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As rodovias são essenciais para o desenvolvimento econômico de um país, em contrapartida são uma das principais causas de fragmentação de habitat e perda de biodiversidade. A colisão de animais silvestres com veículos é a principal causa de morte nas estradas, podendo acarretar na alteração das dinâmicas populacionais e no comportamento das espécies. O objetivo deste estudo foi avaliar os atropelamentos de mamíferos de médio e grande porte em quatro transectos nas estradas do norte do Paraná, Sul do Brasil. Os transectos variaram de 193 a 242 km de extensão e foram percorridos uma vez por mês, entre novembro de 2016 a outubro de 2018. Após 20.592 km percorridos foram registradas aproximadamente 330 carcaças, sendo que destas, 66 mamíferos de médio e grande porte apresentaram condições de coleta. A Ordem com maior incidência foi Didelphimorphia, seguido por Carnivora e Cingulata. A maior concentração de atropelamentos ocorreu na PR-445, entre os municípios de Mauá da Serra e Tamarana, ambos no estado do Paraná. A mortalidade de espécies ameaçadas de extinção, como L. wiedii, L. guttulus e P. concolor é preocupante. Nossos resultados podem ajudar gestores e órgãos competentes responsáveis pelas estradas a mitigar os atropelamentos, com placas de sinalização de vida silvestre, radares e passagens de fauna em áreas críticas, como o trecho de maior número de registros. .

Ehrlichia canis, Anaplasma platys e Babesia vogeli são frequentemente detectados na rotina veterinária com patogênese variada que pode levar à morte, principalmente em coinfecções. Embora os micoplasmas hemotrópicos caninos sejam considerados de baixa importância clínica, recentemente ganharam destaque na pesquisa molecular. O presente estudo teve como objetivo analisar duas populações hospitalares de cães, selecionadas aleatoriamente no ano de 2013 e 2015, dos municípios de Toledo (n = 68) e Cascavel (n = 107). O exame direto de esfregaços de sangue, sorologia e PCR foram usados para detectar a presença de E. canis, A. platys, B. vogeli e Mycoplasma sp. O esfregaço sanguíneo direto foi negativo para os agentes investigados em todas as amostras. A imunocromatografia sérica (SensPERT ™, VetAll Laboratories, Coréia) em 175 animais mostrou que apenas 4% (n = 7) tinham anticorpos contra E.canis, enquanto 60% (n = 105) foram positivos para Anaplasma sp. Todas as amostras de PCR foram negativas para E. canis, enquanto 18,28% (n = 32) foram positivas para A. platys, 3,42% (n = 6) positivas para Babesia vogeli e 7,41% (n = 13) positivas para Mycoplasma sp. O estudo revelou a presença de A. platys em Toledo e Cascavel por PCR, o que acentua a necessidade de monitorar populações de vetores e hospedeiros usuais e avaliar o risco potencial de infecção em humanos.

There is an increase in tick-borne diseases in dogs in urban and rural areas in Brazil and some of these are of public health importance. Rhipicephalus sanguineus-transmitted hemoparasitoses are the main causes of mortality in dogs. The present study investigated the molecular occurrence of Ehrlichia canis, Babesia vogeli and Anaplasma platys in dogs with clinical sings and hematological abnormalities suggestive of tick-borne diseases. These dogs were seen at a Veterinary Hospital of a Public University between January 2014 and December 2016, and were evaluated through anamnesis, clinical examination and complementary exams. The polymerase chain reaction technique was used to detect the presence of hemoparasites DNA. From the 461 dogs that were tested for B. vogeli, 10.6% (49/461) were positive, the associated variable was age. Regarding the 730 animals screened for E. canis, 15.1% (110/730) were positive, and the infection was associated with hematocrit and number of platelets. Relative to the 86 samples evaluated for A. platys, 15.1% (13/86) were positive, and no variable presented statistical significance. From the animals positive for B. vogeli, no of these showed positivity by qPCR for Rangelia vitalii. It is concluded that the occurrence of hemoparasitosis in dogs from the Londrina region is common. Therefore, it is emphasized that molecular techniques should be used as an auxiliary tool for the differential diagnosis of the different etiological agents causing hemoparasitosis. Additionally, these molecular tools are essential for better investigation and preventive assertiveness because it allows to detect parasite DNA.

The aim of the present study was to detect Eimeria spp. in eared doves (Zenaida auriculata) from Brazil. Two hundred and fourteen birds were trap-capture in different regions of Londrina city, Paraná state, Southern Brazil. Fecal samples were collected, and DNA extraction was performed. A nested PCR based on the subunit I of the cytochrome c oxidase gene of the Eimeria mitochondrial genome was used to detect the DNA presence of this coccidian in eared dove feces. From 214 birds, 171 (79.9%) were positive for Eimeria spp. There was significantly difference of positivity between the site of capture. When analyzing the genders, the numbers of positive males were 84/103 (81.5%) and females 87/111 (78.4%). To the best of the authors’ knowledge, this is the first study with molecular prevalence of Eimeria sp. in Z. auriculata. Further studies should be done to identify the species of Eimeria that infect eared doves Z. auriculata.

Protozoans are widely distributed, and several species may parasitize the digestive tracts of cats (Felis catus), and can be transmitted to humans. The present study aimed to evaluate the species and occurrence of gastrointestinal protozoans in cats in the city of Londrina, Paraná, Brazil. A total of 206 cat fecal samples were tested, of which 141 were from shelter animals, and 65 were from pets owned by local people. Samples were processed by parasitological techniques. Coproparasitological techniques (Willis, Faust and Ziehl-Neelsen) were performed for detection of protozoan parasites. Subsequently, all samples were processed by PCR protocols specific to Toxoplasma gondii, Giardia spp., and Cryptosporidium spp. PCR products from positive samples were selected for sequencing. No samples were found to be positive for Cryptosporidium spp. using the Ziehl-Neelsen technique. Using specific PCR protocols, 1/206 (0.48%) samples tested positive for Cryptosporidium spp. After purification, this one positive sample was sequenced, and it demonstrated a 100% identity match to Cryptosporidium muris. Using specific PCR protocols, 13/206 (9.22%) cat fecal samples tested, including 2/65 (3.08%) pet cat fecal samples, were positive for T. gondii. PCR analysis revealed that 37/206 (17.96%) of cat fecal samples were positive for Giardia spp., including 27/141 (19.15%) of shelter cat fecal samples, and 10/65 (15.38%) pet cat fecal samples (p = 0.5124). When sequenced, these positive samples showed a 100% identity match with Giardia duodenalis. This study demonstrated that infections with Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii, and Giardia duodenalis are present in the population of both pet cats and shelter cats in the city of Londrina. This poses a risk to public health, because these parasites have a high zoonotic potential.

Rhipicephalus (Boophilus) microplus infestation is responsible for significant economic losses in cattle industry. The use of acaricides at strategic times and selection of resistant animals can minimize economic losses. This study aimed to determine the anatomical distribution and population dynamics of R. microplus in the municipality of Óleo, state of São Paulo. This study was conducted using eight male cattle, crossbred zebu-taurine (in accordance with the regional herd). Female R. (B.) microplus, greater than 4 mm, present in the right side of the animals were counted between April 2012 and March 2013. The highest tick number per animal was noted in October (128.25), and the lowest in April (35.5), with three infestation peaks during the study, in May, October, and December, which were influenced by the minimum and maximum mean temperature and rainfall. Among the cranio-caudal regions (anterior, median, and posterior), the posterior had the highest mean tick number, and the anterior had the lowest. The minimum temperature, rainfall, and solar radiation interfered with infestation of dorsoventral regions: in cold months, the lowest infestations were found in the mixed area (ear and tail); in the warm months, in the high region (head, neck, upper ribs, flank, and rump). The lower region (dewlap, cranial limb, lower ribs, abdomen, prepuce, scrotum, and lower limb) always had the highest mean tick number. The tick numbers of the caudal limb and crotch showed strong correlation with the total tick number (+0.88 and +0.70, respectively). These data, grouped according to median, posterior, and crotch regions, showed a stronger correlation with the total tick number (+0.96, +0.90, and +0.70, respectively).

Dogs are considered the main reservoirs of visceral leishmaniasis for humans, which also present a chronic and severe clinical picture when affected. The objective of the present report was to describe a canine visceral leishmaniasis case diagnosed in Londrina, an indene city, and its investigation. A street animal with extensive dermatological lesions, onychogryphosis, mild anemia and leukopenia was attended at a veterinary hospital in Londrina, where positivity was reported for Leishmania spp. in serological tests. Cytology was positive in bone marrow, PCR and parasite culture were positive in skin, spleen, liver, lymph node and bone marrow, and DNA sequencing confirmed the species of the parasite as L. (L.) infantum. The official diagnosis was made by the Central Laboratory of Paraná (LACEN), and through an official report, an investigation of the case was started for the confirmation of autochthony. An active search for the vector and other canine cases in the neighborhood was carried out along with a search for information on the origin of the animal in question. However, the species, Lutzomyia longipalpis, new canine cases, or origin of the sick animal were not identified. Although, the present case cannot be confirmed as autochthonous, we suggest that it is necessary to disseminate the present report to serve as a warning to veterinarians and other public health professionals in the northern region of Paraná to be attentive to suspicious cases and to not fail to investigate these cases to the end.

The indiscriminate use of chemical acaricides has allowed Rhipicephalus (Boophilus) microplus to develop resistance to several active principles. However, botanical extracts have been tested as an alternative method to control those ticks. This experiment studied the chemical fingerprint and acaricidal effect of fresh and dry Aloe arborescens Mill. extracts on R. (B.) microplus. The acaricidal activity of extracts was assessed using in vitro assays with engorged females, and phytochemical characterization was performed by infrared (IR) spectroscopy and high-performance liquid chromatography (HPLC). The results showed that fresh and dry A. arborescens extracts prepared with the solvents pure ethanol, ethanol-dichloromethane binary mixture, and ethanol-dichloromethane-acetone ternary mixture, contained water-soluble tannins and had a strong effect on the reproductive parameters of R. (B.) microplus demonstrated by a marked decreased in the number of eggs laid and in the larvae hatching rate (p < 0.05, p < 0.01, p < 0.001). In conclusion, A. arborescens Mill. has components with acaricidal activity against R. (B.) microplus, and phytotherapy with extracts of this plant may be used as an alternative method of R. (B.) microplus control.

Hemoplasma infections are emerging and wild fauna can represent an important reservoir of these pathogens. However, there are very few epidemiological studies about the occurrence of hemoplasmas in wild cats around the world. The purpose of this study is twofold: (1) evaluate the occurrence and phylogeny of hemoplasmas in captive wild felines at a zoo in the state of Paraná, Brazil, and (2) verify the correlation between subpopulations of these bacteria and the hematological and biochemical parameters of the animals. PCR was used to detect hemoplasmas in the blood of three cougars (Puma concolor), a jaguar (Panthera onca), a tiger (Panthera tigris) and a lion (Panthera leo), followed by sequencing and phylogenetic analysis. The cougars and jaguar were found to be hemoplasma-positive by PCR. The phylogenetic analysis of the 16S rRNA gene sequences enabled the identification of genotypes of ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’ circulating in this zoo. The identified sequences were closely related to hemoplasma sequences originating from domestic cats and other wild cats, but the infected cougars and jaguar were healthy and showed no hematological or biochemical changes. It was concluded that P. concolor and P. onca are exposed to ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’ in Paraná, but further research is suggested to assess the resistance of wild cats to different hemoplasma subpopulations.

Spotted fever is a typically endemic infectious disease caused by rickettsiae from the spotted fever group, of which Rickettsia rickettsii is the main etiologic agent. It presents high mortality rates in Brazil, with transmission to humans or animals through the bite of infected ticks. The capybara (Hydrochoerus hydrochaeris) is an important reservoir for Rickettsia spp.; these bacteria can circulate in an infected animal presenting only fever as a clinical sign of the disease, as demonstrated by experimental infection. Considering the high zoonotic potential and the damage caused to human, animal, and environmental health, this study searched for anti-Rickettsia rickettsii antibodies in capybaras from an agricultural landscape in the city of Araras, State of São Paulo, Brazil. The indirect immunofluorescence (IFA) technique was used to detect anti-R. rickettsii antibodies. From the 28 serum samples tested using IFA, 18 (64.28%) were considered reactive, with antibody titers ranging from 256 to 2048. Seven (38.88%) samples presented titers of 256, three (16.67%) with titers of 512, five (27.78%) with titers of 1024, and three (16.67%) with titers of 2048. However, it was not possible to significantly associate gender to these serologic results. These results demonstrate that at some point during their lives, the studied capybaras were exposed to the etiologic agent, but it is impossible to know when this occurred. Further studies need to be performed to clarify which serological titers ensure an infection in capybaras, based on clinical and laboratory assessment of rickettsemia, and to establish the relationship between titers and the chronicity of disease. This is necessary owing to the possibility of cross-reactions with other rickettsiae species of the same subgroup, leading to the need for molecular tests to confirm diagnosis.

Porcine virus type 2 (PCV2) is an emergent virus found in commercial pig farms and may cause clinical or subclinical infection. Wild pigs such as collared peccary (Tayassu tajacu) and white-lipped peccary (Tayassu pecari) may also be infected by PCV2. Accordingly, the aim of this study was to molecularly identify PCV2 in whole blood samples of captive peccaries (16 collared and 6 white-lipped) by conventional and quantitative PCR (qPCR). Although the housekeeping gene (?-actin) DNA was successfully amplified, all 22 peccaries tested negative for PCV2 by both molecular methods. Previous studies have shown no antibodies against PCV2 in 49 free-range collared peccaries of Southern Brazil but PCV2 DNA was detected by PCR in tissue samples of 9/10 (90.0%) collared and 3/3 (100%) white-lipped free-ranging peccaries from Central and Northern Brazil. In conclusion, although PCV2 may be endemic in free ranging wild pigs of Central and Northern Brazil, lack of serological and molecular PCV2 evidence (in whole blood) of both captive and free-range wild pigs may indicate low risk of disease in Southern Brazil.

In the present study, we evaluated a cocktail of recombinant plasmids encoding the major surface proteins (rMSP1a, rMSP1b, rMSP4, rMSP5, VirB9 and VirB10) to improve the humoral and cellular immune response triggered in calves. Ten calves were divided in three groups: Four calves were inoculated with the plasmids/rMSPs (G1); 2 calves were inoculated with empty vector (G2); and 4 calves received saline (G3). Three inoculations were administered at 21-day intervals. In G1, the calves showed significant increases in total IgG level 21 days after the second inoculation, compared to the control group (p

The leishmaniasis are a group of globally widespread parasitic diseases caused by a protozoa of the genus Leishmania, the state of Paraná accounts for 98% of leishmaniasis human cases in southern Brazil and the dogs might serve as a sentinel of the risk of infection to humans in a given area. The aim of this work was to study the epidemiology of leishmaniasis in dogs residents in two different environments, they are: recycling of solid waste centers (Group 1) and a neighborhood adjacent to a forest (Group 2), both in Londrina, Paraná State, Brazil and to determine epidemiological variables associated to infection in these different realities. Serum samples, randomly collected, from 61 dogs from Group 1 and from 74 dogs from Group 2 were submitted to Indirect Immunofluorescence Antibody Test (IFAT) to research for anti-Leishmania IgG antibodies. Of the 135 dogs analyzed, 13 animals (9.6%) were positive; nine (14.7%) in Group 1 and four (5.4%) in Group 2, the difference between the groups is not statistically significant. These results suggest the presence of the protozoan Leishmania spp. in both environments studied which indicate potential for infection in the human population.

A infestação pelo Rhipicephalus (Boophilus) microplus é responsável por significativas perdas econômicas na pecuária bovina. O uso de acaricidas de forma estratégica e a seleção de animais mais resistentes podem minimizar os prejuízos econômicos. O objetivo deste estudo foi determinar a distribuição anatômica e a dinâmica populacional do carrapato em bovinos do município de Óleo, SP. O estudo foi conduzido com 08 bovinos machos, mestiços zebu-taurino (conforme rebanho regional). Foram contadas as fêmeas de R. (B.) microplus, maiores que 4 mm, existentes no lado direito do animal, a cada 4 semanas, no período entre abril de 2012 e março de 2013. Obteve-se o maior número de carrapatos por animal em outubro (128,25), e o menor em abril (35,5), com a existência de três picos de infestação, sendo eles nos meses de maio, outubro e dezembro. Verificou-se a existência de três gerações anuais de carrapatos, que foram influenciadas pela precipitação pluviométrica e temperatura média, mínima e máxima. Das regiões Crânio-caudal (anterior, mediana e posterior), a posterior obteve o maior número médio de carrapatos e a anterior o menor. A temperatura mínima, a pluviosidade e a radiação solar interferiram nas infestações das regiões Dorso-ventral, nos meses frios, as menores infestações foram encontradas na área mista (orelha e cauda) e nos meses quentes na alta (cabeça, pescoço, costado alto, flanco e garupa). A região baixa (barbela, membro cranial, costado baixo, ventre, prepúcio, membro caudal e bolsa escrotal) se manteve sempre com a maior média. Das diferentes regiões anatômicas estabelecidas, o número de carrapatos do membro caudal e entrepernas mostraram ter forte correlação com o total, +0,88 e +0,70, respectivamente. Esses mesmos dados, agrupados segundo regiões previamente estabelecidas, obtiveram correlação mais forte com o total de carrapatos, sendo +0,96 (mediana), +0,90 (posterior) e +0,70 (entrepernas).

Theileria equi is the causative agent of worldwide piroplasmosis, an important tick-borne disease of equids associated to a lifetime carrier state of infected horses. Since rapid, accessible and reliable tests have been posted as a challenge for clinicians, the aim of the present study was to verify the agreement between an in-house immunofluorescence antibody assay (IFA) and a commercial competitive inhibition enzyme-linked immunosorbent assay (cELISA) in a population of 198 carthorses from Southern Brazil. The horse seroreactivity for T. equi revealed 152/198 (76.8%) positive samples by IFA and 155/198 (78.3%) by cELISA. Using cELISA as gold standard, IFA has shown a sensitivity of 91.6% (95% CI = 86.18-95.03%) and specificity of 76.7% (95% CI = 62.26-86.85%), with a substantial degree of agreement (k = 0.8445). In conclusion, the in-house IFA may be used as a screening test for diagnosis of equine piroplasmosis.

The aim of this study was to determine the occurrence of B. burgdorferi sensu lato s.l. antibodies in stray dogs of the urban area of Umuarama Town, localized in the northwest region of Parana state, Brazil. Serum samples from 168 dogs were tested using indirect immunofluorescence assay (IFA) and Western Blot (WB) in order to detect anti-Borrelia burgdorferi s.l. antibodies. The IFI analysis was used as screening test and positive results were confirmed employing the WB technique. Sixty-five (38.69%) of 168 serum samples were positive in the IFI; 54 of them (83.07%) were confirmed by the WB. The overall data analysis confirmed the presence of anti-B. burgdorferi s.l. antibodies in 32.14% (54/168) dogs, what suggests that northwest region of Parana State may constitute a risk area for Lyme disease. Further studies are necessary to determine the epidemiological characteristics of this disease in the region studied.

Mycoplasma sp. are hemotropic bacteria of red blood cells and the causative agent of hemoplasmosis. Diagnosis of infection is reached by polymerase chain reaction (PCR) and real-time PCR (qPCR) of the 16S RNA gene of this bacteria. The aim of this study was to screen horses for Mycoplasma sp. Infection using a pan-hemoplasma SYBR green qPCR assay. A total of 198 blood samples from horses were collected, DNA extracted and pan-hemoplasma qPCR performed. All samples were negative by qPCR. To verify the presence of amplifiable DNA, PCR for glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase gene was performed on all samples. This study was part of an active surveillance program, which is critical for monitoring animal health status, particularly in horses.

Leishmaniasis is an important metazoonosis caused by protozoa of the genus Leishmania and has a heteroxenic life cycle involving invertebrate and vertebrate hosts. Transmission occurs during the blood meal of infected phlebotomine sand flies in wild species, domestic animals, and humans. The dog is a reservoir for the parasite causing visceral leishmaniasis (VL), whereas in American tegumentary leishmaniasis (ATL), dogs are erratic hosts that are accidentally infected, as in humans. Dogs are considered an important indicator of the parasite and its vectors in the environment, thus highlighting the importance of diagnosis in these animals. This study aimed to assess the seroepidemiology of Leishmania spp. in dogs in the municipality of Telêmaco Borba that were part of a castration campaign. Blood samples from 191 dogs were collected, and their owners were surveyed on various epidemiological variables. Serological analysis was performed using indirect immunofluorescence (IIF) and rapid immunochromatography (DPP®). Screening by IIF identified 13 (6.81%) positive animals, none of which were positive for the DPP® test, which is specific for VL. Statistical analysis of the questionnaire responses indicated a significant association between seropositivity and the presence of stacked or composting leaves in the backyard (p = 0.0498), forest areas (squares, woods, parks) near the residence (p = 0.0015), and poorly healing ulcerated or nodular epidermal lesions in the dog (p = 0.0138). This study revealed the presence of anti-Leishmania spp. IgG antibodies in dogs residing in Telêmaco Borba, suggesting the presence of the parasite and vector in the environment. In addition, the existence of stacked or composting leaves in the backyard, forest areas near the residence, and epidermal lesions in dogs are factors associated with Leishmania spp. infection in pet dogs.

The aim of this study was to determine the frequency of gastrointestinal parasites in dogs and cats of Londrina, Paraná. A survey of the results of fecal examinations, the technique of Faust, Willis, Hoffmann and / or direct examination, performed in routine Laboratory of Parasitology, Department of Veterinary Preventive Medicine, State University of Londrina in the period January 2000 to December 2011 and the Clinical Laboratory Veterinary January 2008 to December 2011. 2668 fecal samples were analyzed, of which 2290 (85.83%) and 378 dogs (14.17%) of cats. Of the total, 851 (37,16%) dogs and 166 (43,91%) feline samples were positive for at least one parasite. Isospora spp. was the most frequent in both species with 8.82% and 11.64% of dogs infected cats. Regarding the form of infection, 740 (86.96%) and 139 dogs (83.73%) cats had single infection, while 111 (13.04%) dogs and 27 (16.27%) cats had multiple infection gastrointestinal parasites. The ocurrence of a significant number of parasites and the close contact between animals and humans demonstrates the need for a more effective control and specific, whereas the reduction of the parasitic load of animals and thus decreases environmental exposure of humans to important zoonosis.

The vaccination with DNA is one of the most promising immunization techniques against a pathogens variety and tumors, for which the conventional methods have not been efficient. DNA vaccines are capable to induce immune humoral and cellular response, directed to lymphocytes CD4+ and CD8+, without the necessity of live microorganisms. In spite of the great potential of inducing protective immunity, the DNA vaccine not always has success. The immunity depends on several factors such as the selection of the target gene, construction of the expression vector, frequency and via of administration of the vaccine, amount of DNA, location of the antigen codified by the plasmid and age, health and species of vaccinated animals. This revision shows the development of some vaccines of DNA for diseases of interest in the veterinary and human medicine.A vacinação com DNA é uma das mais promissoras técnicas de imunização contra uma variedade de patógenos e tumores, para os quais os métodos convencionais não tem sido eficientes. Vacinas de DNA são capazes de induzir resposta imune humoral e celular, tanto para resposta de linfócitos CD4+ quanto CD8+, sem a necessidade de microrganismos vivos. Apesar do grande potencial de induzir imunidade protetora, a vacina de DNA nem sempre apresenta bons resultados. A imunidade depende de vários fatores como a seleção do gene alvo, construção do vetor de expressão, freqüência e via de administração da vacina, quantidade de DNA, localização do antígeno codificado pelo plasmídio e idade, saúde e espécies de animais vacinados. Esta revisão relata o desenvolvimento de algumas vacinas de DNA para doenças de interesse na medicina veterinária e humana.

Sera of 708 animals (cows, heifers and calves) from 13 dairy herds in the Londrina region of Paraná, Brazil, were tested for antibodies to Anaplasma marginale by a competitive ELISA assay (cELISA). Ten 2 to 20 days old Holstein calves, from one of the 13 herds studied, were monitored during one year. Blood samples from each calf were collected monthly and tick burden counting was performed every fortnight. Percentage of infected erythrocytes was established by Giemsa-stained smears, and sera samples were examined by cELISA to detect antibodies against A. marginale. In the 13 herds, 92.94% of the animals were seropositive to A. marginale, which indicates that Londrina is an area of enzootic stability. Among the three animal categories (cows, heifers and calves), the rates were 98.29%, 96.64% and 81.25%, respectively. Passive transfer of maternal antibodies to calves was demonstrated by cELISA. From ten calves, nine (90%) were seropositive at the first sampling, revealing colostral antibodies anti-A . marginale. These antibodies remained in calves for 2 to 3 months. After this period the calves were infected with ticks, and then all of them were seropositive to Anaplasma. Five 4 to 7 months old calves showed rickettsemia ranging from 0.1% to 3.8%. Two of them were treated with tetracycline. The rickettsemia and clinical signs of anaplasmosis of these calves were coincident with tick burden increase.Soros de 708 animais (vacas, novilhas e bezerros) oriundos de 13 propriedades leiteiras da região de Londrina, Estado do Paraná, Brasil, foram testados para a presença de anticorpos contra Anaplasma marginale pelo teste ELISA competitivo (cELISA). Dez bezerros recém nascidos, pertencentes a um dos 13 rebanhos utilizados no levantamento sorológico, foram monitorados durante um ano. De cada bezerro foram colhidas amostras de sangue mensalmente e a cada quinze dias foi realizada a contagem de carrapatos. A porcentagem de eritrócitos parasitados foi determinada pela coloração de Giemsa em esfregaços sanguíneos e as amostras de soros foram submetidas ao cELISA para a detecção de anticorpos contra A. marginale. Dos animais dos rebanhos, 92,94% foram soropositivos para A. marginale indicando que a região de Londrina é uma área de estabilidade enzoótica. Nas três categorias de animais estudadas (vacas, novilhas e bezerros) as taxas de soropositivos foram de 98,29%, 96,64% e 81,25%, respectivamente. Nove dos 10 bezerros (90%) foram positivos pelo cELISA logo após o nascimento, o que demonstra a transferência de anticorpos colostrais. Os níveis de anticorpos colostrais foram detectados até o segundo e o terceiro mês de idade com um decréscimo neste período. Os níveis de anticorpos contra A. marginale voltaram a crescer nos meses seguintes, após os animais se infestarem com o Boophilus microplus, quando todos eram positivos. Cinco bezerros com idades entre quatro e sete meses apresentaram rickettsemias detectáveis pela coloração de Giemsa, variando de 0,1% a 3,8%, sendo que dois destes animais foram tratados com tetraciclina. Estas rickettsemias e os sinais clínicos apresentados por estes bezerros foram coincidentes com o aumento do número de carrapatos sobre os animais.

Cisticercose bovina é uma doença endêmica em vários países com um importante potencial zoonótico e uma crescente importância na saúde pública. A inspecção da carne nos matadouros é fundamental para estabelecer a prevalência e prevenção de doenças zoonóticas, tais como a cisticercose. No entanto, no Brasil, não há estudo que tenha investigado a dinâmica da cisticercose em bovinos abatidos em todo o país. Assim, o presente estudo teve como objetivo usar Sistema de Informação Geográfica (GIS) como uma ferramenta para analisar a prevalência de cisticercose bovina em bovinos, usando os dados de matadouros inspecionados pelo Serviço de Inspeção Federal do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (SIF/MAPA), no período de janeiro de 2007 a abril de 2010. As informações de bovinos abatidos foram usadas para gerar um banco de dados sobre cisticercose bovina para todos os estados e municípios do Brasil, a fim de analisar e criar mapas epidemiológicos usando o software GIS. Durante o período analisado, 75.983.590 bovinos foram abatidos e a prevalência de cisticercose bovina no Brasil foi de 1,05%, com a região Sudeste apresentando a maioria dos casos. A maior quantidade de casos cisticercose bovina ocorreram no estado de São Paulo (400.834), seguido por Mato Grosso do Sul (151.735) e Paraná (94.046), enquanto não houve observação de ocorrência em nove estados. Os dados fornecidos por matadouros inspecionados pelo SIF/MAPA podem ser usados como uma fonte informativa para animais e agências de saúde pública para a prevenção do complexo teníase/cisticercose. Este estudo elucida a importância da inspecção da carne associado aos mapas epidemiológicos, visando o controle da doença nos rebanhos bovinos e a vigilância ativa para infecção zoonótica potencial para humano. Os dados deste estudo sugerem que a cisticercose bovina é endêmica em vários estados brasileiros, e o risco de infecção está diretamente relacionado com as principais áreas de criação de bovinos, independentemente da demografia da população humana.

Toxoplasma gondii is a protozoan parasite recognized as an important public health problem. The objective of the present study was to evaluate the occurrence of anti-T. gondii antibodies in pregnant and non pregnant zebus’ breed beef cows (Bos indicus), their fetuses, killed at an abattoir in northern of Paraná state. In the present study 169 cows were evaluated, 92 pregnant (in different stages of gestation) and 77 non pregnant. Sero-occurrence of anti-T. gondii antibodies was performed by Indirect fluorescent antibody test (IFAT) considering positive animals with titers ? 50 for cows and ? 25 for fetuses. Blood (with EDTA) from pregnant cows and blood and tissue samples (brain, lung, heart, and liver) from their fetuses were collected and used for mouse bioassay. Antibodies against T. gondii were observed in 26.0% of cows and 2.5% of fetuses. There was no statistical difference when prevalence of toxoplasmosis was compared between pregnant (23.9%), and non-pregnant (28.6%) animals, and age of gestation (p > 0.59). However, the occurrence of anti-T.gondii antibodies increased with age of animals (p=0.004). Mouse bioassay showed three fetuses positives (3.2%), however, none T. gondii strain was isolated. The present study showed that transplacental transmission of T. gondii naturally occurs in zebu beef cows from Brazil, however, in low rate (5.4%). The anti-T. gondii antibodies occurrence increase with the age of animals, which could be related to the fact that main transmission in cattle T. gondii is horizontal. Toxoplasma gondii é um protozoário reconhecido como um dos mais importantes parasitas em saúde pública. O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência de anticorpos contra T. gondii em vacas de corte zebuínas (Bos indicus) gestantes, e seus fetos, bem como, em vacas não gestantes abatidas em um matadouro no norte do Paraná. No presente estudo foram avaliadas 169 vacas, 92 prenhas (em diferentes fases de gestação) e 77 não prenhas. A ocorrência de anticorpos contra T. gondii foi realizada por meio da reação de imunofluorescência indireta (IFI) considerando animais positivos aqueles com títulos ? 50 para as vacas e ? 25 para os fetos. Sangue (EDTA) de vacas prenhas e amostras de sangue e tecidos (cérebro, pulmão, coração, e fígado) de seus fetos foram coletadas e utilizadas para o bioensaio em camundongos. Anticorpos contra T. gondii foram observados em 26,0% das vacas e em 2,5% dos fetos Não houve diferença quando a soropositividade de anticorpos foi comparado entre vacas gestantes (23,9%), e não gestantes (28,6%), bem como, a idade da gestação (p > 0,59). No entanto, a ocorrência de anticorpos aumentou com a idade dos animais (p = 0,004). O bioensaio mostrou três fetos positivos (3,2%), porém, nenhuma cepa foi isolada. O presente estudo mostrou que a transmissão transplacentária de T. gondii ocorre naturalmente em vacas de corte zebuínas do Brasil, no entanto, esta ocorrência foi baixa (5,4%). A maior ocorrência de anticorpos associada com a idade dos animais poderia estar relacionada a transmissão horizontal do T. gondii nestes animais.

The purpose of the present study was to evaluate the immunity of broilers inoculated with sporulated oocysts and sporozoite proteins of Eimeria tenella against challenge with homologous infectives oocysts. Broiler chickens of Hubbard strain, females, coccidian-free, were kept in wire cages and inoculated on the third day (day 0). Three treatments were used: T1, the negative control; T2, received 500 sporulated oocysts by gavage; T3, positive control; T4, received 50 ?g of sporozoite protein with Quil A; and T5, received Quil A without sporozoite protein and PBS, the last two protocols were administered via nasal route on days 0, 7, and 21. On the 31st day, all groups, with the exception of T1, were challenged with homologous virulent strain of E. tenella at the dose of 8.0×104 oocysts. Immunogenicity was assessed by carotenoids, ELISA assay, histopathological analysis, oocysts count and lesion score. Antibody kinetics were measured weekly and showed a gradual increase in levels of immunoglobulin for treatment T2 and T4, reaching a peak on day 21. Based on the parameters evaluated, a total protecting immunological effect for the infectant oocysts vaccine (T2) and partial protection for the sporozoite protein vaccine (T4) against homologous virulent strain challenge were observed. O objetivo do presente estudo foi avaliar a imunidade de frangos de corte inoculados com oocistos esporulados e proteínas de esporozoítos de Eimeria tenella utilizando um desafio com oocistos esporulados homólogos. Frangos de corte da linhagem Hubbard, fêmeas, livres de coccidiose, foram mantidos em gaiolas de arame e inoculados no terceiro dia (dia 0). O delineamento experimental consistiu de cinco tratamentos com três repetições: T1- controle negativo; T2- recebeu 500 oocistos esporulados por gavagem; T3- controle positivo; T4- receberam 50 ?g de proteína de esporozoítos adicionados a Quil-A, e finalmente o T5- que recebeu apenas Quil A e PBS, os últimos dois protocolos foram administrados pela via nasal nos dias 0, 7 e 21. No dia 31, todos os grupos, com exceção do T1, foram desafiados com uma cepa homóloga virulenta de E. tenella na dose de 8,0 × 104 oocistos esporulados. A imunogenicidade foi avaliada por níveis de carotenóides, ELISA, análise histopatológica, contagem de oocistos e índice de lesões. Com base nos parâmetros avaliados, a vacina de oocistos infectante (T2) mostrou uma proteção total e a vacina de proteína de esporozoítos (T4) uma protecção parcial contra o desafio homólogo com cepa virulenta.

Previous studies showed that Nelore calves’ active production of immunoglobulins is delayed compared to Canchim and Limousin calves, characterizing a possible physiologic difference between taurine and Zebu calves. In this study we compared serum proteins of Nelore and Holstein calves from birth to six months old. Blood samples were taken from 50 healthy calves (30 Nelore and 20 Holstein) in the following ages: 24 to 36 hours of life, and 15, 30, 60, 90, 120, 150 and 180 days. Serum total protein concentrations were measured by colorimetry; albumin, alfa, beta and gammaglobulin concentrations were measured by agarose gel electrophoresis; and IgG concentrations were estimated by the zinc sulphate turbidity test. A repeated measure ANOVA was used to test age effect. The passive transfer of immunity was successful in both breeds and the variation of serum proteins followed the normal pattern throughout the first six months of life. There were breed differences in serum gammaglobulin concentrations. The levels of gammaglobulin were higher at the end of the first day of life, and decreased to the lowest levels at 60 days in Nelore calves and 30 days in Holstein calves. The increase due to the active production of antibodies was precocious in Holstein calves (beginning at 60 days) and slower in Nelore calves (beginning at 90 days), demonstrating that Zebu calves can, in fact, develop active immunity capability later than taurine calves.Estudos anteriores comprovaram que a produção ativa de imunoglobulinas é mais tardia em bezerros Nelore do que nos das raças Canchim ou Limousin, caracterizando possível diferença fisiológica entre zebuínos e taurinos. Esse trabalho tem o objetivo de comparar o proteinograma sérico de bezerros Nelore e Holandeses até os seis meses de vida. Amostras de sangue foram colhidas de 50 bezerros aparentemente sadios, 30 da raça Nelore e 20 da raça Holandesa, entre 24 e 36 horas de vida e aos 15, 30, 60, 90, 120, 150 e 180 dias. Determinaram-se as concentrações séricas de proteína total por colorimetria, das frações albumina, alfa, beta e gamaglobulinas por eletroforese em gel de agarose e de IgG estimada por meio do método de turvação pelo sulfato de zinco. Empregou-se a análise de variância de medidas repetidas. A transferência de imunidade passiva foi bem sucedida nos bezerros das duas raças e as variações das proteínas séricas obedeceram a um padrão de comportamento fisiológico ao longo dos seis primeiros meses de vida. A curva de variação das gamaglobulinas representou a principal diferença entre as raças. As concentrações mais elevadas ao término do primeiro dia de vida declinaram até os valores mais reduzidos aos 60 dias na raça Nelore e aos 30 dias na raça Holandesa. A elevação subsequente resultante da produção ativa de anticorpos foi mais precoce nos bezerros Holandeses (a partir dos 60 dias de vida) e mais tardia nos Nelore (a partir dos 90 dias de vida), o que indica que o desenvolvimento da capacidade de imunidade ativa pode ser de fato mais lento em zebuínos do que nos taurinos.

The purpose of this study was to determine the seroprevalence of antibodies against Toxoplasma gondii and Leishmania spp. in humans and dogs living in two rural settlements in northern Paraná State. An epidemiological questionnaire was applied to obtain socio-demographic information and possible associations with the infections, and the data were analyzed using EpiInfo®. Blood samples were collected from 216 humans and 169 dogs, and tested by indirect immunofluorescence assay. The prevalence of toxoplasmosis in humans was 79.1% (171/216) and in dogs was 82.2% (139/169). Among the variables analyzed for toxoplasmosis in humans the presence of young cats in the household (p = 0.031) and higher frequency with individuals > 18 years showed a significant association. A higher frequency of seropositive was observed in dogs aged > 1 year. The prevalence of leishmaniasis in humans was 7.4% (16/216) and in dogs was 8.2% (14/169). The variable presence of forest less than 200 meters from the residence had a significant association among both humans and dogs. Also for dogs, there was association with the presence of organic matter (leaves) around the household. In conclusion, it can be stated that there is a high spread of T. gondii in both species and the occurrence of anti-Leishmania spp. antibodies in humans and dogs indicates that there is transmission of Leishmania spp. in these localities.O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência de anticorpos contra Toxoplasma gondii e Leishmania spp. em humanos e cães que vivem em dois assentamentos rurais no norte do Paraná. Um questionário epidemiológico foi aplicado para obter informações sociodemográficas e possíveis associações com as infecções, e os dados foram analisados pelo EpiInfo®. Amostras de sangue foram coletadas de 216 pessoas e 169 cães, e testados por imunofluorescência indireta. A prevalência de toxoplasmose em humanos foi de 79,1% (171/216) e em cães foi de 82,2% (139/169). Entre as variáveis analisadas para toxoplasmose em humanos a presença de gatos jovens no domicílio (p = 0,031) e maior freqüência de indivíduos >18 anos mostraram uma associação significativa. Uma maior freqüência de soropositivos foi observada em cães com idade >1 ano. A prevalência de leishmaniose em seres humanos foi de 7,4% (16/216) e em cães foi de 8,2% (14/169). A variável presença de floresta a menos de 200 metros da residência apresentou uma associação significativa entre os seres humanos e cães. Também para os cães, houve associação com a presença de matéria orgânica (folhas) em torno da casa. Em conclusão, pode afirmar-se que existe uma grande propagação de T. gondii em ambas as espécies e a ocorrência de anticorpos anti-Leishmania spp. em humanos e cães, indica que há transmissão de Leishmania spp. nessas localidades.

Brazilian Spotted Fever is a disease caused by Rickettsia rickettsii, and is transmitted to humans and animals by Amblyomma spp. The objective of this work was to study the epidemiology of spotted fever group rickettsiae in rural areas of Northern Parana. In Alvorada do Sul municipality, 88 humans, 83 dogs, and 18 horses were sampled, and in Arapongas municipality, 138 humans, 90 dogs and 18 horses were studied. All the sera were tested by IFA in which R. rickettsii and R. parkeri were used as antigens, considering titers ? 64 positive. Ticks collected from dogs and horses were tested by PCR. In Alvorada do Sul, 24% and 16.1% of humans, 55.6% and 22.2% of horses and, 22.9% and 18.1% of dogs were seropositive for R rickettsii and R. parkeri, respectively. In Arapongas, 9.4% and 4.3% of the humans, 5.6% and 5.6% of horses and, 13.3% and 12.2% of the dogs were seropositive for R. rickettsii and R. parkeri, respectively. PCR detected seven ticks with gltA sequences that showed similarity with R. bellii. The presence of antibodies to R. parkeri and R. rickettsii in dogs, horses and humans demonstrates a potential risk for spotted fever group rickettsiae in these areas.Febre Maculosa Brasileira é uma doença causada por Rickettsia rickettsii, e é transmitida para humanos e animais por Amblyomma spp. O objetivo deste trabalho foi estudar a epidemiologia de riquétsias do grupo da febre em áreas rurais do Norte do Paraná. No município de Alvorada do Sul, 88 pessoas, 83 cães e 18 cavalos foram amostrados, e no município de Arapongas, 138 seres humanos, 90 cães e 18 cavalos foram estudados. Todos os soros foram testados por IFI com R. rickettsii e R. parkeri como antígenos, considerando-se os títulos ? 64 positivos. Carrapatos coletados de cães e cavalos foram testados por PCR. Em Alvorada do Sul, 24% e 16,1% dos seres humanos, 55,6% e 22,2% de cavalos e, 22,9% e 18,1% de cães foram soropositivos para R. rickettsii e R. parkeri, respectivamente. Em Arapongas, 9,4% e 4,3% dos seres humanos, 5,6% e 5,6% de cavalos e, 13,3% e 12,2% dos cães foram soropositivos para R. rickettsii e R. parkeri, respectivamente. A PCR detectou 7 carrapatos com seqüências gltA que mostrou semelhança com R. bellii. A presença de anticorpos para R. rickettsii e R. parkeri em cães, cavalos e seres humanos demonstra um risco potencial para riquétsias do grupo da febre maculosa nestas áreas.

A proteína Iss (increased serum survival) é uma importante característica de resistência ao sistema complemento da Escherichia coli patogênica para aves (APEC). Os objetivos deste trabalho foram clonar e verificar a diversidade da seqüência do gene iss de APEC e caracterizar a proteína Iss recombinante. O gene iss de 309 bp foi amplificado por PCR, clonado e expresso na E. coli BL21 (DE3) utilizando o vetor pET SUMO. O gene iss da APEC9 foi classificado como iss tipo 1 pela diferenciação entre 3 tipos de iss alelos. A proteína Iss foi expressa pela indução com IPTG, purificada em coluna com resina ligada ao íon níquel e utilizada na imunização de galinhas poedeiras. Anticorpos da classe IgY anti rIss reagiram com a proteina rIss, a qual apresentou massa molecular de 22 kDa, correspondendo 11kDa da Iss e 11 kDa da proteína SUMO. The Iss (Increased serum survival) protein is an important characteristic of resistance to complement system of avian pathogenic Escherichia coli (APEC). The objectives of this work were to cloning and verify the sequence diversity of iss gene from APEC and characterize the recombinant Iss protein. The iss gene of 309 bp was amplified by PCR, cloned and expressed in E. coli BL21 (DE3) using the pET SUMO vector. The iss gene from APEC9 strain was classified as iss type 1 by differentiation of the three iss gene allele types. The protein was expressed by induction of IPTG and purified in resin charged with the nickel ion. Antibodies IgY anti rIss reacted with rIss showing a molecular mass of 22 kDa, corresponding 11KDa of Iss protein and 11 KDa SUMO protein.

One hundred and fifty fecal samples from dogs with acute diarrhea (Group 1) and from 50 dogs without diarrhea (Group 2) were collected and analyzed at the Veterinary Teaching Hospital of the State University of Londrina, between October, 2004 and October 2005. From the positive samples (29.3%) of Group 1, 72.7% were infected by only one agent, while 27.3% had mixed infection. The following genera wereobserved by coproparasitologic evaluation: Giardia sp. (9.3%), Ancylostoma sp. (7.3%), Cystoisospora (7.3%), Entamoeba sp. (6.7%), Toxocara sp.(4%), Pentatrichomanas hominis (3.3%), and Trichurisvulpis (1.3%). From the 50 animals without diarrhea, six (12%) were positive by coproparasitologic evaluation: two (4%) for Ancylostoma sp., three (6%) with Giardia sp., and one (2%) for both Ancylostoma sp. and Cystoisospora sp. There was a significant relationship between infection and diarrhea (P=0,005), age and infection (PForam examinadas 150 amostras de fezes colhidas de cães com diarréia aguda (Grupo 1), e outras 50 de animais sem diarréia (Grupo 2), atendidos entre outubro de 2004 e outubro 2005, no Hospital Veterinário Escola da Universidade Estadual de Londrina. Dos 150 animais do G1, 44 (29,3%) estavam infectados por helmintos e/ou protozoários, sendo que destes, 32 (72,7%) apresentavam infecção simples e 12 (27,3%) infecções múltiplas. Os gêneros identificados nestes animais foram: Giardia sp. (9,3%), Cystoisospora sp. (7,3%), Ancylostoma sp. (7,3%), Entamoeba sp. (6,7%), Toxocara sp. (4%), Pentatrichomonas hominis (3,3%) e Trichuris vulpis (1,3%). Dos 50 animais sem diarréia, seis (12%) eram positivos, dois (4%) para Ancylostoma sp., três (6%) para Giardia sp. e um (2%) para Ancylostoma sp. e Cystoisospora simultaneamente. Houve relação estatisticamente significativa (P=0,005) entre o parasitismo e a ocorrência de diarréia, assim como entre a faixa etária e a proporção de infecções (P

The serological techniques Rapid Conglutination Test (RCT), Indirect ELISA (iELISA) and Indirect Immunofluorescent Assay (IFA), using the competition ELISA (cELISA) as gold test, were comparatively evaluated to detect antibodies against Anaplasma marginale. A total of 453 sera from vaccinated and non vaccinated cattle and, collected from enzootic stability and instability areas were tested. iELISA, IFA and TCR presented kappa index = 0.77 (substantial); 0.57 and 0.49 (moderate), sensibility of 90.6%; 90.2% and 73.7% and specificity of 86.6%; 62.8%, and 79.3%, respectively. Therefore, iELISA presented better specificity than IFA and RCT, and can be indicated for more detailed serological investigations, detection of persistently infected animals in cattle herds and for monitorating of vaccination programs. IFA and TCR can be used in prevalence studies and to monitor cattle movement between different geographical regions.Os testes sorológicos de Conglutinação Rápida (TCR) Imunofluorescência Indireta (IFI) e Imunoenzimáticos Indireto (iELISA) utilizando ELISA por competição (cELISA), como padrão ouro, foram avaliados comparativamente para a detecção de anticorpos contra o Anaplasma marginale. Foram utilizadas 453 amostras de soros sangüíneos de bovinos vacinados e não-vacinados e de áreas de estabilidade e instabilidade enzoótica. O iELISA, IFI e TCR apresentaram respectivamente, índice kappa=0,77 (substancial), 0,57 e 0,49 (moderado), sensibilidade de 90,6%, 90,2% e 73,7% e especificidade de 86,6%, 62,8%, e 79,3%. O iELISA apresentou o melhor desempenho e maior especificidade, podendo ser indicado na avaliação do perfil sorológico de rebanhos, na detecção de animais persistentemente infectados e de animais submetidos a programas de vacinação. As técnicas de IFI e TCR, mesmo apresentando desempenho inferior, podem ser recomendadas para a realização de inquéritos epidemiológicos e para o monitoramento de animais em trânsito entre as diferentes regiões geográficas.

A 21 days old Jersey male calf showing neurological signals was examined by the Pathology Emergency Service of Veterinary Hospital of State University of Londrina, Parana, Brazil. After the euthanasia the calf was submitted to the necropsy and fragments of cerebral cortex, cervical area of the spinal marrow, heart, liver and lung were picked for histological exams and virus isolation. No viral agent was isolated from the processed tissues of the calf. The histological exams revealed several ovoid and spherical cysts of protozoan in the brain and spinal marrow. These cysts showed positive reaction in the immunohistochemical (IHQ) for the N. caninum and also for T. gondii. Sera samples of the calf mother’s also presented positive serology for N. caninum, T. gondii, BHV-1 and VBVD. The results of the maternal serology, IHQ, histopathology and clinical signs that the calf presented suggest the involvement of the N. caninum in the case. This is the first report of congenital neosporose in calf in the state of Paraná-Brazil.Um bezerro da raça Jersey, macho, de 21 dias de vida, com opistótono, apatia e paresia de membros posteriores, desde o nascimento, foi encaminhado ao Hospital Veterinário da Universidade Estadual de Londrina, Paraná-Brasil, para avaliação. Após a eutanásia o bezerro foi submetido à necropsia e fragmentos de córtex cerebral, da região cervical da medula espinhal, coração, fígado e pulmão foram colhidos para exames histológicos e virológicos. Nenhum agente viral foi isolado nos tecidos do bezerro. No exame histológico foram observados cistos de protozoário ovóides e circulares de diversos tamanhos no cérebro e medula espinhal. Estes cistos mostraram reação positiva na imunoistoquímica (IHQ) para o N. caninum e também para o T.gondii. Amostras de soros colhidas da mãe do bezerro também apresentaram sorologia positiva para N. caninum, T. gondii, BHV-1 e VBVD. Os resultados da sorologia materna, da IHQ, os achados histopatológicos e sinais clínicos que o bezerro apresentava sugerem o envolvimento do Neospora caninum no caso. Este é o primeiro relato de neosporose congênita em bezerro no estado do Paraná-Brasil.

A hemaglutinina temperatura sensível (Tsh) pertence à família das serino-proteases autotransporte de Enterobacteriacea (SPATE), as quais são capazes de clivar diferentes substratos. Nós isolamos e caracterizamos o gene de Escherichia coli patogênica aviária (APEC) amostra APEC 13, sorotipo O2:H9,clonado em pET101. A região de 4.2 kb do DNA clonado codifificou uma proteína de aproximadamente 140 kDa (r-Tsh). O plasmídio recombinante pET101-tsh conferiu um fenótipo de hemaglutinação positivo para a linhagem BL21 (tsh-) para eritrócitos de galinha. A proteína r-Tsh foi purificada em coluna de níquel e utilizada na produção de anticorpos anti-Tsh. Um fragmento de 1.6 kb foi amplificado e subclonado em pCR4, e a seqüência parcial mostrou alta homologia com outras seqüências analisadas. O anti-Tsh reagiu com as proteínas r-Tsh e Tsh nativa da amostra APEC13, como demonstrado pela técnica de Western blot, mostrando que a r-Tsh tem epitopos conservados e que sua antigenicidade foi preservada. O anti-Tsh também inibiu a atividade hemaglutinante das amostras APEC13 e BL21/pET 101-tsh.The temperature-sensitive hemagglutinin (Tsh) belongs to a family of high-molecular-weight serine protease autotransporters of Enterobacteriaceae (SPATEs), which can cleave different substrates. We isolated and characterised the tsh gene from an avian pathogenic Escherichia coli (APEC) strain, APEC13 serotype O2:H9, which was cloned in pET101. The 4.2 kb region of cloned DNA coded one protein of approximately 140 kDa (r-Tsh). The recombinant plasmid pET101-tsh conferred to E. coli BL21 strain (tsh) the hemagglutination-positive phenotype against chicken erythrocytes. The r-Tsh was purified by Ni-NTA column and used to produce antibody anti-Tsh. A 1.6 kb fragment of the tsh sequence was also amplified and cloned in pCR4, and a partial sequence showed high homology with other sequence analysed. The anti-Tsh reacted with the protein r-Tsh and native Tsh of APEC13, as demonstrated by Western blot, showing that r-Tsh has conserved epitopes and that its antigenicity was preserved. The anti-Tsh also inhibited the hemagglutinating activity of strains APEC13 and BL21/pET101-tsh.

Thirty-four bovine abortions (fetuses) from Paraná State were examined histologically and immunohistochemically. Eight fetuses had non-suppurative encephalitis and miocarditis, and Neospora caninum were detected by immunohistochemistry. Four cows were seropositive to N. caninum. It was the first detection of congenital neosporosis in aborted bovines fetuses, in Paraná State, Brazil.Trinta e quatro fetos bovinos abortados, no Estado do Paraná, foram examinados através de análise histológica e imuno-histoquímica. O Neospora caninum foi detectado, pela imuno-histoquímica, em oito fetos que apresentavam miocardite e encefalite não supurativa. Quatro vacas foram soropositivas para o Neospora caninum. Este é o primeiro relato de neosporose congênita em fetos bovinos abortados, no Estado do Paraná, Brasil.

The dynamic of the infection by Anaplasma marginale in Holstein cows and calves was studied in two dairy farms (A and B) in the Londrina region, North of Paraná. In the farm A the cows were maintained in the tie-stall system and, the calves in collective stall; in the farm B, the cows stayed in freestall system and the calves in individual cages. Every 15 days, blood samples were collected from the dams 45 days before parturition until 60 days post partum, and from their calves at birth until 240 days of age. Tick burden counting was also performed on dams and calves twice a month. Percentage of infected erythrocytes was established by Giemsa-stained smears. Blood and sera samples were examined by Polimerase Chain Reaction (PCR) and competitive Enzime-Linked Immunosorbent Assay (cELISA), respectively. In the cows, the anti-A. marginale antibody levels decreased close to the parturition, showing an adverse behavior among the farms. In the farm A the levels of antibodies increased between 30 and 60 days after the parturition and, in farm B the antibodies stayed in low levels during the accompaniment period of the cows. The anti-A. marginale antibody levels of the calves of the farm A, that were not high in the day of the birth, decreased more until 45 days post parturition and it increased again starting from 60 days, with maximum pick to the 105 days. In the farm B, where the calves presented higher levels of antibodies at the birth day, there was a slower decrease of the antibody levels, reaching the lowest point to the 75 days post parturition and it increased again more tardily, to the 165 days of age. The dams and calves in both farms were exposure to cattle tick Boophilus microplus during almost all period of accompaniment and they showed rickettsemia ranging from 0 to 1%. In conclusion, A. marginale infection after birth was more influenced by maternal antibody levels than tick burden; the differences between animals handling influenced the antibody levels of the dams and calves, and during the natural infection period of the calves; tick burden did not influence the rickettsemia in the studied farms.A dinâmica da infecção por Anaplasma marginale em vacas e bezerros da raça Holandesa foi estudada em duas propriedades leiteiras (A e B) com manejos distintos da região Norte do Paraná. Na propriedade A as vacas eram mantidas no sistema “tie-stall” e, os bezerros em bezerreiros coletivos; na propriedade B, as vacas em sistema “free-stall” e os bezerros em gaiolas individuais. A cada 15 dias efetuou-se a contagem de carrapatos e coletas de amostras de sangue das vacas e seus respectivos bezerros. As vacas foram monitoradas dos 45 dias antes até 60 dias após o parto, e seus bezerros, do nascimento até 240 dias de idade. A parasitemia foi determinada em esfregaços sangüíneos corados pelo Giemsa. O sangue total e as amostras de soro obtidas foram submetidos, respectivamente, as técnicas da PCR e cELISA. Nas vacas os níveis de imunoglobulinas diminuíram próximo ao parto, além de apresentarem uma dinâmica de anticorpos diferentes entre as duas propriedades. Na propriedade A os níveis de anticorpos aumentou entre 30 e 60 dias após o parto e na B os anticorpos permaneceram em níveis baixos no período de monitoramento das vacas. Os níveis de anticorpos dos bezerros da propriedade A que não eram altos no dia do nascimento, diminuíram ainda mais até 45 dias pós-parto e voltou a crescer a partir de 60 dias, com pico máximo aos 105 dias. Na propriedade B, onde os bezerros apresentavam níveis mais elevados de anticorpos no primeiro dia de vida, houve uma diminuição mais demorada dos níveis, alcançando o ponto mais baixo aos 75 dias pós-parto e voltou a crescer bem mais tardiamente, aos 165 dias de idade. Pela PCR, detectou-se A. marginale no sangue de bezerros das duas propriedades, a partir dos 45 dias de vida, com a maioria das amostras de sangue positivas entre 105 e 180 dias. As vacas e bezerros de ambas as propriedades foram expostos ao carrapato Boophilus microplus durante grande parte do período de monitoramento e mostraram parasitemia variando de 0 a 1%. A infecção natural dos bezerros pelo A. marginale após o nascimento foi mais dependente dos níveis de anticorpos colostrais absorvidos do que da intensidade da infestação pelo B. microplus. As diferenças de manejo existentes nas duas propriedades influenciaram os níveis de anticorpos das vacas e bezerros e o período de infecção natural dos bezerros.

Three hundred and thirty nine serum samples were taken from sheep from Londrina region of the Paraná state, Brazil. Samples were analyzed by indirect immunofluorescence assay (IFA) for the detection of anti-Toxoplasma gondii IgG antibodies. Titers higher or equal to 64 were considered positives. One hundred and eighty five (54,6%) of the 339 samples tested were seropositive, with titres ranging from 64 to 65.536. All farms had positives animals. There was a statistical significant difference between seroprevalence to T. gondii and age. No significant difference was observed in the association between seropreva Londrina region of the Paraná state, Brazil. Samples were analyzed by indirect immunofluorescence assay (IFA) for the detection of anti-Toxoplasma gondii IgG antibodies. Titers higher or equal to 64 were considered positives. One hundred and eighty five (54,6%) of the 339 samples tested were seropositive, with titres ranging from 64 to 65.536. All farms had positives animals. There was a statistical significant difference between seroprevalence to T. gondii and age. No significant difference was observed in the association between seroprevalence and sex. It was not possible to associated T. gondiiseroprevalenceand presence of housed or stray cats, because these animals were present in all farms. The present work showed that T. gondii has a wide distribution in sheep from this region.Amostras de 339 soros de ovinos da microrregião de Londrina no Estado do Paraná, foram analisadas através da imunofluorescência indireta para pesquisa de anticorpos anti-Toxoplasma gondii (IFI-IgG), adotando-se como ponto de corte a diluição 1:64. Foram observados 185 (54,6%) ovinos sororeagentes ao T. gondii, com títulos variando de 64 a 65.536. Todas as propriedades apresentaram ovinos sororeagentes. Animais com idade igual ou maior a dois anos, apresentaram um maior número de sororeagentes, e não foi observada diferença estatística significativa quanto ao sexo. Não foi possível associar a soropositividade para T. gondii com a presença de gatos domiciliados e/ou errantes, uma vez que foi constatada a presença desses animais em todas as propriedades. A partir dos dados obtidos neste estudo, conclui-se que a toxoplasmose está presente no rebanho ovino da microrregião de Londrina no Estado do Paraná.

The evolvement of Toxoplasma gondii and Neospora caninum on etiology of clinical-neurological signs in dogs was investigated in this work. Ninety-eight urban dogs with neurologic disturbances were divided into two groups: Group I consisted of 67 dogs examined by the Animal Neurologic Service of Universidade Estadual de Londrina, between 1987 and 1990. Group II consisted of 31 dogs examined on the same University between 2000 and 2001. Dogs were serological evaluated for evidence of T. gondii or N. caninum. The serological results for T. gondii were 82,5% and 35.4% on groups I and II, respectively. Histologic lesions compatible with distemper on the two groups were observed. T. gondii cysts were observed in two dogs by histopathology and immunohistochemistry. Neosporosis was not observed in these dogs, possibly because their urban origin.Neste trabalho estudou-se a participação do Toxoplasma gondii e Neospora caninum na etiologia de sinais neurológicos em cães. Foram utilizados 98 cães com distúrbios neurológicos provenientes da área urbana divididos em dois grupos: Grupo I constituído de 67 animais atendidos no período de 1987 a 1990 pelo Serviço de Neurologia Animal da Universidade Estadual de Londrina, onde se utilizaram os tecidos emblocados em parafina e Grupo II com 31 animais atendidos no período de 2000 a 2001 nesta mesma instituição. Os animais foram avaliados sorologicamente para pesquisa de anticorpos contra T. gondii e N. caninum. Os resultados da sorologia para T. gondii obtidos no grupo I e II foram 82,5% e 35.4%, respectivamente. Foram observadas lesões histológicas compatíveis com cinomose nos dois grupos. Cistos de T. gondii foram diagnosticados em dois cães através da histopatologia e imuno-histoquímica. A neosporose não foi diagnosticada em nenhum animal, provavelmente devido à procedência urbana dos animais estudados.

Many tick-borne disease can infect dogs and human beings. The distribution of the infectious agents transmitted by ticks parallels the geographic distribution of the vectors. Accordingly, we attempted to characterize ticks in dogs from a hospital population in North Paraná State, South Brazil, and to verify the frequency of each tick species in this population. We selected seventy one dogs presented to the Veterinary Hospital of the Universidade Estadual de Londrina with severe tick infestation. Animals with more than 25 ticks were included regardless of the chief complaint or presenting clinical signs. Ten ticks were collected from various parts of the body in each dog. All ticks were toxonomically classified. Four percent of the ticks removed were identified as Amblyomma cajennense, whereas 96% were Rhipicephalus sanguineus. The distribution of ticks was similar to the one observed in urban areas in South and South-east Brazil and compatible from a predominantly urban dog population.Muitas doenças podem ser transmitidas por carrapatos e acometer tanto o homem quanto o cão. Como a distribuição geográfica dos agentes infecciosos transmitidos por carrapatos acompanha a distribuição dos vetores, o presente estudo objetivou caracterizar morfologicamente as espécies de carrapatos que parasitam cães de uma população hospitalar na região norte do Paraná e estimar a taxa de ocorrência de cada espécie de carrapato nesta população. Para tanto foram selecionados 71 cães atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Estadual de Londrina que apresentaram alta infestação por carrapatos. Foram incluídos animais doentes, com qualquer sintomatologia e que, no momento da consulta apresentavam mais de 25 carrapatos. De cada cão foram retirados 10 carrapatos de diversas partes do corpo. Os carrapatos encontrados foram analisados morfologicamente e classificados de acordo com a espécie. Foi determinado o número de cães parasitados por cada espécie. Dos carrapatos coletados, 4% foram identificados como Amblyomma cajenense e 96% como Rhipicephalus sanguineus. A distribuição de carrapatos encontrada foi similar a observada em cães de origem urbanas no Rio Grande do Sul e em estados da Região sudeste e compatível com carrapatos encontrados em cães originários predominantemente de áreas urbanas.

Ehrlichiosis is a disease caused by gram negative obligate intracellular bacterial organisms belonging to the Rickettsiales Order, Anaplasmataceae Family, Genus Ehrlichia and Anaplasma. These organisms may parasite leukocytes, erythrocytes or platelets, leading to abnormalities in many organs. Clinical signs are variable depending on the severity of the infection, host immune response, affected organs, the specific Ehrlichia species involved, and the presence of coinfection with other Ehrlichiae or tickborne disease. The incidence of ehrlichiosis has increased over the last years in both animals and men. The etiological diagnosis is important for adequate epidemiological monitoring. Most tests currently being used have limitations. The recent use of molecular biology diagnostic techniques allow the characterization of the specie or species that are infecting a given patient.A erliquiose é uma doença causada por bactérias gram negativas estritamente intracelulares, pertencentes a Ordem Rickettsiales, Família Anaplasmataceae, Gêneros Ehrlichia e Anaplasma. As diferentes erlíquias podem parasitar leucócitos, eritrócitos e plaquetas levando a alterações em vários órgãos. Os sinais clínicos variam com a severidade da infecção, a resposta imunológica do hospedeiro, os órgãos atingidos, a espécie de erlíquia envolvida e a presenca de co-infecção com outras erlíquias ou outros microrganismos transmitidos pelo mesmo vetor. A incidência de erliquiose vem aumentando nos últimos anos tanto nos animais como no homem. O diagnóstico etiológico é importante para o monitoramento epidemiológico, porém a maioria dos testes usados rotineiramente apresenta limitações. A recente introdução de técnicas diagnósticas que empregam biologia molecular permitem caracterizar quais espécies de erlíquia estão infectando o paciente.

Ten E. coli strains isolated from celulitis lesion s of Japanese quails were to evaluated antimicrobia l resistance to twent y six drugs , to pathogenicity of strains in SPF chickens embryonated eggs and virulence factors. The antimicrobials of higher efficiency wer e ampicillin, florfenicol and the lesser efficiency were erythromycin, oxacilin, lincomicin, novobiocin, penicillin, sulfonamidas, trimethoprim+sulfomethoxazo/e and tetracyicline. The majority of E. coli strains were serum resistance, the others virulence factors, hemolisin and congo red affinity, were lesser frequent on the studied strains. Pathogenicity of E. coli strains, evaluated to DL50 in embryonated eggs, had varied of 8x10 2 the 3,2x10.Dez cepas de E. coli isoladas de lesões de celulite em codornas foram avaliadas quanto a resistência antimicrobiana frente a vinte e seis drogas, a patogenicidade das amostras em ovos embrionários de galinha SPF e quanto aos fatores de virulência: hemolisinas, resistência sérica e afinidade ao vermelho congo Os antimicrobianos de maior eficiência foram ampicilinar florfenicol e os menos eficientes foram eritromicina, oxacilina. lincomicina, novobiocina. penicsilna, sulfonamida, sulfomethoxazole+ trimetoprim e tetraciclina. A maioria das amostras de E. coli foram resistentes ao soro, os outros fatores do virulência, hemolisina e afinidade ao vermelho-congo, foram menos freqüentes nas amostras estudadas. A patogenicidade das amostras de E. coli estimada através da DL50 em ovos embrionados, variaram de 8x10* a 3.2x10a.

This work evaluates the lesions caused by ectoparasites like Boophilus microplus, Dermatobia hominis, Haematobia irritans in cattle leather, in tanning industry. Such material came from the Northwest of Parana State and Southwest of Mato Grosso State. The evaluation of leather occured in August, 1999 and February, 2000. In August, 1999, 15,530 samples from Northwest of Parana State and 11, 289 samples from the Southwest of Mato Grosso State were analysed. The result obtained showed that the main damage was caused by ticks bites, representing 63% in Parana and 67% in Mato Grosso of cattle leather infected by tick. It was followed by D. hominis (Tropical warble) infection, where 34% of the cattle in Parana and 19% in Mato Grosso showed larvae infection and 3% in Parana and 14%> of the remaining cattle presented lesions by horn fly. In February, 2000 9,690 samples from Northwest of Parana State and 16,271 samples from the Southwest of Mato Grosso State were analyzed. Again the highest incidence of damage was caused by the ticks where 60% of cattle leather in Paranaand 65% in Mato Grosso were infected. It was also followed by tropical warble infection, where 35,5% of cattle in Parana and 20% in Mato Grosso presented larvae infection and 4,5% in Parana and 15% of the remaining cattle showed lesions by horn fly. Although tick caused greater leather lesions, the larvae ofD. hominis was responsible for the low quality of the material because such damage is irreversible. The Parana obtained the lowest score for leather due to the high incidence of larvae od D. hominis.Este trabalho avalia as lesões causadas pelos ectoparasitas Boophilus microplus, Dermatobia hominis, Haematobia irritans no couro de bovinos procedentes da região Noroeste do Estado do Paraná e Sudoeste do Estado do Mato Grosso, nos meses de agosto de 1999 e fevereiro de 2000. No mês de agosto de 1999, foram analisados 15530 couros bovinos provenientes da região Noroeste do Estado do Paraná e 11289 couros bovinos da região Sudoeste do Estado do Mato Grosso. A maior incidência de defeitos foi causada pela ação do carrapato - 63% no PR e 67% no MT, seguido pela ação do berne - 34% no PR e 19% no MT, restando 3% no PR e 14% no MT causados pela mosca-dos-chifres. No mês de fevereiro de 2000, foram analisados 9690 couros bovinos provenientes da região Noroeste do Estado do Paraná e 16271 couros bovinos da região Sudoeste do Estado do Mato Grosso. A maior incidência de defeitos foi causada também pela ação do carrapato - 60% no PR e 65% no MT, seguido pela ação do berne - 35,5% no PR e 20% no MT, restando 4,5% no PR e 15% no MT causados pela mosca-dos-chifres. Embora o carrapato tenha tido maior incidência de lesões no couro, o berne foi o maior causador da baixa qualidade, pois suas lesões são irreversíveis. O Estado do Paraná obteve pior classificação em seus couros devido a maior quantidade de lesões provocada pelo berne.

Cento e trinta novilhas importadas do Uruguai foram imunizadas no Brasil com uma vacina trivalente congelada, contendo Anaplasma centrale e cepas atenuadas de Babesia bigemina e B. bovis. Trinta e cinco dias após a vacinação, os animais foram desafiados com cepas virulentas de B. bigemina, B. bovis e A. marginale. No dia do desafio c 30 dias após, foram colhidas amostras de sangue do 26 animais para a avaliação de hematócrito e teste sorológico. Os animais resistiram bem ao desafio com as cepas virulentas, pela ausência de sinais clínicos da Tristeza Parasitária Bovina (TPB) durante o período de observação. O teste de ELISA indireto mostrou que os animais vacinados apresentavam anticorpos contra os três agentes da TPB (B. bigemina - Densidade Óptica (DO) média = 0,356, B. bovis = 0.320 e A. marginale = 0.295), aumentando significativamente após o desafio (B. bigemina - DO média = 0.664, B. bovis = 0.637 e A. marginale = 0.549).

Um bezerro da raça Jersey, macho, de 21 dias de vida, com opistótono, apatia e paresia de membros posteriores, desde o nascimento, foi encaminhado ao Hospital Veterinário da Universidade Estadual de Londrina, Paraná-Brasil, para avaliação. Após a eutanásia o bezerro foi submetido à necropsia e fragmentos de córtex cerebral, da região cervical da medula espinhal, coração, fígado e pulmão foram colhidos para exames histológicos e virológicos. Nenhum agente viral foi isolado nos tecidos do bezerro. No exame histológico foram observados cistos de protozoário ovóides e circulares de diversos tamanhos no cérebro e medula espinhal. Estes cistos mostraram reação positiva na imunoistoquímica (IHQ) para o N. caninum e também para o T.gondii. Amostras de soros colhidas da mãe do bezerro também apresentaram sorologia positiva para N. caninum, T. gondii, BHV-1 e VBVD. Os resultados da sorologia materna, da IHQ, os achados histopatológicos e sinais clínicos que o bezerro apresentava sugerem o envolvimento do Neospora caninum no caso. Este é o primeiro relato de neosporose congênita em bezerro no estado do Paraná-Brasil.