.9 +/- 28.5%) and ZYMV (96.4 +/- 3.6%). Both WMV and ZYMV showed variability in their transmission efficiency by aphids. No significant differences were found in the efficiency of the two CMV isolates tested. No differences were observed in the vector transmission ability between clones of each aphid species tested. Results of our transmission studies together with previously known information on the temporal and spatial patterns of virus epidemics in melon crops in Spain suggest that CMV is mainly transmitted by a colonising aphid such as A. gossypii. In contrast, WMV is mainly transmitted by non-colonising transient aphid species such as M. persicae that alight on melon crops during late spring., Se realizaron experimentos de transmisión de diferentes aislados de Cucumber mosaic virus (CMV), Watermelon mosaic virus (WMV) y Zucchini yellow mosaic virus (ZYMV) utilizando como vectores colonias establecidas de Aphis gossypii Glover, Myzus persicae (Sulzer), A. fabae Scopoli y A. craccivora Koch. El procedimiento de transmisión utilizado proporciona una estimación de la eficacia de transmisión de virus por cada una de las especies de pulgón. Dos diferentes aislados virales/clones de pulgón fueron evaluados para cada especie de virus utilizando como vector la especie de pulgón más eficiente. A. gossypii fue el vector más eficiente de CMV (100 +/- 0%), mientras que M. persicae mostró la mayor eficiencia para transmitir WMV (67,9 +/- 28,5%) y ZYMV (96,4 +/- 3,6%). Tanto WMV como ZYMV mostraron variabilidad en su eficiencia de transmisión por pulgones. No se encontraron diferencias significativas en la eficiencia de los dos aislados de CMV evaluados. Tampoco se observaron diferencias en la capacidad de transmisión entre los clones de cada especie de pulgón evaluadas. Los resultados de nuestros estudios de transmisión, junto con la información previa de los patrones temporal y espacial de las epidemias de virus en los cultivos de melón en España, sugieren que una especie de pulgón colonizante como A. gossypii es la que transmite preferentemente CMV. En contraste, WMV es transmitido preferentemente por especies de pulgones no colonizantes tales como M. persicae, que aterrizan en el cultivo de melón a finales de la primavera.

The common five weed species Datura stramonium L., Solanum nigrum L., Brassica kaber (DC), Capsella bursapastoris L. and Malva parviflora L., were tested for their susceptibility to an isolate of TYLCSV from Murcia, Spain (TYLCSV-ES), using the B-, Q- and S-biotypes of Bemisia tabaci (Gennadius). Both, B- and Q-biotypes were shown to transmit TYLCSV-ES from infected tomato to S. nigrum and D. stramonium and vice versa. Transmission efficiency from tomato to these weeds varied from 58.3% to 83.3%. Transmission efficiency from the infected weeds back to tomato varied from 66.7% to 100%. No significant difference between the B- and Q-biotypes was found in transmission efficiency from infected tomato to weed plants and from D. stramonium back to tomato. However, a significant difference in transmission efficiency from infected S. nigrum plants to tomato was detected between the B- and Qbiotypes. No other tested weed species were found to be infected by or host TYLCSV-ES. The S-biotype was unable to survive on tomato long enough to acquire or transmit TYLCSV-ES and could only transmit the virus from S. nigrum to S. nigrum at a very low efficiency. The implications of these results for the epidemiology of TYLCV´s in the field are discussed., Se analizó la susceptibilidad de las malas hierbas Datura stramonium L., Solanum nigrum L., Brassica kaber (DC), Capsella bursa-pastoris L. and Malva parviflora L. a un aislado del TYLCSV procedente de Murcia, España (TYLCSVES), utilizando como vectores los biotipos B, Q y S de Bemisia tabaci (Gennadius). Los biotipos B y Q transmitieron el TYLCSV-ES desde tomate infectado a S. nigrum y D. stramonium y viceversa, con una eficiencia de transmisión desde tomate a dichas malas hierbas entre el 58,3% y el 83,3%. La eficiencia de transmisión desde las malas hierbas al tomate varió desde el 66,7% al 100%. No se apreciaron diferencias significativas entre los biotipos B y Q respecto a la eficiencia de transmisión desde tomate a malas hierbas ni desde D. stramonium a tomate. No obstante, la eficiencia de transmisión desde plantas infectadas de S. nigrum a tomate fue significativamente diferente entre los biotipos B y Q. El aislado TYLCSV-ES no fue capaz de infectar a ninguna de las otras especies de malas hierbas utilizadas en este estudio. El biotipo S no pudo sobrevivir en tomate el tiempo suficiente para adquirir o transmitir el TYLCSVES, pudiendo solamente transmitir el virus desde S. nigrum a S. nigrum con una eficiencia muy limitada. Se discuten las implicaciones de estos resultados para la epidemiología en campo de los virus TYLCV.

A polymerase chain reaction (PCR) assay to detect Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) has been developed and evaluated. This assay was based on the amplification of a viral thymidine kinase (tk) gene fragment, for which a novel pair of primers and different PCR conditions were tested. Under optimal conditions, no amplification was observed from heterologous herpesviruses or other bovine viruses. However, a 202 bp band from BoHV-1 was obtained confirming the specificity of the assay. An analytical sensitivity of 0.15 TCID50 per reaction led to the detection of BoHV-1 in nasal swab supernatants up to 11 days after experimental infection of cattle. There was a 100% match on the results until six days post-infection when PCR was compared with virus isolation and fluorescent antibody test (FAT). Starting the seven day post-infection and until the end of the experiment most of the positive samples were obtained by PCR. This simple PCR strategy do not use co-solvents in order to eliminate non-specific products or increase the efficiency of the amplification, provides a rapid method for diagnosis of BoHV-1 diseases in contrast with semi-nested or nested protocols with more time-consuming and a higher contamination rate, moreover, can be easily used in all diagnosis laboratories. Se ha desarrollado y evaluado un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la detección de herpesvirus bovino 1 (BoHV-1). Este se basó en la amplificación de una porción del gen de la timidina quinasa (tk) viral, para lo cual se ensayaron un nuevo par de cebadores y diferentes condiciones de la PCR. Bajo condiciones óptimas, no se observó amplificación de herpesvirus heterologos u otros virus bovinos. Sin embargo, se obtuvo una banda de 202 pb lo que confirma la especificidad del ensayo. Una sensibilidad analítica de 0.15 DICT50 por reacción permitió la detección de BoHV-1 en sobrenadantes de exudado nasal hasta 11 días después de la infección experimental de bovinos. Hubo un 100% de concordancia entre resultados hasta el día siete post-infección cuando la PCR fue comparada con el aislamiento viral y la prueba de anticuerpos fluorescentes (FAT). Desde el día ocho post-infección y hasta el final del experimento la mayoría de las muestras positivas se obtuvieron por PCR. Esta estrategia de PCR simple no usa co-solventes con el propósito de eliminar productos no específicos o incrementar la eficiencia de la amplificación, provee un método rápido para el diagnóstico de las enfermedades de BoHV-1 en contraste con el semi-nested o nested PCR con más consumo de tiempo y altas posibilidades de contaminación, además, puede ser fácilmente usada en todos los laboratorios de diagnostico.

In this study, we examined the role of the nucleotides flanking AUG initiator codons in modulating translation of vaccinia virus genes. First, the sequence around initiation codons in the genomic sequence of vaccinia was analyzed. A preference for A in position –3 and for A or G in position +4, relative to the A of the initiator AUG codon was noted. These results are in broad agreement with known optimal consensus for the translation of eukaryotic mRNAs. Nucleotides –3 and +4, which are known to affect the efficiency of translation of cellular mRNAs over a 20-fold range, were examined by site-directed mutagenesis and functional assays in the context of vaccinia-infected cells. A collection of virus recombinants expressing beta-Galactosidase (beta-Gal) under the control of a strong promoter and containing all possible nucleotide substitutions in those positions was generated. Quantitation of beta-Gal mRNA and beta-Gal activity showed that the efficiency of translation was not affected significantly by nucleotide substitutions in positions –3 and +4. Therefore, despite the high occurrence of purine nucleotides in those positions in vaccinia mRNAs, no effect of those positions was noted in conditions where â-Gal was overexpressed. En este estudio hemos examinado el papel de los nucleótidos próximos al AUG iniciador en la modulación de la traducción en genes del virus vaccinia. En primer lugar, hemos analizado la secuencia alrededor de los codones de iniciación en la secuencia genómica de vaccinia. En este análisis se detectó una preferencia por A en la posición –3, y por A ó G en la posición +4, relativa a la A en el codon de iniciación. Estos resultados coinciden en términos generales con las secuencias conocidas para la traducción óptima de mRNAs eucarióticos. Los nucleótidos –3 y +4, que afectan a la eficiencia de traducción de mRNAs celulares en un rango de hasta 20 veces, fueron examinados por mutagénesis dirigida y ensayos funcionales en el contexto de células infectadas por vaccinia. Hemos generado una colección de virus recombinantes que expresan beta-galactosidasa (beta-Gal) bajo el control de un promotor fuerte, y conteniendo todas las posibles sustituciones en esas posiciones. La cuantificación del mRNA de beta-Gal, y de la actividad beta-Gal, mostró que la eficiencia de traducción no se alteraba significativamente por las sustituciones nucleotídicas en las posiciones –3 y +4. Por tanto, a pesar de la alta frecuencia de nucleótidos de purina en esas posiciones en los mRNAs de vaccinia, no se detectó efecto de dichas posiciones en condiciones en las que la â-Gal era sobreexpresada.

Transmissible gastroenteritis (TGE) is a highly contagious enteric disease of pigs caused by an enteropathogenic coronavirus, TGEV. The sequence of the 5' end of the spike glycoprotein (S) gene best distinguishes this virus from related coronavirus. Since February 2003, a large number of unexplained outbreaks of gastroenteritis have occurred on pig farms in Havana. The problem was identified as TGE for the first time in May 2003. This paper describes the virological and molecular studies that led to this diagnosis. The disease was experimentally reproduced in susceptible piglets, a sow, and in weaned pigs. TGEV recovered from the diarrheic faeces of the sick piglets was identified by electron microscope negative staining, viral isolation in secondary swine kidney cultures, and by RT-PCR using previously reported primers. The PCR product amplified from the 5' end of the S gene was directly sequenced. The nucleotide sequence and the deduced amino acid residues of the amplified region are reported. A phylogenetic analysis was performed by comparing a 393-414 nucleotide stretch near the 5' end of the S gene in 36 viruses from different countries and with different isolation dates. The virus causing the outbreak in Cuba seems to be closely related to a TGEV previously isolated in the US Midwest. The source of infection remains unknown. La gastroenteritis transmisible (TGE) es una enfermedad entérica y altamente contagiosa de los cerdos causada por un coronavirus enteropatogénico, el TGEV. El extremo 5' del gen de la glicoproteina S de las espículas de la envoltura, difiere en gran medida de otros coronavirus relacionados. A partir de febrero del 2003, se produjeron numerosos brotes de gastroenteritis en granjas de cría de cerdos de la provincia de La Habana; la enfermedad fue caracterizada como TGE y reportada por primera vez en mayo del 2003. Se presentan los resultados de los estudios virológicos y moleculares que condujeron a este diagnóstico. La enfermedad fue reproducida experimentalmente en cerditos susceptibles, una cerda y su camada. El TGEV fue aislado de heces diarreicas provenientes de cerditos enfermos recién nacidos; se confirmó su identidad por tinción negativa al microscopio electrónico, aislamiento viral en cultivo primario de riñón de cerdo y RT-PCR usando cebadores específicos previamente descritos. El producto de PCR amplificado a partir del extremo 5' del gen de la proteína S fue secuenciado directamente. Se reporta la secuencia nucleotídica y la de aminoácidos deducida de la región amplificada. El análisis filogenético comparando las secuencias de un fragmento de 393-414 nucleótidos del extremo 5' del gen S de 36 virus de diferentes países y fechas de aislamiento, muestra que el virus que causó los brotes en Cuba parece estar muy relacionado con un aislado del medio oeste de EEUU, pero la fuente de la infección permanece sin esclarecer.

Transmission experiments of different isolates of Cucumber mosaic virus (CMV), Watermelon mosaic virus (WMV) and Zucchini yellow mosaic virus (ZYMV) were conducted using established colonies of Aphis gossypii Glover, Myzus persicae (Sulzer), A. fabae Scopoli and A. craccivora Koch as vectors. The transmission procedure used provided an estimate of the virus transmission efficiency for each aphid species. Two different virus isolates/aphid clones were tested for each virus species using the most efficient aphid species as A. gossypii was the most efficient vector of CMV (100 +/- 0%), while M. persicae showed the highest efficiency of transmiting WMV (67.9 +/- 28.5%) and ZYMV (96.4 +/- 3.6%). Both WMV and ZYMV showed variability in their transmission efficiency by aphids. No significant differences were found in the efficiency of the two CMV isolates tested. No differences were observed in the vector transmission ability between clones of each aphid species tested. Results of our transmission studies together with previously known information on the temporal and spatial patterns of virus epidemics in melon crops in Spain suggest that CMV is mainly transmitted by a colonising aphid such as A. gossypii. In contrast, WMV is mainly transmitted by non-colonising transient aphid species such as M. persicae that alight on melon crops during late spring. Se realizaron experimentos de transmisión de diferentes aislados de Cucumber mosaic virus (CMV), Watermelon mosaic virus (WMV) y Zucchini yellow mosaic virus (ZYMV) utilizando como vectores colonias establecidas de Aphis gossypii Glover, Myzus persicae (Sulzer), A. fabae Scopoli y A. craccivora Koch. El procedimiento de transmisión utilizado proporciona una estimación de la eficacia de transmisión de virus por cada una de las especies de pulgón. Dos diferentes aislados virales/clones de pulgón fueron evaluados para cada especie de virus utilizando como vector la especie de pulgón más eficiente. A. gossypii fue el vector más eficiente de CMV (100 +/- 0%), mientras que M. persicae mostró la mayor eficiencia para transmitir WMV (67,9 +/- 28,5%) y ZYMV (96,4 +/- 3,6%). Tanto WMV como ZYMV mostraron variabilidad en su eficiencia de transmisión por pulgones. No se encontraron diferencias significativas en la eficiencia de los dos aislados de CMV evaluados. Tampoco se observaron diferencias en la capacidad de transmisión entre los clones de cada especie de pulgón evaluadas. Los resultados de nuestros estudios de transmisión, junto con la información previa de los patrones temporal y espacial de las epidemias de virus en los cultivos de melón en España, sugieren que una especie de pulgón colonizante como A. gossypii es la que transmite preferentemente CMV. En contraste, WMV es transmitido preferentemente por especies de pulgones no colonizantes tales como M. persicae, que aterrizan en el cultivo de melón a finales de la primavera.

The common five weed species Datura stramonium L., Solanum nigrum L., Brassica kaber (DC), Capsella bursapastoris L. and Malva parviflora L., were tested for their susceptibility to an isolate of TYLCSV from Murcia, Spain (TYLCSV-ES), using the B-, Q- and S-biotypes of Bemisia tabaci (Gennadius). Both, B- and Q-biotypes were shown to transmit TYLCSV-ES from infected tomato to S. nigrum and D. stramonium and vice versa. Transmission efficiency from tomato to these weeds varied from 58.3% to 83.3%. Transmission efficiency from the infected weeds back to tomato varied from 66.7% to 100%. No significant difference between the B- and Q-biotypes was found in transmission efficiency from infected tomato to weed plants and from D. stramonium back to tomato. However, a significant difference in transmission efficiency from infected S. nigrum plants to tomato was detected between the B- and Qbiotypes. No other tested weed species were found to be infected by or host TYLCSV-ES. The S-biotype was unable to survive on tomato long enough to acquire or transmit TYLCSV-ES and could only transmit the virus from S. nigrum to S. nigrum at a very low efficiency. The implications of these results for the epidemiology of TYLCV´s in the field are discussed. Se analizó la susceptibilidad de las malas hierbas Datura stramonium L., Solanum nigrum L., Brassica kaber (DC), Capsella bursa-pastoris L. and Malva parviflora L. a un aislado del TYLCSV procedente de Murcia, España (TYLCSVES), utilizando como vectores los biotipos B, Q y S de Bemisia tabaci (Gennadius). Los biotipos B y Q transmitieron el TYLCSV-ES desde tomate infectado a S. nigrum y D. stramonium y viceversa, con una eficiencia de transmisión desde tomate a dichas malas hierbas entre el 58,3% y el 83,3%. La eficiencia de transmisión desde las malas hierbas al tomate varió desde el 66,7% al 100%. No se apreciaron diferencias significativas entre los biotipos B y Q respecto a la eficiencia de transmisión desde tomate a malas hierbas ni desde D. stramonium a tomate. No obstante, la eficiencia de transmisión desde plantas infectadas de S. nigrum a tomate fue significativamente diferente entre los biotipos B y Q. El aislado TYLCSV-ES no fue capaz de infectar a ninguna de las otras especies de malas hierbas utilizadas en este estudio. El biotipo S no pudo sobrevivir en tomate el tiempo suficiente para adquirir o transmitir el TYLCSVES, pudiendo solamente transmitir el virus desde S. nigrum a S. nigrum con una eficiencia muy limitada. Se discuten las implicaciones de estos resultados para la epidemiología en campo de los virus TYLCV.