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Bovine trypanosomiasis is a hemoparasitic disease transmitted in Latin America mainly by biting flies of the family Tabanidae. The study aimed to evaluate infection by Trypanosoma vivax and Trypanosoma evansi in cattle specialized in milk production on a farm and their potential vectors. A direct parasitological and entomological study was performed using microscopy techniques and polymerase chain reaction (PCR) with two molecular markers to differentiate Trypanosoma species in blood samples of cattle and flies. Infection frequency with Trypanosoma vivax and Trypanosoma evansi in cattle was 3.6 and 0%, respectively. Characterization of vectors shows Haematobia irritans as the most frequent fly in the study area (97.1%), followed by Stomoxys calcitrans (2.8%). No horseflies were identified. T. vivax and T. evansi were found in proboscis and thorax-abdomen of biting flies Haematobia irritans and Stomoxys calcitrans, representing an epizootic behavior, atypical in South American countries. Due to its high population density, it is suggested that the Haematobia irritans fly is the main potential vector., A tripanossomíase bovina é uma doença causada por hemoparasitas e transmitida na América Latina principalmente por moscas picadoras da família Tabanidae. O objetivo do estudo foi avaliar a infecção por Trypanosoma vivax e Trypanosoma evansi em gado bovino especializada em produção de leite em uma fazenda e seus potenciais vectores. Se realizou um estudo parasitológico e entomológico direto por técnicas de microscopia e reação em cadeia da polimerase (PCR) com dois marcadores moleculares para diferenciar espécies de Typanosoma em amostras de sangue de bovinos e moscas. A frequência de infecção por Trypanosoma vivax e Trypanosoma evansi em bovinos foi de 3,6 e 0 %, respectivamente. A caracterização de vetores mostra a Haematobia irritans como a mosca mais frequente na zona de estudo (97,1 %), seguida de Stomoxys calcitrans (2,8 %). Não se identificaram tabanídeos. Se encontrou T. vivax e T. evansi em proboscídea e tórax-abdômen das moscas picadoras Haematobia irritans e Stomoxys calcitrans, o que representa um comportamento epizoótico atípico ao que sucede em países da América do Sul. Por sua alta densidade populacional, se sugere a mosca Haematobia irritans como o principal potencial vetor., La tripanosomiasis bovina es una enfermedad hemoparasitaria transmitida en Latinoamérica principalmente por moscas picadoras de la familia Tabanidae. El objetivo del estudio fue evaluar la infección por Trypanosoma vivax y Trypanosoma evansi en ganadería bovina especializada en producción de leche en una hacienda y sus potenciales vectores. Se realizó un estudio parasitológico y entomológico directo por técnicas de microscopia y reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con dos marcadores moleculares para diferenciar especies de Trypanosoma en muestras de sangre de bovinos y moscas. La frecuencia de infección por Trypanosoma vivax y Trypanosoma evansi en bovinos fue de 3,6 y 0 %, respectivamente. La caracterización de vectores muestra a Haematobia irritans como la mosca más frecuente en la zona de estudio (97,1 %), seguida de Stomoxys calcitrans (2,8 %). No se identificaron tabánidos. Se encontró T. vivax y T. evansi en probóscide y toráx-abdomen de las moscas picadoras Haematobia irritans y Stomoxys calcitrans, lo que representa un comportamiento epizoótico atípico al que sucede en países de Suramérica. Por su alta densidad poblacional, se sugiere la mosca Haematobia irritans como el principal potencial vector.

Bovine trypanosomiasis is a hemoparasitic disease transmitted in Latin America mainly by biting flies of the family Tabanidae. The study aimed to evaluate infection by Trypanosoma vivax and Trypanosoma evansi in cattle specialized in milk production on a farm and their potential vectors. A direct parasitological and entomological study was performed using microscopy techniques and polymerase chain reaction (PCR) with two molecular markers to differentiate Trypanosoma species in blood samples of cattle and flies. Infection frequency with Trypanosoma vivax and Trypanosoma evansi in cattle was 3.6 and 0%, respectively. Characterization of vectors shows Haematobia irritans as the most frequent fly in the study area (97.1%), followed by Stomoxys calcitrans (2.8%). No horseflies were identified. T. vivax and T. evansi were found in proboscis and thorax-abdomen of biting flies Haematobia irritans and Stomoxys calcitrans, representing an epizootic behavior, atypical in South American countries. Due to its high population density, it is suggested that the Haematobia irritans fly is the main potential vector., A tripanossomíase bovina é uma doença causada por hemoparasitas e transmitida na América Latina principalmente por moscas picadoras da família Tabanidae. O objetivo do estudo foi avaliar a infecção por Trypanosoma vivax e Trypanosoma evansi em gado bovino especializada em produção de leite em uma fazenda e seus potenciais vectores. Se realizou um estudo parasitológico e entomológico direto por técnicas de microscopia e reação em cadeia da polimerase (PCR) com dois marcadores moleculares para diferenciar espécies de Typanosoma em amostras de sangue de bovinos e moscas. A frequência de infecção por Trypanosoma vivax e Trypanosoma evansi em bovinos foi de 3,6 e 0 %, respectivamente. A caracterização de vetores mostra a Haematobia irritans como a mosca mais frequente na zona de estudo (97,1 %), seguida de Stomoxys calcitrans (2,8 %). Não se identificaram tabanídeos. Se encontrou T. vivax e T. evansi em proboscídea e tórax-abdômen das moscas picadoras Haematobia irritans e Stomoxys calcitrans, o que representa um comportamento epizoótico atípico ao que sucede em países da América do Sul. Por sua alta densidade populacional, se sugere a mosca Haematobia irritans como o principal potencial vetor., La tripanosomiasis bovina es una enfermedad hemoparasitaria transmitida en Latinoamérica principalmente por moscas picadoras de la familia Tabanidae. El objetivo del estudio fue evaluar la infección por Trypanosoma vivax y Trypanosoma evansi en ganadería bovina especializada en producción de leche en una hacienda y sus potenciales vectores. Se realizó un estudio parasitológico y entomológico directo por técnicas de microscopia y reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con dos marcadores moleculares para diferenciar especies de Trypanosoma en muestras de sangre de bovinos y moscas. La frecuencia de infección por Trypanosoma vivax y Trypanosoma evansi en bovinos fue de 3,6 y 0 %, respectivamente. La caracterización de vectores muestra a Haematobia irritans como la mosca más frecuente en la zona de estudio (97,1 %), seguida de Stomoxys calcitrans (2,8 %). No se identificaron tabánidos. Se encontró T. vivax y T. evansi en probóscide y toráx-abdomen de las moscas picadoras Haematobia irritans y Stomoxys calcitrans, lo que representa un comportamiento epizoótico atípico al que sucede en países de Suramérica. Por su alta densidad poblacional, se sugiere la mosca Haematobia irritans como el principal potencial vector.

[ES]: El objetivo de esta tesis fue identificar genes implicados en la sobrevivencia y reproducción de Haematobia irritans, a partir del análisis bioinformático de una biblioteca de ADNc y confirmados mediante iARN. Se construyó una biblioteca de ADNc con tejidos abdominales de H. irritans. Se secuenciaron y ensamblaron 2,160 ESTs de alta calidad en 992 unigenes (178 contiguos, 814 individuales), con funciones moleculares de serin proteasas, metabolismo celular, función mitocondrial, transcripción y traslación, transporte, vitelogénesis, citoesqueleto, respuesta celular al estrés e infección, entre otras. El análisis funcional se realizó utilizando por primera vez la iARN en moscas H. irritans. Se realizó el silenciamiento génico en los grupos de serina proteasa e inhibidor de proteasas, VTG, FER, vATPasa, componentes del proteasoma, respuesta inmune y 5’-NUC. Los resultados obtenidos del silenciamiento fueron alta mortalidad de H. irritans (grupos funcionales de serina proteasa e inhibidor de proteasas), reducción en la oviposición (VTG, FER y vATPasa) o ambos (componentes del proteasoma, respuesta inmune y 5’-NUC); mientras que para los grupos de ubiquitinación y vATPasa no tuvo efecto en la mortalidad ni en la oviposición comparado con los testigos. Se realizó el análisis de expresión y polimorfismo de los unigenes de componentes del proteasoma y respuesta inmune, lo que permitió observar expresión diferencial en los distintos estadios evolutivos y que se trata de secuencias altamente conservadas. Adicionalmente se analizó la prevalencia de ARN de patógenos encontrados en la biblioteca de ADNc de H. irritans, mediante RT-PCR en tiempo real obteniendo una prevalencia del 94-80% virus Nora, 100% Wolbachia y 100% Mycobacterium bovis, en la población analizada. En conclusión, estos resultados muestran avances en la caracterización molecular y amplian el repertorio de patógenos que afectan a las moscas H. irritans; además sugieren candidatos a antígenos protectores a, [EN]: The aim of this thesis was to identify genes involved in the survival and reproduction of Haematobia irritans, from bioinformatic analysis of a cDNA library and confirmed by RNAi. A cDNA library was constructed with abdominal tissues of H. irritans. 2,160 high quality ESTs were sequenced and assembled into 992 unigenes (178 contigs, 814 singlets) with molecular functions of serine proteases, cell metabolism, mitochondrial function, transcription and translation, transport, vitelogenesis, cytoskeleton, cellular response to stress and infection, among others. Functional analysis was performed using RNAi for the first time in H. irritans flies. Gene silencing in groups of serine protease and protease inhibitor, VTG, FER, vATPasa, proteasome components, immune response and 5'-NUC was performed. The results of the gene knockdown were high mortality of H. irritans (functional groups of serine protease and protease inhibitor), reduced oviposition (VTG, vATPasa and FER) or both (proteasome components, immune response and 5'-NUC), while for groups ubiquitination and vATPasa not had an effect on mortality or oviposition compared to controls. Expression analysis and polymorphism of the unigenes of proteasome components and immune response was performed, which allowed the observation of differential expression in different developmental stages and that it is highly conserved sequences. Additionally RNA prevalence pathogens found in analyzed H. irritans cDNA library, by real time RT-PCR obtaining a prevalence of 94-80% Nora virus, 100% Wolbachia and 100% Mycobacterium bovis in the analyzed population. In conclusion, these results show progress in the molecular characterization and expand the repertoire of pathogens affecting H. irritans flies; further suggest candidate protective antigens for use in the development of vaccines to control infestations H. irritans.

Nascimento C.G., Grisi L., Fazio-Junior P.I., Lambert M.M., Coelho C.N., Magalhães V.S., Coumendouros K. & Scott F.B. [Monitoring resistance of Haematobia irritans (Linnaeus, 1758) (Diptera: Muscidae) to insecticides in the Northwest State of São Paulo]. Monitoramento da resistência de Haematobia irritans (Linnaeus, 1758) (Diptera: Muscidae) a inseticidas no noroeste do estado de São Paulo. Revista Brasileira de Medicina Veterinária, 34(Supl. 1):21-27, 2012. Convolution - Divisão de Antiparasitários, Avenida Norma Valério Correa, 571 casa 97, Bairro Jardim Botânico, Ribeirão Preto, SP 14021-593, Brasil. E-mail: cristiano.grisi@convolution.com.br The objective of the present study was to monitor the resistance of populations of Haematobia irritans insecticide tests were carried out on properties in the northwest region of São Paulo, using filter paper impregnated with insecticides in Petri dishes. The pyrethroids cypermethrin and permethrin and organophosphate diazinon were tested in different concentrations. For each dilution three replicates were used, with at least twenty flies each of the horns. The readings of the plates were made with two and four hours of exposure, calculating the lethal concentration 50 (LC50) and the resistance factor (RF) for each population. Populations of H. irritans northwestern state of São Paulo can be considered highly susceptible to cypermethrin and resistant to permethrin and diazinon. The results found in three farms in the northwestern state of São Paulo were compared with data recorded thirteen years ago by researchers at the Federal Rural University of Rio de Janeiro, in the same region, during the initial dispersal of H. irritans. In vitro tests proved to be an important tool in the indication of populations of H. irritans resistant to insecticides., Com o objetivo de monitorar a resistência de populações de Haematobia irritans a inseticidas foram realizados testes em propriedades da região noroeste do estado de São Paulo, empregando-se papéis de filtro impregnados com inseticidas em placas de Petri. Foram testados in vitro os piretróides cipermetrina e permetrina e o organofosforado diazinon. Para cada diluição avaliada foram utilizadas três repetições, com no mínimo vinte moscas dos chifres cada uma. As leituras das placas foram efetuadas com duas e quatro horas de exposição, calculando-se a concentração letal 50 (CL50) e o fator de resistência (FR) para cada população. As populações de Haematobia irritans do noroeste do estado de São Paulo podem ser consideradas altamente resistentes à cipermetrina e susceptíveis à permetrina e ao diazinon. Os resultados observados em três propriedades rurais do noroeste do estado de São Paulo foram comparados com os dados registrados há treze anos por pesquisadores da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, na mesma região, por ocasião da dispersão inicial de H. irritans. O teste in vitro mostrou-se uma ferramenta importante na indicação de populações de H. irritans resistentes a inseticidas.

Nascimento C.G., Grisi L., Fazio-Junior P.I., Lambert M.M., Coelho C.N., Magalhães V.S., Coumendouros K. & Scott F.B. [Monitoring resistance of Haematobia irritans (Linnaeus, 1758) (Diptera: Muscidae) to insecticides in the Northwest State of São Paulo]. Monitoramento da resistência de Haematobia irritans (Linnaeus, 1758) (Diptera: Muscidae) a inseticidas no noroeste do estado de São Paulo. Revista Brasileira de Medicina Veterinária, 34(Supl. 1):21-27, 2012. Convolution - Divisão de Antiparasitários, Avenida Norma Valério Correa, 571 casa 97, Bairro Jardim Botânico, Ribeirão Preto, SP 14021-593, Brasil. E-mail: cristiano.grisi@convolution.com.br The objective of the present study was to monitor the resistance of populations of Haematobia irritans insecticide tests were carried out on properties in the northwest region of São Paulo, using filter paper impregnated with insecticides in Petri dishes. The pyrethroids cypermethrin and permethrin and organophosphate diazinon were tested in different concentrations. For each dilution three replicates were used, with at least twenty flies each of the horns. The readings of the plates were made with two and four hours of exposure, calculating the lethal concentration 50 (LC50) and the resistance factor (RF) for each population. Populations of H. irritans northwestern state of São Paulo can be considered highly susceptible to cypermethrin and resistant to permethrin and diazinon. The results found in three farms in the northwestern state of São Paulo were compared with data recorded thirteen years ago by researchers at the Federal Rural University of Rio de Janeiro, in the same region, during the initial dispersal of H. irritans. In vitro tests proved to be an important tool in the indication of populations of H. irritans resistant to insecticides., Com o objetivo de monitorar a resistência de populações de Haematobia irritans a inseticidas foram realizados testes em propriedades da região noroeste do estado de São Paulo, empregando-se papéis de filtro impregnados com inseticidas em placas de Petri. Foram testados in vitro os piretróides cipermetrina e permetrina e o organofosforado diazinon. Para cada diluição avaliada foram utilizadas três repetições, com no mínimo vinte moscas dos chifres cada uma. As leituras das placas foram efetuadas com duas e quatro horas de exposição, calculando-se a concentração letal 50 (CL50) e o fator de resistência (FR) para cada população. As populações de Haematobia irritans do noroeste do estado de São Paulo podem ser consideradas altamente resistentes à cipermetrina e susceptíveis à permetrina e ao diazinon. Os resultados observados em três propriedades rurais do noroeste do estado de São Paulo foram comparados com os dados registrados há treze anos por pesquisadores da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, na mesma região, por ocasião da dispersão inicial de H. irritans. O teste in vitro mostrou-se uma ferramenta importante na indicação de populações de H. irritans resistentes a inseticidas.

A granular formulation of novaluron (Novaluron 0.2G, 0.2% [AI]), a newer benzoylphenyl urea insecticide, was evaluated for its efficacy in controlling the larval stage of horn flies, Haematobia irritans (L.); house flies, Musca domestica L.; and stable flies, Stomoxys calcitrans (L.), in cow manure. Various rates and insecticide placement locations (top, middle, and bottom of manure) were evaluated in this study and all combinations of these variables reduced adult emergence of all three species when compared with the untreated controls. The presence of deformed pupae indicated that novaluron had an insect growth regulator effect on the developing fly y larvae. Top, middle, or bottom application rates of 0.125, 0.195, 0.25, and 0.375 g novaluron onto manure samples, reduced adult horn fly y emergence by >90%. Middle and bottom application rates of 0.195, 0.25, and 0.375 g novaluron reduced adult house fly y emergence >93%. All rates and placement combinations resulted in >98% reduction of adult stable fly emergence. The level of control efficacy observed against these three fly species along with the ease of use of a granular formulation, make this product an ideal candidate for use in an integrated livestock pest management program.

MALDI-TOF/TOF tandem mass spectrometry has been applied to determine the complete sequences of the PVK/CAP2b neuropeptides in the stable fly Stomoxys calcitrans and horn fly Haematobia irritans, insect pests of livestock. This peptidomic analysis of single neurohemal organ preparations allows the unambiguous assignment of internal Leu/Ile positions not distinguishable by previous mass spectrometric techniques. The sequences are as follows: Stoca-PVK/CAP2b-1, AGGASGLYAFPRVa; Stoca-PVK/CAP2b-2, NAKLYPVPRVa; and Haeir-PVK/CAP2b-1, AGGASGLYAFPRVa; Haeir-PVK/CAP2b-1, NAKLYPMPRVa. Both Stoca-PVK/CAP2b-1 and -2 stimulate Malpighian tubule fluid secretion in the stable fly, with EC50 values between 3 and 11 nM. The identification of these novel neuropeptides adds to our knowledge of the peptidomes of flies, and can aid in the development of neuropeptide-based control strategies of these insect pests., Pub. in Peptides, v27, p521-526, 2006.