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The article presents a method for calculating CO2 emissions based on fuel consumption in road freight transport, through a single case study and a conceptual review of literature approach to identify the different existing calculation methods. The method selection took into account: ease of use, the number of variables needed for the calculation and the existence of information regarding emission factors. The results indicated a fleet’s CO2 emission rate of 1,643 tons/year with the use of S-10 biodiesel, indicating a reduction of 10.5% in relation to the total CO2 emission of the S-500 diesel. The goal of this article is to present a way to select a practical method for calculating CO2 emission based on fuel consumption for road freight transport companies. El presente artículo presenta un método para calcular las emisiones de CO2 basado en el consumo de combustible en el transporte de mercancías por carretera, a través de un estudio de caso único y un abordaje conceptual de revisión bibliográfica para identificar los diferentes métodos de cálculo existentes. La selección del método tuvo en cuenta: facilidad de uso, número de variables necesarias para el cálculo y existencia de información sobre los factores de emisión. Los resultados indicaron una emisión de CO2 de la flota de 1.643 toneladas/año con el uso de biodiésel S-10, una reducción del 10,5% con relación a la emisión total de CO2 del diésel S-500. O artigo apresenta um método para cálculo de emissão de CO2 baseado no consumo de combustíveis no transporte rodoviário de cargas, através de estudo de caso único e abordagem conceitual de revisão de literatura para identificar os diferentes métodos de cálculo existentes. A seleção do método levou em consideração: facilidade de uso, número de variáveis necessárias para o cálculo e existência de informações sobre fatores de emissão. Os resultados indicaram uma emissão de CO2 da frota de 1.643 toneladas/ano com o uso de biodiesel S-10, redução de 10,5% em relação ao total de emissão de CO2 do diesel S-500.