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目的:構建人CIDE-3基因的原核表達載體,并在E.coliBL21(DE3)中表達。方法:提取人肝母細胞瘤細胞系HepG2細胞的總RNA,經RT-PCR擴增人CIDE-3基因片段,并將其克隆入原核表達載體pET28a(+)中,構建重組質粒pET28a(+)-CIDE-3。經限制性內切酶BamHI、XhoI雙酶切鑒定及序列測定后,轉化E.coliBL21(DE3),經IPTG誘導表達組氨酸融合蛋白。結果:獲得全長為516bp的人CIDE-3基因片段。以構建的重組質粒pET28a(+)-CIDE-3轉化E.coliBL21(DE3)后,經IPTG誘導,表達出相對分子質量(Mr)約為23000的重組CIDE-3蛋白。SDS-PAGE分析顯示,表達的蛋白主要以不溶性包涵體的形式存在于E.coliBL21(DE3)的胞質中,表達量約占全菌蛋白的32%。結論:成功地構建了原核表達載體pET28a(+)-CIDE-3,并表達出重組CIDE-3蛋白,為進一步多克隆抗體的制備和凋亡的相關研究奠定了實驗基礎。