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Dissertação de Mestrado em Bioquímica apresentada à Faculdade de Ciências e Tecnologia Introdução e Objetivos: A lactação é considerada uma fase importante para o desenvolvimento de doenças metabólicas, como a diabetes, bem como para o risco de alterações neuronais na vida adulta. Embora os mecanismos que potenciam estas alterações não sejam totalmente conhecidos, a dieta e a condição metabólica materna são fatores que contribuem para o seu desenvolvimento. A obesidade infantil é uma problemática cada vez maior nos dias de hoje, que leva a um maior risco de desenvolvimento de síndrome metabólica ao longo da vida. Desta forma, este trabalho tem como principais objetivos – 1) avaliar o efeito da glicação materna durante o período de lactação no neurodesenvolvimento e comportamento da descendência, durante a adolescência tanto em machos como em fêmeas; e, 2) avaliar o impacto da exposição da hiperfagia pós-natal no neurodesenvolvimento e comportamento da descendência, num contexto normal e quando expostos a glicação materna.Materiais e Métodos: Foram estudados a descendência (machos e fêmeas) de fêmeas Wistar tratadas com S-p-Bromobenzilgutationa ciclopentil diéster – BBGC (5 mg/kg), um inibidor seletivo da Glioxalase 1 (GLO1), durante os primeiros seis dias após o nasimento. Considerou-se ainda um grupo controlo e um grupo veículo tratado com dimetil sulfóxido (DMSO). Com o objetivo de estudar o impacto da hiperfagia pós-natal (SL), ao dia pós-natal (P) 3, o número de descendentes foi reduzido de oito para três, sendo que foi ainda considerado um grupo em que as progenitoras foram administradas com BBGC – SL+BBGC. Entre P5 e P17, foram efetuados vários testes comportamentais para avaliar o neurodesenvolvimento dos descendentes. Após o desmame, foram coletadas amostras de leite materno para medição dos triglicerídeos e quantificação da capacidade antioxidante total. A P43 e P44 foram efetuados testes de comportamento para avaliar a capacidade locomotora, o comportamento ansioso e o processo de recognição de memória na descendência. A P45 foi realizada uma prova de tolerância à insulina, os níveis de triglicerídeos foram medidos seguindo-se a coleta do hipocampo e córtex pré-frontal para estudos moleculares.Resultados: A glicação materna causa alterações na composição do leite induzindo uma redução dos níveis dos triglicerídeos e da capacidade antioxidante total. Verificou-se ainda que tanto a descendência feminina como masculina não apresentou alterações no peso corporal, nem dos níveis de glicose durante a prova de tolerância à insulina. Contudo, a glicação materna induziu menores níveis de glioxalase 1 no hipocampo dos descendentes machos acompanhado por uma maior acumulação de MG-H1 e Argpirimidina. Por outro lado, não foram observadas alterações significativas no córtex pré-frontal. A glicação materna acelera o desenvolvimento do sistema vestibular e do sistema olfativo dos machos enquanto induz uma antecipação da abertura dos olhos e da capacidade auditiva em ambos os sexos. A exposição precoce ao BBGC demonstrou reduzir os níveis de ansiedade tanto nos machos como nas fêmeas. Observou-se ainda um aumento dos níveis da expressão dos recetores do GABAA no hipocampo dos machos. Paralelamente, no hipocampo das fêmeas o aumento dos níveis do recetor do GABAA foi acompanhado por uma diminuição dos níveis de proteínas envolvidas na sinapse glutamatérgica. Tendo em consideração o segundo objetivo, a exposição à hiperfagia pós-natal demonstrou induzir excesso de peso na descendência bem como uma redução periférica dos níveis de sensibilidade à insulina. Quando expostos à glicação materna, este efeito foi perdido apesar de se continuar a verificar menor sensibilidade à insulina. Ambos os grupos não demonstraram alterações nos testes de neurodesenvolvimento e, apenas a descendência do grupo SL demonstrou desenvolver um comportamento ansioso. Acompanhado por um aumento dos níveis de proteínas antioxidantes como a glioxalase e a catalase no hipocampo da descendência, que é perdido quando expostos à glicação materna. Verificou-se ainda que ambos os grupos apresentavam maiores níveis de proteínas sinápticas, como a sinapsina e a PSD-95, sem alterações nos níveis de proteínas envolvidas nas sinapses excitatórias (vGLUT1) e inibitórias (vGAT).Conclusão: A exposição precoce à glicação materna induz alterações na composição do leite, no neurodesenvolvimento da descendência durante a infância e consequentemente a alterações neurometabólicas que aumentam a predisposição para um comportamento menos ansioso na adolescência. A exposição a um ambiente hiperfágico durante o período pós-natal induz alterações metabólicas na descendência, aumentando o risco de desenvolver síndrome metabólica na vida adulta, bem como maior ansiedade na adolescência. Introduction and Objectives: Lactation is considered a critical phase for the development of metabolic disease and for the programming of neuronal changes in adult life. Although the mechanisms that underlying these changes are not fully understood, maternal diet and metabolic conditions are key factors that contribute to their development. On the other hand, childhood obesity is a growing problem nowadays, leading to a higher predisposition for the development of metabolic syndrome later in adulthood. Thus, this work has two main objectives – 1) study the effect of maternal glycation during lactation period on neurodevelopment and offspring behaviour at adolescence, assessing sex differences; and 2) study the impact of postnatal hyperphagia on offspring neurodevelopment and behaviour, with and without exposure to maternal glycation.Materials and Methods: We studied male and female offspring of female Wistar rats treated with S-p-Bromobenzylguthione cyclopentyl diester - BBGC (5 mg/kg), a selective inhibitor of Glyoxalase 1 (GLO1), during the first six days of lactation period. A control group and a vehicle group treated with dimethyl sulfoxide (DMSO) were also considered. To study the impact of postnatal hyperphagia (SL), after postnatal day (P) 3, the number of offspring was reduced from eight to three pups. In addition, it was also considered a group in which the mothers were simultaneously treated with BBGC – SL+BBGC. Between P5 and P17, several behavioural tests were performed to assess the neurodevelopment of the offspring. After weaning, breast milk samples were collected to measure triglycerides and quantify the total antioxidant capacity. At P43 and P44, locomotor ability, anxious behaviour and recognition memory processes was assessed in the offspring. At P45 an insulin tolerance test was performed, triglycerides levels were measured and the hippocamps and prefrontal cortex were collected to molecular analysis.Results: Maternal glycation causes changes in milk composition, inducing a reduction in triglyceride levels and total antioxidant capacity. Our results demonstrates that both female and male offspring do not show changes in body weight or glucose levels during the insulin tolerance test. However, maternal glycation induced lower levels of glyoxalase 1 in the hippocampus of male offspring accompanied with a higher accumulation of MG-H1 and Argpyrimidine. On the other hand, no significant changes were observed in the prefrontal cortex. Maternal glycation accelerated the development of the vestibular and olfactory systems in male offspring while inducing an anticipation of eye opening and auditory capacity in both sexes. Early exposure to BBGC had an anxiolytic effect both males and females, accompanied with increased levels of GABAA. In parallel, in the female hippocampus, the increase levels of in GABAA receptor were observed in parallel with a decrease in the levels of proteins at the glutamatergic synapse.Regarding our second aim, our results demonstrate that postnatal hyperphagia increased weight gain in offspring and induced a reduction in peripheral insulin sensitivity levels. When exposed to maternal glycation, weight gain was lost despite having lower insulin sensitivity. Both groups – SL and SL+BBGC- do not shown changes in neurodevelopmental tests, and only the offspring of the SL group was shown to develop an anxious-like behaviour. It was also observed an increase in the levels of antioxidant proteins such as glyoxalase and catalase in the offspring's hippocampus from SL group, an effect that is lost when exposed to maternal glycation. Additionally, both groups were found to have higher levels of synaptic proteins, such as synapsin and PSD-95, without no changes in the levels of proteins involved in excitatory (vGLUT1) and inhibitory (vGAT and GABAA).Conclusion: Early exposure to maternal glycation induces changes in milk composition and changes in the neurodevelopment of male and female offspring during childhood and leads to neurometabolic changes and less anxious-like behaviour or more risk-taking in adolescence. Exposure to a hyperphagic environment during the postnatal period induces metabolic changes in the offspring, increasing the risk of developing metabolic syndrome in adulthood, as well as an anxious-like behaviour in adolescence.

Introdução – A estimativa da função renal relativa (FRR) através de cintigrafia renal (CR) com ácido dimercaptossuccínico marcado com tecnécio-99 metastável (99mTc-DMSA) pode ser influenciada pela profundidade renal (PR), atendendo ao efeito de atenuação por parte dos tecidos moles que envolvem os rins. Dado que raramente é conhecida esta mesma PR, diferentes métodos de correção de atenuação (CA) foram desenvolvidos, nomeadamente os que utilizam fórmulas empíricas, como os de Raynaud, de Taylor ou de Tonnesen, ou recorrendo à aplicação direta da média geométrica (MG). Objetivos – Identificar a influência dos diferentes métodos de CA na quantificação da função renal relativa através da CR com 99mTc-DMSA e avaliar a respetiva variabilidade dos resultados de PR. Metodologia – Trinta e um pacientes com indicação para realização de CR com 99mTc-DMSA foram submetidos ao mesmo protocolo de aquisição. O processamento foi efetuado por dois operadores independentes, três vezes por exame, variando para o mesmo processamento o método de determinação da FRR: Raynaud, Taylor, Tonnesen, MG ou sem correção de atenuação (SCA). Aplicou-se o teste de Friedman para o estudo da influência dos diferentes métodos de CA e a correlação de Pearson para a associação e significância dos valores de PR com as variáveis idade, peso e altura. Resultados – Da aplicação do teste de Friedman verificaram-se diferenças estatisticamente significativas entre os vários métodos (p=0,000), excetuando as comparações SCA/Raynaud, Tonnesen/MG e Taylor/MG (p=1,000) para ambos os rins. A correlação de Pearson demonstra que a variável peso apresenta uma correlação forte positiva com todos os métodos de cálculo da PR. Conclusões – O método de Taylor, entre os três métodos de cálculo de PR, é o que apresenta valores de FRR mais próximos da MG. A escolha do método de CA influencia significativamente os parâmetros quantitativos de FRR., Saúde & Tecnologia, N.º 13 (2015): Maio 2015

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Introdução – A estimativa da função renal relativa (FRR) através de cintigrafia renal (CR) com ácido dimercaptossuccínico marcado com tecnécio-99 metaestável (99mTc-DMSA) pode ser influenciada pela profundidade renal (PR), atendendo ao efeito de atenuação por parte dos tecidos moles que envolvem os rins. Dado que raramente é conhecida esta mesma PR, diferentes métodos de correção de atenuação (CA) foram desenvolvidos, nomeadamente os que utilizam fórmulas empíricas, como os de Raynaud, de Taylor ou de Tonnesen, ou recorrendo à aplicação direta da média geométrica (MG). Objetivos – Identificar a influência dos diferentes métodos de CA na quantificação da função renal relativa através da CR com 99mTc-DMSA e avaliar a respetiva variabilidade dos resultados de PR. Metodologia – Trinta e um pacientes com indicação para realização de CR com 99mTc-DMSA foram submetidos ao mesmo protocolo de aquisição. O processamento foi efetuado por dois operadores independentes, três vezes por exame, variando para o mesmo processamento o método de determinação da FRR: Raynaud, Taylor, Tonnesen, MG ou sem correção de atenuação (SCA). Aplicou-se o teste de Friedman para o estudo da influência dos diferentes métodos de CA e a correlação de Pearson para a associação e significância dos valores de PR com as variáveis idade, peso e altura. Resultados – Da aplicação do teste de Friedman verificaram-se diferenças estatisticamente significativas entre os vários métodos (p=0,000), excetuando as comparações SCA/Raynaud, Tonnesen/MG e Taylor/MG (p=1,000) para ambos os rins. A correlação de Pearson demonstra que a variável peso apresenta uma correlação forte positiva com todos os métodos de cálculo da PR. Conclusões – O método de Taylor, entre os três métodos de cálculo de PR, é o que apresenta valores de FRR mais próximos da MG. A escolha do método de CA influencia significativamente os parâmetros quantitativos de FRR. ABSTRACT: Introduction – The estimate of relative renal function (RRF) through scintigraphy with dimercaptosuccinic acid labelled with Technetium-99 metastable (99mTc-DMSA) may be influenced by kidney depth (KD), due to attenuation by soft tissue surrounding the kidneys. Considering that rarely this KD is known, several methods for attenuation correction (AC) have been developed, namely those using empirical formulae, such as Raynaud, Taylor or Tonnesen methods, or by direct calculation of the geometric mean (GM). Objectives – To identify the influence of different AC methods on RRF estimate by scintigraphy with 99mTc-DMSA and to evaluate the respective KD variability. Methods: Thirty-one patients were referred for 99mTc-DMSA scintigraphy and underwent the same acquisition protocol. Processing was performed by 2 independent operators, three times per exam, changing for the same processing the methods for the FRR determination: Raynaud’s method, Taylor’s method, Tonnesen´s method, GM and without AC (WAC). Friedman’s test was used to identify the influence of the different AC methods on RRF estimate and Pearson’s correlation test was used to evaluate the association and significance between KD and the variables age, weight and height. Results – Friedman’s test indicated that there were significant differences between methods (p=0.000), except for WAC/Raynaud, Tonnesen/GM and Taylor/GM (p=1.000) comparisons, for both kidneys. Pearson’s test showed a strong positive correlation between weight and the three methods of KD estimation. Conclusions – Taylor’s method, regarding the three methods of KD calculation, is the closest to GM. The choice of the attenuation correction method influences significantly the quantitative parameters of FRR.

A revisão bibliográfica realizada aponta para a necessidade de compreender a natureza e as características comunicativas da Pessoa com afasia e do cuidador, tendo em conta as implicações que daí poderão advir para a PBE. Com este trabalho pretende-se: a) identificar as dificuldades sentidas pelo cuidador no processo de comunicação com a Pessoa com afasia; b) identificar as dificuldades comunicativas apresentadas pela Pessoa com afasia; c) identificar estratégias facilitadoras da comunicação entre os cuidadores e a Pessoa com afasia e, por fim; d) determinar o perfil comunicativo da díade: cuidador - Pessoa com afasia. O desenho do presente estudo é não experimental, quantitativo, de tipo descritivo, transversal. Este tem como objeto de estudo o perfil comunicativo da díade. Pretende-se que a amostra seja constituída por 30 díades. Foram utilizados um questionário sociodemográfico e o instrumento de avaliação CAPPA - Breve. Encontram-se salvaguardados todos os procedimentos formais, éticos e deontológicos. O levantamento de potenciais estratégias de comunicação que possam ser utilizadas por outros profissionais e cuidadores, poderá ser essencial para contribuir para a eficácia comunicativa e funcionalidade das Pessoas com afasia e cuidadores. info:eu-repo/semantics/publishedVersion

O envelhecimento populacional traz um número vasto de implicações que incluem, entre outras, condições de baixa imunidade. Esta situação implica maior risco de infecções no idoso, comparativamente ao jovem. Outras situações podem, também, contribuir para aumentar esse risco, nomeadamente má ventilação, aglomerado populacional, condições de humidade. Condições especiais, como o caso de indivíduos portadores, podem também contribuir para o risco de infecções no idoso. O tratamento das infecções passa pela administração criteriosa de antibióticos. A identificação de espécies e estirpes é de grande importância, assim como a indicação adequada dos antibióticos. Nesse sentido, o Sistema Europeu de Vigilância da Resistência Antimicrobiana (EARSS) alerta para o desenvolvimento de bactérias multiresistentes aos antibióticos que deste modo representam uma ameaça crescente para a eficácia destes medicamentos. O objectivo geral deste trabalho foi o de isolar e caracterizar estirpes bacterianas de Gram positivo provenientes de isolados ambientais em Lares de 3ª idade, bem como descrever o seu perfil de resistência a diversos grupos de antibióticos. Como complemento, estudou-se também a sua susceptibilidade a dois tipos de desinfectantes comummente utilizados. As amostras foram recolhidas num único tempo de recolha e estas foram transportadas para laboratório no meio Cary Blair. Este estudo fará referência às amostras de zaragatoas de superfície provenientes de três lares de 3ª idade, localizados no distrito de Bragança. No isolamento foi utilizado um meio selectivo (Ágar Chapman), de acordo com os géneros a estudar. Para a identificação preliminar dos isolados utilizaram-se métodos morfo-fisiológicos, nomeadamente a coloração de Gram e um conjunto de provas bioquímicas (oxidase, catalase e coagulase). Para a identificação dos géneros dos isolados de Gram positivo em estudo utilizou-se o sistema de identificação numérica API Staph (bioMérieux). A susceptibilidade aos agentes antibacterianos foi determinada pela técnica de difusão em disco (método Kirby Bauer), avaliando-se o comportamento dos isolados estudados face a diversos grupos de antibióticos: β-lactâmicos, aminoglicosídicos, quinolonas, tetraciclinas, fenicóis, sulfonamidas, macrólidos, fosfomicinas, glicopéptidos, fluroquinonas e ansamicinas. A susceptibilidade das bactérias aos desinfectantes também foi determinada pela técnica de difusão em disco. Da análise do perfil de susceptibilidade aos antibióticos verificou-se que dois dos três lares de 3ª idade estudados apresentaram multiresistência a antibióticos, nomeadamente ao ácido nalidíxico (quinolonas), sulfametoxazol (sulfonamidas) e eritromicina (macrólidos). Os resultados mostram que os isolados apresentaram maior resistência ao ácido nalidíxico e apresentaram maior sensibilidade, isto é, maior eficácia à vancomicina e teicoplanina (glicopeptídeos) e à rifampicina (ansamicinas). Relativamente aos desinfectantes, verificou-se eficácia para ambos, no entanto em termos relativos o desinfectante à base de compostos clorados mostrou-se mais eficaz. Das bactérias identificadas destaca-se Staphylococcus cohnii, Staphylococcus xylosus e Staphylococcus epidermidis, estas duas últimas espécies apresentaram um perfil de multi-resistência. Staphylococcus epidermidis e Staphylococcus cohnii são espécies da microbiota normal dos humanos e geralmente poderão resultar de contaminação hospitalar (nosocomiais), enquanto que Staphylococcus xylosus normalmente é isolada de produtos lácteos e carne e é comummente usada para a fermentação de carnes, e a sua presença no Lar poderá ser devida a contaminação cruzada do ambiente das cozinhas. Estes resultados vêem confirmar a importância de consciencializar utentes e funcionários para correctas práticas de higiene pessoal. Population aging brings a vast number of implications that include, among others, low immunity conditions. This implies a higher risk of infections in the elderly compared to young people. Some situations can increase this risk, including poor ventilation, crowded population and moist conditions. Special conditions, as the case of individuals with infections, may also contribute to the risk of contamination in the elderly. The treatment of infections involves the careful administration of antibiotics, knowing that the identification of species and strains is of great importance, as well as appropriate antibiotics indication. In this sense, the European System of Antimicrobial Resistance Surveillance (EARSS) alert to the development of antibiotic-resistant bacteria, which thus represent a growing threat to the effectiveness of these drugs. The overall objective of this study was to isolate and characterize gram-positive bacterial strains, derived from environmental isolates in nursing homes, and to describe the profile of resistance to several groups of antibiotics. In addition, we also studied their susceptibility to two types of commonly used disinfectants. Samples were collected on a single sampling time, and these were transported to the laboratory in a Cary Blair medium. This study refers to the surface swab samples from three nursing homes located in the district of Bragança. On insulation was used in a selective medium (Chapman agar), according to study gender. For preliminary identification of isolates were used morphological and physiological methods, including Gram stain and a set of biochemical tests (oxidase, catalase and coagulase), and for the identification of genera of the Gram-positive isolates, we used the numeric identification system API Staph (bioMérieux). Resistance to antibacterial agents was determined by disk diffusion technique (Kirby Bauer method), evaluating the behavior of the isolates against various groups of antibiotics: β-lactams, aminoglycosides, quinolones, tetracycline, fenicol, sulfonamides, macrolides, fosfomycin, glycopeptides, ansamycin and fluoroquinolones. The susceptibility of bacteria to disinfectants was also evaluated by the disk diffusion technique. From the profile analysis of antibiotic susceptibility tested in Gram positive bacteria, it was found that two of the three nursing homes studied showed multidrug resistance to antibiotics, including nalidixic acid (quinolones), sulfamethoxazole (sulfonamide) and erythromycin (macrolide). The results showed that the more resistant isolated was to nalidixic acid and that the higher sensitivity, ie, the most effectives were to vancomicin, teicoplanin (glycopeptide) and rifampicin (ansamicin). Regarding to disinfectants, we seen that both were effective, however, in relative terms, the disinfectant based on chlorine was more effective. From bacteria identified, stands out the Staphylococcus cohnii, Staphylococcus xylosus and Staphylococcus epidermidis, showing both of them a multi-resistance profile. Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus cohnii are species of the normal microbiota of humans and can often result from hospital contamination (nosocomial), while Staphylococcus xylosus is usually isolated from dairy products and meat. It is usually used for fermentation of meat and its presence in the home, may be due to cross contamination of the environment of the kitchen. These results confirm the importance of user and staff awareness to correct personal hygiene practices.

O envelhecimento populacional traz um número vasto de implicações que incluem, entre outras, condições de baixa imunidade e por isso maior risco de infecções. Algumas situações podem contribuir para aumentar esse risco, nomeadamente má ventilação, aglomerado populacional, condições de humidade e fraca higienização. O tratamento das infecções passa pela administração criteriosa de antibióticos. A identificação de espécies e estirpes é de grande importância, assim como a indicação adequada dos antibióticos. Nesse sentido, o Sistema Europeu de Vigilância da Resistência Antimicrobiana (EARSS) alerta para o desenvolvimento de bactérias resistentes aos antibióticos com consequências importantes na redução da eficácia dos mesmos. Assim, o objectivo geral deste trabalho foi o de isolar e caracterizar estirpes bacterianas de Gram positivo provenientes de isolados ambientais em Lares de 3ª idade, bem como descrever o seu perfil de resistência a diversos grupos de antibióticos. Como complemento, estudou-se também a sua susceptibilidade a dois tipos de desinfectantes comummente utilizados.