Search

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica, causada pelos fungos termo dimórficos Paracoccidioides spp, comum na América Latina. O tratamento da PCM é de longa duração, feito com quimioterápicos que causam efeitos adversos. O objetivo desse trabalho foi reposicionar fármacos mais seguros e com maior eficácia para o tratamento da PCM. Foram utilizados dados de diferentes linhagens de Paracoccidioides spp. Pb01, Pb03 e Pb18. As proteínas ortólogas foram selecionadas a partir da comparação das proteínas dos três isolados, posteriormente, essas proteínas foram comparadas com as proteínas dos bancos de dados DrugBank e Therapeutic Target Database (TTD), visando a identificação de fármacos que tivessem essas proteínas como alvo. O blast P foi realizado para analisar a porcentagem de caracteres similares existente entre as proteínas do fungo com as proteínas dos bancos de fármacos. Em seguida, as proteínas ortólogas foram comparadas com os genes essenciais de Saccharomyces cerevisiae, obtendo, 45 proteínas ortólogas que foram submetidas a modelagem por homologia e ancoragem molecular. Os resultados foram analisados e 17 fármacos selecionados para a validação dos resultados in silico, por intermédio de testes in vitro. Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis, caused by thermally dimorphic fungus Paracoccidioides spp., common in Latin America. PCM treatment is long-term chemotherapeutic approach and causes adverse effects. The study goal was drug repositioning with more efficient and safer PCM treatment. It was used data from different lineages of Paracoccidioides spp., Pb01, Pb03 and Pb18. The orthologous proteins were selected from the protein comparison of three isolates, posteriorly, those proteins were compared with proteins of two drugs databases, DrugBank and Therapeutic Target Database (TTD) aiming to identify drugs that had those proteins as target. The Blast P was performed to analyze the percentage of similar character between fungus proteins with drugs banks proteins. Posteriorly, Paracoccidioides spp. proteins were compared with Saccharomyces cerevisiae essential proteins, getting 45 orthologous proteins that were submitted to homology modeling and molecular docking. The results were analyzed, and 17 compounds were selected to be tested in vitro for in silico results confirmation. Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq

Paracoccidioides spp. são fungos termodimórficos que ao serem inalados pelo ser humano, esses conídios encontram um ambiente propício, mudando para a fase de levedura e tornando-se patogênico causando a paracoccidioidomicose (PCM), umas das micoses sistêmicas de maior prevalência no Brasil. Alguns antifúngicos são empregados no tratamento da PCM. O tratamento depende do avanço da doença e da capacidade de tolerância do paciente a cada medicamento, mas o seu tratamento pode ser por longos períodos e causando diversos efeitos colaterais no paciente. A via do chiquimato é coordenada pela ação de 7 enzimas que realizam passos consecutivos para transformar a eritrose-4-fosfato e fosfoenol piruvato (PEP) em corismato. Em micro-organismos, esta via está envolvida com a produção dos aminoácidos fenilalanina, tirosina e triptofano; estes aminoácidos são essenciais à manutenção desses organismos. Neste trabalho foi realizado a clonagem em vetor pGEX4T3 e expressão heteróloga da EPSP–sintase de Pb18 pertencente à via do chiquimato. Essa proteína foi expressa em linhagem E. coli (DE3) e purificada. Os anticorpos foram produzidos para análise da expressão da proteína em Western blot. A modelagem da EPSP-sintase foi realizada visando identificar os aminoácidos envolvidos no sítio ativo. O ensaio de pull down-GST com proteínas solúveis de Pb18 possibilitou a identificação de 40 proteínas que interagem com EPSP-sintase. Essas proteínas pertencem a diferentes categorias funcionais, as quais estão envolvidas com a disponibilidade de fosfoenol piruvato, substrato necessário para o funcionamento da via do chiquimato. Paracoccidioides spp. are thermodymorphic fungi that when inhaled by humans, these conidia find a favorable environment, changing to the yeast phase and becoming pathogenic causing paracoccidioidomycosis (PCM), one of the most prevalent systemic mycoses in Brazil. Some antifungals are used in the treatment of PCM. Treatment depends on the patient's progression and tolerability of each drug, but their treatment may be for long periods and cause various side effects in the patient. The chiquimate pathway is coordinated by 7 enzymes that perform consecutive steps to convert erythrose-4-phosphate and phosphoenol pyruvate (PEP) into chorismate. In microorganisms, this pathway is involved in the production of the amino acids phenylalanine, tyrosine and tryptophan; These amino acids are essential to the maintenance of these organisms. In this work, pGEX4T3 vector cloning and heterologous expression of Pb18 EPSP synthase belonging to the chiquimate pathway were performed. This protein was expressed in E. coli (DE3) strain and purified. Antibodies were produced for expression analysis of the protein in Western blot. The modeling of EPSP synthase was performed aiming to identify the amino acids involved in the active site. The pull down-GST assay with soluble Pb18 proteins allowed the identification of 40 proteins that interact with EPSP synthase. These proteins belong to different functional categories, which are involved with the availability of phosphoenol pyruvate, the substrate necessary for the functioning of the chiquimate pathway. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES