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El ñame Criollo (Dioscorea alata) y el ñame Espino (Dioscorea rotundata) se constituyen como las dos especies mayormente cultivadas en el departamento de Sucre, Colombia. Por esta razón en la Universidad de Sucre se han implementado técnicas para lograr su conservación mediante la propagación in vitro, sin embargo esta metodología conserva las accesiones por un periodo no mayor a los 4 meses, provocando continuos subcultivos, aumento de costos y mano de obra. Por ello la presente investigación tuvo como objetivo establecer medios de cultivo óptimos para la conservación in vitro por crecimiento mínimo de diferentes accesiones (D. alata y D. rotundata) pertenecientes al banco de germoplasma de la Universidad de Sucre, durante un periodo de 8 meses. Esto mediante la modificación del medio de cultivo base MS; con los siguientes osmolitos: sacarosa, manitol y sorbitol. Se avaluaron 8 tratamientos (T) en los siguientes porcentajes T1 (control)(3:0:0), T2 (0:1,5:0), T3 (0:0:2), T4 (0:1,5:2), T5 (0:0:1) y T6 (0:0:3), T7 (0:1,5:1) y T8 (0:1,5:3). Cada 30 días se evaluó: supervivencia (%), hojas expandidas (%), longitud del tallo y raíz, número de nudos y raíces, oxidación (%), senescencia foliar (%) y callo (%). Los resultados mostraron que las especies D. alata y D. rotundata, se conservan de forma óptima, en la combinación T4 (0:1,5:2), donde se evidencia un alto porcentaje de supervivencia, un mínimo porcentaje de senescencia foliar y un desarrollo restringido en el resto de variables. Garantizando así la disponibilidad y el desarrollo normal de las accesiones en un periodo superior a 4 meses.

Título en ingles: Differential molecular diagnosis Colletotrichum gloeosporioides and Fusarium oxysporum in yam (Dioscorea sp.).Título corto: Diagnóstico molecular en ñameResumen: Las enfermedades de origen fúngico son responsables de las mayores pérdidas reportadas en los cultivos de ñame colombianos, entre ellas la antracnosis causada por Colletotrichum spp. se destaca por ser la más devastadora. En los últimos años, hongos con baja prevalencia pero con alto poder de diseminación como Fusarium spp., han ampliado su presencia en los cultivos de ñame favoreciendo el desarrollo de enfermedades como la pudrición del tubérculo en postcosecha. A pesar de la importancia del cultivo de ñame en las regiones de la Costa Atlántica colombiana, el Pacífico y la Amazonia, este es considerado un cultivo huérfano en razón a que son pocos los esfuerzos que en investigación se realizan a nivel mundial y particularmente en Colombia. Con el propósito de aportar al diagnóstico correcto y oportuno de fitopatógenos que afectan el cultivo de ñame, se obtuvieron aislamientos fúngicos a partir de hojas con manchas necróticas. De los aislamientos obtenidos, cinco presentaron morfología propia del género Colletotrichum y tres de Fusarium. La identidad de las especies implicadas se determinó por secuenciación de los ITS del ADNr, correspondiendo a Colletotrichum gloeosporioides y Fusarium oxysporum. La evaluación de marcadores moleculares para la detección de forma diferencial y simultánea de estos patógenos, permitió seleccionar la amplificación del factor de elongación alpha (EF-α) como la mejor prueba de diagnosis. Las pruebas de patogenicidad confirmaron la capacidad de los aislados de C. gloeosporioides para causar sintomatología de antracnosis en foliolos y de los aislados de F. oxysporum para desencadenar pudrición en tubérculo, la presencia de este último en hojas se podría asociar a su fácil y rápida dispersión conidial, a su acentuada incidencia en suelo que es su hábitat natural y a su prolongada sobrevivencia.Palabras clave: ñame; Colletotrichum gloeosporioides; Fusarium oxysporum; factor de elongación alpha (EF-α); antracnosis; pudrición.Abstract: Fungal diseases are responsible for the greatest losses of yam crops in Colombia; among which,the anthracnose stands out as the most devastating. Recently, low prevalence fungi with high spread power such as F. oxysporum have increased their presence in yam crops causing diseases like tubers decomposition post-harvest. Despite the importance of yam crop on the Colombian Caribbean Coast, the Pacific and the Amazon; this is considered an orphan crop due to the little effort and investigation in the world and particularly in Colombia. In order to contribute to the proper and timely diagnose of fitopathogens that affects yam crop, in this study fungal isolates from leaves with necrotic spots were obtained, of which five showed morphological characteristics of the Colletotrichum genus and three of the Fusarium genus. The identity of species involved was determined by ITS of ADNr secuencing, corresponding to Colletotrichum gloeosporioides and Fusarium oxysporum. The evaluation of molecular markers for differential and simultaneous detection of these pathogens, allowed to choose the elongation factor alpha (EF-α) as the best diagnostic test. Pathogenicity test confirmed the capacity of C. gloeosporioides to cause anthracnose symptomatology in leaves and F. oxysporum isolates to trigger rot in tuber, whose presence in leaves could be associated with its easy and fast conidial spread, to its high presence in soil which is its natural habitat, and its extended survival.Key words: yam; Colletotrichum gloeosporioides; Fusarium oxysporum; elongation factor alpha (EF-α); anthracnose; rot

Título en ingles: Optimization of a culture medium for micropropagated plants of Dioscorea alata L. Resumen La propagación de material de ñame de buena calidad es esencial para incrementar la producción sostenible de este cultivo. El presente trabajo tuvo como propósito optimizar el medio de cultivo de micropropagación de Dioscorea alata L. clon Caraqueño a través de los siguientes objetivos: determinar el efecto de diferentes antioxidantes (carbón activado 0,5 g/L-1 ; carbón activado 1,0 g/L-1; cisteína 10 mg/L-1, 20 mg/L-1 y 30 mg/L-1) y concentraciones de sales de Murashige y Skoog (MS) (25, 50, 75 y 100 %) en el medio de cultivo durante el establecimiento y la multiplicación de las plantas in vitro, y evaluar la utilización de distintas combinaciones de ácido naftalenacético (0,01; 0,1 mg/L-1) y bencilaminopurina (0,01; 0,1 mg/L-1) en el mejor medio de cultivo de multiplicación obtenido en el experimento anterior. A los 35 días se seleccionaron 40 plantas in vitro, a las cuales se les determinaron las siguientes variables: longitud en cm del vástago; número de nudos de novo por explantes; número de hojas por explante y porcentaje de fenolización. Se evaluó además, en el experimento con los reguladores de crecimiento, el número de raíces y longitud de la raíz de mayor tamaño. Se aplicó un diseño experimental completamente aleatorio con análisis de varianza bifactorial y clasificación simple. Se realizó la prueba de comparación de medias de Tukey para un nivel de significación del 5%. Los resultados obtenidos mostraron que las sales MS al 75% de su concentración, el carbón activado (0,5 g/L-1) o la cisteína (10 mg/L-1), en combinación con los reguladores de crecimiento ANA/BAP (0,01/0,01 mg/L-1) en el medio de cultivo MS, incrementaron los indicadores de desarrollo de las plantas in vitro tales como número de nudos de novo (3,5), longitud del vástago (4,1 cm), número de hojas (3,8), número de raíces (5,7) y longitud de las raíces (6 cm). Palabras clave: ácido naftalenacético; bencilaminopurina; carbón activado; cisteína; ñame. Abstract The material propagation of good quality yam is essential to increase the sustainable production of this cultivation. In the present work the optimization of culture medium of Dioscorea alata L. clone Caraqueño micropropagation was carried out through the following objectives: to determine the effect of different anti-oxydants (activated charcoal 0,5 g.L-1; activated charcoal 1,0 g.L-1; cysteine 10 mg.L-1, 20 mg.L-1 and 30 mg.L-1) and Murashige and Skoog salts concentrations (25, 50, 75 and 100%) in the culture medium during the in vitro plants establishment and the multiplication, and to evaluate the use of different combinations of naftalenacetic acid (0,01; 0,1 mg.L-1) and benzylaminopurine (0,01; 0,1 mg.L-1) in the best multiplication medium obtained in the above experiment. At 35 days, 40 in vitro plants were selected. The following variables were determined in these plants: shoot length, cm; leaf and bud explant number; and oxydation phenolic percentage. In the experiment of plant growth regulators was also evaluated, the roots number and greater size root length. A totally randomized experimental design with one and two factor variance analysis and the Tukey test for means comparison at 5% significance level were applied. The obtained results showed that the salts MS at 75% concentration, the activated charcoal (0,5 g. L-1) or the cysteine (10 mg. L-1), in combination with the growth regulators ANA/BAP (0,01/0,01 mg.L-1) in the MS culture medium, increase the development of the in vitro plants, number of novo buds (3,5), shoot length (4,1 cm), number of leaves (3,8), number of roots (5,7) and greater size root length (6 cm). Key words: activated charcoal; benzylaminopurine; naftalenacetic acid; cysteine; yam.

El cultivo in vitro, como técnica, consiste en cultivar asépticamente una porción aislada de la planta bajo condiciones de ambiente controlado, para que las células expresen su potencial intrínseco e inducido. El presente trabajo tuvo como objetivo determinar el efecto de diferentes concentraciones y tiempos de inmersión en hipoclorito de sodio en el establecimiento in vitro de explantes primarios de ñame (Dioscorea alata L.) clon caraqueño. Las variantes de desinfección consistieron en la utilización de diferentes concentraciones de hipoclorito de sodio (1,5; 2 y 2,5%) durante distintos tiempos de inmersión (10; 20 y 30 min). A los 7 días se evaluó el porcentaje de contaminación de bacterias y hongos respectivamente, y a los 40 días el número de nudos de novo, la longitud del vástago, el número de hojas, y el porcentaje de explantes establecidos y necrosados. Se aplicó un diseño experimental completamente aleatorizado con análisis de varianza bifactorial y clasificación simple. Se realizó la prueba de comparación de medias de Tukey para un nivel de significación del 5%. Los resultados obtenidos arrojaron que el tratamiento de desinfección de segmentos uninodales de ñame con hipoclorito de sodio al 1,5% durante un tiempo de inmersión 30 min es el de mayor efectividad para el establecimiento in vitro de explantes primarios del ñame (D. alata L.) clon caraqueño con altos porcentajes de supervivencia en condiciones ex vitro. Palabras clave: ñame; cultivo de tejidos vegetales; hipoclorito de sodio; establecimiento in vitro. Abstract The in vitro culture technique consists of aseptically culturing an isolated plant portion in controlled environmental conditions for the cells to express their intrinsic and induced potential. This work was aimed at determining the effect of different sodium hypochlorite concentrations and immersion times on in vitro establishment of yam (Dioscorea alata L.) “caraqueño” clone primary explants. Disinfection varied by using different sodium hypochlorite concentrations (1.5%, 2% and 2.5%) during different immersion times (10, 20 and 30 min). Bacterial and fungal contamination percentages were evaluated after 7 days and de novo bud number, shoot length, leaf number, explant establishment and necrosis percentages were determined after 40 days. A totally randomised experimental design was applied, having one- and two-factor variance analysis; the Tukey test was used for comparing means at 5% significance level. The results showed that the most appropriate disinfection treatment for uninodal yam (D. alata L.) segments used 1.5% sodium hypochlorite during 30 min immersion; this was most effective for the in vitro establishment of yam (D. alata L.) clone “caraqueño” primary explants, having high survival percentage in ex vitro conditions. Key words: yam; plant tissue culture; sodium hypochlorite; in vitro establishment

El presente estudio se realizó en el Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales de la Universidad de Córdoba en el año 2000 con el objetivo de evaluar el efecto del ácido naftalenacético (ANA) en el medio de cultivo sobre el enraizamiento in vitro de tres cultivares de ñame (Dioscorea sp.). Se estudió el efecto de cuatro concentraciones del regulador de crecimiento (0, 0.3, 0.6 y 0.9 mg/1) sobre tres cultivares de ñame (Diamantes-22, 003 y 005). Se empleó un experimento trifactorial con diseño aleatorio y 20 repeticiones; cada unidad experimental estuvo conformada por un recipiente de vidrio que contenía el medio de cultivo y el explante (segmento nodal). Las variables consideradas fueron número y grosor de raíces, oxidación del medio de cultivo y producción de callo. Los resultados indicaron que tanto la hormona como el genotipo tuvieron efecto sobre todas las variables consi­deradas en el estudio y que la interacción fue importante (PThe Universidad de Córdoba s Vegetal Tissue Culture Laboratory evaluated the effect of naphthalenacetic acid (NAA) on in vitro rooting of three yam cultivars (Dioscorea sp.) in 2000. The effect of four hormone levels (0, 0.3, 0.6 and 0.9 mg/1) was studied on three yam cultivars (Diamantes-22,003 and 005). A random experimental design was used employing 4x3 factorial arrangement and 20 repetitions; each experimental unit consisted of a glass receptacle containing the culture medium and the explant (one segment nodal). The variables considered were the number of roots and their thickness, culture medium oxidation and callus production. Findings showed that both the hormone and genotype had an effect on all those variables considered in the study and interaction was significant (P

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El presente estudio se realizó en el Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales de la Universidad de Córdoba en el año 2000 con el objetivo de evaluar el efecto del ácido naftalenacético (ANA) en el medio de cultivo sobre el enraizamiento in vitro de tres cultivares de ñame (Dioscorea sp.). Se estudió el efecto de cuatro concentraciones del regulador de crecimiento (0, 0.3, 0.6 y 0.9 mg/1) sobre tres cultivares de ñame (Diamantes-22, 003 y 005). Se empleó un experimento trifactorial con diseño aleatorio y 20 repeticiones; cada unidad experimental estuvo conformada por un recipiente de vidrio que contenía el medio de cultivo y el explante (segmento nodal). Las variables consideradas fueron número y grosor de raíces, oxidación del medio de cultivo y producción de callo. Los resultados indicaron que tanto la hormona como el genotipo tuvieron efecto sobre todas las variables consi­deradas en el estudio y que la interacción fue importante (P

Cepas de Colletotrichum gloeosporioides y Colletotrichum dematium fueron aisladas de plantas de ñame en el departa­mento de Sucre. Se realizó una descripción macro y microscópica encontrándose que el color predominante de la colonia fue lila. La esporulación fue mayor a 58.000 conidias /ml para la mayoría de las colonias. La rata de creci­miento tuvo un rango entre 4 -7 mm / día. Las conidias de los aislados de Colletotrichum gloeosporioides son cilíndri­cas con un extremo redondeado y el otro agudo y un tamaño que varía entre 7-8 micras y 3-4 micras de ancho. Así mismo Colletotrichum dematium se caracterizó por presentar colonias radiales de color gris, conidias falcadas y fusi­forme con ambos extremos agudos; y un tamaño que varia entre 16-18 micras de largo y 3-4 micras de ancho. En C. gloeosporioides se observó que las colonias mostraron diferencias morfológicas macroscópicas y características mi­croscópicas similares. Igualmente, se evaluó la compatibilidad vegetativa, enfrentando aislamientos de diferente origen geográficos, los cuales mostraron compatibilidad en un 90% de los aislados enfrentados. Adicionalmente, se realizaron pruebas de patogenicidad para evaluar la virulencia de los aislados sobre hospederos tolerantes y suscep­tibles. Los aislados mostraron un alto grado de variabilidad en cuanto a su virulencia. La colección de aislados de Colletotrichum podría ser utilizada para trabajos de caracterización molecular y evaluar la tolerancia del germoplasma de ñame a este patógeno. Palabras claves: Colletotrichum; ñame; antracnosis; fitopatología.