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Assisted reproduction techniques ofer a solution to infertility problems in the population. The usual method to evaluate embryo quality in order to select the best embryo is the visualization of its morphological parameters. Through time-lapse technology, it has been possible to carry out a study about the infuence of embryo collapses, whose objective is to fnd out if it could be considered as another parameter in embryo assessment. Such collapses arise normal and randomly in the blastocysts and appear to be negatively related to implantation. In addition, it has been confrmed that they contribute to a slightly delayed development in the embryo, which could be related to implantation failure. Finally, although this parameter is not included in ASEBIR criteria for embryo classifcation, the study supports that it could be considered as a relevant criterion during embryo selection to increase success in implantation rates and live new-born., Las técnicas de reproducción asistida ofrecen una solución a los problemas de infertilidad en la población. El método habitual para evaluar la calidad embrionaria con la fnalidad de seleccionar el mejor embrión es la visualización de sus parámetros por morfología clásica. Mediante tecnología time-lapse se ha podido llevar a cabo un estudio sobre la infuencia de los colapsos embrionarios, cuyo objetivo es averiguar si éstos podrían considerarse un parámetro más en la valoración embrionaria. Dichos colapsos surgen de manera habitual y azarosa en los blastocistos y parece ser que están relacionados negativamente con la tasa de implantación. Además, se ha confrmado que contribuyen a un desarrollo levemente retardado en el embrión lo que podría estar relacionado con en el fallo de implantación. Finalmente, a pesar de que este parámetro no está incluido en los criterios ASEBIR de clasifcación embrionaria, el estudio apoya que podría considerarse como criterio relevante durante la selección del embrión para incrementar el éxito en las tasas de implantación y recién nacido vivo.

[ES] El uso de las técnicas de reproducción asistida (TRA) ha aumentado mucho en años recientes ya que permiten encontrar una solución a los muchos casos de parejas con infertilidad. No obstante, existen muchos estudios que indican que las TRA no son inocuas, y se asocian a varias alteraciones observadas en la descendencia. El objetivo de este estudio es evaluar el efecto de la transferencia embrionaria sobre la paternidad de la descendencia obtenida utilizando inseminación artificial con mezcla heterospérmica y la calidad embrionaria determinada mediante la expresión de mRNA de genes pluripotentes (OCT4, Sox2 y Nanog). Para llevar a cabo el estudio se realizaron tres sesiones de inseminaciones artificiales con mezcla heterospérmica de 4 machos y se recuperaron los embriones a las 24 horas de la misma. Los embriones recuperados se transfirieron a una hembra receptora y se volvieron a recuperar 6 días después de la inseminación. Para determinar la paternidad de la descendencia se llevó a cabo una amplificación y secuenciación de 5 microsatélites que permitieron obtener el parentesco de los embriones. Para evaluar la calidad embrionaria se analizaron los niveles de expresión de los genes pluripotentes Oct4, Sox2 y Nanog mediante una amplificación a tiempo real. Los resultados del estudio no mostraron variaciones en la paternidad de la descendencia obtenida de una inseminación con mezcla heterospérmica. No obstante, sí se observó un descenso en la calidad embrionaria en términos de una disminución significativa en los niveles de expresión del gen Sox2., [EN] The use of assisted reproduction techniques (ART) has increased a lot in recent years as they allow finding a solution to the many cases of infertile couples. However, there are many studies that indicate that ART are not innocuous, and are associated with several alterations observed in offspring. The objective of this study is to evaluate the effect of embryo transfer on the paternity of offspring obtained using artificial insemination with heterospermic mixture and embryo quality determined by the expression of pluripotent gene mRNA (OCT4, Sox2 and Nanog). To carry out the study, three sessions of artificial inseminations with heterospermic mixture of 4 males were carried out and the embryos were recovered 24 hours later. The recovered embryos were transferred to a recipient female and recovered again 6 days after the insemination. To determine the paternity of the offspring, an amplification and sequencing of 5 microsatellites was carried out to obtain the kinship of the embryos. To evaluate the embryo quality, the levels of expression of the pluripotent genes Oct4, Sox2 and Nanog were analyzed by real time amplification The results of the study showed no variation in the paternity of the offspring obtained from an insemination with heterospermic mixture. However, a decrease in embryo quality was observed in terms of a significant decrease in the expression levels of the Sox2 gene.

[ES] El uso de las técnicas de reproducción asistida (TRA) ha aumentado mucho en años recientes ya que permiten encontrar una solución a los muchos casos de parejas con infertilidad. No obstante, existen muchos estudios que indican que las TRA no son inocuas, y se asocian a varias alteraciones observadas en la descendencia. El objetivo de este estudio es evaluar el efecto de la transferencia embrionaria sobre la paternidad de la descendencia obtenida utilizando inseminación artificial con mezcla heterospérmica y la calidad embrionaria determinada mediante la expresión de mRNA de genes pluripotentes (OCT4, Sox2 y Nanog). Para llevar a cabo el estudio se realizaron tres sesiones de inseminaciones artificiales con mezcla heterospérmica de 4 machos y se recuperaron los embriones a las 24 horas de la misma. Los embriones recuperados se transfirieron a una hembra receptora y se volvieron a recuperar 6 días después de la inseminación. Para determinar la paternidad de la descendencia se llevó a cabo una amplificación y secuenciación de 5 microsatélites que permitieron obtener el parentesco de los embriones. Para evaluar la calidad embrionaria se analizaron los niveles de expresión de los genes pluripotentes Oct4, Sox2 y Nanog mediante una amplificación a tiempo real. Los resultados del estudio no mostraron variaciones en la paternidad de la descendencia obtenida de una inseminación con mezcla heterospérmica. No obstante, sí se observó un descenso en la calidad embrionaria en términos de una disminución significativa en los niveles de expresión del gen Sox2., [EN] The use of assisted reproduction techniques (ART) has increased a lot in recent years as they allow finding a solution to the many cases of infertile couples. However, there are many studies that indicate that ART are not innocuous, and are associated with several alterations observed in offspring. The objective of this study is to evaluate the effect of embryo transfer on the paternity of offspring obtained using artificial insemination with heterospermic mixture and embryo quality determined by the expression of pluripotent gene mRNA (OCT4, Sox2 and Nanog). To carry out the study, three sessions of artificial inseminations with heterospermic mixture of 4 males were carried out and the embryos were recovered 24 hours later. The recovered embryos were transferred to a recipient female and recovered again 6 days after the insemination. To determine the paternity of the offspring, an amplification and sequencing of 5 microsatellites was carried out to obtain the kinship of the embryos. To evaluate the embryo quality, the levels of expression of the pluripotent genes Oct4, Sox2 and Nanog were analyzed by real time amplification The results of the study showed no variation in the paternity of the offspring obtained from an insemination with heterospermic mixture. However, a decrease in embryo quality was observed in terms of a significant decrease in the expression levels of the Sox2 gene.

[ES] El uso de las técnicas de reproducción asistida (TRA) ha aumentado mucho en años recientes ya que permiten encontrar una solución a los muchos casos de parejas con infertilidad. No obstante, existen muchos estudios que indican que las TRA no son inocuas, y se asocian a varias alteraciones observadas en la descendencia. El objetivo de este estudio es evaluar el efecto de la transferencia embrionaria sobre la paternidad de la descendencia obtenida utilizando inseminación artificial con mezcla heterospérmica y la calidad embrionaria determinada mediante la expresión de mRNA de genes pluripotentes (OCT4, Sox2 y Nanog). Para llevar a cabo el estudio se realizaron tres sesiones de inseminaciones artificiales con mezcla heterospérmica de 4 machos y se recuperaron los embriones a las 24 horas de la misma. Los embriones recuperados se transfirieron a una hembra receptora y se volvieron a recuperar 6 días después de la inseminación. Para determinar la paternidad de la descendencia se llevó a cabo una amplificación y secuenciación de 5 microsatélites que permitieron obtener el parentesco de los embriones. Para evaluar la calidad embrionaria se analizaron los niveles de expresión de los genes pluripotentes Oct4, Sox2 y Nanog mediante una amplificación a tiempo real. Los resultados del estudio no mostraron variaciones en la paternidad de la descendencia obtenida de una inseminación con mezcla heterospérmica. No obstante, sí se observó un descenso en la calidad embrionaria en términos de una disminución significativa en los niveles de expresión del gen Sox2., [EN] The use of assisted reproduction techniques (ART) has increased a lot in recent years as they allow finding a solution to the many cases of infertile couples. However, there are many studies that indicate that ART are not innocuous, and are associated with several alterations observed in offspring. The objective of this study is to evaluate the effect of embryo transfer on the paternity of offspring obtained using artificial insemination with heterospermic mixture and embryo quality determined by the expression of pluripotent gene mRNA (OCT4, Sox2 and Nanog). To carry out the study, three sessions of artificial inseminations with heterospermic mixture of 4 males were carried out and the embryos were recovered 24 hours later. The recovered embryos were transferred to a recipient female and recovered again 6 days after the insemination. To determine the paternity of the offspring, an amplification and sequencing of 5 microsatellites was carried out to obtain the kinship of the embryos. To evaluate the embryo quality, the levels of expression of the pluripotent genes Oct4, Sox2 and Nanog were analyzed by real time amplification The results of the study showed no variation in the paternity of the offspring obtained from an insemination with heterospermic mixture. However, a decrease in embryo quality was observed in terms of a significant decrease in the expression levels of the Sox2 gene.

[ES] El uso de las técnicas de reproducción asistida (TRA) ha aumentado mucho en años recientes ya que permiten encontrar una solución a los muchos casos de parejas con infertilidad. No obstante, existen muchos estudios que indican que las TRA no son inocuas, y se asocian a varias alteraciones observadas en la descendencia. El objetivo de este estudio es evaluar el efecto de la transferencia embrionaria sobre la paternidad de la descendencia obtenida utilizando inseminación artificial con mezcla heterospérmica y la calidad embrionaria determinada mediante la expresión de mRNA de genes pluripotentes (OCT4, Sox2 y Nanog). Para llevar a cabo el estudio se realizaron tres sesiones de inseminaciones artificiales con mezcla heterospérmica de 4 machos y se recuperaron los embriones a las 24 horas de la misma. Los embriones recuperados se transfirieron a una hembra receptora y se volvieron a recuperar 6 días después de la inseminación. Para determinar la paternidad de la descendencia se llevó a cabo una amplificación y secuenciación de 5 microsatélites que permitieron obtener el parentesco de los embriones. Para evaluar la calidad embrionaria se analizaron los niveles de expresión de los genes pluripotentes Oct4, Sox2 y Nanog mediante una amplificación a tiempo real. Los resultados del estudio no mostraron variaciones en la paternidad de la descendencia obtenida de una inseminación con mezcla heterospérmica. No obstante, sí se observó un descenso en la calidad embrionaria en términos de una disminución significativa en los niveles de expresión del gen Sox2., [EN] The use of assisted reproduction techniques (ART) has increased a lot in recent years as they allow finding a solution to the many cases of infertile couples. However, there are many studies that indicate that ART are not innocuous, and are associated with several alterations observed in offspring. The objective of this study is to evaluate the effect of embryo transfer on the paternity of offspring obtained using artificial insemination with heterospermic mixture and embryo quality determined by the expression of pluripotent gene mRNA (OCT4, Sox2 and Nanog). To carry out the study, three sessions of artificial inseminations with heterospermic mixture of 4 males were carried out and the embryos were recovered 24 hours later. The recovered embryos were transferred to a recipient female and recovered again 6 days after the insemination. To determine the paternity of the offspring, an amplification and sequencing of 5 microsatellites was carried out to obtain the kinship of the embryos. To evaluate the embryo quality, the levels of expression of the pluripotent genes Oct4, Sox2 and Nanog were analyzed by real time amplification The results of the study showed no variation in the paternity of the offspring obtained from an insemination with heterospermic mixture. However, a decrease in embryo quality was observed in terms of a significant decrease in the expression levels of the Sox2 gene.

La congelación de espermatozoides es una técnica que supuso un importante paso para el desarrollo de la reproducción asistida. Esta es una técnica habitual y fundamental en las clínicas de reproducción que ha permitido lograr mejores resultados en las técnicas de reproducción asistida. A pesar de sus ventajas, durante la congelación, el espermatozoide sufre un gran número de alteraciones que dan lugar a la pérdida de función en el espermatozoide debido principalmente a: las bajas temperaturas a las que son sometidos, la cristalización de agua intracelular y los cambios osmóticos como consecuencia de la entrada y salida de crioprotector. Debido a los daños que se han observado, se está comenzando a desarrollar otro tipo de congelación ultrarápida llamada vitrificación, en la que los efectos que produce la entrada y salida de crioprotectores y los cambios de osmolaridad se ven disminuidos. Esta vitrificación es una técnica que consiste en el uso de crioprotectores diferentes y en un descenso de temperaturas brusco. Los primeros ensayos que se llevaron a cabo no resultaron exitosos debido a la poca tolerancia que presentan los espermatozoides a las altas tasas de crioprotector de las que se partieron. Ensayos posteriores en los que se reducía la concentración de crioprotector, se eliminaba el crioprotector permeable y la vitrificación se hacía mediante la aplicación directa de la solución espermática dentro de nitrógeno permitieron obtener mejores resultados. Es por ello que nos propusimos hacer un estudio en tres fases: una primera fase donde se realizara una valoración general de la congelación lenta y buscar un conjunto de biomarcadores útiles para la evaluación del criodaño. Posteriormente una segunda fase, en la que se realizó un estudio comparativo entre la congelación lenta y la vitrificación espermática, testando los biomarcadores elegidos en fase primera. Y, por último, en la tercera fase, un ensayo comparativo dentro de un ciclo de reproducción asistida donde

La congelación de espermatozoides es una técnica que supuso un importante paso para el desarrollo de la reproducción asistida. Esta es una técnica habitual y fundamental en las clínicas de reproducción que ha permitido lograr mejores resultados en las técnicas de reproducción asistida. A pesar de sus ventajas, durante la congelación, el espermatozoide sufre un gran número de alteraciones que dan lugar a la pérdida de función en el espermatozoide debido principalmente a: las bajas temperaturas a las que son sometidos, la cristalización de agua intracelular y los cambios osmóticos como consecuencia de la entrada y salida de crioprotector. Debido a los daños que se han observado, se está comenzando a desarrollar otro tipo de congelación ultrarápida llamada vitrificación, en la que los efectos que produce la entrada y salida de crioprotectores y los cambios de osmolaridad se ven disminuidos. Esta vitrificación es una técnica que consiste en el uso de crioprotectores diferentes y en un descenso de temperaturas brusco. Los primeros ensayos que se llevaron a cabo no resultaron exitosos debido a la poca tolerancia que presentan los espermatozoides a las altas tasas de crioprotector de las que se partieron. Ensayos posteriores en los que se reducía la concentración de crioprotector, se eliminaba el crioprotector permeable y la vitrificación se hacía mediante la aplicación directa de la solución espermática dentro de nitrógeno permitieron obtener mejores resultados. Es por ello que nos propusimos hacer un estudio en tres fases: una primera fase donde se realizara una valoración general de la congelación lenta y buscar un conjunto de biomarcadores útiles para la evaluación del criodaño. Posteriormente una segunda fase, en la que se realizó un estudio comparativo entre la congelación lenta y la vitrificación espermática, testando los biomarcadores elegidos en fase primera. Y, por último, en la tercera fase, un ensayo comparativo dentro de un ciclo de reproducción asistida donde

The aim of this paper was to compare the effects of two superovulation protocols: synchronization of the follicular wave (SFW), and natural estrus (NE) induction of embryos produced for transference in Holstein cows. Twenty cows were chosen as donors, with body condition (BC) of 2.75-3.5; 40-60 months old; 1-2 previous services per ges-tation, and without reproductive problems. Two superovulation protocols were applied: SFW and NE. SFW was not observed to produce more embryos than the NE in the blastocyst and morula stages.

Commonly the assisted reproduction technology was based on the transfer of cleavage-stage embryos in day 2 or 3 after oocyte retrieval. However, in the last years is common the embryo transfer in the blastocyst-stage. The aim of the present study was to evaluate the pregnancy and implantation rates when embryo transfer was carried out in cleavage-stage embryos in day 3 or in blastocyst-stage embryos in day 5 in an assisted reproduction program with oocyte donation. 1667 cycles of assisted reproduction were studied retrospectively, 594 cycles with embryo transfer of day 3 and 1073 cycles of day 5. Implantation (29,09 % vs 44,85 %), pregnancy (51,01 % vs 61,7%) and delivery (44,28 % vs 52,19 %) rates were significantly higher with the blastocyst group transfer compared to cleavage-stage embryos group. Instead, the higher-order multiple pregnancy rates were significantly lower with the blastocyst group transfer. In conclusion, the results of this study support the blastocyst transfer in favor of a higher implantation potential and less risk of higher-order multiple pregnancies, decreasing the number of embryos transferred., En las técnicas de reproducción asistida, la transferencia embrionaria se ha llevado a cabo en estadio de clivaje al segundo o tercer día después de la aspiración de ovocitos. Sin embargo, en los últimos años se ha introducido la transferencia embrionaria en estadio de blastocisto. El objetivo del presente estudio fue evaluar las tasas de embarazo e implantación cuando se transfieren embriones en el día 3 en estadio de clivaje y en el día 5 en estadio de blastocisto, dentro de un programa de reproducción asistida con donación de ovocitos. Se estudiaron de manera retrospectiva un total de 1667 ciclos; de los cuales 594 ciclos fueron con transferencia embrionaria en día 3, y 1073 ciclos, en día 5. Las tasas de implantación (29,09% vs 44,85%), embarazo (51,01% vs 61,7%) y parto (44,28% vs 52,19%) fueron significativamente mayores con la transferencia de embriones en estadio de blastocisto comparada a embriones en estadio de clivaje. Por el contrario, las tasas de embarazo múltiple de alto orden fueron reducidas con la transferencia en día 5. En conclusión, los resultados de este estudio apoyan la transferencia de blastocistos en favor de un mayor potencial de implantación y menor riesgo de embarazo múltiple de alto orden, reduciendo el número de embriones transferidos.

Background: Known causes of unsuccessful pregnancy in couples undergoing assisted reproduction treatment include embryo aneuploidies. Preimplantation genetic diagnosis (PGD) is a technique used in assisted reproduction in order to detect these abnormalities, select embryos chromosomally normal and subsequently transfer to the patients’ uterus. Embryos with single aneuploidies may have the ability to survive and achieve unnoticed implantation. Objectives: To determine incidence of single aneuploidies in good quality embryos in third day of development to blastocyst. Design: Statistical and experimental study. Setting: Reprogenetics Latin-America andAssisted Reproduction Center - Concebir. Biologic material: Samples of embryo biopsies. Methods: Comparative analysis of results from evaluation of each sample obtained by embryo biopsy on the third and fifth days of embryonic development, performing PGD by respectively in situ hybridization (FISH) and comparative genomics (aCGH). Results: On third day of embryonic development 62.9% of embryos with single monosomy had 8-cell morphology. Though when evaluated by aCGH in the blastocyst stage 42.3% were abnormal and 37.5% of these belonged to the 8-cell stage. Single monosomies index in the blastocyst stage was 57.9% in 84.2% of single aneuploidies. Conclusions: Eight-cell embryos on the third day of embryonic development are most likely to reach blastocyst stage and have single aneuploidies, Introducción: De las causas más conocidas en cuanto a la falta del éxito en el embarazo con tratamientos de reproducción asistida son aquellas relacionadas a las aneuploidías cromosómicas presentes en los embriones. El diagnóstico genético preimplantacional (PGD) es una técnica empleada en reproducción asistida para detectar estas anomalías, seleccionando aquellos que sean cromosómicamente normales, para luego transferirlos al útero de la paciente. Los embriones con aneuploidías únicas podrían tener la capacidad de sobrevivir y lograr la implantación, y por lo tanto, sin diagnóstico previo, estas podrían pasar desapercibidas. Objetivos: Determinar la incidencia de aneuploidías únicas en embriones de buena calidad embrionaria en el día 3 de desarrollo hasta blastocisto. Diseño:Estadístico y experimental. Instituciones: Reprogenetics Latinoamérica yCentro de Reproducción asistida, de la Clínica Concebir. Material Biológico: Muestras de biopsia embrionaria. Metodología: Análisis comparativo de resultados a partir de la evaluación de cada muestra obtenida por biopsia en el día tercero y día quinto de desarrollo embrionario, realizando el PGD por hibridación in situ (FISH) y genómica comparada (aCGH), respectivamente. Resultados: El 62,9% de embriones que presentaron monosomías únicas al tercer día de desarrollo embrionario resultaron ser de 8 células. Pero cuando se evaluó por aCGH en día cinco, 42,3% resultó anormal, y de estos 37,5% perteneció al estadio de 8 células. El índice de monosomías únicas en blastocisto resultó ser 57,9% de un total de 84,2% de aneuploidías únicas. Conclusiones: Los embriones de 8 células en el tercer día de desarrollo embrionario son los más probables de llegar al estadio de blastocisto, así como presentar aneuploidías únicas.

The aim of this paper is to present a positive, ethical and practical view of traditional and recently developed clinical markers involved in the process of a human life. Several strategies for collaborative work are discussed, with a hopeful eye towards a promising future in which human life can be respected and defended, not only through a purely biological approach, but also with a human., Este artigo pretende apresentar uma visão positiva, ética e prática dos marcadores clínicos clássicos e de recente desenvolvimento implicados no processo evolutivo de uma vida humana. Posteriormente, comentam-se algumas estratégias do trabalho colaborativo, com uma visão esperançosa em direção a um futuro prometedor, no qual se possa respeitar e defender a vida humana, não somente com um enfoque meramente biológico, mas também humano e interdisciplinar., DOI: 10.5294/pebi.2012.16.2.3Este artículo pretende presentar una visión positiva, ética y práctica de los marcadores clínicos clásicos y de reciente desarrollo implicados en el proceso evolutivo de una vida humana. Posteriormente se comentan algunas estrategias del trabajo colaborativo, con una visión esperanzadora hacia un futuro prometedor, en el cual se pueda respetar y defender la vida humana, no solamente con un enfoque meramente biológico sino humano e interdisciplinar. DOI: 10.5294/pebi.2012.16.2.3

En esta tesis, se han analizando las principales características reproductivas (inducción de la ovulación, tasas de ovulación e implantación, tamaño de camada y niveles séricos de progesterona) en hembras de dos líneas de conejo seleccionadas, además de la expresión de genes relacionados con el proceso de implantación en blastocistos.

En esta tesis, se han analizando las principales características reproductivas (inducción de la ovulación, tasas de ovulación e implantación, tamaño de camada y niveles séricos de progesterona) en hembras de dos líneas de conejo seleccionadas, además de la expresión de genes relacionados con el proceso de implantación en blastocistos.

En esta tesis, se han analizando las principales características reproductivas (inducción de la ovulación, tasas de ovulación e implantación, tamaño de camada y niveles séricos de progesterona) en hembras de dos líneas de conejo seleccionadas, además de la expresión de genes relacionados con el proceso de implantación en blastocistos.

En esta tesis, se han analizando las principales características reproductivas (inducción de la ovulación, tasas de ovulación e implantación, tamaño de camada y niveles séricos de progesterona) en hembras de dos líneas de conejo seleccionadas, además de la expresión de genes relacionados con el proceso de implantación en blastocistos.