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The human mutilating disease chromoblastomycosis is caused by melanized members of the order Chaetothyriales. To assess population diversity among 123 clinical strains of agents of the disease in Brazil we applied sequencing of the rDNA internal transcribed spacer region, and partial cell division cycle and β-tubulin genes. Strains studied were limited to three clusters divided over the single family Herpotrichiellaceae known to comprise agents of the disease. A Fonsecaea cluster contained the most important agents, among which F. pedrosoi was prevalent with 80% of the total set of strains, followed by 13% for F. monophora, 3% for F. nubica, and a single isolate of F. pugnacius. Additional agents, among which two novel species, were located among members of the genus Rhinocladiella and Cyphellophora, with frequencies of 3% and 1%, respectively.

Muitos micro-organismos são estudados em virtude da melhoria nas características organolépticas e tecnológicas que são capazes de conferir a uma grande variedade de alimentos e bebidas. As leveduras não-convencionais destacam-se por sua habilidade de utilização de diferentes rotas metabólicas, o que favorece a produção de biomoléculas que podem ser interessantes do ponto de vista biotecnológico. Desta maneira, a atual pesquisa teve como objetivo avaliar a capacidade de consumo de um composto terpênico, o α-terpineol, por leveduras não-convencionais depositadas no centro de coleções CMRP. Para isso, 23 leveduras não-convencionais e produtoras de aroma frutais foram selecionadas dentre as leveduras depositadas em uma das coleções integrantes do centro de coleções CMRP. Realizou-se a identificação molecular de cada uma delas. As linhagens, então, foram testadas quanto à sua tolerância ao α-terpineol, sendo cultivadas em caldo YM, em pH 5,0, por 48 h com adição de concentrações de 2,5 μL/mL, 5,0 μL/mL, 7,5 μL/mL e 10,0 μL/mL da mistura de α-terpineol e álcool etílico. As leveduras que apresentaram tolerância a alguma dessas concentrações foram cultivadas novamente, mas em meio mineral DP líquido, para avaliação de seu consumo de α-terpineol. O tempo de cultivo total foi de 48 h, e amostras foram coletadas a cada 12 horas de cultivo, inclusive no tempo inicial.Extraíram-se as amostras coletadas com diclorometano e os extratos foram analisados por cromatografia em camada delgada, utilizando tolueno:acetato de etila (93:7) como fase móvel e p-anisaldeído ácido sulfúrico como revelador. As características das manchas foram observadas e os valores de Rf foram calculados. Com a identificação molecular, revelou-se que 12 leveduras pertenciam a espécie Clavispora lusitaniae, 8 eram Rhodotorula mucilaginosa e 3 eram Lodderomyces elongisporus. Segundo a árvore filogenética, duas dessas linhagens (C. lusitaniae e L. elongisporus) apresentam maior proximidade genética entre si em relação à levedura R. mucilaginosa. Do total de 23 leveduras, 6 delas se mostraram tolerantes à concentração de 2,5 μL/mL de α-terpineol, sendo uma destas tolerante também à concentração de 10,0 μL/mL mas somente durante 12 horas. As linhagens tolerantes foram identificadas como C. lusitaniae (n=1), L. elongisporus (n=2) e R. mucilaginosa (n=3). A levedura que aguentou a maior concentração, R. mucilaginosa, no entanto, resistiu apenas 12 h em todas as concentrações. Suspeita-se que seu mecanismo de defesa tenha sucumbido ao composto, que tenha havido degradação enzimática ou a produção de compostos tóxicos pela mesma linhagem ao consumir o α-terpineol. Durante a primeira análise de CCD, as amostras CMIB 46 (R. mucilaginosa) e CMIB 33 (L. elongisporus) apresentaram resultados potencialmente promissores, portanto, repetiu-se o processo de cultivo, coleta e análise para estas amostras. Com a segunda análise por CCD obtiveram-se resultados inconclusivos para o consumo de αterpineol pelas duas linhagens, principalmente pela baixa concentração das amostras, sugerindo-se futuramente o uso de técnicas auxiliares, como cromatografia gasosa acoplada a espectrômetro de massas para detecção destes compostos com maior sensibilidade. Many microbial species are acknowledged by their ability to provide distinct organoleptic properties to countless foods and drinks, especially alcoholic beverages. Non-conventional yeasts stand out in using different metabolic pathways to produce biomolecules that may be interesting from the biotechnological point of view. The present research aimed to analyze the potential consumption of a monoterpenic compound, α-terpineol, by non-conventional yeasts CMRP collection center. For this purpose, 23 fruity aroma-producing, non-conventional yeasts were selected from one of the collections belonging to the CMRP collection center. Thereafter, these strains were molecularly identified. Subsequently, the strains were tested for their tolerance to α-terpineol, by cultivating them in YM broth, at pH 5.0, for 48 h. Concentrations of 2.5 μL/mL, 5.0 μL/mL, 7.5 μL/mL and 10.0 μL/mL of a mixture of α-terpineol and ethyl alcohol were added in the broth. The yeasts that survived any of these concentrations were cultured again, but this time in mineral DP liquid culture medium. This technique aimed to assess their consumption of α-terpineol. The overall cultivation time was 48h, however samples were collected every 12 hours of cultivation, including the initial time of 0 hour. The samples collected were extracted with dichloromethane and the extracts were analyzed by thin layer chromatography, using toluene: ethyl acetate (93:7) as a mobile phase and p-anisaldehyde sulfuric acid as stain for further visualization of the spots. The size, color and intensity of the spots were observed and the Rf values were calculated. The yeasts species were identified as Clavispora lusitaniae, being it 12 strains, Rhodotorula mucilaginosa with 8 strains and the last 3 strains were identified as Lodderomyces elongisporus. Furthermore, according to the phylogenetic tree, two of these strains (C. lusitaniae and L. elongisporus) have greater genetic proximity to each other than to the yeast R. mucilaginosa. From the 23 yeasts, 6 of them were shown to be tolerant to the concentration of 2.5 μL/mL of α-terpineol, one of which also showed tolerance to the concentration of 10.0 μL/mL for 12 hours. The tolerant strains were identified as C. lusitaniae (n = 1), L. elongisporus (n = 2) and R. mucilaginosa (n = 3). The yeast that endured the highest concentration, R. mucilaginosa, however, resited only 12 hours in all concentrations. It is more likely that the defense mechanism of the yeast was not able to prevent further damage to its membrane as the time in contact with α-terpineol increased, it could also be that there was an enzymatic degradation to some level, or even that the death of the strain might be due to the production of toxic compounds by that same strain. The TLC results showed that the extracts from CMIB 46 (R. mucilaginosa) and CMIB 33 (L. elongisporus) could be interpreted as potentially promising results of the production of new compounds by the yeasts. Therefore, both yeasts were cultivated again, thus the analysis could be performed one more time. At last, the results for the consumption of α-terpineol by these two strains were rather inconclusive, mainly due to the low concentration of the samples. For future analysis, it is proposed the use of auxiliary techniques, such as gas chromatography coupled to mass spectrometer for greater sensitivity in the detection of these compounds.

Universidade Tecnológica Federal do Paraná (UTFPR) As enzimas são catalisadores naturais de alto interesse biotecnológico. Esses biocatalisadores podem ser extraídos de tecidos animais, vegetais e de microorganismos, sendo as de origem microbianas as mais utilizadas. Existe um aumento mundial no consumo de enzimas industriais e os fungos filamentosos estão entre as principais fontes microbianas produtores destas enzimas. Neste trabalho foi avaliado o potencial enzimático de fungos isolados do solo da região de Ponta Grossa - PR, utilizando farelo de trigo como substrato. Para isso, realizou-se 3 etapas: seleção dos fungos, fermentações em frascos agitados e fermentação em biorreator. A seleção dos isolados foi realizado inoculando os fungos em placas de Petri contendo meio ágar suplementado com carboximetilcelulose (CMC) incubadas por 4 dias à 32ºC. Após o período de incubação, as placas foram reveladas utilizando o corante Vermelho do Congo 0,1% (p/v), para a verificação do halo de degradação enzimática. Em seguida foram determinados os índices enzimáticos (I.E). Com essa etapa foi possível selecionar 3 fungos com os melhores índices enzimáticos para a etapa de fermentação submersa sob agitação. A fermentação submersa foi realizada a 32 °C, pH 5,4 e agitação de 150 rpm. Os fungos foram avaliados quanto a produção de celulases. O isolado CMIB-174 apresentou uma maior atividade enzimática tanto para CMCase (0,032 UI/mL) quanto a FPase (0,060 UI/mL). Portanto, o isolado CMIB-174 foi escolhida para o teste em biorreator. Pode-se observar que o ensaio em biorreator favoreceu as atividades de CMCase e FPase com um aumento significativo de 433% e 146%, respectivamente. Porém, todas as linhagens utilizadas no presente trabalho, apresentaram baixas atividades enzimáticas quando comparadas a outros resultados obtidos na literatura. Enzymes are natural catalysts of high biotechnological interest. These biocatalysts can be extracted from animal, vegetable and microorganism tissues, with microbial origin being the most used. There is a worldwide increase in the consumption of industrial enzymes and filamentous fungi are among the main microbial sources producing these enzymes. In this work, the enzymatic potential of fungi isolated from the soil of the region of Ponta Grossa - PR was evaluated, using wheat bran as a substrate. For this, 3 stages were carried out: fungi screening, fermentation in agitated flasks and fermentation in a bioreactor. The screening was carried out by inoculating the fungi in Petri dishes containing agar medium and supplemented with carboxymethylcellulose (CMC) incubated for 4 days at 32ºC. After the incubation period, the petri dishes were developed using the Congo Red 0.1% (w/v) dye, to verify the enzyme halo. Then the enzyme indexes (I.E) were determined. With this step, it was possible to select 3 fungi with the best enzyme indexes for the submerged fermentation step in agitated flasks. Submerged fermentation was carried out at 32 °C, pH 5.4 and stirring at 150 rpm. Fungi were evaluated for cellulose production. The CMIB-174 strain showed a higher enzymatic activity for both CMCase (0.032 IU/mL) and FPase (0.060 IU/mL). Therefore, the CMIB-174 strain was chosen for the bioreactor test. It can be observed that the bioreactor assay favored the activities of CMCase and FPase with a significant increase of 433% and 146%, respectively. However, all strains used in the present study showed low enzymatic activities when compared to other results obtained in the literature.

O objetivo desta pesquisa foi a instalação, padronização e gestão de uma coleção de culturas microbiológicas na UTFPR/Ponta Grossa com envio dos dados das linhagens a Rede CMRP/Taxonline. O desenvolvimento do trabalho foi efetuado em 4 etapas, onde a princípio foi realizada uma pesquisa para estimar a quantidade de linhagens na UTFPR/PG, posteriormente as linhagens disponíveis foram depositadas e o sistema de gestão foi desenvolvido através de Termos de Depósito e de Retirada, Procedimentos Operacionais Padronizados (POP’s) e de uma planilha de armazenamento de dados. O último passo foi o envio dos dados para a disposição na Rede CMRP/Taxonline. A partir do levantamento realizado na UTFPR/PG estimou-se que 37,5% dos professores consultados possuíam linhagens para depósito imediato e que 88,9% dos professores que já utilizaram microorganismos em seus trabalhos, não encontraram linhagens para acesso dentro da instituição. Após a estruturação física do laboratório as linhagens foram coletadas e encaminhadas para o local e suas características identificadas e catalogadas em planilha eletrônica, ao final do trabalho foram depositados 149 micro-organismos, entre eles: 31 fungos, 55 leveduras e 63 bactérias. A coleção foi denominada internamente como: Coleção Microbiológica de Interesse Biotecnológico da UTFPR/Ponta Grossa com a sigla: CMIB-UTFPR/PG, sendo parte integrante da Rede Paranaense CMRP - Coleções Microbiológicas da Rede Paranaense. Para gestão da coleção foram desenvolvidos Termos de Depósito e de Retirada de Material Biológico e 7 POP’s, para descrição das atividades da coleção. O último passo foi o envio dos dados da planilha com a caracterização dos micro-organismos aos gestores da Rede CMRP/Taxonline oficializando a integração da CMIB na rede, e nos foi concedido os códigos das Coleções Microbiológicas da Rede Paranaense (CMRP) correspondente ao número oficial das linhagens microbiológicas na rede. The objective of this research was the installation, standardization and management of a collection of microbiological cultures in UTFPR / Ponta Grossa with transmission of data from the lines to the CMRP / Taxonline Network. The development of the work was carried out in 4 stages, in which a research was initially carried out to estimate the number of lineages in the UTFPR / PG, later the available lineages were deposited and the management system was developed through Deposit and Withdrawal Terms, Standard Operating Procedures (POPs) and a data storage worksheet. The last step was to send the data to the layout in the CMRP / Taxonline Network. From the UTFPR / PG survey, it was estimated that 37.5% of the teachers consulted had strains for immediate deposit and that 88.9% of the teachers who had already used microorganisms in their work did not find lineages for access within the institution. At the end of the study, 149 microorganisms were deposited, among them: 31 fungi, 55 yeasts and 63 bacteria. After the physical structure of the laboratory, the lines were collected and sent to the site and their characteristics were identified and cataloged in a spreadsheet. The collection was internally denominated as: Microbiological Collection of Biotechnological Interest of UTFPR / Ponta Grossa with the acronym: CMIB-UTFPR / PG, being an integral part of the Paranaense Network CMRP - Microbiological Collections of the Paranaense Network. For the management of the collection were developed Terms of Deposit and Withdrawal of Biological Material and 7 POPs, to describe the activities of the collection. The last step was the sending of data from the spreadsheet with the characterization of the microorganisms to the managers of the CMRP / Taxonline Network, officializing the integration of the CMIB in the network, and we were granted the codes of the Microbiological Collections of the Paranaense Network (CMRP) corresponding to the number of the microbiological lines in the network.

Orientadora : Drª Débora do Rocio Klisiowicz Coorientador : Drª. Vânia Aparecida Vicente Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 30/11/2017 Inclui referências Resumo: A pediculose, doença causada pelo artrópode Pediculus humanus capitis é considerada um problema de saúde pública, pois afeta milhões de pessoas em todo o mundo, no entanto, crianças em idade escolar são as mais acometidas. É de conhecimento popular que alguns indivíduos são mais suscetíveis à parasitose que outros, porém, fatores inerentes ao hospedeiro, que podem influenciar na suscetibilidade à essa doença não estão totalmente esclarecidos. Assim, o objetivo do presente estudo foi isolar e identificar a microbiota do couro cabeludo e analisar se determinadas caracteríscas da morfologia do cabelo (tipo, cor, comprimento, escamas e diâmetro) podem interferir na predisposição à doença. Para a análise da microbiota do couro cabeludo, 10 crianças com pediculose (grupo A) e 10 crianças sem pediculose (grupo B) foram analisadas. As amostras da microbiota do couro cabeludo foram coletadas através de swabs que foram friccionados na cabeça e acondicionados em meios de transporte Stuart. O isolamento da microbiota fúngica foi feito em Ágar Sabouraud (SBA) com tetraciclina e o isolamento bacteriano foi feito em ágar sangue. A identificação molecular foi realizada através de sequenciamento da região 16S e ITS do DNA ribossomal bacteriano e fúngico, respectivamente. Um total de 186 isolados foram obtidos sendo 35 bactérias e 40 fungos (grupo A) e 47 bactérias e 64 fungos (grupo B). Os resultados sugerem que a microbiota isolada pode estar envolvida na suscetibilidade à pediculose. Em relação à microbiota bacteriana, no grupo A, Staphylococcus captis foi significativamente diferente (P 0,05). No entanto, quando comparado os grupos etários, meninos com idades de 2-3 anos estavam mais infestados que as meninas. Palavras-chave: Piolho; cabelo; bactérias; fungos e prevalência. Abstract:Pediculosis, a disease caused by the arthropod Pediculus humanus capitis is considered a public health problem as it affects millions of people around the world. However, school children are the most affected. It is popular knowledge that some individuals are more susceptible to parasitosis than others, but factors inherent to the host that may influence the susceptibility to this disease are not well understood. In this context, the objective of the present study was to isolate and identify the scalp microbiota and to analyze if certain characteristics of hair morphology (scales, type, color, length and diameter) may interfere with predisposition to the disease. For analysis of the scalp microbiota, 10 children with pediculosis (group A) with 10 children without pediculosis (group B) were analyzed. Samples of the scalp microbiota were collected through swabs that were rubbed on the children's heads and packed into Stuart transport medium. Isolation of the fungal microbiota was done in Sabouraud Agar (SBA) with tetracycline and bacterial isolation was done on blood agar. Sequencing was done for the 16S and 18S region of the bacterial and fungal ribosomal DNA, respectively. A total of 186 isolates were obtained from group A, from these 35 bacteria and 40 fungi and for group B, 47 bacteria and 64 fungi were isolated. The results suggest that the isolated microbiota may be involved in pediculosis susceptibility. In relation to the bacterial microbiota, in group A, Staphylococcus capitis was significantly different (p 0.05). However, when compared to age groups, boys aged 2-3 years were more infested than girls. Keywords: Head lice; hair; bacterium; fungi and prevalence

Orientadora : Profª Drª Vânia Aparecida Vicente Coorientadora : Profª Drª Renata Rodrigues Gomes Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 04/02/2016 Inclui referências : f. 76-92 Resumo: As leveduras negras pertencentes à família Herpotrichiellaceae são microrganismos extremamente relevantes do ponto de vista ecológico e clínico. Esses organismos comuns sapróbios apresentam alta capacidade de adaptação e parecem apresentar um ciclo de vida composto e potencial de patogenicidade. No gênero Fonsecaea foram relatadas diferentes espécies associadas a hospedeiros humanos, animais e de fontes ambientais. Fonsecaea monophora é relatada como agente de cromoblastomicose com formação de corpos muriformes e agente de infecção cerebral. Buscando compreender a biologia e potencial de patogenicidade desta espécie, foi realizada sua análise genômica parcial e o desenvolvimento incial de um protocolo para caracterização carotípica do gênero. Para isto, o genoma parcial foi obtido utilizando a combinação de leituras de sequências provenientes das plataformas Illumina e Ion Proton. O draft de maior qualidade obtido apresenta tamanho de 34,21Mb, com 301 supercontigs e N50 de 268.916 pb. A partir do genoma parcial gerado, foi realizada a anotação automática e uma análise genômica preliminar. Para a caracterização cariotípica, podemos determinar o tiabendazol como agente bloqueador do desenvolvimento celular e estabelecer o protocolo para obtenção de protoplastos. Palavras-chave: Leveduras negras. Fonsecaea monophora. Anotação. Análise genômica. Cariótipo. Abstract: Black yeast belonging to Herpotrichiellaceae family are extremely relevant microorganisms ecological and clinical point of view. These common saprobes organisms have a high capacity to adapt and appear to have a life cycle compound and potential pathogenicity. In the genus Fonsecaea different species were reported related to human, animal and environmental sources hosts whose ecology seems to direct the evolution of clinical conditions. Fonsecaea monophora is reported as chromoblastomycosis agent with training muriformes bodies and brain infection agent. Trying to understand the biology and potential pathogenicity of this species, it was carried out partial genomic analysis and the initial development of a protocol for carotípica characterization of the genre. For this, the partial genome was obtained using the combination of readings from sequences of Proton Ion and Illumina platform. The higher quality obtained draft has size 34,21Mb with 301 supercontigs and N50 of 268,916 bp. From the generated partial genome automatic annotation and preliminary genomic analysis was performed. For karyotype characterization, we can determine thiabendazole as blocking agent of cell growth and establish the protocol for protoplasts. Key words: Black yeasts. Fonsecaea monophora. Annotation. Genomic analysis.Karyotype.

Orientadora : Profª Drª Vânia Aparecida vicente Co-orientadora : Profª Drª Mariangela Hungria Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 22/03/2016 Inclui referências : f. 84-91 Resumo: O Brasil é um país, em grande parte, sustentado pela agricultura, que ocupa milhões de hectares no território nacional, onde a região do Cerrado representa a principal cultivada e a região sul a mais antiga em cultivo. A introdução da agricultura causa perturbação do solo, resultando em diferenças em relação aos solos nativos; contudo, existem manejos com menor ou maior grau de alteração, como o plantio direto (PD) e o plantio convencional (PC), respectivamente. No entanto, ainda existem poucas informações sobre os impactos causados nas comunidades microbianas por diferentes manejos do solo e das culturas, que agora podem ser reveladas pelo uso de novas tecnologias, como a metagenômica, que detecta microrganismos independe do seu cultivo em meios de cultura. Neste trabalho, foram estudadas duas regiões agrícolas do Brasil: uma no norte do Paraná, Região Sul, e outra nos Cerrados, no Distrito Federal. A partir do solo amostrado em cada região, o DNA foi extraído e sequenciado, resultando em milhões de sequências em cada estudo. Para as análises taxonômicas e funcionais as sequências foram submetidas ao servidor online MG-RAST e para as análises estatísticas foram submetidas ao programa STAMP. Nos solos do Norte do Paraná, os dados metagenômicos entre diferentes manejos de solo (PD e PC), e das culturas (rotação e sucessão) foram comparados, e foram constatadas diferenças consideráveis na diversidade taxonômica, mas de menor magnitude na diversidade funcional, indicativo de redundância de vias metabólicas. Os solos sob PD apresentaram maior quantidade de sequências de metabolismo de compostos aromáticos, que podem auxiliar na degradação de pesticidas, enquanto que solos sob PC apresentaram grande quantidade de sequências de metabolismo de carboidratos, que podem estar relacionada à menor oferta de nutrientes nesse solo. No Distrito Federal, os dados dos solos agrícolas foram comparados com uma área nativa do Cerrado, identificando se a predominância de algumas ordens bacterianas, tais como, Rhizobiales e Burkholderiales, em solos agrícolas (PD e PC), em comparação com solos nativos do Cerrado, os quais apresentaram maior abundância dos gêneros Rhizobium, Azospirillum, Xanthomonas, Pseudomonas e Acidobacterium. O Cerrado também apresentou maior diversidade de subsistemas funcionais. Os resultados obtidos neste estudo indicam que a introdução da agricultura em uma área nativa, e o uso de manejos do solo menos conservacionistas provocam profundo impacto principalmente na diversidade taxonômica dos microrganismos do solo. Abstract: Brazil is a country largely sustained by agriculture, which occupies millions of hectares, with the Cerrado representing the main cropping region and the southern region the most traditional. Agriculture introduction causes soil disturbance, resulting in differences in relation to the native soil; however, there are managements with greater or lesser degree of disturbance, such as no-tillage (NT) and conventional tillage (CT), respectively. However, there is still little information about impacts on soil microbial communities by different soil and agricultural managements, which can now be revealed with the use of new technologies, such as the metagenomics, which allows the detection of microorganism independently of their growth in culture media. In this thesis, we studied two agricultural regions in Brazil, one in the north of Paraná, southern Brazil and the other in the Federal District, in the Cerrado biome. The soil was collected from each region, DNA was extracted and sequenced, resulting in millions of sequences in each study. For taxonomic and functional analyzes sequences were submitted to the online server MG-RAST and for statistical analyzes the data were submitted to the STAMP program. In Paraná's soils, different soil (NT and CT) and crop (rotation and sucession) managements were compared and significant differences were observed in taxonomic diversity, but lower in magnitude on the functional analysis, indicating metabolic redundancy. The soils under NT were more abundant in sequences of the aromatic compounds metabolism, that could help in pesticide degradation, while soils under CT showed higher abundance of sequences of the carbohydrate metabolism, which might be related to the lower supply of nutrients. In the Cerrado, we compared the population of cropped soils with an undisturbed soil covered with native vegetation. We identified higher abundance of some bacterial orders, such as Rhizobiales and Burkholderiales in agricultural soils (NT and CT), while the native Cerrado showed greater abundance of Rhizobium, Azospirillum, Xanthomonas, Pseudomonas and Acidobacterium genus. The undisturbed Cerrado was also more abundant in the variety of functional subsystems. The results obtained in our study shown that the introduction of agriculture and the use of less conservationists practices deeply affect soil microbial community, especially the taxonomic diversity.

Resumo: As leveduras do gênero Candida representam uma das principais causas de infecção da corrente sanguínea de origem nosocomial. A candidemia tem como principais fatores de risco: nutrição parenteral, permanência na UTI, neutropenia, diabetes, cirurgia abdominal e uso de cateter venoso central. Os antifúngicos mais utilizados para o tratamento da candidemia são as equinocandinas, mas existem relatos de isolados resistentes a estes medicamentos. Este trabalho se propõe a caracterizar por meio de marcadores moleculares isolados clínicos do gênero Candida obtidos de pacientes com candidemia, assim como, identificar a suscetibilidade destes à antifúngicos. A caracterização molecular foi realizada por sequenciamento das regiões ITS e D1/D2 do rDNA e os testes de suscetibilidade aos antifúngicos "in vitro" foram realizados pelo método de microdiluição de acordo com o estabelecido pelo CLSI/2008. O total de 80 isolados caracterizados geneticamente eram pertecentes às espécies C. albicans (27), C. parapsilosis (22), C. glabrata (8), C. tropicalis (7), C. guilliermondii (5), C. krusei (3), C. pelliculosa (3), C. lusitaniae (2), C. metapsilosis (1) e C. orthopsilosis (1). Quanto à suscetibilidade, observou-se que a espécie C. glabrata apresentou o maior número de linhagens com perfil de resistência frente aos antifúngicos testados, sendo 05 resistentes à micafungina e suscetibilidade intermediária à anidulafungina e 07 com suscetibilidade dose-dependente ao fluconazol. A espécie C. albicans foi a mais suscetível, onde foi verificado apenas 01 linhagem resistente ao fluconazol. Entre o Complexo Parapsilosis, 05 linhagens da espécie C. parapsilosis apresentaram suscetibilidade intermediária à micafungina. As demais linhagens estudadas foram suscetíveis aos antifúngicos testados. De acordo com os resultados concluiu-se que a caracterização molecular e a determinação do perfil de suscetibilidade "in vitro" de isolados clínicos de leveduras do gênero Candida têm um papel importante no direcionamento do tratamento de episódios de candidemia e na identificação da epidemiologia da doença. Palavras-chave: Candida, candidemia, suscetibilidade, antifúngico.

Resumo:O presente estudo avaliou isolados de Streptococcus mutans e leveduras do gênero Candida quanto à capacidade de formação de biofilme in vitro, perfil molecular e a interação destes micro-organismos procedentes de saliva e biofilme dental de crianças com diferentes históricos da doença cárie. A partir de amostras de saliva e biofilme de 38 crianças, foram obtidos 83 isolados de S. mutans e 31 leveduras do gênero Candida, verificando-se 12 (31,5%) indivíduos multicolonizados. Os isolados de Candida spp. foram caracterizados quanto à formação de biofilme, assim como, analisados quanto à região parcial do gene D1/D2, ITS1-5,8S-ITS2 do DNA ribossomal e avaliação do perfil genotípico pelo sistema ABC. Um total de 20 isolados de S. mutans foram selecionados, sendo 12 procedentes de crianças coinfectadas e 08 de crianças não coinfectadas. Estes foram caracterizados, quanto a formação de biofilme in vitro e pelo sequenciamento parcial dos genes HtrA e GtfB. De acordo com os resultados verificou-se entre as linhagens de Candida analisadas que 26 pertenciam à espécie C. albicans (83,8%) e 05 identificadas como Candida não-albicans (16,12%), entre essas, 03 de C. tropicalis (9,6%), 01 C. glabrata (3,2%) e 01 de C. guilliermondii (3,2%). Todas as crianças coinfectadas eram colonizadas com pelo menos uma linhagem de C. albicans, entre as quais foram detectados os genótipos A e B, sendo que o genótipo A foi mais frequente nas crianças com histórico de cárie, ocorrendo em 77% delas, enquanto que o genótipo B foi mais frequente nas crianças sem histórico da doença (87,5%). As espécies não-albicans, principalmente a C. tropicalis estavam associadas à microbiotas cariogênicas, sugerindo que essas espécies podem potencializar a virulência de Streptococcus mutans, aumentando potencialmente o risco da doença. Ambos os micro-organismos avaliados apresentaram variação na concentração de células aderidas durante a formação do biofilme in vitro. Entretanto verificou-se uma variação maior da capacidade de formação de biofilme in vitro entre os isolados de S. mutans procedentes de crianças coinfectadas em relação ao grupo de isolados procedentes de crianças não coinfectadas. Os isolados de S. mutans geneticamente diferentes variavam quanto ao padrão fenotípico da aderência, apresentaram diversidade a qual pôde ser correlacionada ao histórico da doença cárie e padrão de aderência in vitro. Além disso, verificou-se que o padrão de aderência pode ser modificado em função da associação com as leveduras do gênero Candida. As imagens pela técnica de microscopia de fluorescência confocal e por microscopia eletrônica de varredura (MEV) confirmaram a maior expressão de exopolissararídeos na matriz do biofilme formado pela associação de S. mutans com C. albicans confirmando a potencialização da virulência de S. mutans nos biofilmes associados com os dois micro-organismos. A multicolonização, genótipos e distribuição das espécies de Candida encontradas parecem ter uma relação expressiva com o desenvolvimento da cárie dental, sendo que, indivíduos colonizados pela espécie C. tropicalis apresentaram maior incidência da doença. Palavras-chave: Biofilme. Candida albicans. Streptococcus mutans.

Os estreptococos B-hemoliticos do grupo A (Streptococcus pyogenes) causam varias doencas humanas e estao associados com febre reumatica e glomerulonefrite pos-estreptococica. A sorotipagem dos antigenos M e T tem sido a maneira mais comum de tipagem destes patogenos, entretanto, para alguns isolados a tipagem por este metodo nao e satisfatoria, pois cerca de 15 a 40% dos isolados nao sao tipaveis. Alem disso, estes metodos de sorotipagem nao sao eficientes para diferenciacao clonal em estudos epidemiologicos. Marcadores moleculares sao ferramentas importantes capazes de diferenciar sorotipos de estreptococos do grupo A, provendo informacoes na elucidacao de surtos epidemiologicos e diagnostico. Marcadores RAPD foram utilizados para detectar polimorfismos em isolados de S. pyogenes de um surto de faringotonsilite estreptococica ocorrido em uma industria alimenticia, em marco de 2004 na cidade de Curitiba - PR. Foram utilizados 26 isolados do surto, 11 isolados desta especie, nao relacionados com o surto, duas linhagens referencias de sorotipo nefritogenico e uma de sorotipo reumatogenico. Foi observada variabilidade genetica entre os isolados de S. pyogenes do surto. A analise de gcluster h utilizando-se o coeficiente de Jaccard, mostrou dois grupos de isolados sem relacao clonal entre si, sugerindo a circulacao de dois sorotipos na industria alimenticia. Os resultados sugerem que o surto foi causado por sorotipo nefritogenico, com possibilidade de ter sido o sorotipo M4. A utilizacao de mais linhagens referencias nefritogenicas e reumatogenicas e a sorotipagem da proteina M possibilitariam a identificacao dos sorotipos causadores do surto de glomerulonefrite estreptococica na industria alimenticia, em Curitiba-PR, naquela ocasiao.

Orientador : Prof. Dr. Flávio Queiroz Telles Filho Co-orientadores : Profª Drª Vania Aparecida Vicente e Profº. Drº. Newton Sérgio de Carvalho Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 21/03/2013 Inclui bibliografias Área de concentração: Microbiologia Resumo: A candidíase vulvovaginal afeta mulheres em idade reprodutiva representando aproximadamente 15 a 25% dos casos de vaginites. As diferentes espécies de Candida relacionadas à infecção podem ser encontradas na mucosa vaginal como colonizadoras e, em condições apropriadas, aceleram o processo de multiplicação e expressam fatores de virulência. O objetivo deste trabalho foi isolar leveduras de pacientes com ausência de sintomas clínicos (grupo colonizado) e de portadores da infecção. O perfil de sensibilidade in vitro destes isolados foi estabelecido e marcadores moleculares utilizados para identificar a distribuição das espécies. Um total de 40 isolados foram obtidos e identificados através do Cromoagar, sistema API20aux e pelo seqüenciamento das regiões ITS e D1/D2 do gene DNAr. Diferentes isolados de C. albicans foram genotipados pelo sistema ABC. A análise multilocus confirmou isolados das espécies Candida albicans, C. glabrata, C. guilliermondii, C. kefyr e Saccharomyces cerevisiae. A espécie prevalente foi a C. albicans. No grupo colonizado foi encontrado C. albicans (60%), C. glabrata (25%), C. guilliermondii (5%), C. kefyr (5%) e Saccharomyces cerevisiae (5%). No grupo com infecção não complicada todos os isolados eram C. albicans (100%) e no grupo de infecção complicada a maioria eram C. albicans (90,9%), seguido de C. dubliniensiis (9,1%). Os diferentes isolados de C. albicans foram divididos em dois grupos genotípicos (A e B). Em relação ao perfil de sensibilidade in vitro dos isolados das diferentes espécies de Candida procedentes dos diferentes grupos estudados, pode se afirmar que os isolados obtidos a partir do grupo com infecção complicada apresentaram resistência a nistatina e eram sensíveis ao fluconazol, anfotericina B e cetoconazol, enquanto que os isolados do grupo com infecção não complicada e colonizada e individuos colonizados apresentaram sensibilidade dose dependente aos antifúngicos fluconazol, anfotericina B e cetoconazol. Os isolados de C. albicans pertencentes aos diferentes grupos genotípicos (A e B) não apresentaram correlação com os testes de suscetibilidade in vitro. Palavras-chave: candidíase vulvovaginal; suscetibilidade in vitro; variabilidade genética. Abstract: Vulvovaginal candidiasis affects women of reproductive age representing aproximatedly 15 to 25% of vaginitis cases. Different Candida species related to infection can be found colonizing the vaginal mucosa, and under appropriate conditions boost the reproduction process and express virulence factors. This study aimed to isolate yeasts of patients with clinical symptoms absence (colonized group) and also the ones with infection. The susceptibility of in vitro profile from these isolates was stablished and molecular markers were used to identify the species distribution. A total of 40 isolates were obtained and identified through the Cromoagar API20aux system and by sequencing of ITS regions and D1/D2 from the DNAr gene. Different C. albicans strains were genotyped by the ABC system. The multilocus analysis confirmed Isolates of Candida albicans, C. glabrata, C. guilliermondii, C. kefyr and Saccharomyces cerevisiae. The most prevalent species was C. albicans. In the colonized group it was found C. albicans (60%), C glabrata (25%), C guilliermondii (5%), C kefyr (5%) and Saccharomyces cerevisiae (5%). In the uncomplicated infection group all isolates were C. albicans (100%) and in the complicated infection group most of the isolates were C. albicans (90.9%), followed by C. dubliniensiis (9.1%). The different isolates of C. albicans were diveded into two genotypic groups (A and B). Regarding the profile of sensibility in vitro of the isolates of different species of Cândida derived from distinct groups that were studied, it can be confirmed that the isolated obtained from the complicated infection group present resistance to nystatin and were sensitive to fluconazole, amphotericin B and ketoconazole, while the colonized presented dose-dependent sensitivty to the antifungal agents fluconazole, amphotericin B and ketoconazole. The C. albicans isolates which belong to different genotypic groups (A and B) did not show any correlation with the susceptibility tests in vitro. key-words: vulvovaginal candidiasis; susceptibility in vitro; variability genetic.

Resumo: As leveduras negras são Ascomicetos cuja principal característica é a pigmentação escura na parede celular das células vegetativas e reprodutivas, e pertencem às ordens Dothideales e Chaetothyriales. O oligotrofismo destes agentes os torna hábeis a sobreviver em diversos substratos. Sendo assim, estudos da ecologia destes agentes são de fundamental importância para o entendimento da evolução epidemiológica das doenças causadas por estes micro-organismos. O presente trabalho teve como objetivo estudar a ecologia de leveduras negras e avaliar a atividade de enzimas fenoloxidase e lacase visando à aplicação biotecnológica. Neste estudo foram utilizadas 43 linhagens de diferentes gêneros de leveduras negras. A termotolerância foi determinada num intervalo de 15 a 40ºC. A tolerância ao pH foi verificada num intervalo de 2,5 a 9 em intervalos de 0,5. A atividade enzimática foi verificada em placas com meio sólido contendo os substratos Guaiacol 0,2% para enzima lacase e ácido tânico 0,5% para enzima fenoloxidase. Os resultados obtidos mostraram que as linhagens de Exophiala apresentaram melhor crescimento entre 24 e 30°C. Os isolados ambientais pertencentes ao gênero Cladophialophora apresentaram crescimento a 40 °C, sendo o ótimo a 33ºC. Quanto ao pH, a faixa ótima para o crescimento das linhagens variou entre 4 e 5,5. De maneira geral, as linhagens toleram uma ampla variação de pH, sendo que foi observado uma preferência ao pH ligeiramente ácido. Seis linhagens apresentaram atividade fenoloxidase e todas apresentaram atividade para a enzima lacase. As quatro linhagens selecionadas para a assimilação de hidrocarbonetos foram capazes de crescer na presença destes compostos. A partir destes resultados, verificou-se que as linhagens estudadas apresentaram variação em relação à tolerância a temperatura, pH e atividade enzimática testada, o que pode representar diferenças no potencial de virulência e esclarecer os diferentes perfis epidemiológicos destes agentes, assim como identificar isolados com potencial biorremediador.

Resumo: Os fungos negros constituem um grupo grande e heterogêneo cuja principal característica é a pigmentação escura (melanina) na parede celular das células vegetativas e reprodutivas. Estes fungos são encontrados na natureza, principalmente no solo e matéria orgânica em decomposição. Entre as infecções causadas por estes fungos, inclui-se micetomas eumicóticos, feohifomicose e cromoblastomicose. Recentemente uma doença emergente conhecida como doença do caranguejo letárgico (DCL), causada por um fungo negro, uma espécie de Exophiala sp (CBS 120420), está causando maciças mortalidades nas populações de caranguejo-uçá (Ucides cordatus) no Brasil. Enquanto, Cladophialophora sp detectada, algumas vezes, em caranguejos doentes, é considerada uma espécie oportunista. Caranguejos afetados para DCL apresentam letargia e controle motor reduzido. Amostras de fungos negros foram isolados de microhabitats distintos de regiões de manguezais expostos à mortalidades pela DCL (áreas do estado da Bahia) na procura pelas espécies associadas na doença. Marcadores moleculares específicos, Salm F5 e Salm R3 e Clado F2 e Clado R2, foram utilizados para identificar o fungo causador da DCL, Exophiala sp, e o fungo oportunista Cladophialophora sp, respectivamente. Todos os isolados de fungos negros (119) resultaram em reações negativas para o marcador molecular para o fungo causador DCL. Entretanto, 10 isolados resultaram reações positivas para o marcador molecular para o fungo oportunista, Cladophialophora sp. Essas amostras positivas foram isoladas de folhas da árvore (Canavieiras-controle e Acupi-fazenda), galho (Canavieiras controle e Acupi-fazenda) e raiz aérea (Canavieiras controle). Todas as amostras mostraram compatibilidade com a micromorfologia de Cladophialophora sp. Sequências ITS desses isolados positivos mostraram similaridade nucleotídica com linhagens depositadas no Genbank, as quais foram obtidas de solo da cidade de Colombo (Paraná-Brasil) e de doença disseminada ocorrida nos EUA. O resultado rejeita a hipótese que a proximidade de fazendas de carcinocultura pode aumentar a possibilidade de surtos de DCL em populações de caranguejo nos manguezais

Resumo: Os fungos dematiáceos constituem um grupo grande e heterogêneo, caracterizados por possuírem um pigmento escuro, dihidroxinaftaleno melanina-DHN, na parede celular de suas células. Na natureza são encontrados principalmente na microbiota do solo e de matéria orgânica em decomposição, distribuindo-se em regiões de clima tropical e subtropical. Muitos deles são sapróbios de crescimento rápido, entretanto há uma parcela patogênica em hospedeiros vertebrados que está reunida na famí ia Herpotrichiellaceae. Para este estudo foi utilizado o fungo dematiáceo da espécie Fonsecaea monophora, agente de cromoblastomicose, o qual pode causar infecção de forma disseminada em pacientes imunocomprometidos. Com o objetivo de obter, os glicoconjugados de parede celular, os exopolissacarídeos (EPS) e a biomassa das linhagens de origem clinica e ambiental de F. monophora (MMHC82 e F 5p4), respectivamente, realizou-se o cultivo nos meios Mínimo (MM) e Czapeck- Dox (CD). Os EPS foram avaliados quanto a sua composição monossacarídica nos diferentes meios de cultivo e como resultado desta composição, açúcares como manose, galactose e glucose foram encontrados como prevalentes. Os polissacarídeos da parede celular das duas linhagens também apresentaram açúcares como glicose, manose e galactose em sua composição. Quando as frações de parede foram submetidas a análise de metilação e de RMN, foi possível observar a presença de Galf (15) e (16) ligada, bem como na forma de terminal não redutor, devido a presença dos derivados per-O-metilados 2,3,6-Me3-Galf, 2,3,5- Me3-Galf e 2,3,5,6-Me4-Galf, respectivamente, em conjunto com os sinais em 108,4 e 106,0, indicando a presença de uma possível galactofuranana como polissacarídeo estrutural. Além de Galf, a mistura de polissacarídeos de parede também apresentou unidades de Glcp e Manp, sugerindo a presença de - e - glucanas e de -mananas, devido à presença dos sinais em 98,4 e 103,0, e 101,3, respectivamente. Baseado nos dados de metilação observou-se que as unidades de Glcp apresentaram-se principalmente 3-O-, 4-O- e 4,6-di-O-substituídas, enquanto que as unidades de Manp eram substituídas em O-4 e O-6, ou 2,4-, 4,6-, 2,6-, 3,6-di- O-substituídas, ou ainda ,3,6-tri-O-substituídas. Na análise quimiométrica os resultados de 1H RMN corroboraram com os dados de metilação, onde observou-se que a linhagem MMHC82 de F. monophora em meio CD apresentou uma maior variação no perfil fisiológico relacionado aos carboidratos da parede celular. Os glicoconjugados foram utilizados como antígenos em ensaios imunológicos utilizando soros provenientes de pacientes portadores de cromoblastomicose. O antígeno, polissacarídeo pertencente à parede celular do fungo MMHC82 (patogênico), cultivado no meio MM, foi o que obteve melhor resposta antigênica. A distribuição destas espécies na natureza e o conhecimento destes polissacarídeos e glicoconjugados de parede poderão contribuir para ampliar o entendimento e elucidação da patogênese deste fungo podendo auxiliar no diagnóstico e tratamento destas doenças.

Resumo: A bioprospecção de plantas medicinais e microrganismos endofíticos constitui uma atividade promissora na pesquisa e detecção de novos compostos com atividades biológicas de interesse na área da saúde e na área agronômica. Croton urucurana Baill (Euphobiaceae) é uma planta amplamente utilizada na medicina tradicional em países como Brasil, Paraguai e Uruguai. Entre as várias propriedades medicinais atribuídas à planta, destaca-se seu uso para tratar doenças de etiologia infecciosa. No presente trabalho foi avaliada a atividade antibacteriana e antifúngica de diferentes extratos de C. urucurana contra as bactérias gram positivas Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis e Streptococcus mutans, bactérias gram negativas Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa e contra os fungos filamentosos Microsporum gypseum, Fonsecaea monophora e Guignardia citricarpa. Devido ao fato de que nos últimos anos vários trabalhos vêm demonstrando a importância dos microrganismos endofíticos de plantas medicinais como fontes de compostos bioativos, neste trabalho também se realizou a bioprospecção de fungos endofíticos isolados da planta. Avaliou-se o potencial antibacteriano e antifúngico como também a capacidade de produção de compostos bioativos em diferentes meios de cultura desses microrganismos. Em relação à atividade da planta, comparando a atividade antimicrobiana de extratos brutos da folha e casca do caule, este último demonstrou maior atividade. As bactérias mais sensíveis a esse extrato foram P. aeruginosa (CIM: 0,1 mg/mL) e S. aureus (CIM: 0,5 mg/mL). Nenhuma das frações demonstrou uma atividade maior que a do extrato bruto, devido provavelmente a atividade do extrato ser produzida por um sinergismo entre vários princípios ativos. Porém, notou-se que as frações mais polares foram as mais ativas. Para selecionar os fungos endofíticos com maior potencial antimicrobiano foi realizado o teste de antagonismo de 27 isolados endofíticos contra os fungos G. citricarpa e F. monophora. Também foi realizada uma triagem de atividade antibacteriana contra bactérias gram positivas e gramnegativas. Seis isolados foram selecionados para a produção de metabólitos em diferentes meios de cultura: meios líquidos, malte e milho, e meios sólidos arroz e milho. Os extratos obtidos apresentaram diferentes graus de atividade antimicrobiana. A análise dos extratos mais ativos da planta, através de cromatografia em camada delgada demonstrou a presença de metabólitos da classe dos polifenóis. Em relação aos extratos dos endofíticos, o perfil cromatográfico variou bastante em função do fungo e meio de cultura utilizado. O extrato do isolado endofítico FCU 055 Epicoccum sp cultivado em meio sólido milho demonstrou uma interessante atividade antimicrobiana contra G. citricarpa e P. aeruginosa.

Resumo: A armilariose, doença causada por fungos do gênero Armillaria, é conhecida em várias partes do mundo, provocando a mortalidade de culturas agrícolas e florestais. Na região Sul do Brasil, essa doença tem causado a morte de árvores, principalmente em plantios de pínus, e a espécie associada à doença ainda não foi identificada. Sendo assim, o presente trabalho visou caracterizar isolados de Armillaria coletados na região Sul do Brasil, por meio de marcadores morfológicos e moleculares (RAPD e sequenciamento de região ITS). Vinte e dois isolados de Armillaria sp. foram coletados de árvores doentes de pínus, pessegueiro e vassourinha-do-campo, nos estados do Paraná, Santa Catarina e Rio Grande do Sul. Os isolados foram cultivados em meio sólido BDA (batata, dextrose e ágar), a 22ºC, no escuro. As observações de micromorfologia do micélio foram feitas através de microscopia de luz e eletrônica de varredura e demonstraram a presença de estruturas típicas do gênero. Os resultados do RAPD demonstraram haver ariabilidade entre os isolados. Os resultados das análises das sequências ITS demonstraram que os isolados procedentes da região Sul do Brasil formaram um único grupo filogenético, sugerindo se tratar de uma única espécie, a qual parece ser muito próxima das linhagens referências procedentes da Patagônia, as quais parecem se tratar da espécie A. montagnei, intimamente relacionada com a espécie A. luteobubalina.

Resumo: A pesquisa de compostos químicos biologicamente ativos para fins terapêuticos em plantas utilizadas na medicina popular e em seus microrganismos endofíticos tem enriquecido as opções terapêuticas com novos fármacos antinflamatórios, antimicrobianos, antitumorais, entre outros. Em busca de soluções para o avanço das bactérias multiresistentes o presente trabalho buscou a confirmação científica para o uso popular de Schinus terebenthifolius Raddi, aroeira, como atimicrobiano e ampliou o estudo buscando a relação desta atividade aos seus endófitos. Para isto foi avaliada a atividade antimicriobiana e a composição química do extrato metanólico bruto das folhas da planta, assim como suas frações. Paralelamente, foram isolados fungos filamentosos e actinomicetos endofíticos das folhas da mesma árvore, que foram confrontados com bactérias Gram-positivas, Gram-negativas e levedura de interesse clínico e um fitopatógeno filamentoso para verificar o potencial de produção de compostos antimicrobianos por esses microrganismos. Os endófitos com este potencial foram selecionados para fermentação a fim de extrair seus metabólitos secundários ativos. Aqueles que apresentaram bons resultados também foram avaliados quimicamente e comparados com o extrato obtido diretamente das folhas da planta e suas frações. O extrato bruto metanólico das folhas de aroeira e suas frações de diclorometano:acetato de etila (1:1) e de acetato de etila foram ativos contra Staphylococcus aureus (ATCC 27213), Escherichia coli (ATCC 35219), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) e Candida albicans (ATCC 10231). Ainda, o extrato bruto da planta inibiu em mais de 40% o crescimento do fitopatógeno Guignardia citricarpa. Alguns dos compostos extraídos dos endófitos também apresentaram atividade contra pelo menos um dos microrganismos testados (Staphylococcus aureus - ATCC 27213, Pseudomonas aeruginosa - ATCC 27853 e Candida albicans - ATCC 10231). Foram encontrados nove microrganismos endofíticos produtores de metabólitos secundários com atividade antimicrobiana, entre eles foram identificados os gêneros Alternaria, Phomopsis, Penicillium e Streptomyces, um basideomiceto também apresentou a mesma propriedade. De acordo com a analíse química por cromatografia em camada delgada sugere-se que os metabólitos ativos da planta estejam relacionados com compostos fenólicos e/ou antraquinonas, enquanto a atividade antimicrobiana dos endófitos testados parece estar vinculada à produção de alcalóides, presente em todos os extratos ativos dos microrganismos. Dois extratos com atividade produzidos por endófitos também apresentaram antraquinonas e um terpenóides. Nas condições testadas não foi encontrada relação entre os compostos com atividade antimicrobiana extraídos das folhas de S. terebenthifolius Raddi com os extraídos dos fungos e actinomiceto isolados desta mesma planta. Entretanto, esta diversidade de vias metabólicas secundárias ressalta a importância da pesquisa destas duas fontes de metabólitos secundários biologicamente ativos.

Orientador: Walter A. Boeger Co-orientadora: Vânia Aparecida Vicente Dissertaçăo (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Cięncias Biológicas e Setor de Cięncias da Saúde, Programa de Pós-Graduaçăo em Cięncias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 2008 Inclui bibliografia e anexos

Orientador : Prof. Dr. Guilherme Lanzi Sassaki Co-orientadora : Profª Drª Vânia Aparecida Vicente Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 27/02/2007 Inclui referências : f. 49-56;77-78 Resumo: Os fungos dematiáceos constituem um grupo grande e heterogêneo, caracterizado por possuírem um pigmento escuro, dihidroxinaftaleno melanina, na parede celular de suas células. Esses fungos estão reunidos na família Herpotrichiellaceae e podem ser patogênicos em hospedeiros vertebrados. Entre as principais doenças causadas por estes agentes, destacam-se a cromoblastomicose, ocorrida após implantação traumática destes agentes no tecido subcutâneo com formação de corpos muriformes e a feohifomicose com verificação de elementos fúngicos não diferenciados no tecido do hospedeiro. O presente trabalho objetivou caracterizar o fungo Exophiala spinifera, agente de feohifomicose, por meio de morfologia e seqüências ITS e caracterizar os polissacarídeos sintetizados por este agente visando determinar o potencial patogênico desta linhagem através de imunoensaios. O fungo foi cultivado sob agitação constante por sete dias à temperatura de 36ºC em meio mínimo (MM), que tem como fonte de carbono a glucose e em meio Czapeck- Dox (CD) cuja fonte de carbono é a sacarose. O EPS foi recuperado do meio de cultivo por centrifugação a 12.000 G e o sobrenadante foi submetido à precipitação etanólica (3:1, v/v). Esta suspensão foi mantida a -20ºC overnight e após centrifugação resultou no EPS nativo. Da biomassa foram obtidos polissacarídeos através de extração aquosa. Para caracterizar os polissacarídeos foi determinada a composição monossacarídica (Man:Gal:Glc), avaliado espectros de ressonância magnética nuclear de 13C e de GC-MS, sugerindo moléculas complexas. Objetivando a obtenção de anticorpos para testes imunológicos utilizou-se o fungo E. spinifera inativado para imunização via intraperitonial de camundongos isogênicos balb c. Os anticorpos foram testados contra os exopolissacarídeos produzidos e os polissacarídeos obtidos da parede celular, dentre as amostras a que apresentou maior atividade imunogênica foi o EPS produzido no cultivo em meio mínimo seguido do EPS produzido no meio czapeck-dox, as amostras obtidas da parede celular do fungo E. spinifera apresentaram baixa atividade imunogênica. Abstract: The dematiaceous fungi constitute a large and heterogeneous group, characterized by having a dark pigment, dihidoxinaftaleno melanine, on their cells wall. In nature they are found mostly in the of soil and organic matter in decomposition. Many of them are fast growth saprobic, however some of them have tendency to pathogenicity in vertebrate hosts integrating the Herpotrichiellaceae family. Among the main diseases caused by these agents stand out the phaeohyphomycosis and Chromomycosis usually occurred after trauma implantation in the host tissue. The fungus Exophiala sp. is considered one of the phaeohyphomycosis and Chromomycosis agents. The present work aimed at characterizing the Exophiala spinifera fungus by means of morphology and molecule markers, which have been studied through its sequences. Aiming at achieving Exopolysaccharide (EPS) and biomass for further studies on these Macromolecules and obtaining out for immunology tests the fungus was cultivated in minimum environments (MM) and in czapeck-dox (CD) environments under constant agitation for seven days at 36ºC. The EPS was recovered out for the environment by 12.000 G centrifugation and the supernatant was submitted to Ethanolic precipitation. This suspension was kept at - 20ºC overnight and after centrifugation it results in native EPS. Polysaccharides were obtained from the biomass through watery extraction. In order to characterize the EPS the EPS-MM and EPS-CD composition was determined. Isogenics balb C mice were immunized intraperitoneal with the ESP fungus aiming at producing antibodies for immunologic tests against the EPS and wall cells of the fungus.

Orientadora: Vânia Aparecida Vicente Co-orientador: Zoilo Pires de Camargo Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas e Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 2005 Inclui bibliografia e anexos

Resumo: A polpa dental com a injúria torna-se inflamada e os microrganismos colonizadores da boca se fixam no tecido doente e iniciam a infecção endodôntica. Com o passar do tempo esta se agrava com as transições de espécies bacterianas e da ampliação das estruturas invadidas sem que haja o tratamento. As medicações sofrem limitações na presença de coleção purulenta, restos de tecido necrótico, necessidade de preparo químico-mecânico do canal, não neutralização dos produtos tóxicos e danos ao tecido do hospedeiro (paciente) e sendo assim outras formas de tratamento têm sido investigados, como os fitoterápicos. Dentre as medicações fitoterápicas conhecidas está o extrato hidroalcoólico de cascas e folhas de Schinus terebenthifolius Raddi (aroeira), muito utilizada em doenças infecciosas de pele, trato gastrointestinal e região pélvica urinária. Com a parceria do Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, do Departamento de Química da Universidade Federal do Paraná e Departamento de Odontologia da Pontifícia Universidade Católica do Paraná, foram obtidos extratos totais brutos e fracionados das folhas de plantas coletadas no ano de 2002 e 2005 no Litoral do Estado do Paraná. Sendo assim seu potencial antimicrobiano foi avaliado frente a isolados de polpa necrosada e linhagens referência de Staphylococcus aureus ATCC 27213, Pseudomonas aeroginosa ATCC 27853 e Escherichia coli ATCC 35219 determinando a concentração inibitória mínima em meio líquido e meio sólido. A partir dos resultados verificou-se uma concentração inibitória mínima maior em meio líquido (850 ?g/mL) do que em meio sólido (650 ?g/mL) para os extratos brutos. Com o fracionamento dos extratos não foram observadas inibições das bactérias utilizando as frações isoladamente. Da ação antimicrobiana do extrato, um modelo de infiltração marginal foi proposto para avaliar o potencial do substrato como medicação endodôntica, os resultados mostraram eficiência na inibição e controle bacteriano.

Orientadora : Profª Drª Vania Aparecida Vicente Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduaçao em Processos Biotecnológicos. Defesa: Curitiba, 2007 Inclui bibliografia Área de concentração: Saude humana

Orientadora: Vânia Aparecida Vicente Co-orientadora: Chirlei Glienke de Blanco Dissertaçăo (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Cięncias Biológicas, Programa de Pós-Graduaçăo em Cięncias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 22/02/2006 Inclui bibliografia e anexos

Orientadora : Vânia Aparecida Vicente Inclui apêndice Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduaçao em Processos Biotecnológicos. Defesa: Curitiba, 2006. Inclui bibliografia e anexos Área de concentração: Saúde animal e humana

O objetivo deste estudo foi investigar qualitativamente e quantitativamente, a capacidade de aderência de S. mutans e C. albicans isoladamente e associados. Foi realizado ensaio de aderência "in vitro" na superfície dentária, cuja análise foi feita por Microscopia Eletrônica de Varredura (M.E.V.). Para este ensaio de aderência, foram utilizados sistemas com dentes humanos em meio Gibbons e Nygaard, acrescidos dos inóculos C. albicans e S. mutans isoladamente e associados, incubados por 21 dias. Os isolados eram provenientes de amostras salivares de crianças coinfectadas e linhagens de referência ATCC dos dois microrganismos. A análise por meio de M.E.V. mostrou menor aderência de C. albicans do que S. mutans na superfície dentária quando inoculados isoladamente. Quando inoculados juntos no mesmo sistema, C. albicans apresentou aumento de aderência. Também houve favorecimento na aderência de S. mutans quando em associação com C. albicans, mostrando aumento de colonização pela utilização da superfície celular da levedura como suporte de aderência. Um segundo experimento foi desenvolvido buscando avaliar quantitativamente essa aderência, para tanto foi utilizado um sistema de aderência "in vitro" com uso de cortes de acrílico como corpos de prova, e como inóculos os isolados com comportamentos contrastantes do primeiro ensaio, sendo que os resultados confirmaram que durante a associação de C. albicans e S. mutans em meio rico em sacarose, houve potencialização da aderência de ambos, porém S. mutans demonstrou ser mais beneficiado nesta associação. Os dados obtidos pelos dois ensaios de aderência “in vitro” permitem sugerir que embora no meio bucal as interações microbianas sejam muito mais complexas, a presença dos dois microrganismos associados pode favorecer a aderência de ambos, e o conseqüente aumento de colonização por S. mutans pode ser considerado mais um fator relevante no aumento de risco à cárie