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HIV treatment and prevention as well as other chronic disease care can require regular kidney function assessment based on a creatinine test. To assess the costs of creatinine testing in a public health care system, we conducted activity-based costing during a HIV pre-exposure prophylaxis (PrEP) demonstration project in the Hhohho region of Eswatini. Resource use was assessed by a laboratory technician and valued with government procurement prices, public sector salaries, and own cost estimates. Obtaining a blood sample in a clinic and performing a creatinine test in a high-throughput referral laboratory ( 660,000 blood tests, including 120,000 creatinine tests, in 2018) were estimated to have cost, on average, $1.98 in 2018. Per test, $1.95 were variable costs ($1.38 personnel, ¢39 consumables, and ¢18 other costs) and ¢2.6 were allocated semi-fixed costs (¢1.1 laboratory equipment, ¢0.85 other, ¢0.45 consumables, and ¢1.3 personnel costs). Simulating different utilization of the laboratory indicated that semi-fixed costs of the laboratory (e.g., equipment purchase or daily calibration of the chemistry analyzer) contributed less than variable costs (e.g., per-test personnel time and test reagents) to the average creatinine test cost when certain minimum test numbers can be maintained. Our findings suggest, first, lower creatinine testing costs than previously used in cost and cost-effectiveness analyses of HIV services and, second, that investment in laboratory equipment imposed a relatively small additional cost on each performed test in the high-throughput referral laboratory.El tratamiento y la prevención del VIH, así como el cuidado de otras enfermedades crónicas, pueden requerir una evaluación periódica de la función renal basada en una prueba de creatinina. Para evaluar los costes de las pruebas de creatinina en un sistema de atención sanitaria público, realizamos un cálculo de costes basado en actividades durante un proyecto de demostración de profilaxis preexposición al VIH (PrEP) en la región de Hhohho de Eswatini. El uso de los recursos fue evaluado por un técnico de laboratorio y valorado con los precios de adquisición del gobierno, los salarios del sector público y las estimaciones de costes propias. La obtención de una muestra de sangre en una clínica y la realización de una prueba de creatinina en un laboratorio de referencia de alto rendimiento ( 660.000 pruebas de sangre, incluidas 120.000 pruebas de creatinina, en 2018) se estimó que habían costado, en promedio, $1,98 en 2018. Por prueba, $1,95 eran costes variables ($1,38 de personal, ¢39 de consumibles y ¢18 de otros costes) y ¢2,6 eran costes semifijos asignados (¢1,1 de equipamiento de laboratorio, ¢0,85 de otros, ¢0,45 de consumibles y ¢1,3 de personal). La simulación de utilización diferente del laboratorio indicó que los costes semifijos del laboratorio (por ejemplo, la compra de equipos o la calibración diaria del analizador químico) contribuyeron menos que los costes variables (por ejemplo, el tiempo del personal por prueba y los reactivos de la prueba) al coste medio de la prueba de creatinina cuando se pueden mantener ciertos números mínimos de pruebas. Nuestros resultados sugieren, en primer lugar, que los costes de las pruebas de creatinina son inferiores a los utilizados anteriormente en los análisis de coste y costo-efectividad de los servicios de VIH y, en segundo lugar, que la inversión en equipos de laboratorio supuso un coste adicional relativamente pequeño en cada prueba realizada en el laboratorio de referencia de alto rendimiento.