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Recent studies showed that low-pathogenic (LP) avian influenza viruses (AIVs) stuck on wild ducks' feathers during migration can be infectious. In addition, experimental reproduction of AIV infection by allopreening route, showed that viruses stuck on ducks’ feathers could be infectious several weeks after the end of enteric viral shedding. In this work we investigated whether infectious AIVs covering feathers may evade the duck’s immune system. Cloacal swabs, feather swabs and serum samples were collected from 202 wild mallards trapped in Central Italy during the wintering and spring migration (December 2006-March 2007). Both feather and cloacal swabs were screened by reverse transcription (RT)-PCR, specific for virus matrix gene, and then tested by virus isolation (VI) assays. Sera were tested for the presence of antibodies against influenza A virus nucleoprotein by NP-ELISA. Seroprevalence for influenza A virus was 89% (179/202); 51.4% (92/179) and 19.5% (35/179) of these seropositive mallards, tested RT-PCR positive for AIVs on feather and in cloaca respectively. LPAIVs were isolated from 12 feather swabs and from 11 cloacal swabs. NP-ELISA positive sera from 10 ducks found to be H10N7 VI-positive on feathers and VI-negative from cloaca were also investigated by hemagglutination inhibition assay (HI), using as antigen an LPAIV H10N7 strain isolated from feather swabs in this study. HI results showed that one of 10 mallards was immune against homologous H10N7, showing an HI titre of 1:32-64. Our results show evidences suggesting that birds carrying viruses on their feathers might have a post-infection immunity and play an active role in spreading AIVs infection in nature.

Sardinia is a Mediterranean island with a long geological history, leading to a separation process from continental Europe during Miocene. As a consequence, in this insular habitat some wild bird species developed endemic forms, some of which are currently threatened. The aim of this study is to evaluate the presence and the possible health risk associated with a potential avian influenza virus (AIV) circulation in Sardinian wild bird populations. Overall 147 cloacal swabs were sampled in the Sardinia Region from June 2009 to September 2011. Samples were obtained from 12 different taxonomic orders including 16 family and 40 species of birds. Based on the endangered host status or on the ecology of the host/virus interaction, samples were divided into three groups of species: endemic and/or endangered (n. 17 species), potential reservoir (n. 21 species) and potential spill-over (n. 2 species). Cloacal swabs were tested by reverse transcription (RT)-PCR for influenza A virus M-gene amplification. Forty-one serum samples were tested for antibodies against influenza A virus nucleoprotein by NP-ELISA and for detection of seropositivity against H5 and H7 AIV subtypes. No cloacal swabs tested RT-PCR positive for AIV, while two weak serological positive results were detected by NP-ELISA in a Mallard duck (Anas platyrhynchos) and in a Yellow-legged gull (Larus michahellis). The low or absent AIV circulation detected in Sardinia's wild birds during the study period, suggests a naїve status in these avian populations. A possible occurrence of AIV exposure of susceptible endemic species, might represent a cause of transition from compensatory to additive mortality which can contribute to increase a possible extinction process.

La tubercolosi, importante patologia riemergente sostenuta da micobatteri, causa nell’uomo e negli animali morbilità, mortalità e danni economici. In particolare Mycobacterium bovis rappresenta un importante problema di sanità pubblica per la sua capacità di infettare animali domestici, selvatici e uomo, mentre M. avium è patogeno per il suino ed è segnalato come patogeno umano in soggetti immunodepressi. L’infezione da M.bovis, M. avium e altri micobatteri è stata diagnosticata nel cinghiale (Sus scrofa) in molti Paesi europei, compresa l’Italia. Erysipelothrix rhusiopathiae è l’agente causale del mal rosso, malattia zoonosica diffusa in tutto il mondo con importante impatto economico sull’allevamento suino. Sebbene descritta nel cinghiale, esistono attualmente pochi studi sulla suscettibilità all’infezione e sul ruolo epidemiologico di tale suide selvatico. Nel presente lavoro sono state svolte indagini microbiologiche volte alla ricerca di tali agenti zoonosici in una popolazione di cinghiali a vita libera in Provincia di Bologna, per valutare l’implicazione di questo ungulato, in continua espansione demografica, nell’epidemiologia di tali infezioni.

Il maiale domestico (Sus scrofa domestica), condividendo con gli uccelli e i mammiferi i recettori cellulari per i virus influenzali, svolge un ruolo epidemiologico chiave nell’ecologia del virus dell’influenza di tipo A ed in particolare nell’emergenza di nuovi ceppi, come confermato dall’origine suina del virus pandemico H1N1 del 2009. Il cinghiale (Sus scrofa) è il progenitore selvatico del maiale domestico, con cui condivide sia una stretta affinità genetica sia la suscettibilità verso numerosi agenti patogeni, tra cui i virus influenzali. La sottospecie nominale (Sus scrofa scrofa) è la più comune e diffusa in Eurasia, dove può arrecare gravi danni economici e ambientali. Se da un lato l’epidemiologia delle infezioni da virus influenzali di tipo A ed il relativo impatto economico negli allevamenti suini sono noti, vi sono ancora scarse informazioni sulla dinamica di circolazione del virus nelle popolazioni di cinghiali a vita libera. Nel presente lavoro è stata condotta un’indagine sierologica per valutare l’esposizione a virus influenzali di tipo A di una popolazione di cinghiali a vita libera distribuiti in un'area protetta della Provincia di Bologna. Metodi. Durante i periodi maggio 2002-luglio 2003 e aprile 2010-aprile 2011, sono stati raccolti 741 campioni di sangue prelevati da cinghiali catturati o abbattuti selettivamente nel Parco Regionale dei Gessi Bolognesi e Calanchi dell’Abbadessa. In questa area protetta di 4.844 ettari situata nella fascia collinare preappenninica bolognese, dal maggio 2002 è applicato un modello di gestione demografica densità-dipendente basato sulla selezione ed il mantenimento di una popolazione a densità nota strutturata in base ad una piramide di popolazione sesso-età dipendente. In funzione dell’eruzione dentaria, gli animali campionati sono stati suddivisi in tre classi di età: 1a classe, 14 mesi. Per differenziare le positività sierologiche dovute ad immunità passiva materna (IPM) da quelle indotte da una risposta sierologica attiva (RSA) post-infezione, la 1a classe è stata ulteriormente suddivisa nelle sottoclassi 1a-IPM e 1a-RSA che comprendono rispettivamente i cinghiali di età

Sus scrofa scrofa, the most common and invasive Eurasian subspecies of wild boar, is the wild ancestor of domestic pig (Sus scrofa domestica), with which it shares close genetic affinity and susceptibility to most pathogens, including influenza viruses. Although much is known about the occurrence of influenza A virus infection in domestic swine herds, there is little information concerning the virus circulation in wild boar populations. During the periods May 2002-July 2003 and April 2010-April 2011, 741 serum samples were collected from free-living wild boars, captured in the Gessi Bolognesi Regional-Park (48.15 km2 area, located in the Emilia-Romagna Region, Northern Italy). Animals were categorised in 3 age classes: 1st class, 14 months. Two-fold serial dilutions of sera were tested for the presence of antibodies against influenza A nucleoprotein by a standard ELISA technique. Antibody titres of 1:8 or more were considered positive. The highest overall seroprevalence was found in the second period: 1.8% (9/502) in 2002-2003 vs. 18.8% (45/239) in 2010-2011. Likewise, age class-based seroprevalences showed higher values in the 2010-2011 period: 1st class, 2.3% (6/263) vs. 24.7% (20/81); 2nd class, 0.8% (1/132) vs. 11.1% (6/54); 3rd class, 1.9% (2/107) vs. 18.3% (19/104). Nine seropositive subjects were characterised by 1:8 titre in the first period, whereas in the second one the following seropositive frequencies were detected: n. 25 (1:8), n. 12 (1:16), n. 6 (1:32), n. 1 (1:64), n. 1 (1:128). Serologic data show an increased circulation of influenza A viruses in the second study period, despite a demographic control program has reduced population density in the area from about 13.5 wild boars/km2 (2002-2003) to about 7.3 wild boars/km2 (2010-2011). Although data from the end of 2003 to mid 2010 are missing, the higher antibody prevalences found in the second period in all age classes, could be the consequence of a new virus introduction in the study area. Infected wild boars could contribute to maintenance of the viral transmission cycle in natural habitats, thus representing a potential threat not only to humans involved in game and wildlife management programs but also to other wild and domestic susceptible species.

Nelle prime due settimane di gennaio 2011, circa 3.000 carcasse di tortore dal collare (Streptopelia decaocto) a vita libera sono state rinvenute nei pressi di un sito industriale, in provincia di Ravenna, dedito alla lavorazione di partite di semi o loro residui. L’esame autoptico di 322 soggetti evidenziava prevalentemente un grave danno renale, epatomegalia e ipoplasia splenica. Gli esami istologici a livello del rene mostravano nefrosi associata a necrosi tubulari e una nefrite interstiziale linfoplasmacellulare. Inoltre, si osservavano deplezione linfocitaria nella milza unitamente ad emosiderosi splenica ed epatica. La stima dell’età su 46 soggetti identificava il 78% di adulti e il 22% di giovani (entro il primo anno di vita). Le analisi chimiche sulle ingesta e su pool di fegati non evidenziavano tossicità da pesticidi clorurati e fosforati, carbammati, triazine, piretroidi, stricnina, neonicotinoidi, Pb, Cd, Cr, Hg, Zn, Cu, micotossine, perossidi. Indagini molecolari (RT-PCR Real-Time) escludevano la presenza di virus influenzali, mentre veniva evidenziato RNA di Paramyxovirus aviario tipo 1 (APMV-1) tramite RTPCR in 176 su 193 animali analizzati. L’isolamento di 27 ceppi di APMV-1 è stato ottenuto inoculando pool di organi su uova embrionate di pollo SPF. Tali ceppi risultavano patogeni in base alla sequenza aminoacidica del sito di clivaggio della proteina di fusione. Il sequenziamento parziale del gene F ha permesso di identificare 2 differenti genotipi cocircolanti: il lineaggio 4b (APMV-1 ceppo piccione) e un distinto cluster genetico del lineaggio 4.

Tra gli uccelli acquatici gli Anseriformi rappresentano il principale serbatoio dei virus influenzali di tipo A e possono albergare la maggior parte dei sottotipi virali caratterizzati sino ad oggi da 16 emoagglutinine e 9 neuroaminidasi diverse. Occasionalmente virus influenzali aviari possono essere trasmessi ad altre specie, compresi i volatili domestici ed i mammiferi. Scopo del lavoro è stato quello di valutare sia la circolazione di virus influenzali tipo A in Anatidi selvatici sia i patterns di prevalenza correlati a stagionalità, sesso e classi di età degli animali campionati all’interno dell’Oasi WWF “Laguna di Orbetello” (GR) nel periodo ottobre 2005/settembre 2006. L’RNA virale è stato estratto da 146 tamponi cloacali prelevati da anatre di superficie catturate con gabbie ad invito. Mediante one-step RT-PCR diretta ad amplificare un tratto specifico del gene M, sono stati identificati i campioni contenenti virus influenzali. Tali campioni sono stati quindi inoculati, per l’isolamento virale, nella cavità allantoidea di uova embrionate di pollo all’undicesimo giorno di incubazione. I liquidi allantoidei ottenuti sono stati analizzati in prove di emoagglutinazione ed ELISA diretta verso la nucleoproteina virale e sono stati considerati positivi i liquidi allantoidei emoagglutinanti positivi ad entrambe queste metodiche. I test del Chi-quadrato ed Esatto di Fisher sono stati utilizzati al fine di evidenziare differenze statisticamente significative in funzione dell’età e sesso dei soggetti campionati e di tre periodi di campionamento (sovrapponibili rispettivamente alla migrazione di discesa, allo svernamento ed al periodo post-riproduttivo). La prevalenza totale è risultata del 26% in RT-PCR e del 9,6% nelle prove di isolamento su uova embrionate. Durante l’intero anno di campionamento nessuna differenza significativa è stata riscontrata tra le classi di età, di sesso e tra i diversi periodi di campionamento mentre dal confronto degli isolamenti ottenuti in adulti e giovani, durante la stagione di svernamento (gennaio/marzo 2006) emerge una differenza significativa (P

La diffusione dei focolai di influenza aviaria A/H5N1 e gli episodi di mortalità nell’uomo registrati nei paesi del Sud-Est asiatico, hanno determinato un crescente allarme nella comunità scientifica e nell’opinione pubblica a causa del potenziale pandemico rappresentato dalla evoluzione del virus. La tempestiva identificazione del virus nelle specie aviarie domestiche e selvatiche, attraverso l’impiego di strumenti diagnostici altamente sensibili, specifici e di rapida esecuzione, è essenziale per l’adozione rapida ed efficace delle misure sanitarie di controllo. La real-time RT-PCR, basata sull’impiego di sonde fluorescenti, rappresenta lo strumento diagnostico in grado di garantire l’identificazione dei virus influenzali, sia umani che aviari, presentando notevoli vantaggi in termini di rapidità, sensibilità e specificità rispetto alle metodiche classiche di isolamento del virus e alle altre metodiche molecolari. Nell’ottica di un continuo miglioramento dell’iter diagnostico per l’identificazione del virus dell’influenza aviaria, è stato sviluppato un saggio di real-time RT-PCR, impiegando una sonda fluorescente Minor Groove Binder, che presenta una serie di innovazioni rispetto alle piattaforme per real-time sinora disponibili per la diagnostica virologica. Il sistema diagnostico è stato calibrato e ottimizzato in termini di specificità, utilizzando un panel di virus influenzali aviari, di origine suina, equina, oltre che umana, dimostrando inoltre una sensibilità tale da renderlo applicabile per lo screening di campioni biologici prelevati dalle specie aviarie domestiche e selvatiche.

Influenza A viruses (IAV) have been repeatedly demonstrated to circulate in wild suid populations. In this study, serum samples were collected from 2618 free-ranging wild boars in a protected area of Northern Italy between 2007 and 2014, and firstly screened by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the presence of antibodies against IAV. The ELISA-positive samples were further tested by hemagglutination inhibition (HI) assays performed using antigen strains representative of the four major swine IAV (sIAV) lineages circulating in Italy: avian-like swine H1N1, pandemic-like swine H1N1, human-like swine H1N2 and human-like swine H3N2. An overall seroprevalence of 5.5% (145/2618) was detected by ELISA, with 56.7% (80/141) of screened sera tests positive by HI assay. Antibodies against H1N1 subtypes were the most prevalent beginning in 2009—with the highest detection in the first quarter of the year—until 2013, although at a low level. In addition, antibodies to H3N2 subtype were found during six years (2007, 2009, 2010, 2011, 2012 and 2014) whereas H1N2 antibodies were detected in 2012 only. Of the HI-positive samples, 30% showed reactivity to both H1N1 and H3N2 subtypes. These results provide additional insight into the circulation dynamics of IAV in wild suid populations, suggesting the occurrence of sIAV spillover events from pigs to wild boars.

Wild aquatic birds represent major reservoirs of the influenza A virus gene pool, from which novel influenza viruses can emerge to infect other avian and mammalian species, including humans. These avian hosts have long been considered the natural reservoir for low pathogenic avian influenza viruses (AIVs) that, in some occasions, can evolve in poultry to become highly pathogenic (HP) AIVs posing a risk for animal and public health. However, changes in viral ecology have been recently observed with the possibility of perpetuation of HPAIVs in the aquatic bird reservoir. Siberia is of great importance in influenza A virus ecology. After a short reproductive season, huge numbers of wild aquatic birds move from different subarctic breeding sites and congregate in pre-migration staging areas of Siberian wetlands. Major intra-and inter-continental bird flyways overlap in these breeding and/or molting grounds where water birds from different wintering regions of the world are brought together, thus providing the influenza A virus gene pool for the possible emergence of novel reassortant viruses. Moreover, in the context of the global ecology of influenza A viruses, Siberian wetlands play a crucial role in the geographical dispersal of the virus, as shown by the HPAI H5 infections, which have spread since the early 2000s via migratory birds from Asia towards Europe, Africa, Middle East and, more recently, North America. Here we consider ecological interactions that take place within the vast region of Siberia among the avian reservoir hosts and viral populations, and the environment they utilize. We also consider ecological drivers which, in the context of the current global change, can modulate in this Asian portion of Russia the influenza A virus circulation and spill-over from wild bird reservoirs to different avian and/or mammalian hosts.