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Le lymphome cutane primitif B diffus a grandes cellules type jambe (LBC-TJ), le plus agressif des lymphomes B cutanes, presente des caracteristiques proches des lymphomes B diffus a grandes cellules (LBDGC) de type « Activated B- Cell-like » (ABC) avec une activation constitutive de la voie NF-κB (nuclear factor-kappa B). Initialement, notre equipe a demontre la haute prevalence de la mutation MYD88L265P dans les LBC-TJ, puis associee a l’equipe du Pr Jardin (INSERM UMR1245, Rouen), nous avons confirme par exome sequencing la tres haute prevalence des mutations MYD88, PIM1 et CD79B [1] . La prise en charge de ces patients demeure un enjeu therapeutique malgre l’amelioration de la survie a 5 ans de 38 % a 74 % par l’association du Rituximab (anti-CD20) avec une polychimiotherapie adaptee a l’âge mais environ 50 % de non reponse sont observees sans facteur predictif connu. Nous souhaitons identifier un profil moleculaire predictif de reponse therapeutique permettant une meilleure prise en charge de ces patients. Nous avons analyse 14 patients repondeurs et 18 non repondeurs a la R-polychimiotherapie par NGS via un panel de 36 genes importants dans la lymphomagenese. Pour 14 patients, nous avons egalement analyse la biopsie a la progression/rechute afin d’identifier les alterations genetiques selectionnees lors de l’echappement therapeutique. Les patients presentant une mutation de la voie du BCR (CD79A/B ou CARD11) ont une survie sans progression et une survie specifique diminuee (p = 0,002 et p = 0,03 respectivement) [2] . L’analyse des echantillons au diagnostic et a la rechute montre que les mutations des genes MYD88 et CD79B sont les plus conservees et que la frequence allelique de ces mutations est superieure a la progression/rechute. La caracterisation d’une mutation dans la voie du BCR chez les patients atteints d’un LBTJ laisse presager une resistance a la polychimiotherapie conventionnelle. Ces patients pourraient beneficier d’un traitement adjuvant ou d’une seconde ligne d’emblee afin d’ameliorer leur prise en charge.

De recentes analyses de sequencage massif [1] , [2] ont permis de mettre en evidence la diversite et la complexite du profil mutationnel du syndrome de Sezary (SS). Ces differentes etudes ont cependant definit l’alteration de TP53 comme anomalie la plus frequente. Dans ce contexte, nous avons analyse le statut TP53 dans une cohorte de 35 patients SS ainsi qu’un groupe temoin compose de 8 patients presentant une dermatose inflammatoire chronique. Le statut TP53 a ete analyse a differents stades cliniques, notamment pour 9 patients appeles « SS secondaire » car ayant developpe un syndrome de Sezary apres un mycosis fongoides (MF). Une mutation du gene TP53 de type mutation ponctuelle ou petite insertion/deletion a ete caracterisee chez 10 (29 %) patients SS d’emblee ou secondaire. Aucune mutation n’est commune a plusieurs patients. A noter que ces mutations sont presentes a la fois dans les cellules mononuclees du sang et dans les echantillons de peau. Des analyses cytogenetiques realisees en parallele sur les cellules mononuclees du sang de 32 patients ont rapporte 27 (84 %) cas de deletion. Au total, une mutation et/ou une deletion de TP53 a ete caracterisee sur 29 (83 %) des 35 cas testes. Aucune difference de pronostique n’a ete observee selon le statut TP53 mais les patients presentant un SS secondaire ont un pronostic plus sombre que les patients presentant un SS d’emblee. Il est interessant de souligner que la presence de l’alteration de TP53 au diagnostic de SS (ou de MF s’il s’agit d’un SS secondaire) supporte l’hypothese que la mutation de TP53 jouerait un role pivot dans l’oncogenese du SS et du MF, et que l’etude du statut de TP53 et notamment l’absence d’alteration de TP53 pourrait etre utile au diagnostic differentiel des patients atteints de dermatoses inflammatoires.

L’equipe de A.L. Feldman et la notre avons mis en evidence des rearrangements du locus 6p25.3 dans environ 20 % des lymphomes T anaplasiques, notamment cutanes (LTAc). Combinant des approches de cytogenetique et biologie moleculaire, nous avons, parmi les genes candidats presents dans la region des points de cassures en 6p25.3, identifie un nouveau gene candidat, dual specificity phosphatase 22 (DUSP22), de fonction peu connue jusqu’alors. Nous avons mis en evidence, du fait d’epissages et promoteurs alternatifs, de differents transcrits codant des isoformes proteiques distinctes. Les transcrits majoritaires dans les cellules normales sont reprimes dans les tumeurs presentant des alterations du locus 6p25.3. Des transcrits normalement minoritaires sont, au contraire, occasionnellement surexprimes dans les tumeurs. Nous avons ensuite montre, en modulant leur expression dans des lignees cellulaires au moyen de vecteurs lentiviraux d’expression ou d’ARN interference, que les isoformes inactivees dans les tumeurs ont des proprietes suppressives de tumeurs, inhibant la croissance en agar semi-solide et la tumorigenicite dans les souris immuno-deficientes. A l’oppose, celles qui sont surexprimees dans certaines tumeurs exercent des activites pro-oncogeniques. Nos cas de LTAc avec extinction de DUSP22 presentant des rearrangements mono-alleliques du 6p25.3, nous avons recherche les mecanismes responsables de l’inactivation du second allele du gene. Nous avons alors mis a jour, en accord avec les predictions bioinformatiques de Genovese et al., l’existence d’un paralogue du gene DUSP22, localise en 16p11.2, present chez 90 % des individus, methyle ou delete au niveau de la region promotrice, et transcriptionnellement inactif. L’existence de ce paralogue a un impact majeur sur les analyses cytogenetiques et moleculaires de DUSP22. Nous avons ainsi developpe des strategies permettant une etude objective des alterations genetiques (translocations, deletions, mutations) et epigenetiques (methylation) de ce gene, dont l’application a l’analyse des lymphomes T cutanes sera presentee.

Dans 70 a 90 % des cellules tumorales humaines, une activite telomerase est detectee alors que dans les tissus avoisinants non tumoraux, l’activite de la telomerase est faible voire nulle. La telomerase et la longueur des telomeres ont ete proposees comme des biomarqueurs des cellules tumorales. Ces biomarqueurs ont ete etudiee dans les tumeurs solides [1] et hematologiques [2] . En revanche dans les lymphomes T cutanes primitifs (LTCP) les donnees sont rares. Dans une premiere etude [3] , nous avons evalue l’impact de la longueur des telomeres et de l’activite de la telomerase dans la lymphomagenese des LTCP. Nous avons montre que les LTCP agressifs possedaient des telomeres courts par rapport aux LTCP indolents et aux cellules saines, que dans les cellules de LTCP une activite telomerase etait presente, faisant de ces tumeurs des candidates potentielles a un traitement cible anti-telomerase. Pour mieux comprendre la fonction de la telomerase dans ces cellules, nous avons module l’expression de la telomerase, via sa sous-unite catalytique hTERT, a l’aide de constructions lentivirales dans des lignees cellulaires de LTCP. Nous avons montre que l’inhibition de la telomerase se traduisait par une diminution brutale de la proliferation cellulaire et conduisait a la mort cellulaire. En revanche, la surexpression de la telomerase est associee a une augmentation de la proliferation cellulaire, a une augmentation des capacites clonogene et tumorigene des cellules infectees aussi bien in vitro (test de soft agar) que in vivo (xenogreffe chez la souris). Ces dernieres observations laissent supposer qu’au-dela de son role de maintenance des telomeres dans les cellules de LTCP, la telomerase exerce d’autres fonctions, qualifiees de non-canoniques, car independantes de ses fonctions sur les telomeres. La connaissance de ses fonctions est indispensable avant d’envisager d’utiliser la telomerase comme cible therapeutique dans les LTCP.