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Inflammation is a key feature of calcific aortic valve stenosis (CAVS) with no pharmacological treatment until now. We hypothesize that interleukin-8 (IL-8) promotes the calcification of human aortic valve interstitial cells (hVICs). Primary hVICs were isolated from healthy pieces of aortic valves harvested from patients undergoing surgical valve replacement. They were cultured in a pro-calcifying condition (Pi-3.8 mM) with or without IL-8 (5 to 50 pg/ml) for up to 21 days. Calcification was analysed by alizarin red staining and calcium content was measured with the o-cresolphthalein complexone method. The expression of each of metalloproteases, osteogenic and myofibrotic markers was analysed by RT-qPCR. The expression of IL-8 receptors, CXCR-1 and CXCR-2 was evaluated by Western blot and flow cytometry, and the effects of IL-8 were tested in the presence or absence of SCH527123, an antagonist of CXCR-1 and CXCR-2. Finally, the expression of CXCR-1 and -2 and that of elastin were analysed by immunohistochemistry in the calcified and non-calcified areas of human aortic valve samples. All of these experiments were carried out from valves of at least 5 different donors where a P -value < 0.05 was considered statistically significant. Our results showed that IL-8 (15 pg/mL) caused a significant ∼2-fold increase in the calcification of hVICs in the Pi condition. In the same condition, IL-8 stimulated the expression of elastin and MMP-12 but reduced that of OPN. These effects of IL-8 were prevented by the addition of SCH527123. In addition, the expression of CXCR-1 and -2 was confirmed in histological samples of human aortic valves. This expression was more pronounced in calcified areas compared to non-calcified areas and co-localized with degraded elastin. We concluded that IL-8 promoted the calcification of hVICs. This effect was prevented by antagonizing CXCR-1 and CXCR-2, which we showed to be expressed by human VICs and aortic valves of patients with CAVS. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Introduction Les maladies cérébro-vasculaires sont une cause majeure de mortalité au cours de l’insuffisance rénale chronique (IRC). L’objectif de notre travail est d’évaluer l’effet d’un inhibiteur du récepteur minéralocorticoïde, la spironolactone, sur l’étendue de l’ischémie cérébrale dans un modèle murin d’IRC. Patients/matériels et méthodes Les souris ont été réparties en 4 groupes : SHAM placebo, SHAM spironolactone, IRC placebo, IRC spironolactone. L’IRC a été induite par une électrocoagulation du rein droit suivi 2 semaines plus tard d’une néphrectomie gauche. L’accident vasculaire cérébral (AVC) a été induit chirurgicalement par occlusion de l’artère cérébrale moyenne après 6 semaines d’IRC et de traitement par spironolactone. Nous avons évalué les capacités motrices et neurologiques des souris grâce à des tests comportementaux avant et après l’AVC. Les animaux ont été euthanasiés 24 heures après l’AVC afin de prélever les cerveaux et de mesurer le volume d’ischémie après coloration au cresyl violet. Des immunomarquages ont ensuite été réalisés afin d’évaluer l’apoptose et la perte neuronale. Résultats Le volume d’ischémie cérébrale était significativement augmenté chez les souris IRC placebo en comparaison aux souris SHAM (40,3 ± 4,5 versus 23,8 ± 3,9 mm3 ; p < 0,05). Il s’y associait une altération de l’état général et neurologique évalué à j + 1. L’apoptose et la perte neuronale au sein de la zone d’ischémie étaient majorés chez les souris urémiques. Chez les souris IRC, le traitement par spironolactone a réduit de 50 % le volume d’ischémie cérébrale en comparaison aux souris non traitées (19,3 ± 5,1 mm3 ; p < 0,05). Ces effets étaient associés à une amélioration de l’état général et neurologique des souris. La spironolactone a réduit l’apoptose et la perte neuronale dans le parenchyme cérébral ischémique. En revanche, chez les souris SHAM, la spironolactone n’a pas amélioré l’ischémie cérébrale. Conclusion L’IRC est associée à une augmentation de l’atteinte ischémique post-AVC. La spironolactone diminue l’ischémie cérébrale et ses conséquences dans ce modèle murin d’IRC en limitant l’apoptose neuronale. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Le rétrécissement aortique calcifié (RAC) touche près de 10 % des patients insuffisants rénaux chroniques (IRC) et son pronostic reste sombre en dépit des progrès interventionnels. L'accumulation d'indoxyl-sulfate (IS) a montré des effets pro-calcifiants sur la paroi vasculaire. Notre objectif est de vérifier si l'IS a un rôle dans le développement du RAC. Ce travail a été réalisé à partir : – de cellules valvulaires interstitielles humaines (hVICs) provenant de remplacements valvulaires chirurgicaux ; – de monocytes de la lignée THP1 secondairement différenciés en macrophages par le PMA. Les milieux de culture ont été supplémentés par l'IS pour obtenir des concentrations croissantes : 0,5 μg/mL (ISn), 37 μg/mL (ISmoy), 233 μg/mL (ISMax). (1) Les effets directs de l'IS sur la différenciation ostéogénique et la calcification des hVICs ont été évalués par qRT-PCR et la mesure du calcium par la méthode au crésolphtaléine, respectivement. La survie a été déterminée par MTT. (2) Le caractère inflammatoire des macrophages a été évalué par qRT-PCR. (1) L'IS favorise de façon dose dépendante la calcification des hVICs en augmentant la calcification respectivement de 35 % (p < 0,05) pour ISmoy et 260 % (p < 0,01) pour ISmax. Cet effet est associé à une augmentation des marqueurs de différenciation ostéogénique RunX2 (+ 60 %, p < 0,05) et Bmp2 (+ 50 %, p < 0,05). La survie des hVICs est diminuée de 20 % (p < 0,05) pour ISmoy et 45 % (p < 0,05) pour ISmax.(2) L'exposition des macrophages à des concentrations croissantes d'IS favorise l'expression d'IL-1ß (p < 0,01), de TNF-α (p < 0,01), IL-6 (p < 0,01), IL-8 (p < 0,01) et CCL2 (p < 0,01), connus pour leurs effets pro-calcifiants. L'IS montre des effets directs sur la différenciation ostéogénique, la survie et la calcification des hVICs. L'IS favorise la polarisation des macrophages vers un phénotype M1 pro-inflammatoire ce qui pourrait accélérer la progression du RAC chez les patients IRC. Des études sont actuellement en cours afin de vérifier cette hypothèse. [ABSTRACT FROM AUTHOR]