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Tumors are composed of heterogeneous phenotypes, each having different sensitivities to the microenvironment. One microenvironment characteristic – matrix stiffness – helps to regulate malignant transformation and invasion in mammary tumors, but its influence on oral squamous cell carcinoma (OSCC) is unclear. We observed that, on stiff matrices, a highly invasive OSCC cell line (SCC25) comprising a low E-cad toN-cad ratio (InvH/E:NL; SCC25) had increasedmigration velocity and decreased adhesion strength compared to a less invasive OSCC cell line (Cal27) with high E-cad to N-cad ratio (InvL/E:NH; Cal27). However, InvL/E:NH cells acquire a mesenchymal signature and begin to migrate faster when exposed to prolonged time on a stiff niche, suggesting that cells can be mechanically conditioned.Owing to increased focal adhesion assembly, InvL/E:NH cells migrated faster, which could be reduced when increasing integrin affinity with high divalent cation concentrations.Mirroring these data in human patients, we observed that collagen organization, an indicator of matrix stiffness, was increased with advanced disease and correlated with early recurrence. Consistent with epithelial tumors, our data suggest that OSCC cells are mechanically sensitive and that their contribution to tumor progression is mediated in part by this sensitivity.

Tufted angioma (TA) is a benign vascular tumor with endothelial origin. It is extremely rare in oral mucosa; only seven cases have been reported in the literature so far. Here, we describe two cases of tufted angioma observed in children and we also present a review of the literature about this pathology, concerning the differential diagnosis and management of this lesion in children.

Hyperargininemia is a metabolic disorder caused by deficiency of arginase activity resulting in tissue accumulation of arginine and neurological dysfunction. We have previously demonstrated that arginine induces oxidative stress and decreases Na+,K+ -ATPase in rat midbrain. In the present study we investigated the action of vitamins E and C on the inhibition of Na+,K+ -ATPase provoked by arginine in the midbrain of 60-day-old rats. Animals were pretreated for 1 week with daily IP administration of saline (control) or vitamins E (40 mg/kg) and C (100 mg/kg). Twelve h after the last injection, animals received one injection of arginine (0.8 mol/g of body weight) or saline. Chemiluminescence was significantly increased, whereas total antioxidant capacity and Na+,K+ -ATPase activity were significantly decreased. Furthermore, treatment with vitamins E and C prevented these effects. If these effects also occur in the human condition, it is possible that antioxidant administration might slow the progression of neurodegeneration in this disorder.

Achyrocline satureioides (Lam.) DC, popularmente conhecida como “marcela” ou “macela” é amplamente utilizada na medicina popular pelas propriedades digestiva, eupéptica, antidiarreica, anti séptica, anti-inflamatória, para problemas respiratórios e infecções virais. No final de 2019 um novo surto de infecção respiratória aguda grave foi identificado na cidade de Wuhan, na China, espalhando-se rapidamente pelo mundo devido a fácil transmissibilidade, os sintomas podem variar de leves, moderados a graves e incluem febre, tosse, mialgia ou fadiga e, entre outros. Nos casos graves, os pacientes podem apresentar pneumonia, síndrome do desconforto respiratório agudo (SDRA), choque séptico, manifestações cardiovasculares, falência renal e de outros órgãos e evoluir para óbito. O vírus causador foi denominado SARS-CoV-2 e a doença Coronavirus disease 2019 (COVID-19). Nossos objetivos nesta dissertação são avaliar o perfil dos participantes do ensaio clínico aberto randomizado com infusão de inflorescências de Achyrocline satureioides (Lam.) DC e determinar fatores que impactaram na adesão ao estudo. Os participantes do ECR foram recrutados na Unidade Municipal de Triagem (UMT) de Infecções Respiratórias e Suspeita de COVID-19 do município de Igrejinha/RS. Foi realizada a primeira coleta de saliva, “swab” orofaríngeo e sangue, os participantes receberam a intervenção (tomar o respectivo chá duas vezes ao dia por 14 dias) conforme uma lista de randomização. Foram considerados os participantes que aderiram ao ECR aqueles que retornaram para a segunda coleta (recoleta). Foram incluídos 125 pacientes com sintomas de infecção respiratória e suspeita de COVID-19 e, conforme a randomização, 67 pacientes (53,6%) foram incluídos no grupo controle e receberam frutos os secos de maçã (Malus domestica Bork), enquanto 58 pacientes (46,4%), fizeram parte do grupo experimental e receberam as inflorescências de “marcela” ou “macela” (Achyrocline satureioides (Lam.) DC). Após o resultado do teste de RT-PCR para detecção de SARS-CoV-2, 33 pacientes (26,4%) foram alocados em grupo RT-PCR positivo e 92 pacientes (73,6%) no grupo negativo para COVID-19. Foram consideradas diferentes variáveis, idade, sexo, etnia, nível de instrução, renda familiar, tabagismo, comorbidade, alergias e uso de medicamentos contínuos em função da adesão ao ECR. Na análise estatística encontramos diferenças estatisticamente significativas na variável idade (P=0,0013) e a adesão foi maior pelos participantes mais velhos, na variável comorbidades (P=0,0107) em que a adesão foi maior pelos pacientes com alguma comorbidade e, na variável uso de medicamentos contínuos (P=0,0492) que a adesão foi maior pelos pacientes que fazem uso de medicamentos contínuos e, podemos inferir que essas variáveis tendem a ser preditoras de adesão ao ECR. Achyrocline satureioides (Lam.) DC, popularly known as “marcela” or “macela” is widely used in folk medicine for its digestive, eupeptic, antidiarrheal, antiseptic, anti-inflammatory properties, for respiratory problems and viral infections. In late 2019 a new outbreak of severe acute respiratory infection was identified in the city of Wuhan, China, spreading rapidly around the world due to easy transmissibility, symptoms can range from mild, moderate to severe and include fever, cough, myalgia or fatigue and, among others. In severe cases, patients may present with pneumonia, acute respiratory distress syndrome (ARDS), septic shock, cardiovascular manifestations, renal and other organ failure and progress to death. The causative virus was named SARS-CoV-2 and the disease Coronavirus disease 2019 (COVID-19). Our objectives in this dissertation are to evaluate the profile of the participants of the open-label randomized clinical trial with infusion of Achyrocline satureioides (Lam.) DC inflorescences and to determine factors that impacted adherence to the study. The RCT participants were recruited at the Municipal Triage Unit (UMT) for Respiratory Infections and Suspected COVID-19 in the municipality of Igrejinha/RS. The first collection of saliva, oropharyngeal swab and blood was performed, the participants received the intervention (drink the respective tea twice a day for 14 days) according to a randomization list. Participants who adhered to the RCT were considered those who returned for the second collection (recollection). 125 patients with symptoms of respiratory infection and suspected COVID-19 were included and, according to randomization, 67 patients (53.6%) were included in the control group and received apple nuts (Malus domestica Bork), while 58 patients (46.4%) were part of the experimental group and received the inflorescences of “marcela” or “macela” (Achyrocline satureioides (Lam.) DC). After the RT-PCR test result for SARS-CoV-2 detection, 33 patients (26.4%) were allocated to the RT-PCR positive group and 92 patients (73.6%) to COVID-19 negative group. Different variables were considered, age, sex, ethnicity, education level, family income, smoking, comorbidity, allergies and use of continuous medication as a function of adherence to the RCT. In the statistical analysis, we found statistically significant differences in the age variable (P=0.0013) and adherence was higher by the older participants, in the comorbidities variable (P=0.0107) in which adherence was greater by patients with some comorbidity and, in the variable use of continuous medication (P=0.0492) that adherence was higher by patients who use continuous medication, and we can infer that these variables tend to be predictors of adherence to the RCT.

A sexta neoplasia maligna mais comum em todo o mundo é o câncer oral, que se desenvolve em um ambiente com uma microbiota intrínseca, diversa e complexa. Nesse ínterim, o objetivo principal deste trabalho foi desenvolver uma revisão sistemática para investigar a possível relação entre a microbiota oral e a carcinogênese oral. As buscas foram realizadas em três plataformas eletrônicas de dados (Pubmed, SCOPUS e Web of Science) em setembro de 2020, seguidas de critérios de inclusão/exclusão, resultando na seleção de 28 estudos. Devido à diversidade metodológica destes estudos, não foi possível chegar a um consenso sobre qual bactéria seria ideal como biomarcador do câncer oral, apesar de extensas pesquisas na literatura envolvendo os patógenos Porphyromonas gingivalis e Fusobacterium nucleatum. A estratégia de análise da presente pesquisa foi agrupar os resultados microbiológicos relacionados ao tumor nos seis filos de bactérias mais comuns da cavidade oral, comparando, então, as diferenças da constituição nativa de uma cavidade oral saudável; novamente, devido à diversidade metodológica entre os estudos, não foi possível realizar uma meta-análise. Apesar da necessidade de mais estudos padronizados correlacionando os resultados da microbiota com os hábitos pessoais, foi encontrada uma diferença significativa na microbiota de pacientes com câncer bucal. Dessa forma, definir bactérias orais como fator de risco independente para câncer bucal ainda não é confiável, principalmente devido à divergência dos resultados dos estudos. Nos próximos anos, mais estudos com abordagens metodológicas semelhantes serão necessários para identificar os mecanismos que diferenciam o papel das bactérias bucais de outros fatores de risco. The sixth most common malignancy worldwide is oral cancer and it develops in an environment with an intrinsic, diverse and complex microbiota. The main objective of this work was to develop a systematic review to investigate the possible relationship between the oral microbiota and oral carcinogenesis. The searches were performed on three electronic data platforms (Pubmed, SCOPUS and Web of Science) in September 2020, followed by inclusion / exclusion criteria, resulting in the selection of 28 studies. Due to their methodological diversity, it was not possible to reach a consensus on which bacteria would be the best candidate for oral cancer biomarker, despite extensive research in the literature involving the pathogens Porphyromonas gingivalis and Fusobacterium nucleatum. Our analysis strategy was to group the microbiological results related to the tumor into the six most common strains of bacteria in the oral cavity, then comparing the differences in the native constitution of a healthy oral cavity. Again, due to the methodological diversity between the studies, it was not possible to perform a meta-analysis. Despite the need for more standardized studies correlating the results of the microbiota with personal habits, a significant difference was found in the microbiota of patients with oral cancer. In our opinion, defining oral bacteria as an independent risk factor for oral cancer is still not reliable, mainly due to the divergence of the results of the studies. In the coming years, more studies with similar methodological approaches will be needed to identify the mechanisms that differentiate the role of oral bacteria from other risk factors.

O carcinoma espinocelular oral (CEC) corresponde a 95% dos tumores que acometem a cavidade bucal e apresenta uma taxa de sobrevida em 5 anos de aproximadamente 50%. O tratamento convencional envolve cirurgia, radioterapia e/ou quimioterapia. Todas essas modalidades promovem algum grau de toxicidade e/ou morbidade ao paciente e, em muitos casos, não se mostram totalmente eficientes em impedir a progressão tumoral. Parte deste insucesso clínico se deve à presença de um microambiente tumoral, composto de variantes físicos, químicos e biológicos, o qual é capaz de modular o comportamento das células tumorais, como a migração celular observada durante a metástase. Os compostos que modulam este comportamento, como sais imidazólicos (SI) e polifenois, podem constituir alternativas terapêuticas complementares para melhorar o prognóstico de pacientes. Assim, nessa tese nossa hipótese é que o comportamento agressivo do CEC oral pode ser modulado por elementos físicos do microambiente tumoral e por compostos químicos seletivos. Nesta tese, foram analisados três parâmetros: A) fenótipo migratório das células CEC frente a diferentes durezas do ambiente, B) efeitos de sais imidazólicos sobre o CEC e C) analisar evidências de potenciais compostos para tratamento de câncer. Para o parâmetro A, células de CEC foram tratadas em diferentes graus de rigidez (0.48kPa e 20kPa) na presença/ausência de moduladores da contratilidade celular e submetidos a ensaios de migração. Observou-se que o pré-tratamento em substrato rígido induz maior velocidade de migração celular, o qual se mantém quando a célula é transferida para um ambiente menos rígido. A aquisição desta “memória” mecânica foi dependente da contratilidade celular, indicando potencial terapêutico para prevenir metástases e reincidências. Para o parâmetro B, foi realizado uma triagem de 09 compostos derivados de SI com potencial de afetar o comportamento de células CEC. Observou-se que o composto C16MImCl inibiu a proliferação celular e adesão celular, além de induzir a morte celular, apresentando efeitos semelhantes à cisplatina – substância utilizada como quimioterápico em CEC. Para o parâmetro C, foi conduzida uma revisão sistemática para analisar ensaios clínicos sobre o uso de polifenois no tratamento de tumores. Observou-se que os flavonoides, especialmente flavopiridol, mostraram resultados positivos para os tumores não-sólidos (140 pacientes com resposta completa – RC – e 88 com resposta parcial – RP – entre 615 pacientes em 11 ensaios) do que para tumores sólidos (4 pacientes com RC e 21 com PR entre 525 pacientes em 12 ensaios). Em conjunto, conclui-se a importância de avaliar diferentes parâmetros do microambiente tumoral, e assim, compreendendo a interação entre esses componentes pode-se buscar estratégias de tratamento que obtenham maiores taxas de sucesso. Oral squamous cell carcinoma corresponds to 95% of tumors that affect the oral cavity and has a 5-year survival rate of approximately 50%. Conventional treatment involves surgery, radiotherapy and or chemotherapy. All of these modalities promote some degree of toxicity and or morbidity to the patient and, in many cases, are not totally efficient in preventing tumor progression. Part of this clinical failure is due to the presence of a tumor microenvironment, composed of physical, chemical and biological variants, which is able to modulate behavior of tumor cells, such as cell migration observed during metastasis. Additionally, compounds that modulate this behavior, such as Imidazolium Salts (IS) and polyphenols, can constitute complementary therapeutic alternatives to improve the prognosis of patients. Our hypothesis is that the aggressive behavior of oral squamous cell carcinoma can be modulated by physical elements of the tumor microenvironment and by selective chemical compounds. In this thesis, three parameters were analyzed: A) migratory phenotype of tumor cells against different stiffness environmental, B) effects of Imidazolium Salts on oral cancer and C) evidence analysis of potential compounds for cancer treatment. For parameter A, OSCC cells were treated at different stiffness degree (0.48kPa and 20kPa) in the presence / absence of cellular contractility modulators and subjected to migration tests. It was observed that pre conditioning on stiff substrate induces a higher rate of cell migration, which is maintained when the cell is transferred to soft environment. The acquisition of this mechanical “memory” was dependent to cellular contractility, indicating therapeutic potential to prevent metastases and recurrences. For parameter B, five IS-derived compounds were screened with the potential to affect the behavior of OSCC cells. It was observed that the compound C16MImCl inhibited cell proliferation and cell adhesion, in addition to induces cell death, presenting effects similar to cisplatin - a substance used as a chemotherapeutic agent in oral cancer. For parameter C, a systematic review was conducted to analyze clinical trials that use polyphenols in the treatment of tumors. It was observed that flavonoids, especially flavopyridol, showed positive results for non- solid tumors (140 patients with complete response - CR - and 88 with partial response - PR - among 615 patients in 11 trials) than for solid tumors (4 patients with CR and 21 with PR among 525 patients in 12 trials). Together, this data demonstrate the importance to evaluate different parameters of tumor microenvironment, and thus, understanding the interaction between these components, we will can look for treatment strategies with greater success rates.

O carcinoma espinocelular oral (CEC) é o tipo mais frequente de câncer na cavidade oral. É caracterizado histopatologicamente por células epiteliais que invadem o tecido conjuntivo adjacente e por apresentar um microambiente extremamente complexo e diversificado, contendo diversos fatores químicos, físicos e biológicos que influenciam na progressão do tumor. Um dos diversos fatores que caracteriza a alteração do microambiente tumoral é a composição da matriz extracelular (MEC), a qual apresenta maior quantidade de colágeno nos tumores e, assim, pode influenciar em sua progressão. Dentre os componentes do microambiente tumoral, tem sido relatado na literatura que fibroblastos normais (NOFs) adquirem um fenótipo alterado, demonstrando ter maior proliferação e maior migração promovendo mudanças composicionais na MEC, assim sendo caracterizados de fibroblastos associados ao câncer (CAFs). Os CAFs influenciam na progressão e invasão tumoral, porém a sua origem ainda não está bem estabelecida. Neste trabalho, avaliamos o comportamento de NOFs quando associados aos fatores liberados por queratinócitos e células de diferentes graus de agressividade de CEC. Para tal finalidade foram realizados ensaios in vitro utilizando cinco diferentes linhagens celulares: fibroblastos primários de mucosa oral normal, queratinóticos (HaCat), CEC pouco (Cal27) ou muito (SCC9 e SCC25) invasivos. A partir de meio condicionado e/ou co-cultura destas células em ambiente bi ou tri-dimensional, foi analisada a proliferação, atividade contrátil e remodelamento da MEC por NOFs. Apenas os fatores liberados pela linhagem tumoral agressiva de CEC (SCC9) induziram a um aumento de proliferação de NOFs (p

O carcinoma espinocelular oral (CEC) apresenta variabilidade inter e intratumoral. A doença é formada pelas células tumorais e pelos diversos fatores biológicos, químicos e físicos que compõem o microambiente tumoral com poder de influenciar a progressão tumoral. Neste trabalho, avaliamos as modificações fenotípicas intrínsecas do CEC e a influência de fatores físicos (rigidez) nestas células. Em uma revisão de literatura, foi observado que GAPDH e β-actina são os principais genes de referência utilizados em pesquisas de expressão gênica com CEC. Entretanto, demonstramos experimentalmente a grande variabilidade de 5 genes de referência durante análise comparativa de mais de um subtipo celular de tumor, sendo recomendado o uso de 2 ou mais genes de referência para este tipo de ensaio. Devido à esta variabilidade de expressão gênica, utilizamos a ferramenta transcriptograma em dados de sequenciamento de RNA de amostras de diferentes regiões de carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço. Foi constatada que existem diferenças no perfil de expressão gênica entre as diferentes regiões tumorais, mas também entre os tecidos sadios. Esta diferença pode estar associada às diferentes etiopatogenias do câncer de cabeça e pescoço, bem como às diferentes características bioquímicas e biomecânicas a que estão expostos os tecidos desta região. Visto que clinicamente é observado o endurecimento das bordas das lesões de CEC e que observamos que o aumento da organização das fibras colágenas (maior rigidez) está relacionado com pior prognóstico, analisamos a influência da rigidez da matriz extracelular no fenótipo destas células tumorais. Foram utilizadas linhagens de CEC com baixa (InvL/E:NH) e alta (InvH/E:NL) agressividade expostas a diferentes durezas (0,48 ou 20kPa). Após 24h, observamos que apenas as células InvH/E:NL migraram em maior velocidade em ambiente com alta rigidez (20kPa) quando comparado com baixa rigidez (0,48kPa) (p

O câncer oral é o sexto tipo de câncer mais comum no mundo, e o Carcinoma Espinocelular Oral (CEC) representa 95% dessas lesões. O CEC origina-se no epitélio de revestimento e possui comportamento agressivo com metástase cervical precoce e taxa de sobrevivência baixa de 5 anos. Evidências mostram que alterações metabólicas como na glicólise e função mitocondrial contribuem para a agressividade do tumor. A mitocôndria representa a maior fonte de produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) e, ao mesmo tempo, possui muitas vias antioxidantes para neutralizá-las. As EROs podem ativar a transição epitélio-mesenquimal (EMT) e a consequente progressão do câncer através da metástase. Este estudo objetivou caracterizar o perfil metabólico das células tumorais de CEC e verificar a sua relação com a agressividade. Inicialmente, foi verificado o panorama metabólico do CEC por meio de análise proteômica de três tumores e seus epitélios adjacentes. Foi observado que os tumores de CEC possuem um aumento nas proteínas relacionadas com a glicólise e diminuição na atividade mitocondrial em comparação com seus epitélios adjacentes, provavelmente devido à subexpressão da piruvato desidrogenase, e na atividade antioxidante. Posteriormente, foi analisada a atividade metabólica de linhagens celulares epitelial (HaCaT), de CEC com alto (Cal27) e baixo (SCC25) nível de diferenciação e fibroblastos através de citometria de fluxo. As células mais indiferenciadas (SCC25) apresentaram menor massa e potencial de membrana mitocondriais, geraram menores níveis de EROs e nitrogênio, o que correlacionou com maior viabilidade celular. Depois, foi analisado por imunohistoquímica o perfil de peroxidação lipídica (4-HNE) em biópsias de CEC, desordens potencialmente malignas (displasia epitelial oral) e mucosa oral normal. Foi verificado que os níveis de espécies reativas estavam aumentados no tumor e nas desordens potencialmente malignas nas regiões epiteliais. Ocorreu diminuição nos níveis de concentração de 4-HNE/espécies reativas no tecido conjuntivo adjacente às lesões displásicas na região de invasão de OSCC. Os resultados indicam um dinamismo durante a carcinogênese oral relacionado ao metabolismo energético das células que varia de acordo com cada etapa desse processo, com o potencial de ser influenciado por elementos do microambiente tumoral. Oral cancer is the sixth most common cancer in the world, and the Oral Squamous Cell Carcinoma (OSCC) represents 95% of these lesions. OSCC originates in the lining epithelium and has an aggressive behavior with early cervical metastasis and low 5-year survival rate. Evidence indicates that metabolic changes, such as glicolysis and mitochondrial function, contribute to tumor aggressiveness. Mitochondria represents the major source of reactive oxygen species (ROS) production and, at the same time, has many antioxidant pathways to neutralize them. ROS can activate the epithelialmesenchymal transition (EMT) and the consequent progression of cancer through metastasis. This study aimed to characterize the metabolic profile of tumor cells of OSCC and to verify its relationship with aggressiveness. Initially, the metabolic panorama of OSCC was verified through the proteomic analysis of three tumors and their adjacent epithelium. It was observed that OSCC tumors have an increase on proteins related to glycolysis and a decrease on mitochondria activity in comparison to its adjacent epithelium, probably due to the downregulation on pyruvate dehydrogenase, and in the antioxidant activity. Afterwards, it was analyzed the metabolic activity of epithelial cell lines (HaCaT), OSCC with high (Cal27) and low (SCC25) level of differentiation and fibroblasts by flow cytometry. The more undifferentiated cells (SCC25) had lower mitochondrial mass and membrane potential, generated lower levels of ROS and nitrogen species, which correlated with a greater cell viability. Afterwards, it was analyzed by immunohistochemistry the lipid peroxidation profile (4-HNE) of OSCC biopsies, potentially malignant lesions (oral epithelial dysplasia) and normal oral mucosa. It was found that, the levels of reactive species are increased in the tumor and in the potentially malignant lesions in the epithelial regions. There was a decrease in the concentration levels of 4-HNE/reactive species in the connective tissue underlying dysplastic regions and the OSCC invasion zone. The results indicate a dynamism during oral carcinogenesis regarding the energy metabolism of cells and it varies according to each stage of this process with the potential to be influenced by elements of the tumor microenvironment.

O carcinoma espinocelular oral (CEC) é uma das neoplasias mais frequentes da cavidade bucal. Contudo, a maioria dos pacientes é diagnosticada em estágios avançados, minimizando a chance de cura, piorando a sobrevida e dificultando o tratamento a ser realizado. Assim, a detecção precoce das lesões de CEC é fundamental para o diagnóstico em estágios iniciais. Diversos métodos não invasivos têm sido propostos para este fim e alguns deles utilizam o mecanismo da autofluorescência tecidual e aplicação de sondas fluorescentes. Assim, o objetivo do presente trabalho foi realizar uma revisão sistemática acerca do uso da autofluorescência e de sondas fluorescentes como potencial ferramenta de detecção precoce do câncer bucal. Quatro bases de dados (PubMed, Embase, Web of Science e Scopus) foram utilizadas como fonte de busca, no qual foram incluídos estudos que usaram autofluorescência e sondas fluorescentes para detecção do câncer bucal. O estudo foi registrado no PROSPERO sob número CRD42020169535. Quarenta e cinco estudos foram selecionados para a revisão sistemática. O VELscope foi o dispositivo mais utilizado para autofluorescência (sensibilidade 33% a 100% e especificidade 12% a 88%) e se mostrou eficaz na distinção de mucosa bucal normal e neoplásica. Por outro lado, a adição de sondas fluorescentes no tecido neoplásico se baseia no princípio do acúmulo de moléculas fluorescentes nas células tumorais que, após uma reação fotodinâmica, permite a distinção de tecido normal e tumoral. Observamos que as sondas fluorescentes, especialmente o 5-ácido aminolevulínico (sensibilidade de 90% a 100% e especificidade de 51% a 96%), também são estratégias promissoras na detecção precoce do CEC. Diante disso, a avaliação da autofluorescência tecidual e a aplicação de sondas fluorescentes devem ser encorajadas, pois permitem a distinção da mucosa bucal normal e alterada, auxiliando o cirurgião-dentista em sua rotina clínica na triagem de pacientes e, consequentemente, aumentando as chances do diagnóstico do CEC em estágios iniciais. Oral squamous cell carcinoma (CPB) is one of the most frequent neoplasms of the oral cavity. However, most patients are diagnosed in advanced stages, minimizing the chance of cure, worsening survival and making treatment more difficult. Thus, the early detection of CPB lesions is essential for early diagnosis. Several non- invasive methods have been proposed for this purpose and some of them use the mechanism of tissue autofluorescence and application of fluorescent probes. Thus, the objective of the present study was to carry out a systematic review about the use of autofluorescence and fluorescent probes as a potential tool for early detection of oral cancer. Four databases (PubMed, Embase, Web of Science and Scopus) were used as a search source, which included studies that used autofluorescence and fluorescent probes to detect oral cancer. The study was registered with PROSPERO under number CRD42020169535. Forty-five studies were selected for systematic review. The VELscope was the most used device for autofluorescence (sensitivity 33% to 100% and specificity 12% to 88%) and was effective in distinguishing between normal and neoplastic oral mucosa. On the other hand, the addition of fluorescent probes to neoplastic tissue is based on the principle of accumulation of fluorescent molecules in tumor cells, which, after a photodynamic reaction, allows the distinction between normal and tumor tissue. We observed that fluorescent probes, especially 5-aminolevulinic acid (sensitivity from 90% to 100% and specificity from 51% to 96%), are also promising strategies in the early detection of CPB. Therefore, the evaluation of tissue autofluorescence and the application of fluorescent tubes should be encouraged, as they allow the distinction between normal and altered oral mucosa, assisting the dental surgeon in his clinical routine in screening patients and, consequently, increasing the chances of diagnosis of CPB in early stages.

O processo de migração celular envolve a ativação coordenada de moléculas estruturais e de sinalização, como a RhoGTPase Rac1. Sabe-se que a montagem do complexo NADPH oxidase, o qual gera espécies reativas de oxigênio (ERO) na membrana da célula também depende da ativação de Rac1, indicando um possível efeito de ERO durante a migração celular. Nesse trabalho, nós avaliamos os efeitos das ERO no processo de migração celular. Células CHO.K1 foram cultivadas em placas com superfície tratada com fibronectina (2 μg/ml), na presença ou ausência de um antioxidante inespecífico - N-acetil-cisteína (NAC) - ou de inibidores do complexo NADPH oxidase, o di-fenil-iodonio (DPI) ou acetovanilona. Através de vídeos time-lapse, observamos que a depleção de ERO causada por NAC (10 mM) induziu uma diminuição de 60% na velocidade de migração e impactou severamente a direcionalidade da migração das células, o que também foi observado quando utilizado o DPI (10 μM). Posteriormente, analisamos os efeitos da NADPH oxidase em três eventos de migração celular: taxa de protrusão, processo de adesão e vias de sinalização relacionadas com adesão celular. Através de vídeos time-lapse, observamos que o DPI induziu um aumento de ~3 protrusões/célula, as quais foram duas vezes mais rápidas, porém tiveram uma taxa de retração de ~50%, quando comparado ao controle. Com a finalidade de analisar a dinâmica de adesões, células CHO.K1 foram transfectadas com paxilina-GFP, plaqueadas em condições migratórias e analisadas por microscopia de fluorescência de refletância interna total (TIRF) na presença de DPI. A área de adesão na presença de DPI (5 μM) foi maior quando comparada ao controle. Além disso, por ensaio de pull down, não observamos alterações na ativação de Rac1, indicando que os efeitos mediados por ERO estão relacionados com moléculas downstream a Rac1, como moléculas relacionas a adesão. Por fim, observamos a redução nos níveis de FAK-Y397 em células tratadas com NAC e DPI, indicando um aumento no tamanho de adesões focais. Esses resultados nos indicam que a geração local de ERO, principalmente às derivadas do complexo NADPH oxidase, pode modular a migração celular devido a mudanças na dinâmica de adesões a partir de vias de sinalização. Cell migration requires the coordinated activation of structural and signaling molecules, such as the RhoGTPase Rac1. It is know that the NADPH oxidase complex assembly, which generates Reactive Oxygen Species (ROS) at the cell membrane, also relies on Rac1 activation, indicating a possible effect of ROS during cell migration. In this study, we evaluated the effect of NADPH-derived ROS on the migration process. CHO.K1 cells were plated on fibronectin (2 μg/ml) coated dishes in the presence/absence of the unspecific antioxidant N-acetyl-cysteine (NAC) or the NADPH-oxidase inhibitors Di-phenil-iodonium (DPI) and Acetovanilone. Using time-lapse videos, we observed that depletion of ROS by NAC (10 mM) induced a 60% decrease in migration speed and severely impacted migration directionality, which was also observed when NADPH oxidase was inhibited by DPI (10 μM). Then, we analyzed the effects of NADPH oxidase on three migratory events: protrusion rate, adhesion process and signaling pathways related to cell migration. By time-lapse movies, we observed that DPI induced an increase of ~3x protrusion/cell, which were twice faster but had a ~50% retraction when compared to control. In order to analyze adhesion dynamics, CHO.K1 cells were transfected with paxillin-GFP, plated on migrating promotion conditions and we analyzed adhesion dynamics with Total Internal Reflectance Fluorescence (TIRF) microscope in the presence of DPI. The adhesion area in the presence of DPI (5 μM) were larger when compared to control. Also, by pull down assay, we observed no changes on Rac1 activation, indicating that ROS-mediated effects were related to downstream molecules, such as adhesion-related molecules. Finally we had a reduction in FAK-Y397 levels in cells treated with NAC and DPI, indicating an increase on focal adhesion size. These results indicate that the local generation of NADPH-derived ROS can modulate cell migration due changes on adhesions dynamics and signaling.

O câncer de boca é considerado um problema de saúde pública em diversos países, sendo o carcinoma espinocelular (CEC) a forma mais comum. Apesar dos avanços nos conhecimentos sobre os processo moleculares, a taxa de sobrevida está em torno de 50% em cinco anos. Entre os mecanismos moleculares que estão alterados no câncer, as mudanças no metabolismo energético têm sido analisadas quanto ao seu efeito no crescimento e invasão tumoral. Em geral, os tumores possuem uma alta dependência de glicose para a produção de energia, sendo observado um aumento de transportadores GLUT na membrana citoplasmática. Adicionalmente, células cancerígenas reprogramam rotas metabólicas, o que ocasiona alterações moleculares e morfológicas nas células, alteraçoes no número de mitocôndrias e suas interconexões e ainda o conteúdo mitocondrial. O objetivo desta dissertação foi avaliar se componentes do metabolismo energético podem ser relacionada com o prognóstico de pacientes com carcinoma espinocelular bucal e observar potenciais alterações mitocondriais neste tipo de tumor. Para isso, desenvolvemos uma revisão sistemática de literatura com buscas nas bases de dados Pubmed, Scopus e Web ISI, associando os termos relacionados ao câncer de boca, metabolismo e prognóstico. De um total de 721 trabalhos, 21 artigos foram selecionados após leitura de título e resumo. O manuscrito foi categorizado em 2 subtópicos principais: (1) via glicolítica; (2) diagnóstico. A maioria dos componentes do metabolismo energético do tumor relacionados nesta revisão foram preditores de sobrevivência importantes em casos de pacientes com CEC oral . Após, buscamos verificar experimentalmente as alterações na morfologia mitocondrial em linhagens de carcinoma espinocelular oral. As linhagens celulares utilizadas foram SCC9, SSC25 e HACAT, as quais foram processadas e submetidas a microscopia eletrônica de transmissão. As características morfométricas das mitocôndrias foram analisadas no Software Image J. Nossos resultados preliminares sugerem um aumento de mitocôndrias em linhagens tumorais o que pode estar relacionado ao aumento do processo de fissão, e a degradação nas cristas mitocondriais. Concluímos que os tumores orais possuem profundas alterações metabólicas as quais podem envolver mudanças na morfologia mitocondrial, sendo que os marcadores metabólicos podem ser utilizados para determinar o prognóstico de pacientes com CEC. Oral cancer is considered a public health problem in several countries, and the oral squamous cell carcinoma (OSCC) is the most common form. Despite advances in knowledge about the molecular processes involved in disease progression, the survival rate is around 50% in five years. Among the molecular mechanisms that are altered in cancer, changes in energetic metabolism have been analyzed for their effect on tumor growth and invasion. In general, tumors have a high glucose dependency for energy production, with an increase in glucose transporters (GLUT) in the cytoplasmic membrane. Additionally, cancer cells reprogram metabolic pathways, which results in molecular and morphological changes in cells, such as changes in the number of mitochondria and their interconnections, and mitochondrial content. The aim of this dissertation was to evaluate if components of energy metabolism could be related to the prognosis of patients with OSCC and to observe potential mitochondrial alterations in this type of tumor. We developed a systematic review with searches in Pubmed, Scopus and ISI Web databases, associating terms related to cancer, metabolism and prognosis. From a total of 721 papers, 21 articles were selected after reading the title and abstract. The manuscript was categorized into 2 main subtopics: (1) glycolytic pathway; (2) diagnosis. Most of the components of energetic metabolism of the tumor related in this review were important predictors of survival in patients with OSCC. Afterwards, we verified changes in mitochondrial morphology in OSCC. The cell lines used were SCC9, SSC25 and HACAT, which were processed and submitted to transmission electron microscopy. The morphometric characteristics of the mitochondria were analyzed with the Image J Software. Our preliminary results suggest an increase of mitochondria number in tumoral lineages which may be related to the increase of the fission process and the degradation in mitochondrial ridges. We conclude that oral tumors have profound metabolic alterations which may involve changes in mitochondrial morphology, and metabolic markers can be used to determine the prognosis of patients with OSCC.

Os eixos norteadores do Plano Nacional de Educação (2014-2024), bem como as competências e habilidades preconizadas na Base Nacional Comum Curricular são fortemente centradas na figura do professor pesquisador. Nesta tese abordamos a hipótese de que a integração entre universidade e instituições públicas de ensino podem capacitar o jovem na promoção em saúde e na divulgação científica, ao mesmo tempo complementar a formação do professor. Nosso objetivo foi desenvolver ações de prática educativa para educação básica fomentando uma cultura de aprendizagem através por meio da prática em pesquisa. No primeiro artigo, foi descrita uma ação voltada à qualificação de alunos e professores da educação básica para a atuação como promotores em saúde junto à comunidade escolar. Foram selecionados para as atividades 6 alunos e 2 professores da educação básica de uma escola de Alvorada, RS, que receberam treinamento na área biológica, epidemiológica e de divulgação relacionada ao câncer através de ações integradoras com universitários. No segundo artigo, foi descrita uma ação integradora entre alunos da educação básica da rede pública e alunos de pósgraduação, baseado na problematização de situações mais próximas da vivência do aluno. Foram abordados os temas microrganismos, iniciação científica, divulgação científica e acesso à universidade para 35 alunos da educação básica de uma escola estadual de Alvorada, RS. O terceiro artigo reflete um exercício para formação de professor pesquisador através da análise crítica de aspectos sobre metodologia científica e modelos de pesquisa, em angiogênese. Através deste conjunto de atividades, concluímos que a integração de alunos e professores da educação básica em atividades em centros de pesquisa universitários é uma forma de oportunizar o conhecimento do processo de pesquisa e de produção de conhecimento, aproximar a Universidade da sociedade, através da divulgação científica e da educação em saúde. The guiding axes of the National Education Plan (2014-2024), as well as the competencies and skills advocated in the National Common Curricular Base are strongly centered on the figure of the researcher professor. In this thesis we approach the hypothesis that the integration between university and public educational institutions can enable young people in health promotion and scientific dissemination, while complementing teacher education. Our goal was to develop educational practice actions for basic education, fostering a culture of learning through research practice. In the first article, an action was described aimed at qualifying students and teachers of basic education to act as health promoters in the school community. Six students and two basic education teachers from a school in Alvorada, RS, were selected for the activities, who received training in the biological, epidemiological and cancer-related areas through integrative actions with university students. In the second article, an integrative action was described between basic education students from public schools and graduate students, based on the problematization of situations closer to the student's experience. The topics of microorganisms, scientific initiation, scientific dissemination and university access were addressed to 35 students of basic education in a state school in Alvorada, RS. The third article reflects an exercise for training a researcher teacher through the critical analysis of aspects about scientific methodology and research models, in angiogenesis. Through this set of activities, we conclude that the integration of students and teachers of basic education in activities in university research centers is a way of providing the knowledge of the research process and knowledge production, bringing the University closer to society, through dissemination scientific and health education.

Introdução: Colite Ulcerativa (UC) é uma Doença Inflamatória Intestinal (DII) caracterizada por uma resposta imune exacerbada, com sintomas como diarreia, perda de peso e sangue nas fezes. Apesar dos medicamentos disponíveis, a remissão da doença nem sempre consegue ser alcançada e há a necessidade de terapias alternativas. A colite induzida por DSS (Dextran Sulfate Sodium) é um modelo animal utilizado na investigação de novas terapias por sua semelhança à UC humana. DSS provoca dano à barreira epitelial do cólon, induzindo uma resposta imune exacerbada; entretanto, o exato mecanismo não está totalmente esclarecido. O Ultrassom Terapêutico (TUS) foi utilizado para tratamento de injúria renal em modelo experimental, sua ação se dá através da estimulação do nervo vago (VN) e consequente ativação da via antiinflamatória colinérgica (CAIP). Uma vez que pacientes com DII podem exibir atividade disfuncional do VN, TUS pode ser investigado como terapia alternativa. Objetivos: Investigar temporalmente o perfil clínico, proteômico, histológico e imunológico da colite aguda induzida por DSS; e determinar os efeitos de TUS na colite induzida por DSS. Métodos: No primeiro estudo, a severidade da colite foi avaliada pela administração de DSS 1-3%, observando a resposta clínica e histológica. A análise temporal de DSS 3% incluiu uma avaliação proteômica e histológica do cólon, e a resposta imune celular no baço, linfonodo mesentérico (MLN) e cólon. No segundo estudo, utilizando o modelo de DSS 2%, TUS foi aplicado no abdômen dos animais e foram observados os sintomas clínicos, dano histológico, proteômica do cólon e respostas imunes celulares no baço, MLN e cólon. Animais esplenectomizados ou knockout para a7nAChR (marcador clássico para ativação de CAIP) foram utilizados. Resultados: No primeiro estudo, observou-se que a severidade da doença foi aumentada seguindo concentrações de 1-3% DSS. A análise temporal de DSS 3% demonstrou que os macrófagos (F4/80+) se apresentam como a primeira resposta celular, seguidos por células T CD25+, CD4+ e CD8+. A piora clínica da doença correspondeu ao aumento progressivo de fatores pró-inflamatórios e dano tecidual no cólon, exceto no dia 8. Foram observados menores níveis dos marcadores de células T CD25+, CD4+ e CD8+ no MLN e/ou baço, sugerindo a ocorrência de tropismo destas células para o intestino. No segundo estudo, a aplicação de TUS diminuiu a severidade da doença através da melhora de sintomas clínicos, danos teciduais e encurtamento do cólon. A proteômica do cólon demonstrou uma resposta anti-inflamatória durante a fase de injúria (D0-7), induzindo uma resolução acelerada da doença na fase de recuperação (D8-14). TUS diminuiu os níveis de células T CD8+ e normalizou os níveis de células T CD25+ no cólon. Animais esplenectomizados não demonstraram melhora clínica ou histológica, enquanto animais a7nAChR KO apresentaram piora da colite experimental. Além disso, TUS aumentou os níveis de células F4/80+a7nAChR+ no intestino de animais WT DSS 2%. Conclusão: Nossos resultados demonstram que a severidade da doença depende da concentração de DSS, relacionada com as respostas clínica, proteômica e imune no modelo animal de DSS 3%; e TUS diminuiu a severidade da colite induzida por DSS presumidamente pela da estimulação do VN e consequente ativação de CAIP através do baço. Introduction: Ulcerative Colitis (UC) is an Inflammatory Bowel Disease (IBD) characterized by uncontrolled immune response, presenting with symptoms of diarrhea, weight loss and bloody stools. Despite available treatments, UC sustained remission is not achievable and there is still the need for alternative therapies. Dextran Sulfate Sodium (DSS)-induced colitis is a mouse model used to investigate novel therapies, since it closely mimics human UC. DSS damages the colonic epithelial barrier, leading to an exacerbated immune response. However, the exact mechanism is not totally understood. Previous studies showed the use of Therapeutic Ultrasound (TUS) to prevent kidney injury in mice through stimulation of the vagus nerve (VN) and activation of the cholinergic anti-inflammatory pathway (CAIP). Since IBD patients can present with dysfunctional VN activity, TUS could be studied as an alternative therapy. Objectives: To investigate the temporal clinical, proteomic, histological and cellular immune profiles of DSS-induced acute colitis; and to determine the effects of TUS directed toward the VN and spleen in the course of DSS-induced colitis. Methods: First, we analyzed DSS-induced colitis severity by administration of 1-3% DSS, observing the clinical course and histological damage. A time course analysis was performed at 3% DSS, including colon proteomics, colon histology and immune cell responses in the spleen, MLN (mesenteric lymph node) and colon. Next, utilizing 2% DSS in drinking water, we applied TUS over the mice abdomen and analyzed clinical symptoms, histological damage, colon proteomics and immune cell responses in the spleen, MLN and colon. Splenectomized and a7nAChR (key indicator of CAIP activation) KO animals were also used. Results: In the first study, we observed worsening of the disease when increasing DSS concentrations from 1 to 3%. Time course analysis of 3% DSS revealed macrophages to be the first responders, followed by CD25+, CD4+ and CD8+ T cells. Worsening of the disease corresponded to a progressive increase in pro-inflammatory colonic factors and histological damage, except at day 8. Lower levels of CD25+, CD4+ and CD8+ T cells in MLN and/or spleen suggest an immune cell tropism to the gut. In the second study, TUS attenuated DSS induced colitis through amelioration of clinical symptoms, histological damage and colon shortening. Proteomic colon analysis demonstrated an antiinflammatory profile during the injury phase (D0-7), whilst inducing an early resolution of the disease during the recovery phase (D8-14). TUS decreased CD8+ and normalized CD25+ T cell levels in the gut. Splenectomized animals demonstrated no improved clinical and pathological outcomes, and a7nAChR KO mice presented with worsening of the disease. Furthermore, there were increased levels of F4/80+a7nAChR+ cells in the colon of 2% DSS WT mice under TUS treatment. Conclusion: Our results demonstrate that the severity of colitis is dependent on DSS concentration, correlated with clinical, proteomic and cellular immune responses on 3% DSS; and TUS significantly improved DSS-induced acute colitis presumably through stimulation of the VN and consequent activation of CAIP through the spleen.

As desordens orais potencialmente malignas (DOPM) representam um grupo diverso de lesões orais que podem favorecer o desenvolvimento de carcinoma espinocelular oral (CECO). No entanto, as alterações teciduais provocadas pelas DOPM podem ser de difícil detecção clínica para a grande maioria dos profissionais, já que podem ser bastante sutis e ainda podem mimetizar alterações inflamatórias bastante comuns. Diante deste contexto, diversas ferramentas auxiliares estão sendo avaliadas quanto ao seu potencial uso na rotina clínica, podendo facilitar a detecção de tais lesões de maneira precoce. Assim sendo, o objetivo do presente trabalho foi realizar uma revisão sistemática e meta-análise acerca do uso da autofluorescência e de sondas fluorescentes na detecção precoce de desordens orais potencialmente malignas. As bases de dados PubMed, Embase, Scopus, Web of Science foram utilizadas como fonte de busca, assim como as bases Proquest, Open Grey e Google Scholar na literatura cinza. Os estudos incluídos foram aqueles que utilizaram pelo menos um método auxiliar e seguiram os critérios de inclusão estabelecidos. O presente estudo foi registrado no PROSPERO sob o número: CRD42020187911. Ao total, 2.715 artigos foram incluídos e, após as diferentes etapas de seleção, 25 artigos atenderam totalmente os critérios de inclusão. O VELscope® foi o equipamento mais utilizado para autofluorescência, enquanto o ácido aminolevulínico (5-ALA) foi o principal representante das sondas fluorescentes. A metanálise avaliou todos os 10 artigos que utilizaram o VELscope® como método auxiliar durante a detecção de lesões. A sensibilidade combinada foi de 74% (IC95 60-76%, p = 0,0001, havendo diferença significativa entre os grupos) e a especificidade foi de 57% (IC95 52-60%, p = 0,0000, havendo diferença significativa entre os grupos). A inclusão de métodos auxiliares é promissora e tem potencial para auxiliar o cirurgião-dentista na detecção precoce de tais lesões, permitindo que o paciente receba o correto tratamento e possibilitando um melhor prognóstico. Oral potentially malignant disorders (OPMD) represent a diverse group of oral lesions that favor the development of oral squamous cell carcinoma (OSCC). However, tissue changes caused by OPMD may be difficult to detect for the vast majority of professionals, as they can be quite subtle and can even mimic very common inflammatory changes. In this context, several auxiliary tools are being evaluated regarding their potential and use in clinical routine, which may facilitate the early detection of such lesions. Therefore, the objective of the present work was to perform a systematic review and meta-analysis on the use of autofluorescence and fluorescent probes in the early detection of potentially malignant oral disorders. PubMed, Embase, Scopus, Web of Science databases were used as search sources, as well as Proquest, Open Gray and Google Scholar in the gray literature. The included studies were those that used at least one auxiliary method and followed the established inclusion criteria. The present study was registered with PROSPERO under the number: CRD42020187911. In total, 2,715 articles were included, and, after the different selection steps, 25 articles fully met the inclusion criteria. The VELscope® was the most used equipment for autofluorescence, while aminolevulinic acid (5-ALA) was the main representative of the fluorescent probes. The meta-analysis evaluated all 10 articles that used VELscope® as an auxiliary method during lesion detection. The pooled sensitivity was 74% (95CI 60-76%, p=0.0001, with a significant difference between the groups). and the specificity was 57% (CI95 52-60%, p=0.0000, with a significant difference between the groups). The inclusion of auxiliary methods is promising and has the potential to help the dentist in the early detection of such lesions, allowing the patient to receive the correct treatment and enabling a better prognosis.

INTRODUÇÃO: O carcinoma espinocelular de origem bucal (CEC) apresenta uma alta taxa de mortalidade devido à invasividade das células tumorais. A migração celular, principal evento da invasão e metástase, pode ser regulada tanto por fatores intrínsecos, como adesão e contratilidade celular, quanto extrínsecos, como composição, densidade e remodelagem da matriz extracelular (MEC). OBJETIVO: Avaliar o papel de elementos intrínsecos e extrínsecos sobre o processo invasivo do carcinoma espinocelular de origem bucal. MÉTODOS: Foi realizada imuno-histoquímica para as proteínas: Miosina II (isoformas A, B e C), metaloproteinases de matriz (1, 2, 9 e 14); imunofluorescência as proteínas: e-caderina, n-caderina, FAK, paxilina, vinculina e fibronectina em amostras de CEC oral. Foi realizado ensaio de migração nas seguintes condições: 1 – matriz 2D com o substrato de fibronectina, ou laminina ou matrigel; 2 – matriz 3D com colágeno na presença ou não de fibronectina ou laminina; 3 – matriz 3D com diferentes concentrações de colágeno (0,6; 1,2 e 1,8 mg/ml) + fibronectina na presença ou não de um inibidor de MMP. Foi realizado análise de adesão celular utilizando-se o microscópio TIRF e o microscópio confocal, tanto em matrizes 2D quanto 3D. Foram realizados esferoides celulares para avaliar a contratilidade celular, através do plaqueamento das células em gel de agarose e a utilização de drogas que inibem ou que induzem a contratilidade, bem como a partir de células transfectadas com versões fosfomiméticas para a cadeia leve de miosina. Foi realizado ainda western blotting para proteínas: e-caderina, FAK, vinculina, paxilina, N-caderina, integrinas e as isoformas de miosina II, bem como foi avaliado os níveis de ativação das proteínas da família RhoGTPase, as quais estão envolvidas no controle da migração celular. RESULTADOS: A expressão das MMPs analisadas e das isoformas de miosinas foi maior nas zonas de invasão tumoral, sendo que o CEC oral também apresenta uma maior expressão de proteínas associadas à adesão com a MEC. A migração celular foi afetada pela densidade e a composição da MEC, bem como pela atividade das MMPs. Adicionalmente, a modulação das proteínas de adesão célula-matriz altera a velocidade de migração, a direcionalidade dessa migração e também a forma de migração, mudando de uma migração coletiva para uma migração individual. O aumento na contratilidade células resulta numa dispersão celular enquanto que a diminuição da contratilidade resulta numa melhor adesão célula – célula. CONCLUSÕES: O comportamento das células tumorais pode ser modulado através de fatores extrínsecos como, por exemplo, a alteração no microambiente tumoral, seja ela por mudança no substrato ou na densidade da matriz, e também dos fatores intrínsecos como a alteração nos níveis de miosina. INTRODUCTION: Oral squamous cell carcinoma (OSCC) presents high mortality index due to the invasive phenotype of tumor cells. Cell migration is the main event in cell invasion and metastasis and it can be regulated by intrinsic factor, such as adhesion and cell contractility, and extrinsic factors, such as density and extracellular matrix (EMC) remodeling. OBJECTIVE: Analyze the role of intrinsic and extrinsic factor during the invasive process of oral squamous cell carcinoma. METHODS: We performed immunostaining in OSCC samples for the following proteins: myosin II (isoforms A, B and C), matrix metalloproteinase (1, 2, 9 and 14) e-cadherin, n-cadherin, FAK, paxillin, vinculin and fibronectin. We also performed migration assays with OSCC cell line in the following conditions 1 – 2D matrix with fibronectin or laminin or matrigel; 2 – 3D matrix with collagen in the presence or not of fibronectin or laminin; 3 – 3D matrix with different collagen concentration (0,6; 1,2 e 1,8 mg/ml) with fibronectin in the presence or not of the MMP inhibitor. In order to analyze cell adhesion, it was performed Total Internal Reflectance Fluorescence and Confocal microscopy, in 2D and 3D matrix. To analyze cell contractility, cells were plated in agarose gel in order to produce spheroids, which were treated with drugs that inhibit or induce cell contractility or cells were previously transfected with Myosin Light Chain phosphomimetics mutants. It was also performed western blotting to: e-cadherin, n-cadherin, FAK, paxillin, vinculin and myosin II isoforms, as well as it was analyze the levels in RhoGTPase family, which are involved in cell migration control. RESULTS: The expression to MMPs and myosin II isoforms were higher at invasion zone of the tumor, and the OSCC presented higher expression of proteins associated to adhesion to ECM. Cell migration was affected by the EMC composition and density and by MMP activity. Also, the modulation of cell-matrix adhesion proteins altered migration speed, cell directionality as well as influenced the switch between collective and single cell migration. The increase in cell contractility resulted in cell dispersion while the decrease in cell contractility resulted in a better cell-cell adhesion. CONCLUSIONS: The behavior of cell tumor can be modulate by extrinsic factors, for example, the change in tumor microenvironment, by the change in the EMC substrate or density and by intrinsic factors such as the alteration in myosin levels.

O carcinoma espinocelular de boca (CEB) é a neoplasia maligna mais comum da cavidade oral, correspondendo à aproximadamente 94% dos casos dessa região. Apesar dos diversos estudos moleculares e celulares do CEB, a taxa de sobrevida dos pacientes é de aproximadamente 50%, devido principalmente ao tamanho do tumor, metástase em linfonodos regionais, grau de diferenciação das células e sítio anatômico. O microambiente tumoral do CEB, é extremamente complexo e diversificado, tendo como característica principal um estado inflamatório crônico imunossupressivo. Este microambiente é sustentado pela liberação de diferentes citocinas inflamatórias, como IL-6, TNF- - atividades exercidas tanto pelas células tumorais quanto pelas estromais. Dentre essas atividades, tem sido relatado na literatura que as citocinas inflamatórias são capazes de aumentar a migração e a capacidade de invasão das células tumorais. Entre as células estromais, os macrófagos são as mais abundantes e participam da manutenção do microambiente tumoral. De acordo com o estímulo, podem ser polarizados M1, com papel pró-inflamatório e antitumoral, e M2, com papel anti-inflamatório e pró-tumoral. O objetivo desta tese foi compreender o papel dos macrófagos no prognóstico de CEB e das citocinas inflamatórias IL-6, TNF- - linhagens celulares de CEB. Para verificar o papel dos macrófagos no prognóstico, foi realizada uma revisão sistemática na qual foram incluídos apenas os estudos que utilizavam amostra de pacientes com CEB e avaliavam o prognóstico com marcadores para macrófagos. Foi observado que maiores concentrações de macrófagos CD68+ e CD163+ estavam relacionados com pior prognóstico de pacientes com CEB, embora não tenha sido possível concluir qual região tumoral a presença destas células seja mais importante 7 para o desfecho. Para analisar o papel das citocinas inflamatórias IL-6, TNFILensaios in vitro utilizando duas linhagens celulares, SCC25 e Cal27, em condições promotoras de migração sob a influência dessas citocinas. Foi observado que a citocina IL-6 foi capaz de aumentar a velocidade de migração e a direcionalidade tanto da SCC25 quanto da Cal 27 e que esta melhora na capacidade migratória ocorreu através de um crosstalk entre a via de sinalização relacionada a IL6 (STAT3) e a via reguladora de migração celular, Rho GTPase Rac1. Estes dados reforçam o papel do microambiente tumoral no processo de progressão tumoral e sugerem potenciais alvos terapêuticos como a modulação do perfil da população de macrófagos e o papel de interleucinas no controle de invasão tecidual e metástase. Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is the most common malignant neoplasm of the oral cavity, corresponding to approximately 94% of the cases in this region. Despite the diverse molecular and cellular studies of OSCC, the patient survival rate is approximately 50%, mainly due to tumor size, regional lymph node metastasis, cell differentiation and anatomic site. The OSCC tumor microenvironment is extremely complex and diverse, with the main characteristic being an immunosuppressive chronic inflammatory state. This microenvironment is supported by the release of different inflammatory cytokines, such as IL-6, TNF- - and enhance the activities of both tumor and stromal cells. Among these activities, it has been reported in the literature that inflammatory cytokines are capable of increasing migration and invasiveness of tumor cells. Among stromal cells, macrophages are the most abundant and participate in the maintenance of the tumor microenvironment. According to the stimulus, macrophages can be polarized in M1, with pro-inflammatory and anti-tumoral role, and M2, with antiinflammatory and pro-tumoral role. Thus, the aim of this thesis was to evaluate the role of macrophages in the prognosis of OSCC and the influence of inflammatory cytokines IL-6, TNF- - OSCC cell lines. To assess the role of macrophages in the prognosis, a systematic review was conducted in which only studies using a sample of OSCC patients were evaluated and the prognosis was evaluated with macrophage markers. It was observed that higher concentrations of CD68 + and CD163 + macrophages were related to worse prognosis in patients with OSCC, although it was not possible to conclude which tumor region the presence of these cells is more important for the outcome. In order to analyze the role of the inflammatory cytokines IL-6, TNF- - atory 9 behavior of OSCC cells, in vitro assays using two cell lines, SCC25 and Cal27, were performed in migration-promoting conditions under the influence of these cytokines. It was observed that IL-6 was able to increase the speed migration and directionality of both SCC25 and Cal 27 and that this improvement in migratory capacity occurred through a crosstalk between the IL6-related signaling pathway (STAT3) and cell migration-related pathway, RhoGTPase Rac1. These data reinforce the role of the tumor microenvironment in the tumor progression process and suggest potential therapeutic targets such as the modulation of the profile of the macrophages population and the role of interleukins in the control of tissue invasion and metastasis.

A lagarta da espécie Lonomia obliqua é medicamente importante, cujo veneno, presente nas espículas, causa uma síndrome hemorrágica caracterizada por equimoses, alterações da coagulação, dentre outros sintomas. Isto sugere a presença de peptídeos bioativos com potencial farmacêutico, devido à capacidade de modular o comportamento das células endoteliais. O objetivo deste estudo é analisar os potenciais efeitos do veneno de Lonomia obliqua na angiogênese. Uma linhagem celular endotelial (HUVEC) foi exposta a diferentes concentrações do extrato de espículas da Lonomia obliqua (Lonomia obliqua Bristle extract - LOBE) 5 μg/mL, 10 μg/mL, 20 μg/mL e 50 μg/mL. Empregando citometria de fluxo, observou-se que nenhuma das doses afetou o ciclo celular, viabilidade ou apoptose das células endoteliais após 24h de exposição. Os esferóides das células HUVEC foram plaqueados numa matriz 3D de colágeno e observou-se que LOBE (10 μg/mL, 20 μg/mL e 50 μg/mL) induz um aumento na migração celular, consistente com o processo de angiogênese. A análise da dinâmica da VE-caderina indica que a exposição imediata a LOBE (10 μg/mL) induz um desprendimento da junção célula-célula, o que corrobora com a hemorragia observada nas vítimas de envenenamento. Através de espectrometria de massa, observou-se que LOBE possui vários potenciais peptídeos bioativos. Grupos destes peptídeos foram isolados por fracionamento com metanol a partir do veneno bruto. Os peptídeos presentes, em cada uma das 10 frações, foram caracterizados por espectrometria de massa e foram analisados os efeitos de cada fração sobre a angiogênese. Os resultados sugerem que alguns dos efeitos do envenenamento por Lonomia obliqua são devidos à presença de peptídeos bioativos que modulam o comportamento das células endoteliais. The caterpillar of the species Lonomia obliqua is medically important, whose venom present in the bristles leads to an hemorrhagic syndrome characterized by ecchymosis, coagulation disorders and others symptoms. This suggests the presence of bioactive peptides with pharmaceutical potencial due to the ability to modulate the behavior of endothelial cells. The aim of this study is to analyze the potential effects of Lonomia obliqua venom on angiogenesis. An endothelial cell line (HUVEC) was exposed to different concentrations (5 μg/mL, 10 μg/mL, 20 μg/mL and 50 μg/mL) of Lonomia obliqua bristle extract (LOBE). Using flow cytometry, it was observed that none of the doses affected endothelial cell cycle, cell viability or apoptosis after 24h of exposition. Spheroids of HUVEC cells were plated in a 3D-collagen matrix and it was observed that LOBE (10 μg/mL, 20 μg/mL and 50 μg/mL) induced an increase on cell migration consistent with the angiogenesis process. Analysis of VE-cadherin dynamics indicates that the immediate exposition to LOBE (10 μg/mL) induced a loosening of cell-cell junction, which corroborates with the hemorrhage observed in the victims. By mass spectroscopy, it was observed that LOBE possesses several potentially bioactive peptides. Groups of these peptides were isolated by a methanol-based fractioning of the crude venom. The peptides present in each of the 10 fractions were characterized by mass spectroscopy and it was analyzed the effects of each fraction on angiogenesis. The results suggest that some of the effects of Lonomia obliqua envenomation are due to the presence of bioactive peptides that modulate the behavior of endothelial cells.

O fator de transcrição SOX2 regula a identidade celular em células embrionárias efacilita a reprogramação das células somáticas terminalmente diferenciadas para umestado de células-tronco pluripotente. A diminuição na expressão deSOX2 é um indicativo de pior prognóstico e baixa sobrevida de pacientes com câncer. Nossa hipótese é a de que, durante o processo de carcinogênese do carcinoma oral de células escamosas (OSCC) ocorre uma desregulação negativa na expressão de SOX2, contribuindo para o comportamento invasivo das células tumorais na matriz extracelular. Nós analisamos a expressão de SOX2 em biópsias humanas de carcinoma oral e lesões potencialmente malignas (PMOL). Foram utilizadas biópsias da mucosa oral (livre de lesão, n = 13), hiperplasia (n = 6) e displasias (n = 21), carcinomas orais com elevado (n = 12) ou baixo grau de malignidade (n = 12), os quais foram submetidos à análise de expressão de SOX2 por hibridização in situ fluorescente (FISH) e imuno-histoquímica para SOX2 e Vimentina, um marcador de células mesenquimais. Observou-se um aumento na expressão de SOX2 em regiões de proliferação em PMOLe no centro do tumor, mas nas zonas de invasão onde as células passam pelo processo de transição epiteliomesênquima (EMT), SOX2 apresentou diminuição da expressão. Em seguida, analisamos o possível papel da SOX2 no EMT.Utilizou-se a linhagem celular FaDu, de tumor de cabeça e pescoço (HNSCC) e clones geneticamente modificados, nos quais a expressão da peptidase relacionados com calicreína 6 (FaDu-shKLK6) foi silenciada empregando short hairpinRNAs (shRNA). KLK6 pertence a uma família de 15 serino-proteases secretadas, que altera marcadores de EMT e um silenciamento de SOX2. Usando este sistema, os níveis de SOX2 foram restabelecidos e observou-se uma diminuição nos níveis de Vimentina, sugerindo um retorno a um fenótipo de célula epitelial. Utilizando-se de um sistema TOPFLASH-FOPFLASH, observou-se que a expressão de SOX2é inibida por β-catenina, o que sugere um papel da via da sinalização por Wnt para o processo de EMT SOX2-dependente. Os nossos resultados sugerem que, durante as patologias proliferativas, existe uma regulação positiva da expressão SOX2, mas para a indução de EMT é necessária uma regulação negativa de SOX2dependente de β-catenina. The transcription factor SOX2 regulates cellular identity in embryonic stem cells and facilitates the reprogramming of terminally differentiated somatic cells back to a pluripotent stem cell state. The decrease in SOX2 expression is indicative of worse prognosis and poor survival of cancer patients. Our hypothesis is that during the Oral Squamous Cell Carcinoma (OSCC) carcinogenesis process, there is a dysregulation of SOX2 expression, contributing to the invasive behavior of tumor cells in the extracellular matrix. We analyzed the expression of SOX2 in human biopsies of Oral Squamous Cell Carcinoma (OSCC) and Potentially Malignant Oral Lesion (PMOL). Biopsies of oral mucosa (without lesions, n=13), hyperplasic (n=6) and dysplastic (n=21) lesions (PMOLs) and high (n=12) or low (n=12) differentiated HNSCC were used to analyses the SOX2 expression by fluorescent in situ hybridization (FISH). In addition, immunohistochemistry detection of SOX2 and the mesenchymalmarker Vimentin were conducted. It was observed an increase on SOX2 expression at proliferative regions. In PMOLS and center of the tumor but not, at the OSCC invasion zones where cells underwent epithelial-tomesenchyme transition (EMT) process, SOX2 expression was reduced. Then, we analyzed the possible role of SOX2 in the EMT. We used the wellestablished OSCC tumor cell line FaDu and genetically modified clones in which the expression of the Kallikrein-related peptidase 6 (FaDu-shKLK6) was silenced employing shRNA. KLK6 belongs to a family of 15 secreted serine proteases, which depletion results in EMT an SOX2 silencing. Using this system, we restored SOX2 levels and observed a decrease in the Vimentin levels, suggesting a return to an epitheliallike phenotype. Using the TOPFLASH-FOPFLASH system, we observed that SOX2 expression is inhibited by β-catenin, which suggest a role for the Wnt signaling for the SOX2- dependent EMT process. Taken together, our results suggest that during proliferative disorders, there is an upregulation of SOX2 expression but it is necessary a β-catenin dependent downregulation of SOX2 for induction of EMT.

O carcinoma espinocelular é responsável por 90% das lesões malignas na cavidade bucal, sendo o oitavo tipo de câncer em todo o mundo e apresenta uma taxa de sobrevida de apenas 50% em 5 anos. Os carcinomas podem se desenvolver diretamente de células epiteliais normais ou a partir das desordens potencialmente malignas, as quais envolvem as hiperplasias e as displasias. Para que estas lesões se desenvolvam é necessário que nutrientes e oxigênio sejam disponibilizados, o que ocorre a partir da formação de uma nova vasculatura. Este processo, denominado angiogênese, é complexo e envolve a regulação de diferentes fatores indutores, como as moléculas Angiopoetina 1 (ANG1) e Trombospondina 1 (TSP1), cuja ação pode ser influenciada tanto pelas células de origem epitelial quanto pelos componentes do microambiente da lesão. O objetivo deste projeto foi descrever o perfil de expressão das moléculas angiopoetina 1 e trombospondina 1 em biópsias de desordens potencialmente malignas e em carcinoma espinocelular oral. A amostra foi composta por biópsias de pacientes que apresentaram diagnóstico de hiperplasia (n=6), displasia epitelial leve (n=7), displasia epitelial severa (n=15), carcinoma espinocelular oral grau 1 e 2 (n= 13) e 3 e 4 (n=13). As lâminas histológicas foram submetidas à reação de imunoistoquímica para ANG1 e TSP1, das quais foi realizada uma análise descritiva quanto ao perfil de marcação tanto em epitélio quanto em tecido conjuntivo subjacente à lesão. Angiopoetina apresentou uma marcação concentrada principalmente nas células endoteliais e com leve marcação nas células da camada basal do epitélio, sendo observada uma redução da intensidade de marcação de acordo com o grau de severidade da desordem epitelial, porém com um aumento de marcação em células do microambiente tumoral. Trombospondina apresentou marcação heterogênea tanto em tecido epitelial, endotelial e conjuntivo, com um aumento da marcação em macrófagos e fibroblastos de acordo com a severidade da lesão. Este perfil diferenciado de expressão destes marcadores do processo de angiogênese, tanto por células epiteliais modificadas quanto por células do microambiente celular, evidencia a necessidade de mais estudos que explorem a diversidade celular das lesões neoplásicas, com o objetivo de aprimorar as terapias anti-angiogênicas vigentes para o tratamento de desordens potencialmente malignas. Oral squamous cell carcinoma is the eight most common cancer and it accounts for 90% of malignant lesions in the oral cavity, presenting a survival rate of only 50% after 5 years. Carcinomas may develop directly from normal epithelial cells or from the potentially malignant disorders, such as hyperplasia and dysplasia. During the carcinogenesis process, it is necessary an increase on nutrients and oxygen supply, which occurs through the formation of new vasculature. This process, known as angiogenesis, is complex and involves the regulation of various inducing factors such as angiopoietin molecules 1 (ANG1) and Thrombospondin 1 (TSP1), whose action can be influenced both by epithelial cells or cells from the lesion microenvironment . The objective of this project was to describe the expression profile of molecules angiopoietin 1 and thrombospondin 1 in biopsies of potentially malignant disorders and oral squamous cell carcinoma. The sample consisted of biopsies from patients who were diagnosed with hyperplasia (n = 6), mild dysplasia (n=7), severe dysplasia (n=15), squamous cell carcinoma grade 1 and 2 (n=13) and 3 and 4 (n=13). The histological slides were submitted to immunohistochemical reaction to ANG1 and TSP1, which underwent a descriptive analysis of the staining profile in both epithelium and in the underlying connective tissue to injury. Angiopoietin showed staining mainly in endothelial cells and a subtle staining on cells at the basal layer of the epithelium, and it was observed a reduction in the intensity of the staining in accordance with the severity of epithelial disorder, but with an increase of staining of cells from the microenvironment. Thrombospondin presented a heterogeneous staining among epithelial, endothelial, and connective tissue, with an increase in the staining on macrophages and fibroblasts according to the severity of injury. This differential expression profile of these markers of angiogenesis process, which was observed in both epithelial cells and cells from the microenvironment, highlights the need for more studies exploring the cellular diversity of neoplastic lesions, in order to improve the existing anti-angiogenic therapies for the treatment of malignant disorders.

Glicocorticoides e outras drogas imunossupressoras são comumente utilizados para o tratamento de condições inflamatórias, como as Doenças Inflamatórias Intestinais (DIIs). Apesar dos avanços na terapia medicamentosa, a remissão da doença ainda é difícil de ser mantida. Devido às suas propriedades imunomodulatórias, as Células-Tronco Mesenquimais (MSCs – Mesenchymal Stem Cells) têm emergido como reguladoras da resposta imune, e sua viabilidade e propriedades migratórias são essenciais para o sucesso da terapia celular. Entretanto, pouco se conhece sobre os efeitos das drogas convencionalmente utilizadas no tratamento das DIIs no comportamento das MSCs. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade, a morfometria nuclear, a polaridade celular, a distribuição da actina-F e da FAK (Focal Adhesion Kinase), e o comportamento migratório das MSCs na presença das drogas Azatioprina (AZA) e Dexametasona (DEXA). As células foram isoladas de membranas coriônicas humanas e caracterizadas pela diferenciação em adipócitos e osteócitos, bem como pela expressão de um painel de marcadores de superfície. As MSCs foram previamente tratadas com AZA ou DEXA por 24h ou 7d nas concentrações de 1μM ou 10μM, respectivamente. Ambas as drogas não afetaram a viabilidade celular analisada por MTT (3-(4,5-dimethyltiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide) e morfometria nuclear. Entretanto, a análise do índice de polaridade resultou em uma morfologia mais alongada após o tratamento com AZA, enquanto células mais arredondadas foram observadas na presença de DEXA. Os filamentos de actina foram marcados por Rodamina-Faloidina e sua análise mostrou que a AZA preservou parcialmente a formação de lamelipódios e aumentou a presença de fibras de estresse ventrais, enquanto que a DEXA inibiu a formação de lamelipódios, evidenciou uma maior presença de fibras de estresse ventrais e diminuiu a estabilidade das protrusões de membrana, observadas em vídeo. Através da análise de microscopia de série temporal, foi observado que as células sob o efeito da AZA por 7d migraram por maiores distâncias e tiveram um aumento em sua velocidade de migração (24,35%; P < 0,05; n = 4), ao passo que a DEXA diminuiu a velocidade migratória em 24h e 7d (-28,69% e -25,37%, respectivamente; P < 0.05; n = 4) e diminuiu a distância alcançada pelas células. Em conclusão, nossos dados sugerem que as drogas AZA e DEXA podem afetar diferentemente a morfologia e o comportamento migratório das MSCs, possivelmente afetando o resultado da terapia celular. O protocolo de migração celular utilizado neste estudo foi estabelecido por nosso grupo de pesquisa, sendo que um artigo científico contendo todas as etapas do protocolo foi escrito para que outros laboratórios possam utilizá-lo de maneira simples e eficaz. Glucocorticoids and other immunosuppressive drugs are commonly used to treat inflammatory disorders, such as Inflammatory Bowel Disease (IBD) and, despite few improvements, the remission of IBD is still difficult to maintain. Due to its immunomodulatory properties, Mesenchymal Stem Cells (MSCs) have emerged as regulators of immune response, and its viability and activation of migratory properties are essential for a successful cell therapy. However, little is known about the effects of immunosuppressant drugs used on IBD treatment on MSCs behavior. In this way, the aim of this study was to evaluate MSCs viability, nuclear morphometry, cell polarity, F-actin and FAK (Focal Adhesion Kinase) distribution and cell migration properties in the presence of the immunosuppressive drugs Azathioprine (AZA) or Dexamethasone (DEX). MSCs were isolated from human chorionic membranes and characterized through adipogenic and osteogenic differentiations, as well as a panel of surface markers. Cells were previously treated with AZA or DEX for 24 hrs or 7 days at 1μM and 10μM, respectively. Both drugs had no effects on cell viability analyzed through MTT (3-(4,5- dimethyltiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) and nuclear morphometry. However, polarity index analysis showed that AZA treatment induced a more elongated cell shape while a greater presence of rounded cells was observed under DEX exposure. F-actin was stained by Rhodamine-Phalloidin and showed that AZA could partially preserve lamellipodia formation and increase the presence of ventral actin stress fibers, while DEX inhibited lamellipodia formation and increased the presence of ventral actin stress fibers while decreasing protrusion stability, observed in video. Through time-lapse microscopy, it was observed that after 7 days of treatment, AZA improved cell the spatial trajectory (ST) and increased migration speed (24.35%, P < 0.05, n = 4) while DEX impaired ST and migration speed after 24 hrs and 7 days treatment (- 28.69% and -25.37%, respectively; P < 0.05, n = 4). In conclusion our data suggests these immunosuppressive drugs can differently affect MSCs morphology and migration capacity, possibly impacting the success of cell therapy. The migration protocol used in this study was successfully established by our group, leading to the writing of a protocol paper to facilitate the usage of this technique by other laboratories in a simple and efficient manner.

O carcinoma espinocelular é uma neoplasia maligna que representa aproximadamente 94% de todas as ocorrências presentes em boca e uma das suas principais características celulares é a migração de suas células para formar metástases. A adesão celular é considerada um dos eventos determinantes da migração celular. Para as células formarem uma estrutura tecidual tridimensional as adesões entre células e entre células e matriz extracelular são de grande importância. As junções de adesão celulares surgem, caracteristicamente, pela interação entre receptores adesivos, vias de sinalização e elementos do citoesqueleto. A proteína E-caderina está presente em adesões entre células no tecido epitelial. A proteína FAK está envolvida na maioria dos eventos relacionados à adesão celular estimulada por integrinas. A Vinculina é uma proteína de adesão que se liga ao citoesqueleto de actinomiosina como uma proteína de adesão focal através das integrinas. Estudos recentes sugerem que há alteração na expressão e atividade de proteínas de adesão em tumores malignos. O objetivo deste trabalho foi descrever o padrão de expressão e de regulação da atividade de proteínas de adesão em amostras de tumores de carcinoma espinocelular. Foram realizadas reações de imunoistoquímica para verificar o padrão de distribuição das proteínas E-caderina, Vimentina e FAK-y397 em amostras de tumores de carcinoma espinocelular oral. Verificou-se a diminuição da expressão de E-caderina e de Vinculina em regiões de adesão célula-célula e em contrapartida constatou-se aumento na marcação citoplasmática de Vinculina bem como na marcação de FAK-y397 em todas as amostras de tumores. Apesar dos avanços, ainda são necessários mais estudos observacionais que averiguem não apenas o grau de expressão dessas proteínas de adesão, mas também o seu nível de regulação. A partir dos resultados deste estudo, pode-se sugerir que o controle do nível de expressão e de atividade da adesão celular podem ser considerados como potenciais alvos para a aplicação de terapias coadjuvantes que visam a diminuir ou impedir a progressão tumoral, bem como o desenvolvimento de metástases. Squamous cell carcinoma is a malignant neoplasm that accounts for approximately 94% of all occurrences present in mouth and one of its main characteristics is the cellular migration of its cells to form metastases. Cell adhesion is considered one of the defining events of cell migration. For a three-dimensional tissue structure, adhesions between cells and between cells and the extracellular matrix is of great importance. Cell adhesion junctions arise characteristically by interaction between adhesive receptors, signaling pathways and cytoskeletal elements. The protein E-cadherin is present in cells in the adhesion between epithelial tissue. The Focal Adhesion Kinase (FAK) protein is involved in most events related to cell adhesion stimulated by integrins. The vinculin is an adhesion protein that binds cytoskeletal protein through integrins activaion. Recent studies suggest that there are alterations in the expression and activity of adhesion proteins in malignant tumors. The aim of this study was to describe the pattern of expression and regulation of the activity of adhesion proteins in tumor samples of squamous cell carcinoma. Immunohistochemical reactions were performed to check the distribution pattern of the protein E-cadherin, vimentin and FAK-y397 in tumor samples of oral squamous cell carcinoma. There was a decrease in the expression of E-cadherin and vinculin in regions of cell-cell adhesion but, on the other hand, it was found to increase in cytoplasmic as well as unscheduled vinculin FAK-y397 in all tumor samples. Despite progress, it is necessary more observational studies that examine not only the degree of expression of these adhesion proteins, but also its level of regulation. From the results of this study it is suggested that the control of the expression level and activity of cell adhesion may be considered as potential targets for application adjuvant therapies that aim to reduce or prevent tumor progression and the development metastases.

O objetivo do estudo foi analisar as alterações no perfil inflamatório causado pela associação da doença periodontal e o exercício físico, em condições fisiológicas, e o papel desta interação sobre o processo de reparo muscular. Para isso, foram utilizados 24 ratos Wistar machos divididos em quatro grupos experimentais: Controle saudável e sedentário (SS); Controle saudável e treinado (TS); Com doença periodontal e sedentário (SC) e Com doença periodontal e treinado (TC). Foi realizada a indução de doença periodontal pela técnica de ligadura nos grupos SC e TC. Os grupos TS e TC realizaram um protocolo de exercício físico intenso em esteira rolante, durante 8 semanas. Ao longo das semanas do experimento, foram realizadas coletas de sangue para análise dos níveis séricos de citocinas inflamatórias e de leucócitos circulantes. Ao final do protocolo de exercício, foi realizada a indução de lesão muscular, por criolesão, nos músculos tibial anterior e gastrocnêmio de todos os animais, sendo os ratos sacrificados 3 dias após a criolesão. Foram realizadas análises morfológicas dos músculos com lesão induzida e dos músculos contralaterais, além do timo. Os dados foram analisados utilizando o pacote estatístico SPSS versão 17.0 para Windows. Para realizar a comparação das médias entre os grupos, nos diferentes momentos analisados, foi utilizando o teste One-Way ANOVA e teste Post-Hoc de Tukey, com nível de significância de 0,05%. A doença periodontal foi capaz de modificar células e mediadores inflamatórios sistêmicos, tendo uma ação indireta no catabolismo muscular e no processo de reparo tecidual após lesão, sendo seu efeito potencializado, quando associada ao exercício físico. The aim of the study was to analyze the changes in the inflammatory profile caused by the association of periodontal disease and exercise, under physiological conditions, and the role of this interaction on the process of muscle repair. For this, it was used 24 male Wistar rats which were randomly divided into four groups: healthy and sedentary (SS), healthy trained (TS); sedentary with periodontal disease (SC) and trained with periodontal disease (TC). Periodontal disease induction was performed in the SC and TC groups. TS and TC groups underwent a protocol of intense exercise on a treadmill for 8 weeks. Over the weeks of the experiment, blood samples were taken for analysis of serum inflammatory cytokines and circulating leukocytes. At the end of the exercise protocol it was induced muscle damage at the tibialis anterior and gastrocnemius muscles of all animals by cryoinjury, and the ratswere sacrificed 3 days after the cryoinjury. Morphological analyzes were performed with muscle injury induced, undamaged contralateral muscles, and thymus. Data were analyzed using SPSS version 17.0 for Windows. To perform the comparison of means between groups in different time points analyzed, it was used One-Way ANOVA and post-hoc Tukey test with a significance level of 0.05%. It was obseved that periodontal disease was able to modify white blood cells count and the systemic levels of inflammatory mediators, with an indirect action in muscle catabolism and tissue repair after injury, and its action is potentiated when combined with exercise.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Cell migration is a prominent feature in cancer metastasis and the characterization of proteins related to migration is important in order to understand the behavior of tumor cells and their invasiveness during tumor progression. Among the proteins involved in cell migration, isoforms of non-muscle myosin type II play a pivotal role in several events related to cell migration, such as contractility, adhesion and cellular signaling. There are three isoforms of myosin type II that can be expressed in mammalian cells: myosin IIA (MIIA), myosin IIB (MIIB) and myosin IIC (MIIC). However, few studies have been conducted to characterize the expression and distribution patterns in cells of different types of tumors, including oral squamous cell carcinoma. The aim of the study was to analyze the expression and distribution of isoforms of myosin II (A, B and C) in surgical fragments of squamous cell carcinoma. Fragments of surgical specimen were collected from different regions of the tumor: a tumor-free zone, the center of the tumor and the invasion zone. These samples (n = 4) were fixed, crioprotected, cut on criostat, submitted to immunolocalization of MIIA, MIIB and MIIC and analyzed on confocal microscopy. The three isoforms of myosin II were expressed differently and showed distinct distribution in accordance with the region of the tumor sample. MIIA and MIIC were overexpressed at the center zone when compared with the free zone, whereas strong staining revealed MIIB at the zone invasion. Based on these observations, the isoforms of myosin IIC and IIA appeared to be more associated with tumor proliferation while MIIB appeared to be more involved in the invasive behavior of tumor, indicating that the isoforms can participate in different ways regulating the behavior and development of tumor type analyzed. A migração celular é uma característica proeminente na metástase do câncer e a caracterização de proteínas relacionadas com a migração é importante para que se compreenda o comportamento de células tumorais e sua capacidade de invasão durante a progressão tumoral. Entre as proteínas envolvidas na migração celular, as isoformas de miosina não-muscular do tipo II desempenham um papel central em vários eventos relacionados com a migração de células, como a contratilidade, a adesão e a sinalização celular. Existem três isoformas de miosina do tipo II que podem ser expressas em células de mamíferos: miosina IIA (MIIA), miosina IIB (MIIB) e miosina IIC (MIIC). Entretanto, poucos estudos têm sido realizados para caracterizar a sua expressão e padrões de distribuição em células de diferentes tipos de tumores, incluindo carcinoma epidermóide. O objetivo do estudo foi analisar a expressão e distribuição de isoformas de miosina II (A, B e C) em fragmentos de peça cirúrgica de carcinoma epidermóide. Os fragmentos de peça cirúrgica foram coletados a partir de distintas regiões do tumor: a zona livre de tumor, o centro do tumor e a zona de invasão. Estas amostras (n = 4) foram fixadas, crioprotegidas, cortadas em criostato, submetidas à imunolocalização de MIIA, MIIB e MIIC e analisadas em microscopia confocal. As três isoformas de miosina II foram expressas diferentemente e apresentaram distribuição distinta de acordo com a região da amostra de tumor. MIIA e MIIC foram superexpressas na zona central quando comparadas com a zona livre, ao passo que MIIB revelou forte marcação para região de zona de invasão. Com base nas presentes observações, as isoformas de miosina IIA e IIC pareceram estar mais associadas ao evento de proliferação tumoral ao passo que MIIB pareceu mostrar-se mais envolvida com o comportamento invasivo do tumor, indicando que as isoformas podem participar de formas distintas na regulação do comportamento e do desenvolvimento do tipo de tumor analisado.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Aims: The purpose of this study was to investigate the effects of different of low level laser (LLL) protocols on induced-oral mucositis by 5-fluoracil (5-FU) in hamsters. Introduction: The oral mucositis is a ordinary side effect from antineoplasic therapy. Development of effective interventions to its prevention and treatment are priory on caring of the oncology patients. Metodologia: In the present study 96 hamsters were used and randomly allocated into 4 groups: Control (without treatment), Preventive (laser from day -5 to day +5), Therapeutic (laser from day +5 to day +15) and Combined (laser from day -5 to day +15). Mucositis was induced in hamsters by intraperitoneal injection of 5- fluorouracil (5-FU) at days 0 and 2 and superficial scratching in cheek pouch mucosa. The irradiation was carried out using diode LLL, 660 nm, 40mW of power, 6,0J/cm2 during 6seconds/point. At days 0, 5, 10 and 15, six animals from each group were sacrificed, weighted and the cheek pouch mucosa was clinically analyzed. Statistical analysis was made considering the time x treatment interaction through the SPSS Statistics 18.0® software. The multiple comparison was made by the Generalized Estimation Equation test and adjusted by the Bonferroni test. Results: The animals from the Control group had significant lose of weight at the 10th day of the experiment. The laser treatment at preventive, therapeutic and combined form presented mucosits scratching reduction in comparison to the control group. However there was no statistic difference between the mucositis scores at the groups that received treatment. Conclusion: The low level laser, independent of the used protocol, is efficient to clinical reducing oral-inducted mucositis by 5-FU in hamsters. Objetivos: O objetivo do presente estudo foi investigar o efeito de diferentes protocolos de laser de baixa potência (LBP) na mucosite bucal induzida por 5-fluouracil (5-FU) em hamsters. Introdução: A mucosite bucal é uma complicação comum da terapia antineoplásica. O desenvolvimento de intervenções efetivas para sua prevenção e tratamento é visto como prioridade nos cuidados de suporte ao paciente oncológico. Metodologia: Foram utilizados 96 hamsters divididos aleatoriamente em 4 grupos: Controle (sem tratamento), Preventivo (laser do Dia -7 ao Dia +5); Terapêutico (laser do Dia +5 ao Dia +15) e Conjugado (laser do Dia -7 ao Dia +15). Os animais receberam injeção intraperitoneal de 5-FU nos dias 0 e 2 e escarificação da mucosa jugal nos dias 3 e 4. A irradiação foi realizada com LBP de diodo (InGaAlP), 660 nm, 40 mW de potência, 6,0 J/cm2 por 6 segundos/ponto. Nos dias 0, 5, 10 e 15 foram sacrificados seis animais de cada grupo, pesados e a mucosa jugal foi analisada clinicamente. Foi realizada análise estatística para a interação tempo x tratamento através do programa SPSS Statistics 18.0®. As comparações múltiplas foram feitas pelo teste de Equações de Estimação Generalizada e ajustado pelo teste de Bonferroni. Resultados: Houve significativa perde de peso dos animais do grupo controle no dia 10 do experimento. Os tratamentos com laser tanto na forma preventiva, terapêutica e conjugada exibiram redução dos escores de mucosite de forma estatisticamente significante quando comparados ao grupo controle. Todavia, não houve diferença estatisticamente significativa entre escores de mucosites nos grupos que receberam tratamento laser. Conclusão: O laser de baixa intensidade, independente do protocolo utilizado, é eficaz na redução clínica da mucosite bucal induzida por 5-FU em hamsters.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Doutor em Genética e Bioquímica CHAPTER II: Ca+2/calmodulin complex interacts with and regulates various enzymes and target proteins, known as calmodulin-binding proteins (CaMBPs). This group of proteins includes molecular motors such as myosins. Non-muscle myosin-IIB was shown in our study to be overexpressed in diabetic rat brains. In this study, we compared CaMBPs, purified by immobilized-calmodulin, affinity chromatography, isolated from non-diabetic and streptozotocin-induced diabetic rat brains. Proteins eluted with EGTA and urea were separated on a SDS-PAGE gel, digested and submitted to peptide mass fingerprinting analysis. There were fifteen and sixteen intense bands for non-diabetic and diabetic brains, respectively. Two proteins were exclusively in non-diabetic brains, four were found exclusively in diabetic brains and thirteen were found in both. Protein sequences were then analyzed for the presence of the calmodulin-binding sites. A large fraction of the eluted proteins (83%) had putative IQ motifs or calmodulin-binding sites. The myosin-IIB affinity chromatography elution in association with western blot, immunohistochemistry and RT-PCR analyses strongly suggest that myosin-IIB protein and mRNA are highly expressed levels in diabetic rat brains. This is the first study that identified and showed calmodulin-binding proteins differential expression in non-diabetic and diabetic rat brains through a comparative proteomic analysis, and it opens up a new field of study relating myosin-IIB expression in the brain, diabetes mellitus and intracellular calcium regulation. CHAPTER III: Diabetes mellitus is a chronic disease characterized by persistent hyperglycemia, which may lead to brain tissue damage due to oxidative stress. The enhancement of free radicals during hyperglycemia contributes to increased neuronal death and changes in synaptic transmission. This study evaluated the effect of oxidative stress and the use of antioxidants (calcium, zinc and vitamin E) supplementation on myosins expression levels in brain tissues of streptozotocin-induced diabetes experimental rat model. Lipid peroxidation, antioxidant enzymes activities and myosins IIB and Va expressions at transcriptional and protein levels were examined after 5 and 90 days post streptozotocin induction. The chronic effect of the streptozotocininduced diabetes led to upregulation of glutathione peroxidase (GPx) and malondialdehyde (MDA) levels, and downregulation of superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) activities. These alterations were accompanied by increased myosin-IIB and decreased myosin-Va expressions in diabetic rat brains. The antioxidant supplementation protected against hyperglycemia damage by reducing CAT activity and increasing GPx and SOD activities, although it had no influence on MDA levels. Interestingly, only diabetic rats restored myosin-IIB expression at both transcriptional and protein levels in brain tissues after supplementation, and no differences were observed in myosin-Va expression in comparison to non-diabetic rat brains. The functional alterations of antioxidant enzymes and myosins IIB and Va in rat brains of experimentallyinduced diabetes were strongly associated with the disease and aging during acute and chronic stages, but only myosin-IIB expression could be reversed by antioxidants. These data highlight the supplementation (calcium, zinc and vitamin E) antioxidants effects on the oxidative stress and the involvement of myosins IIB and Va in the diabetes stages; however, their mechanisms of action on enzymes activities, lipid peroxidation and myosins expression remain to be elucidated.