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Immune cell reconstitution after stem cell transplantation is allocated over several stages. Whereas cells mediating innate immunity recover rapidly, adaptive immune cells, including T and B cells, recover slowly over several months. In this study we investigated kinetics and reconstitution of de novo B cell formation in patients receiving CD3 and CD19 depleted haploidentical stem cell transplantation with additional in vivo T cell depletion with monoclonal anti-CD3 antibody. This model enables a detailed in vivo evaluation of hierarchy and attribution of defined lymphocyte populations without skewing by mTOR- or NFAT-inhibitors. As expected CD3+ T cells and their subsets had delayed reconstitution (+ B lymphocytes of naïve and memory phenotype were detected at day +60. Remarkably, we observed a very early reconstitution of antibody-secreting cells (ASC) at day +14. These ASC carried the HLA-haplotype of the donor and secreted the isotypes IgM and IgA more prevalent than IgG. They correlated with a population of CD19− CD27− CD38low/+ CD138− cells. Of note, reconstitution of this ASC occurred without detectable circulating T cells and before increase of BAFF or other B cell stimulating factors. In summary, we describe a rapid reconstitution of peripheral blood ASC after CD3 and CD19 depleted haploidentical stem cell transplantation, far preceding detection of naïve and memory type B cells. Incidence before T cell reconstitution and spontaneous secretion of immunoglobulins allocate these early ASC to innate immunity, eventually maintaining natural antibody levels.

Although treatment options in breast cancer have been improved significantly, predictive biomarkers for disease progression and metastasis are still lacking. Recent studies indicate that several TNF Receptor Superfamily members are involved in breast cancer cell proliferation and survival. Interestingly, TNFRSF13B (TACI) mRNA level were of prognostic relevance in breast cancer patients. In this study we provide evidence for TACI expression on platelets of breast cancer patients. The level of platelet-expressed TACI (pTACI) was significantly increased on platelets derived from breast cancer patients compared to healthy controls. Upon platelet activation, pTACI was downregulated on the platelet surface of healthy donors and breast cancer patients. Of note, inhibition of matrix metalloprotease (MMP) prevented downregulation of pTACI ex vivo, indicating that proteolytic cleavage of pTACI is responsible for reduction of pTACI level. Stimulation of pTACI via BAFF, BAFF 60-mer or APRIL did not influence platelet activation and function. Remarkably, pTACI was particularly regulated during tumor progression in our breast cancer cohort. TACI expression levels on platelets were correlated with clinical parameters including tumor stage, occurrence of metastasis and tumor cell proliferation (Ki67). In conclusion, our data emphasize the potential use of platelets as a liquid biomarker in breast cancer.

Die Immunrekonstitution nach einer allogenen Stammzelltransplantation hat größten Einfluss auf das Auftreten infektiologischer Komplikationen, die Auftretenswahrscheinlichkeit einer Alloreaktivität wie der GvHD und des GvM-Effekts, eines Krankheitsrezidivs und somit auch auf die Morbidität und Mortalität eines transplantierten Patienten. Daten aus früheren Studien zeigen übereinstimmend eine frühe Immunrekonstitution von Zellen des angeborenen Immunsystems, welches Granulozyten, Monozyten und NK-Zellen umfasst, während Zellen des adaptiven Immunsystems, welches insbesondere T-Lymphozyten und B-Lymphozyten beinhaltet, erst Monate nach einer allogenen Stammzelltransplantation regenerieren. Vor diesem Hintergrund, ermöglicht eine CD3+/CD19+ depletierte haploidente Stammzelltransplantation eine Beobachtung der Lymphopoese in vivo ohne den Einfluss von Immunsuppressiva. Das Ziel dieser Arbeit war es, die Rekonstitution Antikörper-produzierender Zellen bei Patienten innerhalb des ersten Jahres nach einer hämatopoetischen Stammzell¬transplantation zu untersuchen, wobei der Fokus der Untersuchung insbesondere auf den ersten Wochen nach der Transplantation lag. Die Fragestellung beruht auf der Beobachtung, dass die Entstehung reifer Plasmazellen erst etwa ein Jahr nach der Transplantation in der Literatur beschrieben ist, Antikörper zur Abwehr von Infekten jedoch bereits vorher benötigt werden und auch vorhanden sind. Insgesamt konnten bei sieben haploident transplantierten Patienten Personen-bezogenene Daten erhoben werden und Proben gewonnen werden. Das Patientenkollektiv unterscheidet sich hinsichtlich Alter bei der Erstdiagnose, Geschlecht, hämatologischer Grunderkrankung, Vortherapien und Zeitpunkt der haploidenten Transplantation erheblich. Dennoch ergibt sich bei allen sieben analysierten Patienten ein sehr einheitliches Bild bezüglich der erhobenen Ergebnisse. Alle Patienten zeigen ab Tag 14 nach der haploidenten Transplantation eine signifikante Regeneration der Leukopoese, welche hauptsächlich auf der Regeneration der neutrophilen Granulozyten beruht. Der Beginn der Lymphopoese hingegen kann frühestens nach 28 Tagen beobachtet werden, wobei eine Normalisierung der Lymphozytenwerte im Durchschnitt nach 270 Tagen nach der Transplantation erreicht wird. Trotz der verzögerten Lymphopoese kann bei allen analysierten Patienten das Auftreten Immunglobulin-exprimie¬render und –produzierender Zellen bereits nach 10 bis 30 Tagen nach der haploidenten Stammzelltransplantation beobachtet werden. Diese Zellen produzieren und exprimieren die Immunglobulinsubklassen IgA, IgG und IgM. Auch im Serum der Patienten kann in diesem Zeitraum ein Anstieg der Konzentrationen für lösliches IgA, IgG und IgM beobachtet werden. Gleichzeitig sind in diesem Zeitraum insbesondere die Expressionslevel Inflammations-assoziierter Zytokine erhöht, wohingegen Zytokine, die klassischerweise eine Rolle in der B-Zell-Differenzierung und B-Zell-Proliferation spielen, allen voran BAFF, eine untergeordnete Rolle spielen. Die identifizierte Zellpopulation, die mit dem Auftretenden der Antikörper-produzierenden Zellen signifikant korreliert und diesen vermutlich auch entspricht, zeigt den Phänotyp CD19- CD38low/+ CD27- und CD138-. Sie lässt sich somit weder klassischen Plasmazellen noch „unreiferen“ B1-B-Zellen zuordnen. Die gefundenen Zellen sind jedoch eindeutig aus dem Transplantat des Spenders hervorgegangen. Insgesamt kann somit eine frühe, bereits 2 bis 3 Wochen nach der haploidenten Stammzelltransplantation auftretende, Immunglobulin-produzierende Zellpopulation nachgewiesen werden, die einen bisher unbekannten Phänotyp aufweist und möglicherweise einen bislang nicht beschriebenen Zwischenschritt in der Entwicklung der B-Lymphozyten darstellt. Zudem kann spekuliert werden, dass es sich bei diesen frühen Immunglobilun-sezernierenden Zellen um Elemente des angeborenen und weniger des adaptiven Immunsystems handeln könnte.