Search

Tropomiozini su visoko očuvani kontraktilni proteini kod kičmenjaka i beskičmenjaka, molekulske mase od oko 35-38 kDa. Uprkos njihovoj relativno maloj zastupljenosti, kod porodice beskičmenjaka prepoznati su kao pan-alergeni. Prema statistici tropomiozini su treći najčešći uzrok anafilakse izazvane hranom. U ovom radu ispitani su uslovi optimalne ekstrakcije proteina sirovih i kuvanih dagnji. Krajnji cilj je bila kvantifikacija tropomiozina u dobijenim ekstraktima sirovih i kuvanih dagnji, razvijanjem i optimizacijom uslova ELISA testa. Za potrebe optimizacije uslova ekstrakcije korišćeno je nekoliko pufera različitih pH vrednosti i jonske sile, kao i različito vreme ekstrakcije (2 h i 24 h). Kao model organizam izabrana je mediteranska dagnja. Kvantifikacija proteina u ekstraktima urađena je Bredfordovom metodom, proteinski profili ekstrakata vizualizovani su pomoću natrijum-dodecilsulfat poliakrilamidne gel elektroforeze (SDS-PAGE), a potom je potvrđeno prisustvo tropomiozina Western blotom sa monoklonskim i poliklonskim antitelima. Nakon optimizacije ELISA testa urađena je kvantifikacija tropomiozina u dobijenim ekstraktima. Prema dobijenim rezultatima, nije primećena statistički značajna razlika u koncentracijama proteina u ekstraktima dobijenim nakon 2 h i 24 h. Ekstrakcija proteina dagnji pokazala se efikasnijom sa porastom pH pufera. Vrednosti koncentracija proteina u ekstraktima sirovih i kuvanih dagnji, dobijene Bredfordovom metodom, u skladu su sa elektroforetskim profilima ekstrakata. Denzitometrijom, sa gela kuvanih uzoraka nakon SDS-PAGE, procenjene su bile koncentracije tropomiozina. Western blotom, odrađenim nakon SDS-PAGE, potvrđeno je prisustvo tropomiozina. Pokazano je da tropomiozin kuvanih ekstrakata daje jači signal od tropomiozina iz sirovih solubilnih ekstrakata dagnji. Radi kvantifikacije tropomiozina razvijen je sendvič ELISA test i izračunati su limit detekcije i limit kvantifikacije testa. Koncentracije tropomiozina u ekstraktima dobijene

Morski plodovi su česti uzročnici alergija širom svijeta koje mogu imati i fatalan ishod. Stoga, u cilju njihove prevencije neophodna je detekcija i kvantifikacija alergena, kao i redukcija njihove alergenosti. Termalno procesovanje hrane je jedan od načina smanjenja alergenosti, ali problem je stabilnost određenih proteina na visokim temperaturama, među kojima je i tropomiozin. Riječ je o glavnom termostabilnom alergenu rakova. U ovom radu su optimizovani uslovi ekstrakcije ukupnih proteina zapadno-pacifičkih kozica (lat. Solenocera melantho). Dobijen je uvid u uspješnost ekstrakcije određivanjem koncentracije ukupnih proteina i upoređivanjem elektroforetskih profila. Tropomiozin i ostali alergeni kozica su detektovani Western blotom, a u cilju osjetljive kvantifikacije tropomiozina u ekstraktima razvijen je i ELISA test. Takođe, ispitana je ukrštena reaktivnost tropomiozina iz morskih plodova i iz grinja Western blotom.

Morski plodovi su česti uzročnici alergija širom svijeta koje mogu imati i fatalan ishod. Stoga, u cilju njihove prevencije neophodna je detekcija i kvantifikacija alergena, kao i redukcija njihove alergenosti. Termalno procesovanje hrane je jedan od načina smanjenja alergenosti, ali problem je stabilnost određenih proteina na visokim temperaturama, među kojima je i tropomiozin. Riječ je o glavnom termostabilnom alergenu rakova. U ovom radu su optimizovani uslovi ekstrakcije ukupnih proteina zapadno-pacifičkih kozica (lat. Solenocera melantho). Dobijen je uvid u uspješnost ekstrakcije određivanjem koncentracije ukupnih proteina i upoređivanjem elektroforetskih profila. Tropomiozin i ostali alergeni kozica su detektovani Western blotom, a u cilju osjetljive kvantifikacije tropomiozina u ekstraktima razvijen je i ELISA test. Takođe, ispitana je ukrštena reaktivnost tropomiozina iz morskih plodova i iz grinja Western blotom.

Tropomiozini su visoko očuvani kontraktilni proteini kod kičmenjaka i beskičmenjaka, molekulske mase od oko 35-38 kDa. Uprkos njihovoj relativno maloj zastupljenosti, kod porodice beskičmenjaka prepoznati su kao pan-alergeni. Prema statistici tropomiozini su treći najčešći uzrok anafilakse izazvane hranom. U ovom radu ispitani su uslovi optimalne ekstrakcije proteina sirovih i kuvanih dagnji. Krajnji cilj je bila kvantifikacija tropomiozina u dobijenim ekstraktima sirovih i kuvanih dagnji, razvijanjem i optimizacijom uslova ELISA testa. Za potrebe optimizacije uslova ekstrakcije korišćeno je nekoliko pufera različitih pH vrednosti i jonske sile, kao i različito vreme ekstrakcije (2 h i 24 h). Kao model organizam izabrana je mediteranska dagnja. Kvantifikacija proteina u ekstraktima urađena je Bredfordovom metodom, proteinski profili ekstrakata vizualizovani su pomoću natrijum-dodecilsulfat poliakrilamidne gel elektroforeze (SDS-PAGE), a potom je potvrđeno prisustvo tropomiozina Western blotom sa monoklonskim i poliklonskim antitelima. Nakon optimizacije ELISA testa urađena je kvantifikacija tropomiozina u dobijenim ekstraktima. Prema dobijenim rezultatima, nije primećena statistički značajna razlika u koncentracijama proteina u ekstraktima dobijenim nakon 2 h i 24 h. Ekstrakcija proteina dagnji pokazala se efikasnijom sa porastom pH pufera. Vrednosti koncentracija proteina u ekstraktima sirovih i kuvanih dagnji, dobijene Bredfordovom metodom, u skladu su sa elektroforetskim profilima ekstrakata. Denzitometrijom, sa gela kuvanih uzoraka nakon SDS-PAGE, procenjene su bile koncentracije tropomiozina. Western blotom, odrađenim nakon SDS-PAGE, potvrđeno je prisustvo tropomiozina. Pokazano je da tropomiozin kuvanih ekstrakata daje jači signal od tropomiozina iz sirovih solubilnih ekstrakata dagnji. Radi kvantifikacije tropomiozina razvijen je sendvič ELISA test i izračunati su limit detekcije i limit kvantifikacije testa. Koncentracije tropomiozina u ekstraktima dobijene

Tato bakalářská práce, zpracována rešeršní formou, poskytuje přehled o metodách moleku-lární biologie při zkoumání kvality potravin. Hlavní část práce dokumentuje metodu PCR, další metody pro zkoumání kvality potravin a analýzu proteinů. Další část je zaměřena na falzifikaci potravin. Jsou zde popsány nejčastěji falzifikované potraviny. Poslední část se zabývá detekcí reziduí ve zpracovaných potravinách, kde se charakterizuje pojem alergen. Dále se zabývá potravinami, v nichž se detekují významné alergeny (araší-dy, kravské mléko, mléčné výrobky, vejce) a metodami detekce těchto alergenů., The bachelor thesis, elaborated as a review, provides an overview of the molecular-biology methods researching food quality. The main part of this work documents the PCR methods and other methods researching food quality and an analysis of proteins. Next part is concentrated on the falsification of foods. The most frequently falsificated foods are described there. Last part of the work discusses common issues on detection of the allergenic residues on equipment and in processed foods. This part desribes the foods where are major allergens (for example peanuts, cow's milk, milk products and eggs) detected. Several methods used to detect residues in foods are discussed, too., Ústav potravinářského inženýrství, obhájeno