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Recruitment of a specific cell population after Leishmania infection can influence the outcome of the disease. Cellular migration in response to Leishmania or vector saliva has been reported in air pouch model, however, cellular migration induced by Leishmania associated with host's blood and vector saliva in this model has not been described. Herein we investigated cellular migration into air pouch of hamster after stimulation with combination of L. chagasi and host's blood and Lutzomyia longipalpis saliva. Migration induced by saliva was 3-fold more than those induced by L. chagasi alone. Additionally, L. chagasi associated with blood and saliva induced significantly even more leukocytes into air pouch than Leishmania alone. L. chagasi recruited a diverse cell population; however, most of these cells seem to have not migrated to the inflammatory exudate, remaining in the pouch lining tissue. These results indicate that L. chagasi can reduce leukocyte accumulation to the initial site of infection, and when associated with vector saliva in the presence of blood components, increase the influx of more neutrophils than macrophages, suggesting that the parasite has developed a strategy to minimize the initial inflammatory response, allowing an unlimited progression within the host. This work reinforces the importance of studies on the salivary components of sand fly vectors of leishmaniasis in the transmission process and the establishment of the infection. O recrutamento de uma população de células específicas após infecção por Leishmania pode influenciar o resultado da doença. A migração celular em resposta a Leishmania ou saliva do vetor tem sido reportada utilizando o modelo da bolsa de ar subcutânea, entretanto, a migração celular induzida por Leishmania associada com o sangue do hospedeiro e saliva do vetor neste modelo ainda não foi descrita. Neste trabalho foi investigada a migração celular no modelo da bolsa de ar subcutânea em hamster após a estimulação com a combinação de L. chagasi, sangue do hospedeiro e saliva de Lutzomyia longipalpis. A migração induzida por saliva foi três vezes maior do que a induzida por L. chagasi sozinha. Adicionalmente, L. chagasi associada com sangue e saliva induziu significativamente ainda mais leucócitos no exsudato inflamatório do que o estímulo com Leishmania sozinha. L. chagasi recrutou uma população de células distintas, no entanto, a maioria dessas células parece não ter migrado para o exsudato inflamatório, permanecendo no tecido da bolsa de ar. Estes resultados indicam que L. chagasi pode reduzir o acúmulo de leucócitos para o local inicial da infecção e que quando associada à saliva do vetor e na presença de componentes do sangue aumenta o influxo de mais neutrófilos do que macrófagos, sugerindo que o parasito desenvolveu uma estratégia para minimizar a resposta inflamatória inicial, permitindo uma progressão ilimitada dentro do hospedeiro. Este trabalho reforça a importância de mais estudos sobre os componentes da saliva dos vetores das leishmanioses no processo de transmissão e no estabelecimento da infecção.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-04-24T19:50:20Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Maria Teixeira.pdf: 2708323 bytes, checksum: 1ed381eedc13288f43ff7b4dbfeb7222 (MD5) Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-04-25T16:46:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Maria Teixeira.pdf: 2708323 bytes, checksum: 1ed381eedc13288f43ff7b4dbfeb7222 (MD5) Made available in DSpace on 2013-04-25T16:46:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Maria Teixeira.pdf: 2708323 bytes, checksum: 1ed381eedc13288f43ff7b4dbfeb7222 (MD5) CNPq, CAPES, PROCAD – 0018/01-5, FAPESB Dois artigos científicos resumem o presente estudo. No primeiro, é mostrado que duas cepas de L. braziliensis, isoladas de pacientes de diferentes Estados (Ceará e Bahia), são geneticamente diferentes e apresentam processos patológicos distintos em camundongos BALB/c. No segundo trabalho é demonstrada uma correlação entre padrões de expressão de quimiocinas, induzidas por estas duas cepas de L braziliensis, com a formação de lesão e a atração de leucócitos para o sítio inflamatório. O terceiro trabalho é uma revisão sobre o papel das quimiocinas e receptores de quimiocinas nas interações parasito-hospedeiro em leishmaniose. Em particular, a revisão focaliza os estudos que contribuíram para a compreensão sobre quimiocinas na infecção por leishmania. Os principais achados desses estudos são: 1. A L. braziliensis H3227 do Ceará apresentou genótipo diferente da L. braziliensis BA788 da Bahia, demonstrado por RAPD. 2. A cepa H3227 levou ao desenvolvimento de lesões pequenas que se resolveram, enquanto BA788 não causou lesões em camundongos BALB/c. 3. Em ambos os grupos de camundongos, a carga parasitária não diferiu significativamente no sítio de infecção e começou a reduzir com 30 dias de infecção. Nos linfonodos drenantes, entretanto, o número de parasitos aumentou durante o decorrer do estudo. 4. Após a inoculação do parasito, a cepa BA788 pareceu ativar mais precocemente uma reposta mais intensa tipo Th1. Camundongos infectados com BA788 produziram níveis mais altos de IFN-γ, o que se correlacionou com um maior número de células NK nas lesões destes animais. 5. Numa fase mais tardia, camundongos infectados com H3227 produziram mais IL-12p70 e IL-10 no sobrenadante de células recuperadas dos linfonodos. Esta regulação da produção de IL-10 coincidiu com o pico máximo do desenvolvimento da lesão e da carga parasitária nestes animais. 6. As maiores lesões causadas por H3227, em camundongos BALB/c, foi diretamente correlacionada com o aumento progressivo da reação inflamatória, mas não com a carga parasitária. 7. A expressão mais precoce e intensa das quimiocinas CCL2/MCP-1, CCL3/MIP-1α, CXCL1/KC, CCL11/eotaxina, XCL1/linfotactina e dos seus respectivos receptores correlacionou-se com o maior influxo de leucócitos para as lesões induzidas por H3227 e com o aumento do processo inflamatório observado nos camundongos infectados com esta cepa, após 15 dias de infecção. 8. As diferenças observadas no processo inflamatório estavam correlacionadas com a virulência do parasito, uma vez que a cepa mais patogênica H3227 mostrou-se um recrutador mais potente de todas as células observadas no sistema do bolsão inflamatório, do que a menos patogênica BA788. Em conclusão, os achados apresentados aqui indicam que duas cepas de L. braziliensis geneticamente diferentes, embora apresentem carga parasitária semelhante no sítio de inoculação, podem estabelecer processos patológicos distintos e induzir expressão de quimiocinas em diferentes tempos e/ou intensidades, levando ao recrutamento diverso de células e respostas inflamatórias diferenciadas que poderiam finalmente estar envolvidas em diferentes apresentações da doença. Salvador

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-04-24T19:50:20Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Maria Teixeira.pdf: 2708323 bytes, checksum: 1ed381eedc13288f43ff7b4dbfeb7222 (MD5) Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-04-25T16:46:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Maria Teixeira.pdf: 2708323 bytes, checksum: 1ed381eedc13288f43ff7b4dbfeb7222 (MD5) Made available in DSpace on 2013-04-25T16:46:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Maria Teixeira.pdf: 2708323 bytes, checksum: 1ed381eedc13288f43ff7b4dbfeb7222 (MD5) CNPq, CAPES, PROCAD – 0018/01-5, FAPESB Dois artigos científicos resumem o presente estudo. No primeiro, é mostrado que duas cepas de L. braziliensis, isoladas de pacientes de diferentes Estados (Ceará e Bahia), são geneticamente diferentes e apresentam processos patológicos distintos em camundongos BALB/c. No segundo trabalho é demonstrada uma correlação entre padrões de expressão de quimiocinas, induzidas por estas duas cepas de L braziliensis, com a formação de lesão e a atração de leucócitos para o sítio inflamatório. O terceiro trabalho é uma revisão sobre o papel das quimiocinas e receptores de quimiocinas nas interações parasito-hospedeiro em leishmaniose. Em particular, a revisão focaliza os estudos que contribuíram para a compreensão sobre quimiocinas na infecção por leishmania. Os principais achados desses estudos são: 1. A L. braziliensis H3227 do Ceará apresentou genótipo diferente da L. braziliensis BA788 da Bahia, demonstrado por RAPD. 2. A cepa H3227 levou ao desenvolvimento de lesões pequenas que se resolveram, enquanto BA788 não causou lesões em camundongos BALB/c. 3. Em ambos os grupos de camundongos, a carga parasitária não diferiu significativamente no sítio de infecção e começou a reduzir com 30 dias de infecção. Nos linfonodos drenantes, entretanto, o número de parasitos aumentou durante o decorrer do estudo. 4. Após a inoculação do parasito, a cepa BA788 pareceu ativar mais precocemente uma reposta mais intensa tipo Th1. Camundongos infectados com BA788 produziram níveis mais altos de IFN-γ, o que se correlacionou com um maior número de células NK nas lesões destes animais. 5. Numa fase mais tardia, camundongos infectados com H3227 produziram mais IL-12p70 e IL-10 no sobrenadante de células recuperadas dos linfonodos. Esta regulação da produção de IL-10 coincidiu com o pico máximo do desenvolvimento da lesão e da carga parasitária nestes animais. 6. As maiores lesões causadas por H3227, em camundongos BALB/c, foi diretamente correlacionada com o aumento progressivo da reação inflamatória, mas não com a carga parasitária. 7. A expressão mais precoce e intensa das quimiocinas CCL2/MCP-1, CCL3/MIP-1α, CXCL1/KC, CCL11/eotaxina, XCL1/linfotactina e dos seus respectivos receptores correlacionou-se com o maior influxo de leucócitos para as lesões induzidas por H3227 e com o aumento do processo inflamatório observado nos camundongos infectados com esta cepa, após 15 dias de infecção. 8. As diferenças observadas no processo inflamatório estavam correlacionadas com a virulência do parasito, uma vez que a cepa mais patogênica H3227 mostrou-se um recrutador mais potente de todas as células observadas no sistema do bolsão inflamatório, do que a menos patogênica BA788. Em conclusão, os achados apresentados aqui indicam que duas cepas de L. braziliensis geneticamente diferentes, embora apresentem carga parasitária semelhante no sítio de inoculação, podem estabelecer processos patológicos distintos e induzir expressão de quimiocinas em diferentes tempos e/ou intensidades, levando ao recrutamento diverso de células e respostas inflamatórias diferenciadas que poderiam finalmente estar envolvidas em diferentes apresentações da doença. Salvador

Texto completo: acesso restrito. p. 1191-1195 Submitted by Edileide Reis (leyde-landy@hotmail.com) on 2013-11-29T13:00:24Z No. of bitstreams: 1 Maria Jania Teixeira.pdf: 436416 bytes, checksum: ec46d1b7dfbebdaf366f2f02c703c58c (MD5) Approved for entry into archive by Flávia Ferreira (flaviaccf@yahoo.com.br) on 2014-11-24T15:37:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Maria Jania Teixeira.pdf: 436416 bytes, checksum: ec46d1b7dfbebdaf366f2f02c703c58c (MD5) Made available in DSpace on 2014-11-24T15:37:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Jania Teixeira.pdf: 436416 bytes, checksum: ec46d1b7dfbebdaf366f2f02c703c58c (MD5) Previous issue date: 2005 Inflammatory events during Leishmania braziliensis infection in mice were investigated. Large lesions were directly correlated with the inflammatory reaction but not with parasite burden. Different L. braziliensis strains induce different paces of chemokine expression patterns, leading to diverse cell recruitment and differential inflammatory responses.

Texto completo: acesso restrito.p.8346-8353 Submitted by Edileide Reis (leyde-landy@hotmail.com) on 2013-09-09T15:49:13Z No. of bitstreams: 1 8346.full.pdf: 855486 bytes, checksum: 1c7d51f5819eb413b86382dd03c13a0b (MD5) Approved for entry into archive by Rodrigo Meirelles (rodrigomei@ufba.br) on 2013-11-01T19:26:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 8346.full.pdf: 855486 bytes, checksum: 1c7d51f5819eb413b86382dd03c13a0b (MD5) Made available in DSpace on 2013-11-01T19:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 8346.full.pdf: 855486 bytes, checksum: 1c7d51f5819eb413b86382dd03c13a0b (MD5) Previous issue date: 2005 Saliva of bloodfeeding arthropods has been incriminated in facilitating the establishment of parasite in their host. We report on the leukocyte chemoattractive effect of salivary gland homogenate (SGH) from Lutzomyia longipalpis on saliva-induced inflammation in an air pouch model. SGH (0.5 pair/animal) was inoculated in the air pouch formed in the back of BALB/c or C57BL/6 mice. L. longipalpis SGH induced a significant influx of macrophages in BALB/c but not in C57BL/6 mice. SGH-induced cell recruitment reached a peak at 12 h after inoculation and was higher than that induced by the LPS control. This differential cell recruitment in BALB/c mice was directly correlated to an increase in CCL2/MCP-1 expression in the air pouch lining tissue. In fact, treatment with bindarit, an inhibitor of CCL2/MCP-1 synthesis, and also with a specific anti-MCP-1 mAb resulted in drastic reduction of macrophage recruitment and inhibition of CCL2/MCP-1 expression in the lining tissue. CCL2/MCP-1 production was also seen in vitro when J774 murine macrophages were exposed to L. longipalpis SGH. The SGH effect was abrogated by preincubation with serum containing anti-SGH IgG Abs as well as in mice previously sensitized with L. longipalpis bites. Interestingly, the combination of SGH with Leishmania chagasi induced an increased recruitment of neutrophils and macrophages when compared with L. chagasi alone. Taken together these results suggest that SGH not only induces the recruitment of a greater number of macrophages by enhancing CCL2/MCP-1 production but also synergizes with L. chagasi to recruit more inflammatory cells to the site of inoculation.

p. 977-984 Submitted by JURANDI DE SOUZA SILVA (jssufba@hotmail.com) on 2012-11-08T18:46:05Z No. of bitstreams: 1 1-s2.0-S1286457904001856-main.pdf: 320965 bytes, checksum: aef854a2cfd36c43568ef089a238616a (MD5) Made available in DSpace on 2012-11-08T18:46:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1-s2.0-S1286457904001856-main.pdf: 320965 bytes, checksum: aef854a2cfd36c43568ef089a238616a (MD5) Previous issue date: 2004 Leishmania braziliensis is the species responsible for the majority of cases of human cutaneous leishmaniasis in Brazil. In the present study, L. braziliensis isolates from two different geographic areas in Brazil were studied by RAPD, using arbitrary primers.We also evaluated other biological features of these two isolates. We compared (a) the clinical features they initiate or not once delivered subcutaneously as stationary-phase promastigotes in the footpad of BALB/c mice; (b) the parasite load in both the footpad and the draining lymph node; (c) the cytokines present in the supernatant of cultures of the cell suspensions from the draining lymph nodes; and (d) the cell types present at the site of parasite delivery. The results show that the L. braziliensis strain from Ceará (H3227) is genotypically different from the L. braziliensis strain from Bahia (BA788). H3227-parasitized mice developed detectable lesions, whereas BA788-parasitized mice did not. Fifteen days post parasite inoculation there was an increase in the numbers of macrophages and lymphocytes in the footpads, whatever the parasite inoculum. Parasite load at the inoculation site—namely the footpad—did not differ significantly; in draining lymph nodes, however, it increased over the period under study. Early after parasite inoculation, the cells recovered from the draining lymph nodes of BA788-parasitized mice produced higher levels of IFN-c, a feature coupled to a higher number of NK cells. Later, after the parasite inoculation, there was an increased content of IL-12p70 and IL-10 in the supernatant of cells recovered from the lymph nodes of H3227-parasitized mice. This comparative analysis points out that L. braziliensis isolates differing in their genomic profiles do establish different parasitic processes in BALB/c mice.

p. 977-984 Submitted by JURANDI DE SOUZA SILVA (jssufba@hotmail.com) on 2012-11-08T18:46:05Z No. of bitstreams: 1 1-s2.0-S1286457904001856-main.pdf: 320965 bytes, checksum: aef854a2cfd36c43568ef089a238616a (MD5) Made available in DSpace on 2012-11-08T18:46:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1-s2.0-S1286457904001856-main.pdf: 320965 bytes, checksum: aef854a2cfd36c43568ef089a238616a (MD5) Previous issue date: 2004 Leishmania braziliensis is the species responsible for the majority of cases of human cutaneous leishmaniasis in Brazil. In the present study, L. braziliensis isolates from two different geographic areas in Brazil were studied by RAPD, using arbitrary primers.We also evaluated other biological features of these two isolates. We compared (a) the clinical features they initiate or not once delivered subcutaneously as stationary-phase promastigotes in the footpad of BALB/c mice; (b) the parasite load in both the footpad and the draining lymph node; (c) the cytokines present in the supernatant of cultures of the cell suspensions from the draining lymph nodes; and (d) the cell types present at the site of parasite delivery. The results show that the L. braziliensis strain from Ceará (H3227) is genotypically different from the L. braziliensis strain from Bahia (BA788). H3227-parasitized mice developed detectable lesions, whereas BA788-parasitized mice did not. Fifteen days post parasite inoculation there was an increase in the numbers of macrophages and lymphocytes in the footpads, whatever the parasite inoculum. Parasite load at the inoculation site—namely the footpad—did not differ significantly; in draining lymph nodes, however, it increased over the period under study. Early after parasite inoculation, the cells recovered from the draining lymph nodes of BA788-parasitized mice produced higher levels of IFN-c, a feature coupled to a higher number of NK cells. Later, after the parasite inoculation, there was an increased content of IL-12p70 and IL-10 in the supernatant of cells recovered from the lymph nodes of H3227-parasitized mice. This comparative analysis points out that L. braziliensis isolates differing in their genomic profiles do establish different parasitic processes in BALB/c mice.

Antimonials, drugs of choice for the treatment of leishmaniasis, provide good results but have side effects and cases of resistance have been reported. In recent years, there has been an increase in the search for new antiparasitic drugs developed from plants extracts. This study aims to evaluate the leishmanicidal effects, both in vitro and in vivo, of two chemicals isolated from medicinal plants, tymol and lapachol, and compare that effect with the one obtained by antimonials. As well as to compare the results obtained in vitro with the therapeutical response in vivo. These compounds (0,008 to 4,0mg/ml) were evaluated in vitro against intracellular amastigotes of Leishmania (Viannia) braziliensis (LVb), then tested in an animal model (hamster) to confirm the leishmanicidal activity. In vitro, both tymol and lapachol, exhibited an anti-amastigote effect whereas in vivo these substances were not able to stop the development of LVb-induced lesions in the concentrations of 14mg/kg/day/i.m and 300mg/kg/day/p.o, respectively. These results suggest that they might be getting transformed into non-active metabolite(s) or is neutralized, losing their leishmanicidal activity. The antimonials demonstrated efficacy in vitro as well in vivo. But, in spite of presenting a significant anti-amastigote effect in vitro for LVb and apparent clinical cure in vivo, these drugs (60mg/kg/day/i.m) could not completely eradicate the parasites from the tissues of LVb-infected animals. In the histopathological findings disclosed that, lapachol induced a severe lymph node necrosis and apoptosis, although it didn’t reduce the parasitic load in that site. We also found out the spleen and lymph node respond differently to Leishmania infection, since in the spleen an intense withe pulp hypoplasia occurred whereas in the lymph node a remarkable follicular hyperplasia was the rule. LVb-induced tegumentary leishmaniasis in the hamster showed an unresolved pattern of infection, characterized by lymphadenopathy, hepatosplenomegaly, weight loss and absence of granulomas in the lymph node and spleen. Since the substance effects were not similar in the two models studied, in vitro and in vivo, the in vivo model appears to better reflect the therapeutic potencial of the drugs, therefore being more adequate for the screening of new substances for the treatment of leishmaniasis. Os antimoniais, drogas de escolha no tratamento da leishmaniose, apresentam bons resultados, porém com vários efeitos colaterais e registros de resistência. Nos últimos anos, vem ocorrendo um aumento na busca por novas drogas antiparasitárias a partir de extrações de plantas. Este trabalho teve o objetivo de avaliar o efeito leishmanicida in vitro e in vivo, de duas substâncias isoladas de plantas medicinais, timol e lapachol, em relação aos antimoniais. Bem como comparar os resultados obtidos in vitro com a resposta terapêutica in vivo. As drogas, em concentrações que variaram de 0,008 a 4,0mg/ml, foram avaliadas contra amastigotas intracelulares de Leishmania (Viannia) braziliensis (LVb) in vitro e, em seguida, testadas em um modelo animal susceptível (hamster) para confirmar a ação leishmanicida. In vitro, ambos, timol e lapachol, apresentaram efeito anti-amastigota, entretanto, in vivo, não foram capazes de conter o desenvolvimento de lesões por LVb, nas concentrações de 14mg/kg/dia/i.m e 300mg/kg/dia/v.o, respectivamente. Tais resultados sugerem que possam ser convertidas em metabólitos inativos ou neutralizadas, perdendo sua ação leishmanicida. Os antimoniais apresentaram significante efeito anti-amastigota para LVb in vitro, entretanto, in vivo, apesar da aparente cura clínica, estas drogas (60mg/kg/dia) não foram capazes de erradicar os parasitas dos tecidos. Na histopatologia, foi visto que lapachol induziu intensa necrose e apoptose no linfonodo, no entanto, não reduziu a carga parasitária neste sítio. Encontramos ainda que, baço e linfonodo respondem de maneira diferente à infecção por Leishmania, uma vez que no baço ocorreu hipoplasia da polpa branca e no linfonodo, hiperplasia folicular. A leishmaniose tegumentar por LVb, no hamster, apresentou um padrão de infecção não resolutivo, com linfadenopatia, hepatoesplenomegalia, perda de peso e ausência de granulomas no linfonodo e baço. Como a ação das drogas não foi semelhante nos modelos in vitro e in vivo utilizados, o modelo in vivo parece refletir melhor o potencial terapêutico das drogas, sendo, portanto, mais adequado à triagem de novas substâncias para o tratamento da leishmaniose.

O programa de controle do calazar, adotado pela Fundação Nacional de Saúde (FNS), não tem conseguido reduzir a níveis aceitáveis a incidência de calazar humano. Utiliza como método diagnóstico a imunofluorescência de eluato de sangue e sacrifíca os cães infectados com uma média de 80 dias após a coleta. A longa permanência do cão infectado na área e a baixa sensibilidade do teste utilizado podem ser importantes para esta falha. Neste trabalho, compara-se o programa de rotina da FNS, com outra estratégia baseada na identificação de cães infectados pelo enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) e eliminação dos cães infectados dentro de um prazo máximo de 7 dias. A prevalência do calazar canino foi medida nas duas áreas, antes e 10 meses após a medição inicial. Na área submetida ao controle de rotina da FNS observou-se um decréscimo de 9% na prevalência, enquanto na submetida ao método proposto a redução observada foi de 27%, sendo esta diferença sinificativamente maior (p = 0,0015). The kala-azar control program, adopted by the Fundação Nacional de Saúde- FNS (National Health Foundation) has not been able to reduce to an acceptable level the incidence of human cases. The diagnostic method utilized is a blood eluate immunofluorescence. A dogs diagnosed as infected is eliminated a mean of eighty days after the blood collection. The low sensitivity of the test used and the continuing residence of the infected dog in the region due to the elimination delay may be critical in the lack of success of this program. In this study, the FNS standard canine control method is compared to a strategy based on ELISA identification of infected dog and elimination within 7 days. In both study areas the canine seroprevalence was noted ten months before and ten months after the intervention. In the routine FNS area a 9% decrease in seroprevalence was noted, compared to statistically significant greater 27%, reduction (p = 0.0015) in the ELISA intervention area.

The actual pharmacotherapy for the treatment of leishmaniasis has serious side effects, as well as cases of drug resistance. Species such as Amburana cearensis A.C. Smith (cumaru), a caatinga tree, whose extract and / or molecules have shown antiinflammatory, antioxidant, antiparasitic properties can be a potential source for new treatments. The present study evaluated the leishmanicidal effect in vitro and in vivo of secondary metabolites isolated from A. cearensis in infection by L. braziliensis. The dry extract (spray dryer) standard HPLC-PDA (markers / CM: 48.573 ± 0.2674 mg / g and AMB: 15.118 ± 1.1181 mg / g), phenolic fraction of A. cearensis (ESAC and FFAC, respectively) and chemical constituents - coumarin (CUM), amburoside A (AMB), vanillic acid (AV) were added to the suspension of promastigotes for up to 48 hours, and the antipromastigote effect was measured by microscopic analysis with Trypan Blue. To evaluate the effect against amastigote forms Raw 264.7 macrophage infected with L. braziliensis was treated or not with CUM (10, 25,50,10 μg / mL). The cytotoxicity of the drugs was evaluated by the MTT assay, parasitic load and cytokine dosage after 24 and 48 hours of infection. For in vivo tests, lesion development and parasitic load (lesion and lymph node-LN) were evaluated, for which Hamsters (Mesocricetus auratus; n=24) were infected with 107 promastigotes of L. braziliensis in the ear. After the appearance of the lesions, animals were treated Antimony or CUM. All estudied metabolites showed anti-promastigote effect after 48h of incubation, however the CUM, showed better inhibition after 24h of incubation with reduction (100ug / mL: 57.3% ± 3.54%). The effect of CUM was not related to cytotoxicity. CUM (100ug / mL) reduced the intracellular parasitic load in 24 and 48h of incubation (maximum reduction: 49% ± 2.517%) accompanied by an increase in NO production (100ug / mL / 48h: 114, 2 µmol / L). There was an increase in TNFα and IL-10, levels and a decrease in the production of IL-4. Regarding the vivo experiments, CUM administered orally reduced the thickness of the lesion, the parasitic load at the lesion site and prevented the spread of the disease to the lymph node, compared to the untreated control. In view of the results obtained, CUM showed a promising leishmanicidal effect in animals infected with L. braziliensis, being capable to induce the control of the lesion, suggesting that this may occur due to the decrease in the parasitic load as well as a modulation of the immune response with induction of a Th1 response profile (increased TNF-α and IL-12) and increased antiinflammatory cytokines (IL-10), thus providing a favorable microenvironment for the control of intracellular parasitemia in macrophages infected with L. braziliensis. A farmacoterapia atual para o tratamento da leishmaniose apresenta efeitos colaterais graves, como também, resistência aos fármacos. Espécies como Amburana cearensis A.C. Smith (cumaru) uma árvore da caatinga, cujo extrato e/ou moléculas têm mostrado propriedades anti-inflamatória, antioxidante e antiparasitária podendo apresentar-se como fonte em potencial para novos tratamentos. Diante do exposto, no presente estudo avaliou-se o efeito leishmanicida in vitro e in vivo de metabólitos secundários isolados da A. cearensis na infecção por L. braziliensis. Para tanto o extrato seco (spray dryer) padronizado por CLAE-DAD-PDA (marcadores/ AV: 1,613 mg/g, AMB: 48,573 mg/g, CUM: 15,118 mg/g) fração fenólica de A. cearensis (ESAC e FFAC, respectivamente) e constituintes químicos - cumarina (CUM), amburosídeo A (AMB), ácido vanílico (AV) foram adicionados à suspensão de promastigotas por até 48h, e mensurado o efeito antipromastigota pela análise microscópica com Trypan Blue. Para avaliar o efeito contra as formas amastigotas, foram utilizados macrófagos Raw 264.7 infectados com L. braziliensis e tratados ou não com CUM (10, 25,50,10 g/mL). Foi avaliado a citotoxicidade dos fármacos pelo ensaio de MTT, carga parasitária e dosagem de citocinas após 24 e 48h de infecção. Para ensaios in vivo foram avaliados a espessura da lesão e carga parasitária (lesão e linfonodo drenanteLN), para isso Hamsters (Mesocricetus auratus; n=24) foram infectados com 107 promastigotas de L. braziliensis na orelha. Após o aparecimento das lesões, os animais foram tratados com Antimônio ou CUM. Embora todos os metabólitos avaliados tenham apresentado efeito anti-promastigota após 48h de incubação, a CUM e o ESAC, demonstraram melhor inibição na redução dos parasitos (100ug/mL: 57,3% ± 3,54%; 40,44 ± 3,97 %) respectivamente. A CUM não apresentou citotoxicidade, no entanto o ESAC apresentou-se tóxico e por isso apenas a CUM foi eleita para continuidade dos experimentos. Contra as formas amastigotas, a CUM (100µg/mL) reduziu a carga parasitária intracelular em 24 e 48h de incubação (redução máxima: 49% ± 2,517%) acompanhada por um aumento na produção de NO (100ug/mL/48h: 114,2 µmol/L). Observou-se aumento dos níveis de TNFα e IL-10 e diminuição da produção de IL-4. Nos experimentos in vivo, CUM administrado via oral reduziu a espessura da lesão, a carga parasitária no sítio da lesão e protegeu a disseminação da doença para o linfonodo, comparados ao controle não tratado. Diante dos resultados obtidos, a CUM mostrou um efeito leishmanicida promissor em animais infectados com L. braziliensis, sendo capaz de induzir o controle da lesão, sugerindo que isso possa ocorrer em função da diminuição da carga parasitária bem como uma modulação da resposta imune com indução de um perfil de resposta Th1 (aumento de TNF-α e IL-12) e aumento de citocinas anti-inflamatória (IL10), proporcionando assim um microambiente favorável para o controle da parasitemia intracelular em macrófagos infectados por L. braziliensis

Leishmania braziliensis is the main causative agent of cutaneous leishmaniasis in Brazil and despite its importance for public health, there is a lack of an experimental model that can be used for testing new therapies and vaccines. The aim of this study was to investigate the influence of parasite burden and the inoculation site in the immunopathogenesis of cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania braziliensis in hamsters using ear dermis infection model. Groups of animals (n = 48) were infected intradermally in the ear (n = 24) or paw (n = 24) with 105 promastigotes of L. braziliensis. Afterwards, other groups of animals (n=32) were infected intradermally in the ear with 105 (n=16) or 106 (n=16) promastigotes. The lesions were measured every 5 days for 60 days. The animals were euthanized at 30, 45 and 60 d.p.i., and had their infected ears and paws, as well as lymph nodes (retromaxilar or popliteal), livers and spleens collected for evaluation of parasite burden and expression of inflammatory mediators, and analysis of histopathological changes. The lesions arose at 20 d.p.i. both paw and ear. The ear lesions ulcerated and were bigger (p< 0.0001) in contrast to paw lesions that presented themselves as small nodules without ulcers. It was observed significant parasitic burden in the ear after 30, 40 and 60 d.p.i. at the lesion and in the lymph node, with parasite burden being always bigger at the lesion. Regardless of the route of inoculation, neither liver and spleen were enlarged nor had lumps or parasites. In the retromaxillary lymph node, it was observed a greater expression of inflammatory cytokines IFN- ɣ, TNF- α and IL -6 and the enzyme arginase, 30 and 60 d.p.i., and it was corroborated by histological changes observed in the ear, intenser inflammatory process and chronicity of the disease. On the contrary, the popliteal lymph node (paw) presented a combination of pro and anti-inflammatory cytokines indicating a precocious regulation of immune and inflammatory response. It was also observed that the bigger the inoculum, the more intense the inflammatory response and bigger the lesions, however, without parasite dissemination to the liver and spleen, indicating lesser systemic commitment and increased survival time of the animal. In short, the data indicates that the inoculum of 105 parasites through the ear dermis infection model could make easier the visualization of a possible protective effect of new drugs or vaccine candidates. Leishmania braziliensis é o principal agente causador de leishmaniose cutânea no Brasil, e apesar de sua importância para a Saúde Pública, há carência de um modelo experimental que possa ser usado para testar novas terapias e vacinas. O objetivo deste estudo foi investigar a influência da carga parasitária e do sítio de inoculação na imunopatogênese da leishmaniose cutânea causada por Leishmania braziliensis em hamster no modelo de infecção na derme da orelha. Grupos de animais (n=48) foram infectados por via intradérmica, na orelha (n=24) ou na pata (n=24), com 105 promastigotas de L. braziliensis. Em seguida, outros grupos de animais (n=32) foram infectados por via intradérmica na orelha, com 105 (n=16) ou 106 (n=16) promastigotas. As lesões foram medidas a cada 5 dias por 60 dias. Os animais foram eutanasiados com 30, 45 e 60d.p.i, e coletados a orelha e pata infectada, linfonodos (retromaxilar ou poplíteo), fígado e baço, para a avaliação da carga parasitária, expressão de mediadores inflamatórios e análise das alterações histopatológicas. As lesões surgiram com 20d.p.i., tanto na pata como na orelha. As lesões na orelha ulceraram e foram maiores (p

Leishmania braziliensis from antimony-resistant patient is able to induce high levels of IL-4 and Arginase in mice, contributing to the increased virulence of the strain and the severity of the disease. CXCL10 is a chemokine that recruits and activates Th1 cells, NK, macrophages, dendritic cells and lymphocytes B. The objective of this study was to evaluate in vivo the effect of CXCL10 in the infection by strain of L. braziliensis refractory to treatment with antimony. BALB/c mice (n=64) were infected intradermally in the right ear 107 promastigotes (20 µl), and after appearance of lesions (5ª week), the animals were divided into four groups (16/group): 1. Control untreated; 2.Glucantime (100mg/kg/day, I.M.); 3.CXCL10 (100 ng/10μL, I.M.); 4.Glucantime+CXCL10 (100ng/10µL+100mg/kg/day, I.M.). The animals were treated for 7 days, followed by weekly measurements of lesions, and were euthanized in the first and fourth week post-treatment (w.p.t) for the evaluation of some parameters: parasite burden (lesions, and draining lymph node-LN), production of the cytokines IFN-γ, IL-4, IL-10 and TGF-β (LN) and histological changes (lesions). The results showed CXCL10 and Glucantime induced, early as the first s.p.t., non-ulcerated lesions that regressed significantly (0.35 ± 0.07, 0.047 ± 0.27, p

Chemotherapy available for leishmaniasis is effective in many cases, however is still not satisfactory, presenting several inconveniences, one of them, resistance to antimony, which is a major current problems. Few studies using treatment with recombinant chemokines for leishmaniasis have been reported. The objective of this study was to evaluate the immunomodulatory effect in vitro of CXCL10 and its association with Glucantime for the infection of macrophages by Leishmania braziliensis strain refractory to treatment with antimony. For this, murine macrophages were infected with L. braziliensis and treated or not with CXCL10 (25, 50 e 100ng/mL), Glucantime (32mg/mL), and CXCL10+Glucantime [(25, 50 e 100ng/mL) + (32mg/mL)]. After 24 and 48h of infection were evaluated: parasitic load (macrophages infected count on coverslips stained), nitric oxide concentration (NO) and the pattern of the cytokines TNF-α, IL-12, IL-4, IL-10, and TGF-β in the culture supernatant. The results showed that the treatment with CXCL10 and CXCL10+Glucantime combination resulted in a significant reduction of the parasitic load, ranging from 70.5% to 95% and 92.4% and 95.0%, respectively, compared with the control untreated, while treatment with Glucantime decreased infection of macrophages to 74.0%. The reduction of the parasitic load was correlated with the increase of NO in all concentrations of CXCL10 (p

Leishmania braziliensis is the main causative agent of American cutaneous leishmaniasis in Brazil. Altough L. braziliensis infection is self-limited it is distinguished by its latency and chronicity and can persist in mice and patients even after spontaneous clinical cure or treatment. Little is known about the persistence feature in L. braziliensis’ infection in humans and mice. Thereby, the aim of this study was to characterize the parasite’s persistence in the murine model. The parasite load, lesion thickness and pattern of cytokines and chemokines involved in persistence were evaluated through BALB/c mice infection with a L. braziliensis strain and observation for 90 days after infection. The results showed that parasites gradually disappear in the footpad, while the parasite load was sustained in the draining lymph node until 90 days post-infection (p.i). In the footpad, TNF-α expression was higher at 30 days p.i, followed by the decrease in parasite load and lesion thickness in the site. IL-10 and TGF-β were more expressed at first and decreased after 30 days of infection. A higher concentration of TNF-α and IFN-γ was observed at 15 and 30 days post-infection in the draining lymph node, while IL-4 was significantly increased at 15 days post-infection, and IL-10 and TGF-β were the predominant cytokines after 90 days of infection. CCL2, CCL3, CXCL1 e CXCL10 were expressed in the footpad, with a peak at 30 days p.i. and reduction at 60 days. In the draining lymph node, CCL2 and CXCL10 presented a low expression at first, increasing to a peak at 45 days p.i., while CCL3 was more expressed at 30 days p.i., the same period of the maximum lesion thickness. In our work, we observed that Leishmania persists in draining lymph nodes, while CCL2, CXCL10, IL-10 and TGF- are significantly expressed/produced. These results indicate that these citokynes act synergistically, which can determinate parasite persistence in the draining lymph node. A infecção por Leishmania braziliensis se distingue por sua latência e cronicidade, podendo persistir em camundongos e nos pacientes após a cura clínica espontânea ou após o tratamento. A persistência da infecção por L. braziliensis ainda tem sido pouco estudada, seja em humanos, seja em modelos experimentais. O objetivo deste trabalho, portanto, foi caracterizar a persistência da infecção por L. braziliensis utilizando o modelo murino. Foram avaliados em diferentes tempos a espessura da lesão, a carga parasitária e o padrão de citocinas e quimiocinas envolvidas no processo. Para isso, camundongos BALB/c foram infectados com uma cepa de L. braziliensis e acompanhados por 90 dias. Os resultados mostraram que os parasitos desapareceram gradativamente da pata, enquanto nos linfonodos a carga parasitária se manteve, mesmo 90 dias pós-infecção (p.i.). Houve pouca expressão de IFN-γ nas patas durante os períodos analisados, enquanto a expressão de TNF-α apresentou-se alta aos 30 dias de infecção. IL-10 e TGF-β apresentaram maior expressão inicialmente e regrediram a partir de 30 dias p.i. Quanto às quimiocinas, observou-se expressão de CCL2, CCL3, CXCL1 e CXCL10 nas patas; aos 30 dias todas as quimiocinas apresentaram máxima expressão, e diminuíram no 60o dia p.i. Através de detecção por ELISA no linfonodo de drenagem, observou-se um pico de concentração de TNF-α aos 15 dias e de IFN-γ aos 30 dias pós-infecção, o que precedeu a redução na espessura da lesão e diminuição da carga parasitária na pata. IL-4 foi predominante aos 15 dias p.i., tendo sua concentração muito diminuída aos 30 dias; a partir desse período a citocina foi pouco detectada. Já a concentração de IL-10 e TGF-β manteve-se alta e estável, a partir dos 30 dias p.i. Nos linfonodos, a expressão de CCL2 e CXCL10 aumentou gradativamente, atingindo pico aos 45 dias p.i., enquanto a expressão de CCL3 apresentou pico aos 30 dias p.i., regredindo depois. Em conclusão, os parasitos persistem no linfonodo de drenagem em períodos crônicos de infecção, quando CCL2, CXCL10, IL-10 e TGF- continuam sendo expressos/produzidos em quantidade. O quadro observado sugere um equilíbrio entre essas citocinas, o que pode ser determinante para a persistência do parasito no linfonodo.

Leishmania braziliensis is the more common etiologic agent of the cutaneous leishmaniasis in Brazil. BALB/c mice are more susceptible to L. braziliensis infection, although develop small and not ulcerated lesions. The lesions in BALB/c mice infected by L. braziliensis are accompanied by expression of a broad chemokines spectrum, including CXCL10, which is able to attract and activate NK and Th1 cells with IFN-γ production. The aim of this study was to evaluate whether the chemokine CXCL10, administered in early stages of infection could influence the course of disease, leading to a faster and more effective time of healing. Groups of BALB/c mice (n=24) were infected by L. braziliensis and divided into two groups: one group (n=12) received CXCL10 (100 ng/5μL) and the other (n=12) received PBS (5μL), at 1, 3, 5 and 7 days postinfection. Some parameters were evaluated: thickness of the lesions every three days; parasite burden in both the footpad and the draining lymph node, NO concentration, cytokines production (IFN-γ, IL-12p40, TNF-α, IL-4, IL-10 and TGF-β), at 15 and 30 days after infection; and histopathological analysis of lesions. Animals receiving CXCL10 showed reduced disease duration, since the lesions started to regress earlier (12 days), whereas the control animals developed the disease for longer (15 days). CXCL10 induced statistically significant differences in parasite load in the draining lymph nodes compared with control in both times evaluated (15 days: p=0.0353; 30 days: p=0.0292). In the animals receiving CXCL10 was not observed change in the number of parasites in the site of inoculation, even with reduced thickness of the lesion, showing no correlation between lesion size and parasite load. There was no difference in NO concentration between groups with 15 days of infection, and this concentration remained the same in the group receiving CXCL10 at day 30, although it was lower than that observed in the control group. CXCL10 also induced higher levels of IFN-γ and IL-12, and reduced IL-4, IL-10, and TGF-β at 30 days postinfection, when compared to control animals. Histopathology analyses of lesions after 15 days postinfection showed a very mild inflammation in both groups, differing only for the presence of neutrophils, which were practically not observed in lesions of animals receiving CXCL10. Taken together, the data from this study showed CXCL10 chemokine presented a protective effect on L. braziliensis infection in BALB/c mice, with a reduction in the progression of the disease, associated with a higher concentration of IFN-γ and lesser of IL-4 and IL-10. Leishmania braziliensis é o agente etiológico mais comum da leishmaniose cutânea no Brasil. Camundongos BALB/c são os mais susceptíveis à infecção por L. braziliensis, embora desenvolvam lesões pequenas e não ulceradas. As lesões em BALB/c infectados com L. braziliensis são acompanhadas pela expressão de um amplo espectro de quimiocinas, entre elas CXCL10, que é capaz de atrair a ativar células NK e Th1 com produção de IFN-γ. O objetivo deste trabalho foi avaliar se a quimiocina CXCL10, administrada nos estágios iniciais da infecção, poderia alterar o curso da doença, dimunindo o tempo de cura. Para isso, camundongos BALB/c (n=24) foram infectados com L. braziliensis e divididos em dois grupos: um grupo (n=12) recebeu CXCL10 (100 ng/5µL) e o outro (n=12) PBS (5µL), nos dias 1, 3, 5 e 7 dias de infecção. Alguns parâmetros foram avaliados: a espessura das lesões a cada três dias; a carga parasitária na pata e no linfonodo de drenagem, a concentração de NO, IFN-γ, IL-12p40, TNF-α, IL-4, IL-10 e TGF-β, 15 e 30 dias após a infecção; e análise histopatológica das lesões. Os animais que receberam CXCL10 apresentaram uma redução no tempo de duração da doença, uma vez que as lesões começaram a regredir mais precocemente (12 dias), enquanto que nos animais controle (PBS) a doença evoluiu por mais tempo (15 dias). CXCL10 induziu diferenças estatisticamente significativas na carga parasitária do linfonodo de drenagem nos dois pontos avaliados, quando comparado com o controle (15 dias: p=0,0353; 30 dias: p=0,0292). Nos animais que receberam CXCL10, não foi observada mudança no número de parasitos no sítio de inoculação, mesmo com redução da espessura da lesão, mostrando que não houve correlação entre o tamanho da lesão e a carga parasitária. Não houve diferença na concentração de NO entre os grupos, no 15º dia de infecção, e esta concentração manteve-se igual no grupo que recebeu CXCL10 no 30º dia, embora tenha sido menor do que a observada no grupo controle. CXCL10 também induziu concentrações mais elevadas de IFN-γ e IL-12 e mais reduzidas de IL-4, IL-10, TGF-β 30 dias pós-infecção, quando comparados aos animais controle. A análise histopatológica das patas mostrou uma inflamação muito leve em ambos os grupos, com diferença apenas quanto à ausência de neutrófilos nas lesões dos animais que receberam CXCL10. Em conjunto, os dados mostraram que CXCL10 apresentou um efeito protetor na infecção por L. braziliensis em camundongos BALB/c, com redução no tempo de evolução da doença, associada a maior concentração de IFN-γ e menor de IL-4 e IL-10.

A doença de Chagas é causada pelo parasito intracelular Trypanosoma cruzi e afeta em torno de 17 milhões de pessoas na América Latina. A fase crônica da doença caracteriza-se por baixo nível de parasitemia e alto nível de anticorpos Anti-T.cruzi e o diagnóstico é feito preferencialmente utilizando-se métodos sorológicos, incluindo imunofluorescência indireta (IFI), hemaglutinação indireta (HAI) e imunoensaio enzimático (ELISA). São testes que apresentam alta sensibilidade, mas sofrem de baixa especificidade, e um variável número de indivíduos apresenta testes sorológicos inconclusivos. Nos últimos anos, muitos estudos têm usado a tecnologia da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para detectar sequências de DNA de T. cruzi em sangue de pacientes chagásicos crônicos. A alta especificidade da PCR tem apontado para sua aplicação como método confirmatório no diagnóstico de pacientes com provas sorológicas inconclusivas. O objetivo desse trabalho foi realizar uma análise comparativa entre a PCR e os métodos convencionais mais utilizados para o diagnóstico - sorologia e xenodiagnóstico, na detecção da infecção por T. cruzi, em indivíduos com doença de Chagas crônica. Sangue de 67 pacientes chagásicos crônicos, ambos os sexos, provenientes do ambulatório de doença de Chagas do Hospital Universitário Walter Cantídio, da Universidade Federal do Ceará, foram avaliados para T. cruzi, utilizando testes sorológicos (IFI, HAI e ELISA), PCR-Multiplex e xenodiagnóstico. Além disso, foi avaliado também a PCR-Multiplex em dejetos de triatomíneos provenientes do xenodiagnóstico destes pacientes. De acordo com o resultado dos testes sorológicos, os pacientes foram classificados em 3 grupos: 1°. Sorologia positiva (quando 2 ou 3 resultados dentre os 3 testes sorológicos foram positivos), 2°. Sorologia inconclusiva ou indeterminado (apenas 2 resultados foram negativos) e 3°. Sorologia negativa (quando os 3 resultados foram negativos). Dentre as 59 amostras com sorologia positiva foram obtidos 18 (30,5%) resultados positivos de PCR-Multiplex em sangue periférico e 41 (69,5%) resultados negativos. Nos PCR-Multiplex em dejetos de triatomíneos foram obtidos 20 (33,9%) resultados positivos e 39 (66,1%) resultados negativos. As 2 amostras com sorologia inconclusiva foram negativas na PCR-Multiplex, tanto em sangue periférico como em dejetos de triatomíneos. As amostras com sorologia negativa (n=6) apresentaram 2 resultados positivos (33,3%) na PCR-Multiplex em sangue e 4 resultados negativos (66,7%). Nos dejetos de triatomíneos, as 6 amostras com sorologia negativa foram negativas na PCR-Multiplex. Estes resultados mostraram que o ensaio da PCR-Multiplex em amostras de sangue periférico e em dejetos de triatomíneos, empregando iniciadores para regiões diferentes, no caso, DNA nuclear e DNA do cinetoplasto, podem ser aplicados para o diagnóstico da doença de Chagas crônica (mesmo com diferentes metodologias de extração de DNA total). Os dados mostraram também que a PCR-Multiplex em dejetos de triatomíneos é mais sensível que o ensaio do xenodiagnóstico.

Visceral leishmaniasis caused by Leishmania infantum chagasi is characterized by the loss of the ability of host to generate an effective immune response. In this study it was investigated the role of CXCL10 chemokine in controlling L. infantum chagasi infection in vivo. Groups of BALB/c mice were treated or not with recombinant CXCL10 chemokine (5 μg/kg) with 1, 3 and 7 days of infection and after 1, 7 and 23 days of treatment, some parameters were evaluated: parasite load, levels of IFN-g, IL-4, TGF-β and IL-10, and the histopathological alterations in the liver. After 23 days of treatment, CXCL10 induced in the spleen a significant reduction on the number of parasites as compared to control group. In the liver, parasite load decreased in treated group between the 7th and 23th day post treatment. However, the antileishmanial effect of CXCL10, in this work, does not seem to be mediated by NO, since there was no difference in the NO production among the groups. IFN-γ was induced most significantly in treated group than in controls, and reached its maximum production (100 pg/mL) on day 23 after treatment, correlating with the reduction in parasite burden in target organs. IL-4 was produced in low doses, in both groups, although treated animals had shown higher levels than control group. Regarding to anti-inflammatory cytokines, after the 23th day of treatment, IL-10 levels in treated animals were smaller than in control group. Production of TGF-β after 7 days of treatment was 2 times lower in treated group when compared to control, and after the 23th day of treatment, this cytokine remained with lower levels than those observed in control. In the histopathological analysis of the liver after the 1st day of treatment, were found in both groups more immature granulomas (GI) than non-granulomatous infiltrate (NG), and some few mature granulomas (GM) were only observed in treated group. After 7 days of treatment, the amount of NG infiltrates was lower, and GI were still the most frequent in both groups, besides a slight increase of GM was observed in treated group. In summary, at the light of the found results, it is possible to suggest an important leishmanicidal role to CXCL10 in BALB/c mice infected by L. infantum chagasi, which seems to be mediated by a significant IFN-g production, and suppression of immunoregulatory cytokines, IL-10 and TGF-β, opening the hypothesis that this would be associated to a decrease in the frequency of regulatory T cells induced by CXCL10 in these animals. A leishmaniose visceral causada por Leishmania infantum chagasi é caracterizada pela perda da habilidade do hospedeiro gerar uma resposta imunológica eficaz. Neste estudo, foi investigado o papel da quimiocina CXCL10 no controle da infecção por L. infantum chagasi in vivo. Grupos de camundongos BALB/c foram tratados ou não com CXCL10 (5 μg/kg) com 1, 3 e 7 dias de infecção e após 1, 7 e 23 dias do tratamento, alguns parâmetros foram avaliados: a carga parasitária, os níveis de IFN-, IL-4, TGF-β e IL-10, e as alterações histopatológicas no fígado. Após 23 dias de tratamento, CXCL10 induziu, no baço, uma redução expressiva no número de parasitos, quando comparado ao grupo controle. No fígado, a carga parasitária mostrou uma queda no grupo tratado, entre o 7º e 23º dia após o tratamento. Entretanto, o efeito leishmanicida de CXCL10, neste trabalho, não parece ser mediado por NO, uma vez que não houve diferença na produção de NO entre os grupos. IFN-γ foi induzida de maneira mais significativa no grupo tratado do que nos controles, e atingiu sua produção máxima (100 pg/mL) no 23º dia após o tratamento, correlacionando-se com a queda da carga parasitária nos órgãos-alvo. IL-4 foi produzida em baixas concentrações, em ambos os grupos, embora os animais tratados com CXCL10 tenham mostrado níveis mais elevados do que os controles. Em relação às citocinas antiinflamatórias, após 23 dias do tratamento, os níveis de IL-10 nos animais tratados foram menores do que os do controle. A produção de TGF-β após 7 dias do tratamento foi 2 vezes menor no grupo tratado quando comparado ao controle, e após 23 dias do tratamento, essa citocina continuou com níveis mais baixos do que aqueles observados no controle. Na análise histopatológica do fígado após o 1º dia do tratamento, foram encontrados, em ambos os grupos, mais granulomas imaturos (GI), do que infiltrados não granulomatosos (NG) e alguns poucos granulomas maduros (GM) apenas no grupo tratado. Após 7 dias do tratamento, a quantidade de infiltrados NG estava menor e os GI ainda foram os mais encontrados, em ambos os grupos, além disso, foi observado um pequeno aumento de GM no grupo tratado. Em resumo, diante dos resultados encontrados, é possível sugerir um importante papel leishmanicida de CXCL10 em camundongos BALB/c infectados por L. infantum chagasi, que parece ser mediado por uma expressiva produção de IFN-g e supressão das citocinas imunorreguladoras, IL-10 e TGF-β, abrindo a hipótese se isto não estaria associado a uma diminuição na frequência de células T regulatórias, induzida por CXCL10, nesses animais.

Quando fazem o repasto sanguíneo, fêmeas do flebotomíneo inoculam promastigotas de Leishmania junto com a saliva no lago sanguíneo formado pelo traumatismo da probóscida do inseto, na derme do hospedeiro mamífero. O sistema imunológico do hospedeiro, na tentativa de controlar a infecção, recruta leucócitos para o sítio inflamatório da inoculação. Neste trabalho foi avaliada a cinética e o recrutamento celular induzidos por Leishmania chagasi, principal agente etiológico da leishmaniose visceral nas Américas, e sua associação com a saliva do vetor específico, Lutzomyia longipalpis, além do sangue do próprio hospedeiro, com o objetivo de entender melhor os eventos iniciais da infecção por Leishmania. Foi utilizado o modelo da bolsa de ar subcutânea em hamsters para analisar o recrutamento e o fenótipo das células que migraram para o sítio da inflamação induzida por L. chagasi, associada ou não a sangue do hospedeiro e a saliva do vetor. Foram estudados também os tipos celulares e as alterações histopatológicas observados no tecido da bolsa de ar. Os dados mostraram que L. chagasi, quando inoculada sozinha, foi capaz de recrutar uma população mista de células, entretanto, grande parte destas células não migrou para o exsudato inflamatório, permanecendo no tecido da bolsa de ar. Por outro lado, a associação de L. chagasi com o sangue do hospedeiro e a saliva do vetor resultou na exacerbação da resposta inflamatória, influenciando também o perfil celular recrutado para o sítio de inoculação, indicando que o sangue e a saliva apresentam um efeito sinérgico com a Leishmania na modulação da resposta inflamatória inicial. Os dados sugerem ainda que Leishmania e os componentes sanguíneos do hospedeiro por si só têm potencial para induzir um processo inflamatório que pode favorecer ou não o estabelecimento do parasito, e que a saliva é um fator a mais que, quando acrescentado ao microambiente, pode exacerbar esta resposta inflamatória. Em suma, a associação de L. chagasi com o sangue do hospedeiro e a saliva do vetor induz uma importante resposta inflamatória, caracterizada pela presença de neutrófilos, eosinófilos, macrófagos e linfócitos, sendo os neutrófilos e macrófagos os tipos celulares predominantes. O efeito sinérgico do sangue e da saliva provavelmente facilita a entrada dos parasitos nas células recrutadas e a consequente progressão da doença.

Immunoglobulins, soluble parasite circulating antigens, immune cells, citokines and other cell-related products can be transferred from infected mothers to their young, leading to suppression or stimulation of the immune response to a homologous antigen. Several studies demonstrated an increased susceptibility to leishmania infection in males, however, a relation between gender and susceptibility on the subgenus Viannia is rarely described. The influence of gender and maternal infection to the Leishmania braziliensis response in hamster offspring were evaluated. Thirty-nine hamster offspring of infected mothers and non-infected mothers from both genders, with 04 weeks-old, similar weights and infected with the Leishmania braziliensis strain MHOM/BR/94/H-3227 were analyzed. Studies on footpad lesion size, parasite load on footpad and draining lymph nodes, ELISA and histopathology were conducted. After analyzing the data, we concluded that the male offspring had higher susceptibility to infection by L. braziliensis, regardless if they were born from an infected mother or a non-infected mother, and had presented a more indolent pattern of response than the females. The maternal infection by L. braziliensis in hamsters did not influence the course of the disease in the infection rate of the offspring. The more intense inflammatory response in the offspring born from an infected mother can possibly be correlated to a greater induction of inflammatory molecules, cytokines and chemokines, although this has not been evaluated in this study. A passagem de imunoglobulinas, antígenos parasitários solúveis circulantes, células imunes, citocinas ou outros fatores solúveis através da placenta, podem induzir no feto uma resposta imunológica frente a uma infecção homóloga à materna, resultando em supressão ou em estimulação da resposta imune. Estudos demonstram uma maior susceptibilidade dos machos à infecção por leishmania, porém a relação entre o sexo e a susceptibilidade à leishmaniose no subgênero Viannia raramente é descrita. Foi avaliada a influência do gênero e da infecção materna na resposta à Leishmania braziliensis em filhotes de hamster. Foram utilizados trinta e nove filhotes de hamster de mães infectadas e de mães não-infectadas, de ambos os sexos, com 04 semanas de vida e pesos aproximados, infectados com L. braziliensis (MHOM/BR/94/H-3227). Foram estudados o tamanho da lesão da pata, a carga parasitária em patas e linfonodos de drenagem, ELISA e histopatológico. Após a análise dos dados, concluímos que os filhotes machos apresentaram maior susceptibilidade à infecção por L. braziliensis, independente se nasceram de mãe infectada ou de mãe não infectada, apresentando um padrão de resposta mais indolente do que as fêmeas. A infecção materna por L. braziliensis em hamsters não influenciou o curso da doença na infecção homóloga dos filhotes. A resposta inflamatória mais intensa nos filhotes nascidos de mãe infectada possivelmente pode ser correlacionada a uma maior indução de moléculas inflamatórias, citocinas e quimiocinas, embora isso não tenha sido avaliado no presente trabalho.